A peptidase-B eritrocitária foi estudada eletroforeticamente em bovinos das raças Holandesa, Mantiqueira e Gir, utilizando-se o amido de milho conhecido no Brasil como Penetrose-30. Detectamos um novo alelo desta enzima, denominado Pep-B3, no bovino Mantiqueira. Este gado é descendente de raças que foram introduzidas no Brasil no período da colonização (século XVI) e do gado Caracu e Holandês. Determinamos o controle genético da peptidase-B através da análise da progênie de pais que possuíam os três alelos, confirmando que esta enzima é controlada por um único loco autossômico com três alelos,denominados Pep-B1, Pep-B2 e Pep-B3. A utilização de um tampão citrato-fosfato, pH 5,9 com o gel na concentração de 14% e nas condições eletroforéticas padronizadas neste trabalho, permitiu uma boa visualização de todas as formas da peptidase-B.