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Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 31, Issue: 4, Published: 2000
  • Survival and conjugal transfer between Bacillus thuringiensis strains in aquatic environment Environmental And Soil Microbiology

    Furlaneto, Luciana; Saridakis, Halha Ostrensky; Arantes, Olívia Márcia Nagy

    Abstract in Portuguese:

    O presente trabalho é um estudo sobre a sobrevivência e a conjugação de linhagens de Bacillus thuringiensis em água. Os experimentos conduzidos no laboratório mostram que as células e os esporos de B. thuringiensis podem persistir pelo menos 10 dias na água. A esporulação inicia-se 12-15 horas após a inoculação. O processo de conjugação foi demonstrado em diferentes ambientes aquáticos, tanto em condições de laboratório quanto no meio ambiente.

    Abstract in English:

    Field and laboratory studies were conducted to assess the survival of cells and spores and plasmid transfer between Bacillus thuringienis strains in aquatic environment. Results indicated that cells and spores of B. thuringiensis can survive for 10 days in water, without altering their number. The sporulation process began after 12-15 hours of inoculation of water. B. thuringiensis was able to transfer conjugative plasmids in the aquatic environment.
  • Biological control of Phytophthora root rot of avocato with microorganisms grown in organic mulches Environmental And Soil Microbiology

    Costa, Jefferson L. da S.; Menge, John A.; Casale, Willian L.

    Abstract in Portuguese:

    Compostos orgânicos colonizados com agentes de controle microbiológico, então denominados compostos bioativados, foram testados quanto a sua habilidadade controlar à podridão radicular de Phytophtora no abacateiro (Persea americana Mill.) Mutantes de Gliocladium virens (KA 230-1) e Trichoderma harzianun (KA 159-2) resistentes a benomyl recuperados de solos supressivos e selecionados como eficientes antagonistas à P. cinnamoni foram avaliados quanto à sua capacidade de colonizar diversos compostos orgânicos em condições de laboratório. O Capim Sudão e um Composto de Jardim de alta granulação demonstraram quanto à sua capacidade de multiplicar propágulos de agentes de biocontrole, serem superiores à um composto de Jardim de granulação fina, à um composto de madeira e à um composto de casca de arroz. A condição ideal de colonização destes compostos foi encontrada à 24°C sob teor de umidade de 20% para Capim Sudão e 30% para o composto de Jardim de alta granulação, desde que incubados por 15 dias. Em casa de vegetação Capim Sudão e o Composto de Jardim de alta granulação quando colonizados por G. virens e utilizados como cobertura superficial do solo demonstraram serem as melhores combinações para redução da população de P. cinnamomi. Em vasos contendo solos artificialmente infestados e cultivados com abacateiro por dois meses, a combinação destes compostos com G. virens produziu de 31 à 37% de raízes de abacateiro sadias contra 0% de sanidade no controle.

    Abstract in English:

    Organic mulches colonized with microbial biocontrol agents, termed bioenhanced mulches, were tested for their ability to reduce Phytophthora root rot of avocado (Persea americana Mill.). Benomyl-resistant mutants of Gliocladium virens (KA 230-1) and Trichoderma harzianum (KA 159.2) isolated from suppressive soils and selected as efficient antagonists of P. cinnamomi were evaluated for their ability to colonize different mulches under controlled laboratory conditions. Sudangrass and a coarse yardwaste were found to be better substrates than a fine yardwaste, woodwaste or rice hulls for biocontrol agents propagules production. The most suitable conditions for colonization were an optimum temperature of 24°C, a moisture content of 20% for sudangrass and 30% for the coarse yardwaste, and a continuous light exposure during a 15-day incubation period. In the greenhouse, fresh sudangrass and a coarse yardwaste colonized with G. virens and used as a surface mulch proved to be the best combination for reducing the population of P. cinnamomi in 4-liter pots containing artificially-infested soil. Healthy avocado roots made up 31-37% of the roots in the G. virens-mulch combinations compared to 0% healthy in infested controls after two months.
  • Antibacterial activity of plant extracts and phytochemicals on antibiotic-resistant bacteria Environmental And Soil Microbiology

    Nascimento, Gislene G. F.; Locatelli, Juliana; Freitas, Paulo C.; Silva, Giuliana L.

    Abstract in Portuguese:

    Foi avaliada a atividade antimicrobiana de extratos vegetais e fitofármacos frente a microrganismos sensíveis e resistentes a antibióticos, bem como observado o possível efeito sinérgico da associação entre antibióticos e extratos vegetais. Foram utilizados os extratos de plantas cujo nomes populares são: tomilho, alecrim, cravo-da-Índia, jambolão, erva cidreira, romã, goiaba, sálvia, manjericão e mil-folhas, e ainda os fitofármacos, ácido benzóico, ácido cinâmico, eugenol e farnesol. Na avaliação da atividade antimicrobiana através do método de difusão em agar, foram utilizadas 14 amostras de microrganismos: 1 levedura (Candida albicans), 5 bactérias sensíveis (Staphylococcus aureus, Salmonella choleraesuis, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Proteus spp ) e 8 bactérias resistentes a antibióticos isoladas de ambiente hospitalar (2 amostras diferentes de Klebsiella pneumoniae, Shigella spp, Proteus spp, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli e Staphylococcus aureus. A determinação do CIM e sinergismo foram realizados pela incorporação dos extratos e antibióticos aos meios de culturas liquidos. O maior potencial antimicrobiano foi verificado para os extratos de cravo e jambolão que inibiram, respectivamente, 64,2 e 57,1% dos microrganismos, inclusive com maior atividade sobre os microrganismos resistentes a antibióticos (83,3%). Associação de antibióticos e extratos vegetais ou fitofármacos, sobre bactérias resistentes a antibióticos, mostrou que em alguns casos ocorreu sinergismo, possibilitando que antibióticos já ineficazes apresentassem ação sobre estas bactérias. Os dados obtidos no presente trabalho permitem concluir que estudos mais detalhados sobre o uso terapêutico das plantas devem ser intensificados, principalmente sobre bactérias resistentes a antibióticos, seja na sua ação individual ou em menores concentrações associados com antibióticos.

    Abstract in English:

    The antimicrobial activity of plant extracts and phytochemicals was evaluated with antibiotic susceptible and resistant microorganisms. In addition, the possible synergistic effects when associated with antibiotics were studied. Extracts from the following plants were utilized: Achillea millifolium (yarrow), Caryophyllus aromaticus (clove), Melissa offficinalis (lemon-balm), Ocimun basilucum (basil), Psidium guajava (guava), Punica granatum (pomegranate), Rosmarinus officinalis (rosemary), Salvia officinalis (sage), Syzygyum joabolanum (jambolan) and Thymus vulgaris (thyme). The phytochemicals benzoic acid, cinnamic acid, eugenol and farnesol were also utilized. The highest antimicrobial potentials were observed for the extracts of Caryophyllus aromaticus and Syzygyum joabolanum, which inhibited 64.2 and 57.1% of the tested microorganisms, respectively, with higher activity against antibiotic-resistant bacteria (83.3%). Sage and yarrow extracts did not present any antimicrobial activity. Association of antibiotics and plant extracts showed synergistic antibacterial activity against antibiotic-resistant bacteria. The results obtained with Pseudomonas aeruginosa was particularly interesting, since it was inhibited by clove, jambolan, pomegranate and thyme extracts. This inhibition was observed with the individual extracts and when they were used in lower concentrations with ineffective antibiotics.
  • Growth and nutritional status of Brazilian wood species Cedrella fissilis and Anadenanthera peregrina in bauxite spoil in response to arbuscular mycorrhizal inoculation and substrate amendment Environmental And Soil Microbiology

    Tótola, Marcos Rogério; Borges, Arnaldo Chaer

    Abstract in Portuguese:

    Estudou-se o crescimento de plantas de Cedrella fissilis Vell. (Cedro Rosa) e de Anadenanthera peregrina Benth (Angico Vermelho) em estéril de mineração de bauxita e sua resposta à inoculação com fungos micorrízicos arbusculares (FMAs) ou à melhoria do substrato. As plantas foram cultivadas em estéril de mineração de bauxita, em solo de camada superficial, em estéril adicionado de solo de camada superficial ou de composto orgânico e inoculadas com os FMAs Acaulospora scrobiculata, Gigaspora margarita ou Glomus etunicatum. A colonização de C. fissilis por Gigaspora margarita foi reduzida de 75% em estéril de mineração de bauxita para apenas 4% em solo de camada superficial. Ao contrário, a colonização de A. peregrina pela mesma espécie fúngica aumentou de 48% no estéril para 60% em solo de camada superficial. A colonização radicular de C. fissilis em solo de camada superficial foi menor que nos outros três substratos testados, o oposto do resultado observado com A. peregrina. A inoculação de C. fissilis e A. peregrina com Acaulospora scrobiculata ou com Glomus etunicatum resultou em aumentos significativos na produção de biomassa vegetal. Plantas das duas espécies, quando não-inoculadas, não responderam às alterações das características do substrato de crescimento. Observou-se também uma partição preferencial de fotossintatos para a parte aérea de plantas de A. peregrina inoculadas com G. etunicatum ou com A. scrobiculata e de C. fissilis inoculadas com qualquer das três espécies de FMAs. C. fissilis respondeu mais significativamente à inoculação micorrízica que A. peregrina. A eficiência micorrízica média (EM) para a produção de matéria seca por C. fissilis foi de 1.847% para A. scrobiculata, 1.922% para G. etunicatum e 119% para G. margarita. Em A. peregrina, a EM foi de 249% para A. scrobiculata, 540% para G. etunicatum e de 50% para G. margarita. O efeito da inoculação sobre o crescimento das plantas parece ter resultado de um aumento na capacidade de absorção de fósforo. A eficiência com que os nutrientes absorvidos foram utilizados para produzir biomassa vegetal foi também significativamente maior em plantas inoculadas com A. scrobiculata ou com G. etunicatum.

    Abstract in English:

    The growth of Cedrella fissilis Vell. (Cedro Rosa) and of Anadenanthera peregrina Benth (Angico Vermelho) in bauxite spoil was studied to evaluate their response to substrate amendment or to inoculation with arbuscular mycorrhizal fungi (AMF). The plants were grown in bauxite spoil, topsoil or spoil amended with either topsoil or compost, and inoculated with the AMF Acaulospora scrobiculata, Gigaspora margarita or Glomus etunicatum. Root colonization was highly dependent on the interaction plant-fungus-substrate. In C. fissilis, root colonization by Gigaspora margarita dropped from 75% in bauxite spoil to only 4% in topsoil. Contrarily, root colonization of A. peregrina by the same fungus increased from 48% in spoil to 60% in topsoil. Root colonization of C. fissilis in topsoil was lower than in the three other substrates. The opposite was observed for A. peregrina. Inoculation of the plants with Acaulospora scrobiculata or Glomus etunicatum was very effective in promoting plant growth. Plants of both C. fissilis and A. peregrina did not respond to amendments of bauxite spoil unless they were mycorrhizal. Also, a preferential partitioning of photosynthates to the shoots of A. peregrina inoculated with G. etunicatum or A. scrobiculata, and of C. fissilis inoculated with any of the three species of AMF was observed. C. fissilis showed a greater response to mycorrhizal inoculation than A. peregrina. The mean mycorrhizal efficiency (ME) for dry matter production by C. fissilis was 1,847% for A. scrobiculata, 1,922% for G. etunicatum, and 119% for G. margarita. In A. peregrina, the ME was 249% for A. scrobiculata, 540% for G. etunicatum, and 50% for G. margarita. The effect of mycorrhizal inoculation on plant growth seems to be related in part to an enhanced phosphorus absorption by inoculated plants. Moreover, the efficiency with which the absorbed nutrients were used to produce plant biomass was much greater in plants inoculated with A. scrobiculata or G. etunicatum.
  • Isolation of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) serotype 091:H21 from a child with diarrhea in Porto Alegre city, RS, Brazil Medical Microbiology

    Cantarelli, Vlademir; Nagayama, Kenichi; Takahashi, Akira; Honda, Takeshi; Cauduro, Paulo F.; Dias, Cícero A.G.; Mezzari, Adelina; Brodt, Teresa

    Abstract in Portuguese:

    É descrito o isolamento de uma cepa de Escherichia coli O91:H21 produtora de toxina Shiga (STEC) em associação com diarréia em uma criança da cidade de Porto Alegre, RS, Brasil. Dado o potencial para causar complicações graves, infecções por STECs deveriam ser melhor avaliadas em nossa população.

    Abstract in English:

    We describe the isolation of one strain of Shiga toxin-producing Escherichia coli O91:H21 from a child with diarrhea in the city of Porto Alegre, RS, Brazil. Considering the pathogenic potential of STEC, these organisms should be looked for more carefully among our population.
  • Elaboration and evaluation of a new screening medium for detection and presumptive identification of extended-spectrum beta-lactamase-producing organisms (ESBL) Medical Microbiology

    Silva, Carlos Henrique Pessôa de Menezes e

    Abstract in Portuguese:

    As novas beta-lactamases têm aparecido, na maioria das vezes, como consequência do amplo uso de antibióticos beta-lactâmicos de largo espectro. Os profissionais de saúde precisam estar atentos acerca do problema da resistência bacteriana causado por estas novas enzimas e conhecer os corretos procedimentos para detectar, prevenir e controlar tais situações. Neste estudo, um novo meio de triagem foi desenvolvido no setor de Microbiologia do Marcos Daniel Laboratório - Vitória, ES (denominado CIVA - Ceftazidima-Inositol-Vancomicina-Anfotericina B) e a sua performance microbiológica foi avaliada quanto à detecção e identificação presuntiva de enterobactérias produtoras de ESBL. Foram realizadas 126 culturas de amostras fecais de pacientes hospitalizados no Hospital Santa Monica (Vila Velha, ES, Brasil), previamente expostos a combinações de antibióticos de largo espectro. As bactérias foram detectadas pelo meio baseado nas cores das colônias desenvolvidas (devido à fermentação do inositol). Testes adicionais foram realizados para a correta identificação destes microorganismos. Não foram detectados resultados falso-positivos.

    Abstract in English:

    The new ß-lactamases have arisen largely as a consequence of heavy use of new expanded spectrum ß-lactam antibiotics. Health professionals need to be aware of the resistance problems caused by the new enzymes, and know the correct procedures to detect, prevent and control such problems. In this study, a new screening medium called Ceftazidime-Inositol-Vancomycin-Amphotericin B Agar (CIVA) was elaborated and the microbiological performance was evaluated for the detection and presumptive identification of ESBL-producing members of Enterobacteriaceae. It was performed in 126 stool samples from hospitalized patients at Santa Monica Hospital (Vila Velha, ES, Brazil), who had been heavily exposed to broad-spectrum antibiotic combinations. The bacteria were detected by the medium based on their colony colours (due to inositol fermentation). Additional tests were required for correct identification of these strains. No false positive rates were detected.
  • Molecular identification of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) associated with infant diarrhea in Londrina, Parana, Brazil Medical Microbiology

    Kobayashi, Renata K. T.; Saridakis, Halha Ostrensky; Dias, Angela M.G.; Vidotto, Marilda C.

    Abstract in Portuguese:

    A prevalência de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) em crianças em Londrina-PR, Brazil, foi avaliada através de sondas de DNA marcadas com digoxigenina, as quais identificam o plasmidio EAF (EPEC adherence factor) e os genes de virulência para EPEC, bfp (bundle-forming pilus) e eae (E. coli attaching and effacing). As amostras de E. coli foram também sorotipadas e testadas para a aderência às células HEp-2. Das 102 crianças com diarréia, 19 colonias de E. coli hibridizaram com pelo menos uma sonda, e destas, 11 foram identificadas como EPEC típica pois hibridizaram com as 3 sondas testadas. Todas as EPEC típicas apresentaram o padrão de aderência localizada e não apresentaram os genes para enterotoxinas (ST e LT) e invasão por PCR. Seis EPEC típica (43%) pertenceram ao sorotipo clássico O119:H6, uma ao sorotipo O111:H6 e em quatro amostras (29%) o antígeno O não foi determinado com os soros contra O1-O173 (ONT:H7). Três amostras foram classificadas como EPEC atípicas: O26H-, O111:H9 e O119:HNT. E. coli O26H- e O111:H9 hibridizaram somente com eae e mostraram padrão de aderência localizada "like" (LAL); O119:HNT hibridizou com as sondas bfp e eae, e mostrou padrão de aderência localizada/difusa (LA/DA) após 6 h. O padrão DA foi observado em duas amostras (ONT:H11 e O142:H34) isoladas de crianças com diarréia, as quais hibridizaram com eae. Dos 46 controles, cinco colônias hibridizaram com pelo menos uma sonda, mas nenhuma hibridizou com as 3 sondas testadas ou apresentou LA. Três amostras com padrão DA hibridizaram com sonda eae. Nenhuma EPEC com sorotipo clássico foi encontrada nas fezes de crianças controle.

    Abstract in English:

    In this work, the prevalence of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) in children in Londrina-PR, Brazil, was evaluated by means of digoxigenin-labelled DNA probes which identify the plasmid responsible for EPEC adherence factor (EAF), and virulence genes for EPEC as bundle-forming pilus (bfp) and E. coli attaching-effacing factor (eae). In addition, the isolated strains were serotyped and tested for adherence to HEp-2 cells. From 102 children with diarrhoea, 19 strains hybridized with at least one probe, and eleven of them were identified as typical EPEC because they hybridized with the three probes used, showed a localized adherence (LA) pattern, and presented no genes for enterotoxins (ST and LT) or invasion as detected by PCR. Six of the typical EPEC strains belonged to the classical serotype O119:H6 (43%); in four strains O antigens could not be determined using antisera against O1 to O173, they were all ONT:H7 (29%); one strain belonged to O111:H6. Three strains were classified as atypical EPEC: O26H-, O111:H9 and O119:HNT. Strains O26H- and O111:H9 hybridized with the eae probe only and showed localized adherence like (LAL) pattern; strain O119:HNT hybridized with the bfp and eae probes, and showed a localized adherence/diffuse adherence (LA/DA) pattern after 6 h. A DA pattern was observed in two strains isolated from children with diarrhoea (ONT:H11 and O142:H34), which hybridized with the eae probe. From 46 controls, five strains hybridized with one or two probes, but none hybridized with all probes or presented the LA pattern. Three strains with the DA pattern hybridized with the eae probe. No EPEC strain belonging to classical EPEC serotypes was isolated from faeces of control children.
  • Clinical and Laboratory evaluation of measleslike rash in children and young adults Medical Microbiology

    Stewien, Klaus Eberhard; Lima, Lourdes Rehder de Andrade Vaz de; Botosso, Viviane Fongaro; Oliveira, Maria Isabel de; Fagundes, Simone N.; Nogueira, Meri B.; Ragazzi, Selma Lopes Betta; Costa, Maria Tereza Zuluni da; Ejzenberg, Bernardo; Durigon, Edison Luiz

    Abstract in Portuguese:

    Apresenta-se um estudo sobre a avaliação clínica e laboratorial de crianças e adultos jovens com exantema semelhante ao sarampo, durante a ocorrência do surto epidêmico de sarampo na região metropolitana da Grande São Paulo no final de 1996 que se alastrou por todo o país durante o ano de 1997. O diagnóstico laboratorial de sarampo foi firmado em 7 dos 11 pacientes examinados, por detecção direta de IgM específico em amostras de soro da fase aguda da doença, por soroconversão de IgG em um par de amostras da fase aguda e convalescente, pelo isolamento do vírus em culturas de linhagem B95a e pela detecção do RNA viral por PCR em linfócitos do sangue periférico e na urina. O quadro clínico apresentado pelos pacientes nem sempre correspondeu à forma clássica do sarampo. Um jovem adulto, que havia sido vacinado contra o sarampo, apresentou um quadro clínico modificado. Os 4 casos restantes foram negativos em todas as provas laboratoriais para o sarampo, tendo diagnóstico final de exantema súbito (2 casos), escarlatina e Doença de Kawasaki. O presente estudo reforça o ponto de vista de que os sinais e sintomas clínicos são geralmente insuficientes para estabelecer um diagnóstico preciso de sarampo na era pós-vacinal, sendo indispensável um sistema de vigilância baseado em resultados laboratoriais que confirmam todos os casos suspeitos, inclusive os casos de sarampo com sorologia IgM-negativa

    Abstract in English:

    A clinical and laboratory evaluation of 11 children and young adults with measleslike rash was done during the measles outbreak in the Greater São Paulo Metropolitan area at the end of 1996 and spread over the country during 1997. Measles was laboratory confirmed in 07 patients by specific IgM detection in acute serum specimens using an IgM-capture EIA, by specific IgG seroconversion in serum pairs, and by reverse transcription PCR and virus isolation in peripheral blood lymphocytes. Clinical presentations were not always classic; one of the 07 cases had received measles vaccine and corresponded to modified clinical case of measles. The 4 remaining cases were negative for measles and were diagnosed as exanthem subitum (2 cases), scarlet fever and Kawasaki disease. The present study reinforces the view that clinical features alone are not sufficient for establishing an accurate diagnosis in the post-vaccine era, and a surveillance system based on sensitive laboratory results is needed so that it can confirm IgM-negative measles cases.
  • Carbon sources effect on pectinase production from Aspergillus japonicus 586 Industrial Microbiology

    Teixeira, Maria F. S.; Lima Filho, José L.; Durán, Nelson

    Abstract in Portuguese:

    Foi avaliado o efeito de diferentes fontes de carbono na atividade de pectinesterease, endo - e exo-polygalacturonase de Aspergillus japonicus 586, em meio líquido (soluções de Manachini) suplementado com diferentes concentrações de substratos. O meio de cultura foi inoculado com 5 x 10(6) esporos/ml e mantido sob agitação (140 rpm), a 30°C, durante 120 h. A avaliação das enzimas foi realizada a cada 24 h após filtração. O extrato cru de A. japonicus 586 mostrou que as melhores atividades enzimáticas foram obtidas na presença de 0,5% pectina (pectinestarease), 0,2% pectina e 0,2% glicerol (endopoligalacturonase) e 0,5% pectina associada a 0,5% glicose (exopoligalacturonase). Diferentes concentrações de fontes de carbono, isoladas ou associadas afetaram significativamente as atividades de polinesterase, endo- e exopoligalacturonase. Quando adicionado pectina, glicose e sacarose em altas concentrações, ao meio de cultura, observou-se um efeito de repressão de todas as enzimas analisadas.

    Abstract in English:

    The effect of different carbon sources on the pectinesterases, endo- and exo-polygalacturonase activities from Aspergillus japonicus 586 was evaluated in liquid media (Manachini solutions) supplemented with different substrate concentrations. The culture medium was inoculated with 5.10(6) spores/ml and mantained under agitation (140 rpm), at 30°C, during 122 h. The enzyme evaluation was carried out 24 h after filtration. The crude extract from A. japonicus 586 indicated that the best enzymatic activities were afforded in the presence of 0.5% pectin (pectinesterease), 0.2% pectin and 0.2% glycerol (endopolygalacturonase), and 0.5% pectin associated to 0.5% glucose (exopolygalacturonase). Carbon sources concentration, isolated or associated, significantly affects the pectinesterase, and endo- and exopolygalacturonase activities. Pectin, glucose and saccharose, when added to the culture medium in high concentrations, exhibited a repression effect on all the analyzed enzymes.
  • Characterization of the Saccharomyces cerevisae Y500-4L killer toxin Industrial Microbiology

    Soares, Giselle A. M.; Sato, Hélia H.

    Abstract in Portuguese:

    A linhagem de Saccharomyces cerevisiae Y500-4L, selecionada de mosto de fermentação de usina de álcool, produz toxina "killer", letal à levedura comercial Fleischmann Royal Nabisco e outras linhagens de leveduras. Esta proteína foi caracterizada, verificando-se que a produção máxima foi obtida após 24 horas de incubação a 25ºC em meio YEPD. A toxina "killer" apresentou maior atividade na faixa de pH 4,1-4,5 e temperatura de 22-25ºC; e maior estabilidade na faixa de pH 3,8-4,5 a -10ºC, sendo totalmente inativada após 1 hora de incubação a 40ºC em pH 4,1. Após concentração a partir do sobrenadante do meio de cultura através de ultrafiltração e purificação por cromatografia de filtração em gel, estimou-se, através de SDS-PAGE, que o peso molecular desta toxina é cerca de 18 a 20 kDa.

    Abstract in English:

    The strain Saccharomyces cerevisiae Y500-4L, selected from the must of alcohol producing plants, liberates a toxin which is lethal to the commercial yeast produced by Fleischmann Royal Nabisco and other strains of yeast. This toxin was characterized, and the maximum production was obtained after 24 hours of incubation at 25ºC in YEPD medium. The maximum activity was achieved between pH 4.1 and 4.5 and between 22 and 25ºC and maximum stability in the pH range 3.8 to 4.5 at -10ºC. The killer toxin was inactivated by heating at 40ºC for 1 hour at pH 4.1. After concentration by ultrafiltration of culture supernatants and purification by gel filtration chromatography, the molecular weight of the purified toxin was estimated by SDS-PAGE to be about 18-20 kDa.
  • Culture conditions for the production of thermostable amylase by Bacillus sp Industrial Microbiology

    Teodoro, Carlos Eduardo de Souza; Martins, Meire Lelis Leal

    Abstract in Portuguese:

    Estudos sobre a produção de alfa-amilase foram realizados com uma bactéria isolada a partir de amostras de solo. As células foram cultivadas em um meio mineral contendo amido como única fonte de carbono. A adição de cálcio (10mM) ou peptona (1,0%) e extrato de levedura (0,5%) ao meio mineral, encurtou o período lag, melhorou o crescimento e a síntese de alfa-amilase. A adição de glicose a cultura diminuiu grandemente a síntese de alfa-amilase, demonstrando que o efeito glicose ocorre neste microrganismo. A temperatura ótima e o pH inicial ótimo para a síntese da amilase pelo organismo foram 50ºC e 7,0 respectivamente. O pH e temperatura ótima para atividade foram 6,0 e 50ºC respectivamente. O extrato enzimático reteve 100% de atividade quando incubado por uma hora a 90ºC e 40% a 60ºC por 24 horas. A adição de glicose ao meio de cultura diminuiu grandemente a síntese de alfa-amilase.

    Abstract in English:

    Studies on the alpha-amylase production were carried out with a bacterial strain isolated from a soil sample. The cells were cultivated in a mineral medium containing soluble starch as sole carbon source. The addition of calcium (10 mM) or peptone (1%) and yeast extract (0.5%) to the mineral medium shortened the lag period and improved the growth and alpha-amylase synthesis. The addition of glucose to the culture diminished greatly the synthesis of alpha-amylase, demonstrating that a classical glucose effect is operative in this organism. The optimum temperature and initial medium pH for amylase synthesis by the organism were 50°C and 7.0 respectively. The optimal pH and temperature for activity were 6.0 and 50°C respectively. The enzyme extract retained 100% activity when incubated for one hour at 90°C and 40% at 60°C for 24 h. The addition of glucose to the culture diminished greatly the synthesis of alpha-amylase.
  • Isolation, identification and physiological study of Lactobacillus fermentum LPB for use as probiotic in chickens Veterinarian Microbiology

    Reque, Elizete de F.; Pandey, Ashok; Franco, Sebastião G.; Soccol, Carlos R.

    Abstract in Portuguese:

    O nosso trabalho teve como proposta o isolamento e identificação de microrganismos para uso como probiótico em aves. As espécies foram selecionadas de acordo com aspectos de biosegurança, viabilidade durante a estocagem, tolerância a pH baixo, suco gástrico, bile e atividade antimicrobiana. As espécies foram isoladas do papo, proventrículo, moela, íleo e ceco de frango. Os conteúdos destes segmentos foram diluídos e semeados em meio MRS e incubados por 48 h a 37°C em anaerobiose. A identificação das culturas foi realizada de acordo com as características de Lactobacillus presentes no Manual Bergey’s, como bacterioscopia (morfologia), coloração de Gram, crescimento a 15 e 45°C e fermentação de diferentes fontes de carbono. Baseado nestes critérios Lactobacillus fermentum LPB foi identificado e testado para uso como probiótico em frangos. O isolado bacteriano foi avaliado como suplemento alimentar para frangos de corte. Os resultados mostraram que, em comparação com a presença e efeitos de antibióticos, a implantação de L. fermentum LPB, resultou em efeitos similares, manifestado por eficiência alimentar durante o crescimento de frangos.

    Abstract in English:

    Studies were carried out to isolate and identify microorganisms for probiotic use for chickens. Selection of strains included various criteria such as agreement with bio-safety aspects, viability during storage, tolerance to low pH/ gastric juice, bile, and antimicrobial activity. The strains were isolated from the crop, proventriculus, gizzard, ileum and caeca of chicken. Decimal dilution of the contents of these segments were mixed with MRS medium and incubated for 48 h at 37°C under anaerobiosis. The identity of the culture was based on characteristics of lactobacilli as presented in the Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, carrying out bacterioscopy (morphology), Gram stain, growth at 15 and 45°C, and fermentation of different carbon sources. Based on these criteria, Lactobacillus fermentum LPB was identified and tested for probiotic use for chickens. The isolate was evaluated for poultry feeds supplement. The results showed that in comparison to the presence and effects of antibiotics, L. fermentum LPB implantation resulted in a similar effect as that of antibiotics manifested by feed efficiency in growth of chicks.
  • Acute and latent infection in mice with a virulent strain of Aujeszky’s disease virus Veterinarian Microbiology

    Flatschart, Roberto B.; Resende, Maurício

    Abstract in Portuguese:

    Infecções dos tipos aguda e latente foram obtidas em camundongos infectados com a amostra brasileira LA031 do vírus da doença de Aujeszky (ADV). A administração subcutânea da amostra de ADV irradiada com luz ultravioleta foi indispensável para se estabelecer a infecção latente. A presença do ADV em animais foi detectada por PCR. Oligonucleotídeos de 22 mer foram sintetizados e usados para amplificar sequências do gene da glicoproteína gG no gânglio do nervo trigêmio em camundongos com infecção aguda e latente. A especificidade da amplificação foi verificada por hibridização do tipo dot-blot.

    Abstract in English:

    Acute and latent infections with the Brazilian LA031 strain of Aujeszky’s disease virus (ADV) were established in mice. Ultraviolet irradiated ADV administered subcutaneously was a successful way to establish latent infection. The presence of ADV was detected by PCR. Two sets of 22-mer primers were synthesized and used to amplify gG glycoprotein gene sequences in acute and latent infected trigeminal nerve ganglia. The specificity of the amplification was verified by dot-blot hybridization.
  • Genetic diversity of the VP1/VP2 gene of canine parvovirus type 2b amplified from clinical specimens in Brazil Veterinarian Microbiology

    Pereira, Cesar A. D.; Durigon, Edison Luiz

    Abstract in Portuguese:

    Neste estudo foi avaliada a diversidade genética no gene VP1/VP2 do parvovírus canino tipo 2b a partir de amostras isoladas de cães sintomáticos no Brasil. Foram estudadas 21 amostras coletadas no período de 1990 à 1995, previamente caracterizadas como CPV 2b pela técnica de PCR. Observou-se alto grau de similaridade entre as seqüências estudadas e a análise genética da região selecionada não indicou a presença de uma linhagem brasileira específica.

    Abstract in English:

    We evaluated the genetic diversity in the VP1/VP2 gene of CPV type 2b isolates from symptomatic dogs in Brazil. A total of 21 isolates collected from 1990 through 1995 previously typed as CPV2b by PCR assay were studied. Overall we found a high degree of similarity among sequences from different CPV clinical isolates collected. Genetic analysis of this selected region gave no indication of a specific Brazilian parvovirus lineage.
  • A method for the determination of two Alternaria toxins, alternariol and alternariol monomethyl ether, in tomato products Food Microbiology

    Motta, Silvana da; Soares, Lucia M. Valente

    Abstract in Portuguese:

    Tomates são frutas de pele fina e assim facilmente susceptíveis a deterioração por fungos. Alternaria é o gênero que mais freqüentemente invade tomates. A. alternata e outras espécies deste gênero produzem as toxinas alternariol (AOH) e alternariol monometil (AME). Um método analítico para determinação de AME e AOH em produtos de tomate foi desenvolvido e avaliado. O método consiste em uma extração com metanol, clarificação com sulfato de amônio e partição para clorofórmio. Quantificação foi executada por cromatografia líquida de alta eficiência com detetor de arranjo de diodos (DAD). Recuperações médias foram 98,7% e 84,1% para AME e AOH, respectivamente. Os limites de detecção do método, definidos como a menor quantidade das toxinas que permitiu quantificação e confirmação pelo DAD, foram 2,0 ng/g para AME e 5,0 ng/g para AOH.

    Abstract in English:

    Tomatoes, as any soft skinned fruit, are easily susceptible to fungal rot. Alternaria is the genus most frequently encountered in tomatoes. A. alternata and other spp. have been shown to produce the toxins alternariol monomethyl ether (AME) and alternariol (AOH) in tomatoes. A method for determining AME and AOH in tomato products was developed and evaluated. The method involves extraction with methanol, clarification with ammonium sulfate, and partition to chloroform. Quantification was conducted by high performance liquid chromatography with diode array detector (DAD). Average recoveries were 98.7% and 84.1% for AME and AOH, respectively. The quantification limits of the method, defined as the minimum amount that allowed quantification and confirmation by the DAD detector, were 2.0 ng/g for AME and 5.0 ng/g for AOH.
  • Mycoflora and aflatoxin/fumonisin production by fungal isolates from freshly harvested corn hybrids Micology

    Almeida, Adriana P.; Corrêa, Benedito; Mallozzi, Marisa A. B.; Sawazaki, Eduardo; Soares, Lúcia M. Valente

    Abstract in Portuguese:

    A microbiota fúngica de 66 amostras de três híbridos de grãos de milho recém-colhido, provenientes de 3 regiões do Estado de São Paulo - Brasil (Assis, Capão Bonito e Ribeirão Preto), foram analisadas perante a influência dos fatores abióticos (teor de umidade, atividade de água, precipitação pluvial e temperatura média) na frequência de isolamento de fungos, bem como a potencialidade toxigênica das cepas de Aspergillus flavus e Fusarium moniliforme quanto à produção de aflatoxinas e fumonisinas, respectivamente. As análises microbiológicas demonstraram predominância de Fusarium spp., Penicillium spp. e Aspergillus spp. e outros dois gêneros de fungos filamentosos, isolados de grãos com atividade de água entre 0,30 e 0,99 e teor de umidade entre 5,0% e 20,2%. Entre Fusarium spp, F.moniliforme foi a mais frequentemente isolada, enquanto que, em relação ao gênero Aspergillus, predominou A. flavus nas três regiões. Todas as cepas de Fusarium moniliforme isoladas (40), produziram fumonisinas, que variaram de 20 mg/g a 2168 mg/g (FB1) e 10 mg/g a 380 mg/g (FB2). Referente a 10 cepas de Aspergillus flavus isoladas, 6 cepas (60,0%) produziram aflatoxinas, que variaram de 615 mg/kg a 30.750 mg/kg (AFB1) e 11 mg/kg a 22 mg/kg (AFB2).

    Abstract in English:

    The mycoflora of 3 hybrids of freshly harvested corn grains collected from three regions of the state of São Paulo, Brazil (Assis, Capão Bonito and Ribeirão Preto) was investigated. A total of 66 samples were analyzed focusing on the influence of abiotic factors (moisture content, water activity, temperature and rainfall) on both the prevalence of Aspergillus flavus and Fusarium moniliforme, and the ability of these genera isolates to produce aflatoxins and fumonisins, respectively. In the three surveyed regions, the fungal population comprised mainly Fusarium spp., Penicillium spp., Aspergillus spp. and 2 others filamentous fungal genera, which were isolated from corn kernels showing water activity of 0.30 to 0.99 and moisture content of 5.0% to 20.2%. Among the genera Fusarium and Aspergillus, the most frequent species were F. moniliforme and A. flavus, respectively. Concerning the toxigenic potential of F. moniliforme, all isolated strains (40) produced fumonisins at 20 mug/g to 2168 mug/g (FB1) and/or 10 mug/g to 380 mug/g (FB2). From the 10 A. flavus isolates, 6 strains (60.0%) produced aflatoxins at 615 mug/kg to 30.750 mug/kg (AFB1) and/or 11 mug/kg to 22 mug/kg (AFB2).
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