Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 31, Issue: 3, Published: 2000
  • Use of endophytic diazotrophic bacteria as a vector to express the cry3A gene from Bacillus thuringiensis Environmental And Soil Microbiology

    Salles, Joana Falcão; Gitahy, Patrícia de Medeiros; Skøt, Leif; Baldani, José Ivo

    Abstract in Portuguese:

    Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial de uso de bactérias diazotróficas endofíticas como vetores para a expressão de genes cry de Bacillus thuringiensis. As bactérias diazotróficas endofíticas Gluconacetobacter diazotrophicus estirpe BR11281 e Herbaspirillum seropedicae estirpe BR11335 foram usadas como modelo. O gene cry3A foi transferido através de um plasmídeo suicída por conjugação e os recombinantes foram selecionados pela sua capacidade de fixar nitrogênio em meio semi-sólido sem N. A presença do gene cry3A no genoma dos transconjugantes foi detectada através da técnica de "Southern blot" utilizando como sonda um fragmento de 1,0 kb, interno ao gene cry3A. A produção de delta-endotoxina pelos transconjugantes foi detectada por "Dot blot" em de H. seropedicae e por "Western blot" em G. diazotrophicus, usando-se o anticorpo específico para a toxina de B. thuringiensis. A avaliação da produção da delta-endotoxina mostrou que a expressão do gene cry3A em G. diazotrophicus é dependente do processo de fixação de nitrogênio por estar fusionado a um promotor nif nesta bactéria. No caso de H. seropedicae a expressão não foi influenciada pelo promotor de rizosfera (rhi) usado. Os resultados obtidos sugerem que estas bactérias diazotróficas endofíticas podem ser usadas como vetores para expressar genes com atividade entomopatogênica, visando o controle de pragas de cana-de-açúcar ou outras plantas de interesse econômico.

    Abstract in English:

    The goal of this study was to evaluate the potential of endophytic diazotrophic bacteria as a vector to express a cry gene from Bacillus thuringiensis, envisaging the control of pests that attack sugarcane plants. The endophytic nitrogen-fixing bacteria Gluconacetobacter diazotrophicus strain BR11281 and Herbaspirillum seropedicae strain BR11335 were used as models. The cry3A gene was transferred by conjugation using a suicide plasmid and the recombinant strains were selected by their ability to fix nitrogen in semi-solid N-free medium. The presence of the cry gene was detected by Southern-blot using an internal fragment of 1.0 kb as a probe. The production of delta-endotoxin by the recombinant H. seropedicae strain was detected by dot blot while for G. diazotrophicus the Western-blot technique was used. In both cases, a specific antibody raised against the B. thuringiensis toxin was applied. The delta-endotoxin production showed by the G. diazotrophicus recombinant strain was dependent on the nitrogen fixing conditions since the cry3A gene was fused to a nif promoter. In the case of H. seropedicae the delta-endotoxin expression was not affected by the promoter (rhi) used. These results suggest that endophytic diazotrophic bacteria can be used as vectors to express entomopathogenic genes envisaging control of sugarcane pests.
  • Sporulation of Metarhizium anisopliae var. Acridum and Beauveria bassiana on Rhammatocerus schistocercoides under humid and dry conditions Environmental And Soil Microbiology

    Magalhães, Bonifácio Peixoto; Goettel, Mark Stanislaw; Frazão, Heloisa da Silva

    Abstract in Portuguese:

    A esporulação dos fungos Metarhizium anisopliae var. acridum e Beauveria bassiana em cadáveres do gafanhoto Rhammatocerus schistocercoides foi estudada em ambientes seco e úmido. As duas espécies de patógenos foram igualmente patogênicas a R. schistocercoides. Entretanto, internamente, M. anisopliae produziu mais conídios que B. bassiana a 53% e 75% de umidade relativa. Externamente, não houve esporulação a 53% e 75% de umidade relativa e M. anisopliae produziu mais conídios que B. bassiana a 100%.

    Abstract in English:

    The sporulation of the fungi Metarhizium anisopliae var. acridum and Beauveria bassiana in cadavers of the grasshopper Rhammatocerus schistocercoides was studied in dry and humid environments. Both fungi were equally virulent against R. schistocercoides. However, internally, M. anisopliae produced more conidia than B. bassiana at 53% and 75% relative humidity. Externally, there was no sporulation at 53% and 75% RH, and M. anisopliae produced more conidia than B. bassiana at 100% RH.
  • Effectiveness of Bacillus thuringiensis strains against Spodoptera frugiperda (lepidoptera: noctuidae) Environmental And Soil Microbiology

    Polanczyk, Ricardo Antonio; Silva, Rogério Fernando Pires da; Fiuza, Lidia Mariana

    Abstract in English:

    The fall armyworm (Spodoptera frugiperda) is one of the most important pests of maize, causing up to 20% production losses when defoliation occurs near to flowering, or even complete destruction of plants. Among the alternatives to control this pest, the use of Bacillus thuringiensis (Bt) has gained attention due to its efficiency and low impact on natural enemies. Strains Bt dendrolimus HD 37, Bt aizawai HD 68, Bt kurstaki HD 73, Bt darmstadiensis HD 146, and Bt thuringiensis 4412 were tested against second instar larvae in in vivo assays. Suspensions of Bt aizawai HD 68 and Bt thuringiensis 4412, containing 3 x 10(8) cells/ml, induced mortality of 100% and 80.4%, respectively. To test virulence, cell concentrations of 8 x 10(5) to 3 x 10(8) cells/ml of strains Bt aizawai HD 68 and Bt thuringiensis 4412 were applied on the second instar larvae: LC50 were 6.7 x 10(6) and 8.6 x 10(6) cells/ml, respectively.
  • Beijerinckia derxii stimulates the viability of non-N2-fixing bacteria in nitrogen-free media Environmental And Soil Microbiology

    Barbosa, Heloiza R.; Thuler, Daniela Strauss; Shirakawa, Márcia Aiko; Miyasaka, Natália R. S.

    Abstract in Portuguese:

    Co-culturas com a bactéria fixadora de nitrogênio Beijerinckia derxii e duas bactérias não diazotróficas (Escherichia coli e uma bactéria quimiolitotrófica facultativa oxidante de enxofre) foram empregadas para o estudo de interações bacterianas. B. derxii foi colocada em contato direto e indireto com E. coli. Um aumento no número de UFC e a manutenção da viabilidade das não diazotróficas foi promovido por B. derxii, porém seu crescimento e atividade da nitrogenase não foram afetadas por nenhuma das parceiras.

    Abstract in English:

    The interactions between the nitrogen-fixing microorganism Beijerinckia derxii with two non-diazotrophic bacteria, either Escherichia coli or a facultative sulphur-oxidizing chemolitotroph, were studied in mixed cultures. Direct and indirect contact between B. derxii and E. coli were tested. B. derxii increased CFU numbers and/or maintained the viability of the non-diazotrophic bacteria, but neither growth nor nitrogenase activity of the nitrogen-fixing bacterium were affected by either partner.
  • Isolation and survival of Yersinia enterocolitica in ice cream at different pH values, stored at -18°c Food Microbiology

    Pederiva, Norma B. Barbini de; Guzmán, Ana M. Stefanini de

    Abstract in Portuguese:

    Neste estudo pesquisou-se a presença de Yersinia enterocolitica em 203 amostras de sorvetes, sendo 123 de fabricação industrial e 80 de fabricação artesanal. Isolaram-se 2 cepas a partir de sorvetes artesanais, uma das quais foi caracterizada como B:1A, O:3,50, 51; lis Xz e a outra se tipificou como Y. enterocolitica B:1A mas não se tipificou sorologicamente, o que sugere uma contaminação pós processo. Em 9 dos sorvetes de fabricação industrial de distintos pH, estudou-se a sobrevivência desse microrganismo, inoculando-os com 20 UFC/ml de Y. enterocolitica, quando armazenados durante 480 dias a -18°C. Esses sorvetes, segundo seu pH, agruparam-se em: Grupo 1: pH: 4-5, Grupo 2: pH 5-6 e Grupo 3: pH: 6-7. Determinou-se a viabilidade pelas curvas de morte usando semeadura direta e enriquecimento. Nos sorvetes do grupo 1, Y. enterocolitica só foi detectada até o 150° dia de armazenagem, enquanto que nas amostras dos grupos 2 e 3, pelo menos até o 480° dia da experiência. Nossos resultados mostram que a sobrevivência de Y. enterocolitica em sorvetes armazenados a - 18°C foi significativamente menor (p <= 0.05) em amostras com pH < 5.

    Abstract in English:

    The presence of Yersinia enterocolitica was investigated in 203 samples of industrial (123) and non-industrial ice cream (80). Two Y. enterocolitica strains were isolated from non-industrial ice cream, which suggests the possibility of post-manufacturing contamination. One strain was typed as B:1A, O: 3,50,51; lis Xz, while the other one was biotyped as: B:1A but not serologically typed. Survival of Y. enterocolitica was investigated by inoculating nine samples of industrially manufactured ice cream to contain 20 CFU/ml of Y. enterocolitica and stored at -18°C for 480 days. The inoculated samples were classified into three different groups according to their pH (Group 1: pH 4-5; Group 2: pH 5-6 and Group 3: pH 6-7). Viability was determined by a combination of direct plating and enrichment. In Group 1, Y. enterocolitica was not detected after 150 days of storage, while in Groups 2 and 3, this microorganism was isolated until day 480 of storage. These findings suggest that the survival time of Y. enterocolitica in ice cream stored at -18°C is significantly (p <= 0,05) lower at pH values under 5.
  • Microbiological and chemical changes in freshwater prawn (Macrobrachium rosembergii) stored under refrigeration Food Microbiology

    Leitão, Mauro Faber de Freitas; Rios, Daniel de Pinho Astacio

    Abstract in Portuguese:

    Foram estudadas alterações químicas e microbiológicas do camarão da Malásia, armazenado a 0°C e 5°C durante 10 dias, enfatizando-se a produção de indol como indicador da deterioração. A microbiota psicrotrófila total e indol positiva era predominantemente mesófila, sendo a indol positiva inferior a 10% da total após 10 dias de armazenamento sob refrigeração, sendo constituida por bactérias das famílias Enterobacteriaceae e Vibrionaceae. O método de Número Mais Provavel-NMP, usando-se o caldo triptona, revelou-se o mais adequado na contagem da microbiota indol positiva. Nas amostras observaram-se o aumento de pH, dos teores de L- triptofano e de bases voláteis totais-BVT, mais evidentes a 5°C. Nas amostras armazenadas a 0°C não foram constatados valores de contagem total de psicrotrófilos e de BVT acima dos limites recomendados (10(7) CFU/g e 30 mgN/100g, respectivamente) mesmo após 10 dias de estocagem. No entanto, nas mantidas a 5°C, estes valores foram detectados após 10 e 5 dias, respectivamente. A presença de indol em níveis acima de 25 mig/100g, limite adotado pela FDA/USA, somente foi detectada em uma amostra, sugerindo que esta substância, isoladamente, não seria um bom indicador da qualidade do camarão armazenado sob refrigeração.

    Abstract in English:

    Microbiological and chemical changes were evaluated in freshwater prawn stored under refrigeration at 0°C and 5°C during 10 days, with special emphasis on indole production as a chemical spoilage indicator. The total psychrotrophic and indole positive microflora were mainly mesophilic, with indole positive microorganisms being less than 10% of the total microflora after 10 days storage under refrigeration. Bacteria from Enterobacteriaceae and Vibrionaceae families prevailed among the isolated indole positive strains. The use of the Most Probable Number-MPN method, using tryptone broth as culture medium, was the most reliable approach for the quantitative evaluation of the indole positive microflora. The stored samples showed increases in pH, L-tryptophan and total volatile bases (TVB), which were more intensive at 5°C. The psychrotrophic counts and TVB values of samples stored at 0°C were lower than the recommended limits (107 CFU/g and 30 mg N/100g, respectively), even after 10 days storage. However, in samples stored at 5°C, these values were reached after 10 and 5 days, respectively. The presence of indole in levels above the limit recommended by FDA/USA (25 mug/100g) was confirmed in only one sample, suggesting that this substance, alone, wouldn’t be a good indicator of freshwater prawn quality stored under refrigeration.
  • Characterization of bacteriocins produced by Lactococcus lactis strains Food Microbiology

    Moreno, Izildinha; Lerayer, Alda L.S.; Baldini, Vera L.S.; Leitão, Mauro F. de F.

    Abstract in Portuguese:

    Bacteriocinas resistentes ao aquecimento produzidas por quinze linhagens de Lactococcus lactis (14 L. lactis subsp. lactis e 1 L. lactis subsp. cremoris) foram sensíveis à enzimas proteolíticas e ativas em uma ampla faixa de pH. A resistência dessas bacteriocinas ao aquecimento foi fortemente influenciada pelo pH do meio. Somente a linhagem L. lactis subsp. lactis ITAL 383 produziu uma bacteriocina com um amplo espectro de atividade, semelhante ao da nisina de L. lactis subsp. lactis ATCC 11454. Esta bacteriocina inibiu as espécies relacionadas e outros microorganismos gram-positivos, inclusive Listeria monocytogenes e Staphylococcus aureus, mas não as bactérias Gram-negativas examinadas. A identificação do composto antimicrobiano parcialmente purificado por SDS-PAGE revelou um peso molecular similar entre a bacteriocina ITAL 383 e a nisina de L. lactis subsp lactis ATCC 11454.

    Abstract in English:

    Bacteriocins produced by fifteen strains of Lactococcus lactis (14 L. lactis subsp. lactis and one L. lactis subsp. cremoris) were heat resistant, sensitive to several proteolytic enzymes and active over a wide range of pH. Their resistance to the heating was greatly influenced by the pH. Only the strain L. lactis subsp. lactis ITAL 383 produced a bacteriocin with a wide activity spectrum, similar to nisin of L. lactis subsp. lactis ATCC 11454. This bacteriocin inhibited closely related species and other Gram-positive microorganisms including Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus, but it was not active against the Gram-negative bacteria tested. The identification of partially purified antimicrobial compounds by SDS-PAGE showed that bacteriocin produced by strain ITAL 383 had the same molecular weight of nisin produced by L. lactis subsp. lactis ATCC 11454.
  • Disinfectant and antibiotic activities: a comparative analysis in Brazilian hospital bacterial isolates Medical Microbiology

    Guimarães, Márcia Aparecida; Tibana, Anita; Nunes, Marly Paiva; Santos, Kátia Regina Netto dos

    Abstract in Portuguese:

    As infecções nosocomiais têm se tornado uma importante causa de morbidade e mortalidade em todo o mundo. Práticas adequadas de higiene e desinfecção ambiental são fundamentais para o controle destas infecções. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade bactericida de alguns desinfetantes em amostras hospitalares resistentes e sensíveis à antibióticos. A susceptibilidade aos desinfetantes e antibióticos de 27 amostras clínicas foi determinada pelo Método de Diluição de Uso (AOAC) e pelo Método de Kirby-Bauer, respectivamente. Os resultados mostraram que todas as amostras testadas foram susceptíveis ao hipoclorito de sódio, ao glutaraldeído e à associação de quaternário de amônio-formaldeído-álcool etílico. Contudo, a susceptibilidade das amostras ao fenol e ao quaternário de amônio se mostrou variável. Entre 21 amostras multirresistentes à antibióticos (Staphylococcus resistente à meticilina, Enterococcus spp, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens e Escherichia coli) onze (52%) e oito (38%) foram resistentes ao composto quaternário de amônio e aos fenóis, respectivamente. Dentre as 6 amostras que demonstraram susceptibilidade aos antibióticos (estafilococos, Enterococcus spp, P. mirabilis, E. cloacae e E. coli), duas amostras (33%) mostraram resistência a estes desinfetantes. Os resultados observados neste estudo mostraram que não houve correlação entre susceptibiliadde à antibióticos e susceptibilidade à desinfetantes quando foram analisadas amostras clínicas hospitalares.

    Abstract in English:

    Nosocomial infections are an important cause of morbidity and mortality all over the world. It has been shown that appropriate environmental hygienic and disinfection practices can be very helpful to hospital infection control. The purpose of this study was to evaluate the bactericidal activity of some disinfectants against antibiotic-susceptible and antibiotic-resistant hospital bacterial isolates. The susceptibility of 27 clinical isolates to disinfectants and antibiotics was determined by the Association of Official Analytical Chemist’s (AOAC) Use-Dilution method and by the Kirby-Bauer method, respectively. All strains tested were susceptible to sodium hypochlorite, glutaraldehyde and to the association quaternary ammonium - formaldehyde - ethyl alcohol disinfectants. However, the susceptibility of strains to phenol and to one quaternary ammonium compound was variable. Among twenty-one antibiotic-multiresistant strains (methicillin-resistant staphylococci, Enterococcus spp, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens and Escherichia coli) eleven (52%) and eight (38%) strains were resistant to the quaternary ammonium and phenol compounds, respectively. Among six isolates that demonstrated susceptibility to antibiotics (staphylococci, Enterococcus spp, P. mirabilis, E. cloacae and E. coli) two strains (33%) showed resistance to these disinfectants. The results demonstrated the lack of correlation between antibiotic-susceptibility and susceptibility to disinfectants in hospital strains.
  • The iron uptake mechanisms of enteroinvasive Escherichia coli Medical Microbiology

    Andrade, Agda; Dall’Agnol, Monique; Newton, Salete; Martinez, Marina B.

    Abstract in Portuguese:

    Cepas de Escherichia coli enteroinvasora de diferentes sorotipos isoladas de pacientes com diarréia aguda foram examinadas quanto a capacidade de produzir sideróforos e proteínas de membrana externa reguladas pelo ferro (IROMP). O crescimento bacteriano em meio com deficiência em Fe foi obtido em caldo Lúria acrescido de 200 mM de alfa-<FONT FACE="Symbol">a</font>’dipiridil. Todas as cepas produziram enterobactina e 40% produziram aerobactina. As cepas produziram IROMPs com MM variando de 82-67 kDa. As proteínas foram induzidas ou estimuladas pela deficiência de ferro. Diferenças foram observadas no perfil eletroforético entre os sorotipos, originando 5 perfis eletroforéticos. Todos os sorotipos, com exceção do sorotipo O28ac:H- (onde a proteína de 76 kDa não foi produzida), expressaram proteínas de 82 kDa (FepA) e 76 kDa (IutA). Várias cepas (O29:H-, O144:H-, O152:H- e O167:H-) expressaram IutA na membrana externa, na ausência da produção de aerobactina. Além das proteínas (FepA e IutA), foram encontradas em alguns sorotipos duas IROMPs de função desconhecida: uma proteína de 71 kDa foi detectada em 3 perfis e uma de 67 kDa presente no sorotipo O152:H-. Além disso, 2 bandas (39 e 43 kDa), as quais não foram reguladas pelo ferro, mostraram afinidade à lactoferrina humana.

    Abstract in English:

    Enteroinvasive Escherichia coli strains (EIEC) of different serotypes isolated from patients with acute diarrhea were examined for the ability to produce siderophores and iron-regulated outer membrane proteins (IROMP). For iron starvation cultures were grown at 37°C in LB supplied with 200 muM of <FONT FACE="Symbol">a</font>-alpha’dypirydil. All strains produced enterobactin and twelve (40%) produced aerobactin. The strains showed IROMP varying from 67-82 kDa. Proteins were either induced or stimulated by the iron starvation. Differences were observed in the electrophoretic profile among the serotypes, originating 5 electrophoretic profiles. All serotypes expressed proteins of 82 kDa (FepA) and 76 kDa (IutA) (except serotype O28ac:H- that did not produce the 76 kDa protein). Several strains (O29:H-, O144:H-, O152:H-, and O167:H-) expressed IutA in the outer membrane, in the absence of aerobactin production. Additionally to well characterized proteins (FepA and IutA), we found two IROMP of unknown function in some serotypes: a 71 kDa protein was detected in three profiles and a 67 kDa protein was present in serotype O152:H-. Moreover, two bands (39 and 43 kDa) which were not iron-regulated bound specifically to human lactoferrin.
  • Thermal stability of xylanases produced by Aspergillus awamori Industrial Microbiology

    Lemos, Judith Liliana Solórzano; Bon, Elba P.S.; Santana, Maria de Fátima Ebole; Pereira Junior, Nei

    Abstract in Portuguese:

    O presente trabalho trata do estudo do efeito da temperatura na atividade e estabilidade de endo-xilanase e beta-xilosidase produzidas, extracelularmente, por Aspergillus awamori. O cultivo deste microrganismo, em bagaço de cana finamente dividido, produziu predominantemente endo-xilanases (30 U/ml) e menores atividades de beta-xilosidase (1,3 U/ml); esta última exibiu considerável estabilidade em faixa de temperatura variando de 35 a 55°C, por outro lado verificou-se uma menor termo estabilidade para a endoenzima. A estabilidade térmica de endo-xilanase foi aumentada consideravelmente através da adição de polióis, principalmente xilitol e sorbitol em concentração de 2,0 M. No que concerne à estocagem a baixa temperatura (-4°C), observou-se uma estabilidade particular na atividade endo-xilanásica (100%), durante 165 dias, porém, um decréscimo de aproximadamente 20% na atividade beta-xilosidásica foi verificado após os primeiros 15 dias de armazenamento nas mesmas condições, mantendo-se aproximadamente em 75% da atividade inicial no mesmo período de tempo.

    Abstract in English:

    The effect of temperature on the activity and stability of endoxylanase and beta-xylosidase from Aspergillus awamori was investigated. The growth of A. awamori in milled sugar cane bagasse produced predominantly extracellular endoxylanase (30 U/ml) and lower amounts of beta-xylosidase (1.3 U/ml). Grown in sugar cane bagasse as the principal carbon source, the microorganism produced a quite stable beta-xylosidase in a temperature range of 35-55°C, but it exhibited a lower thermostable endoxylanase. The thermostability of endoxylanase was enhanced through addition of polyhydric alcohols, mainly 2 M xylitol and sorbitol solutions. Particular stability upon storage (100%) was found for endoxylanase at -4°C for 165 days. Yet for beta-xylosidase, an activity decrease of approximately 20% was observed during the first 15 days of storage, maintaining roughly 75% of initial activity until the end of the experiment.
  • Fermentation of sweet whey by recombinant Escherichia coli K011 Industrial Microbiology

    Leite, Amarildo Ricardo; Guimarães, Walter Vieira; Araújo, Elza Fernandes de; Silva, Daison Olzany

    Abstract in Portuguese:

    A produção de etanol a partir de soro de leite empregando a cepa Escherichia coli KO11 recombinante, em fermentação de batelada, foi testada. O rendimento máximo de etanol foi obtido em 96h, representando apenas 38% do rendimento teórico. A suplementação do soro com os componentes do caldo LB aumentou o rendimento para 96% em 72h. A adição de 0,5% de extrato de levedura ao soro resultou em um rendimento máximo de 74% em 36h que aumentou para acima de 100% quando se adicionou extrato de levedura e uma solução de metais traço (Fe++, Mn++ e Zn++).

    Abstract in English:

    The production of ethanol from sweet whey using the recombinant Escherichia coli KO11, in batch fermentation, was tested. The maximum ethanol yield was reached after 96h, representing only 38% of the theoretical yield. The supplementation of whey with components of LB broth increased the maximum yield to 96% in 72h. The addition of 0.5% yeast extract to whey resulted in maximum yield of 74% at 36h and it increased to over 100% when yeast extract and trace metals solution (Fe++, Mn++ and Zn++) were added.
  • Methodology for fast evaluation of Bacillus thuringiensis crystal protein content Methods

    Alves, Lúcia M. Carareto; Lemos, Manoel V. F.

    Abstract in Portuguese:

    O desenvolvimento da produção e uso do Bacillus thuringiensis no Brasil em escala comercial enfrenta certas dificuldades, entre elas o estabelecimento de metodologias para a quantificação de produtos tóxicos a serem comercializados. Atualmente, a quantidade de toxinas é expressa como porcentagem do total de proteínas presentes em amostras em consideração. Tal metodologia, entretanto, não mede a quantidade real de uma determinada proteína presente em um produto qualquer, além do fato de diferentes linhagens bacterianas possuírem diferentes genes codificadores para endotoxinas e mesmo para b-toxina. Desde que os diferentes tipos de toxinas apresentam diferentes características antigências, este trabalho tem como objetivo a utilização de técnicas imunológicas para quantificar específicamente o conteúdo de proteína cristal presente em diferentes amostras. A proteína cristal produzida pela subespécie B. thuringiensis var. israelensis foi purificada por ultracentrifugação e utilizada para imunizar coelhas e produzir soros hiperimunes. Tais soros foram posteriormente usados para avaliar o nível de proteína cristal em bioinseticidas comerciais e em culturas de laboratório desta bactéria utilizando-se a técnica do imunodot. Os resultados foram obtidos por comparação de reações com concentrações conhecidas de proteína cristal permitindo assim avaliar com segurança os níveis desta proteína em várias preparações.

    Abstract in English:

    The development of the production and use of Bacillus thuringiensis in Brazil at a commercial scale faces certain difficulties, among them the establishment of efficient methodologies for the quantitation of toxic products to be commercialized. Presently, the amount of toxin is given in percentage by analyzing the samples total protein content. Such methodology however, does not measure the actual amount of active protein present in the product, since most strains express different endotoxin genes and might even produce b-toxin. Since the various types of toxins exhibit different antigenic characteristics, this work has as objective the utilization of fast immunological techniques to quantify the level of crystal protein. Crystal protein produced by a subspecies of Bacillus thuringiensis var. israelensis was purified by ultracentrifugation and utilized to immunize rabbits and to produce hiperimmune sera. Such sera were latter used to evaluate the level of proteins on commercial bioinsecticide and on laboratory cultures of B. thuringiensis through the immunodot technique. The results were obtained by comparison of data obtained from reactions with known concentrations of crystal protein permitting to evaluate the level of such protein on various materials.
  • Immobilization of lipase from Fusarium solani FS1 Methods

    Knight, Kirsty; Pimentel, Maria do Carmo Barros; Morais, Marcia Maria Camargo de; Ledingham, William M.; Lima Filho, José Luiz de; Maia, Maria de Mascena Diniz

    Abstract in Portuguese:

    Lipase de Fusarium solani FS1 foi imobilizada por ligação covalente usando esferas de poliacrilamida e Dacron magnetizado, retendo 12%, e 97% de atividade, respectivamente. A lipase foi também enclausurada em esferas de poliacrilamida e reteve 53% de sua atividade específica. Investigações sobre o comportamento cinético usando trioleína como substrato mostraram que as lipases imobilizadas não seguem a cinética de Michaelis-Menten.

    Abstract in English:

    Lipase from Fusarium solani FS1 was immobilized by covalent attachment to polyacrylamide beads and onto magnetized Dacron, retaining 12% and 97% of activity, respectively. Lipase was also entrapped within polyacrylamide beads, retaining 53% of activity. Investigations of the kinetic characteristics of the immobilized derivatives using triolein as substrate showed that lipase immobilized onto polyacrilamide beads and Dacron did not follow Michaelis-Menten kinetics.
  • Ultrastructural aspects in perithecia hyphae septal pores of Glomerella cingulata F. SP. Phaseoli Micology

    Roca M., María Gabriela; Ongarelli, Maria das Graças; Davide, Lisete Chamma; Mendes-Costa, Maria Cristina

    Abstract in Portuguese:

    Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Schrenk f. sp. phaseoli, conhecida no seu estado anamórfico como Colletotrichum lindemuthianum (Sacc. & Magn.) Briosi & Cav., é agente causal da antracnose do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.). Aspectos ultraestruturais das hifas do peritécio deste patógeno foram observados. Os poros dos septos das hifas do peritécio apresentaram-se obstruídos com uma vesícula ou livres. Alguns septos das hifas do peritécio foram observados sem poros. Os corpos de Woronin, próximos aos poros dos septos, mostraram-se como estruturas globosas mais eletrodensas que as obstruções encontradas nos poros.

    Abstract in English:

    Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Schrenk f. sp. phaseoli, better known in its anamorphic state Colletotrichum lindemuthianum (Sacc. & Magn.) Briosi & Cav., is a causal agent of anthracnose in beans (Phaseolus vulgaris L.). Ultrastructural aspects of the perithecial hyphae of this pathogen were studied. The perithecia hyphae septal pores were found either plugged by a vesicle or unplugged. Some perithecia hyphae septa presented no pore. The Woronin bodies, close to the septal pores, appeared as globose structures which were more electron dense than the occlusions plugging the septal pore.
  • Fumonisins in corn cultivars in the state of São Paulo Micology

    Camargos, Simone M.; Soares, Lucia M. Valente; Sawazaki, Eduardo; Bolonhezi, Denizart; Castro, Jairo L.; Bortolleto, Nelson

    Abstract in Portuguese:

    Vinte e três amostras, representando 19 cultivares de milho com diferentes tipos de germoplasma, de endosperma e ciclo vegetativo, foram avaliadas quanto ao teor de fumonisinas em três Estações Experimentais do Instituto Agronômico (Capão Bonito, Ribeirão Preto e Votuporanga) em São Paulo, Brasil, durante a safra de 97/98. Todos os cultivares analisados estavam contaminados com fumonisinas em níveis que variaram de 1.63 µg/g a 25.69 µg/g e uma média de 5.61 µg/g FB1 e de 0.38 µg/g a 8.60 µg/g e uma média de 1.86 µg/g FB2. Estes níveis tão elevados colocam o milho cultivado no Estado de São Paulo entre os mais contaminados do mundo em termos de fumonisinas.

    Abstract in English:

    Twenty three samples, belonging to 19 corn cultivars with distinct types of germoplasms, endosperm and length of vegetative cycle, were analyzed for fumonisins B1 and B2. The cultivars were grown in experimental fields in three locations (Votuporanga, Ribeirão Preto and Capão Bonito) within the State of São Paulo, Brazil, during the 97/98 crop. All samples were contaminated with fumonisins with concentrations ranging from 1.63 µg/g to 25.69 µg/g with an average of 5.61 µg/g for FB1 and from 0.38 µg/g to 8.60 µg/g with an average of 1.86 µg/g for FB2. In terms of fumonisins, these high levels put the corn cultivated in São Paulo among the most contaminated in the world reported to date.
  • Salmonella spp investigation in transport boxes of day-old birds Veterinarian Microbiology

    Zancan, Fábio Tavares; Berchieri Junior, Angelo; Fernandes, Sueli Aparecida; Gama, Nilce Maria Soares Queiroz

    Abstract in Portuguese:

    Foram examinadas caixas de transporte de pintos de um dia com o objetivo de investigar a presença de Salmonella no momento em que chegaram à granja. 1611 caixas foram amostradas em 15 propriedades, sendo uma granja de avós, quatro granjas de matrizes, duas de frangos de corte e seis de aves de postura comercial. Foram feitas 19 visitas a essas granjas e Salmonella foi encontrada em 10 delas. Salmonella Heidelberg foi encontrada em caixas de cinco granjas, S. Heidelberg e S. Mbandaka em caixa de uma granja de matriz. S. Enteritidis somente, S. Enteritidis e S. Mbandaka simultaneamente, e S. Cerro somente, foram detectadas em caixas de três, uma e uma granjas de postura comercial, respectivamente.

    Abstract in English:

    The presence of Salmonella was investigated in transport boxes of newly hatched chicks in the moment they were received in the farms. 1,611 boxes, delivered to 15 farms (one broiler grand-parent farm, four broiler parent farms, two commercial broiler chick farms and seven laying hens farms) were tested. A total of 19 visits to these farms were done, and Salmonella was detected in ten of these visits. Salmonella Heidelberg was detected in boxes in five farms. S. Heidelberg and S. Mbandaka were simultaneously detected in one broiler breeder farm. Salmonella Enteritidis alone, S. Enteritidis and S. Mbandaka and S. Cerro alone were detected in three, one and one laying hens farms, respectively.
Sociedade Brasileira de Microbiologia USP - ICB III - Dep. de Microbiologia, Sociedade Brasileira de Microbiologia, Av. Prof. Lineu Prestes, 2415, Cidade Universitária, 05508-900 São Paulo, SP - Brasil, Ramal USP 7979, Tel. / Fax: (55 11) 3813-9647 ou 3037-7095 - São Paulo - SP - Brazil
E-mail: bjm@sbmicrobiologia.org.br