• Microbial contamination of sand from major beaches in Fortaleza, Ceará State, Brazil Environmental and Soil Microbiology

    Vieira, Regine Helena Silva dos Fernandes; Rodrigues, Dália dos Prazeres; Menezes, Everardo A.; Evangelista, Norma Suely de Santana; Reis, Eliane M.F. dos; Barreto, Leopoldo Melo; Gonçalves, Flávia Araújo

    Abstract in Portuguese:

    No presente trabalho, avaliou-se a presença de contaminação fecal e de microrganismos patogênicos em areia seca e areia úmida de três praias de Fortaleza, Ceará: Praia do Mucuripe, Praia do Futuro e Praia do Caça e Pesca. A praia que apresentou maior índice de contaminação com E.coli em areia seca foi a do Caça e Pesca (56%), seguido das praias do Mucuripe (28%) e Futuro (16%). Em areia úmida a ordem decrescente de contaminação por E. coli foi Praia da Caça e Pesca, Futuro e Mucuripe com 48%, 28% e 24% de contaminação, respectivamente. Salmonella foi isolada de duas amostras da Praia do Futuro, uma de areia seca e outra de areia úmida. V. parahaemolyticus foi isolado em 2 amostras de areia seca e 2 de úmida da Praia da Caça e Pesca. Esse patógeno foi isolado de uma amostra de areia úmida da Praia do Futuro e de três de areia úmida e quatro de areia seca da Praia do Mucuripe. As leveduras encontradas em todas as amostras pertenciam ao gênero Candida. O índice de contaminação por leveduras foi maior em amostras de areia seca que de areia úmida. A praia que apresentou maior contaminação por leveduras foi a Praia do Futuro (41%), seguida da Praia do Caça e Pesca e (33%) e da Praia do Mucuripe (26%).

    Abstract in English:

    The presence of faecal contamination and pathogenic microorganisms in samples of dry and wet sand collected from three major beaches in Fortaleza, Ceará State, Brazil: (Praia do Mucuripe, Praia do Futuro and Praia do Caça e Pesca), during the period of May 1999 to January 2000 was evaluated. Praia do Caça e Pesca had the highest incidence of E. coli in dry sand (56%) followed by Praia do Mucuripe (28%) and Praia do Futuro (16%). In wet sand, results were 48%, 28% and 24% for Praia do Caça e Pesca, Praia do Futuro and Praia do Mucuripe, respectively. Only two samples from Praia do Futuro, one from dry sand and another one from wet sand, were positive for Salmonella. V. parahaemolyticus was isolated from four samples from Praia do Caça e Pesca (two from dry-sand samples and two from wet-sand), one from Praia do Futuro (wet sand), and three and four from Praia do Mucuripe (wet and dry sand, respectively). Yeasts belonged to the Candida genus. Dry-sand samples presented higher yeast contaminations level than wet-sand ones. Praia do Futuro had the highest level of yeast contamination (41%), followed by Praia do Caça e Pesca (33%) and Praia do Mucuripe (26%).
  • Vesicular-arbuscular-/ecto-mycorrhiza succession in seedlings of. Eucalyptus spp. Environmental and Soil Microbiology

    Santos, Vera Lúcia dos; Muchovej, Rosa Maria; Borges, Arnaldo Chaer; Neves, Júlio César L.; Kasuya, Maria Catarina M.

    Abstract in Portuguese:

    A ocorrência de micorrizas arbusculares (AM) e ectomicorrizas (ECM) no mesmo sistema radicular foi observada quando Eucalyptus urophylla S.T. Blake, E. citriodora Hook F., E. grandis W. Hill ex Maiden, E. cloeziana F. Muell e E. camaldulensis Dehnh foram inoculadas simultaneamente com Glomus etunicatum Becker & Gederman and Pisolithus tinctorius (Per.) Cocker & Couch. A sucessão entre os dois fungos foi observada. De modo geral, o aumento da colonização ECM foi acompanhado de um decréscimo em AM. A inoculação simultânea resultou em percentagens de colonização diferenciadas das obtidas com a inoculação isolada. Pisolithus tinctorius beneficiou-se da inoculação simultânea com G. etunicatum. Para o fungo AM, o efeito positivo da inoculação simultânea ocorreu até aos 60 dias após a inoculação. A partir de 120 dias, a colonização das raízes por G. etunicatum diminuiu na presença de P. tinctorius. A proporção de AM e ECM variou com o tempo de avaliação e o total da percentagem de raízes colonizadas aproximou-se do valor máximo aos 60 dias da inoculação, mantendo-se constante. Os maiores valores foram observados para E. camaldulensis, seguido por E. citriodora, E. urophylla, E. grandis e E. cloeziana.

    Abstract in English:

    The occurrence of vesicular-arbuscular mycorrhizae (AM) and ectomycorrhizae (ECM) in the same root system was observed when species of Eucalyptus urophylla S.T. Blake, E. citriodora Hook f., E. grandis W. Hill ex Maiden, E. cloeziana F. Muell. and E. camaldulensis Dehnh were simultaneously inoculated with Glomus etunicatum Becker & Gederman and Pisolithus tinctorius (Per.) Cocker & Couch, isolate Pt 90A. The succession between the two fungi was observed. In general ectomycorrhizal colonization increased followed by a decrease in AM. Pisolithus tinctorius was favored in simultaneous inoculation with G. etunicatum, and the positive effect of the simultaneous inoculation of both fungi in the percent colonization by the AM fungus occurred up to 60 days after inoculation. After 120 days, colonization of roots by G. etunicatum decreased in the presence of P. tinctorius. When inoculated simultaneously, the proportion of AM and ECM varied with evaluation time, while the combined percentage of mycorrhizal roots approached the maximum and remained more or less constant after 60 days, suggesting that there could be competition between the fungi for limiting substrate. The maximum percent mycorrhizal colonization varied with Eucalyptus species and the highest value was observed for E. camaldulensis, followed in order by E. citriodora, E. urophylla, E. grandis and E. cloeziana.
  • Biodegradability potential of two experimental landfills in Brazil Environmental and Soil Microbiology

    Vazoller, Rosana Filomena; Gomes, Luciana Paulo; Baldochi, Viviana Maria Zanta; Villas-Bôas, Denise Maria Fortes; Badra, Rosileine Jabur; Povinelli, Jurandyr

    Abstract in Portuguese:

    Durante um ano foi realizado o monitoramento da biodegradabilidade anaeróbia de resíduos sólidos, do potencial de geração de metano e da composição microbiológica de dois aterros sanitários experimentais. Observou-se que, apesar da grande heterogeneidade dos resíduos sólidos, os resultados em termos de estabilização de matéria orgânica durante a fase de produção de metano foram similares para os dois aterros. Ambos os sistemas apresentaram as mesmas faixas de produção de metano (91.5 L CH4 / kg STV - sólidos totais voláteis) e de ácidos orgânicos, principalmente ácidos acético e butírico. Isolou-se ainda, culturas bacterianas dos gêneros Megasphaera, Selenomonas, Methanobacterium, Methanobrevibacter and Methanosarcina.

    Abstract in English:

    Solid wastes anaerobic biodegradability, methane production potential and microbiological composition of two experimental sanitary landfills in Brazil, running for one year, were evaluated. The two landfills showed a similar organic matter stabilization during the methane production phase, despite the high heterogeneity of the solid wastes. Both landfills presented the same level of methane (around 91.5 L CH4 / kg Volatile Total Solids) and organic acids, mainly acetic and butyric acids, in the leachate. Bacterial isolates belonged to genera Megasphaera, Selenomonas, Methanobacterium, Methanobrevibacter and Methanosarcina.
  • DNA polymorphism and total protein in mutants of Metarhizium anisopliae var. Anisopliae (Metsch.) Sorokin strain E9 Environmental and Soil Microbiology

    Freire, Laurineide Lopes de Carvalho; Costa, Ana Bolena Lima da; Góes, Larissa Brandão; Oliveira, Neiva Tinti de

    Abstract in Portuguese:

    Foram analisados cinco mutantes MaE (MaE10, MaE27, MaE34, MaE41 e MaE49) da linhagem selvagem E9 de Metarhizium anisopliae var. anisopliae quanto ao perfil de DNA pela técnica de RAPD e também quanto ao conteúdo de proteína total por espectrometria e eletroforese em gel de poliacrilamida e densitometria. O padrão de marcadores de RAPD evidenciou polimorfismo nas amostras; dos 20 primers testados foram selecionados 7 que geraram 113 bandas. Deste total, 47 estavam presentes em todas as amostras (41.6% de bandas monomórficas) e 66 mostraram polimorfismo (58.4%). O coeficiente médio de similaridade foi de 75%. O conteúdo de proteína total variou de 6 a 8 µg/µl. O zimograma e perfís das frações de proteínas obtidos por densitometria revelaram 7 bandas para a linhagem selvagem E9 e 5 bandas para os mutantes com variações nos percentuais em µg% entre as frações de proteínas. A técnica de RAPD mostrou-se bastante sensível para detectar diferenças entre a linhagem selvagem e os mutantes obtidos por radiação gama. A análise de proteína total também evidenciou mudanças ocorridas na quantidade e no padrão de bandas nos mutantes em relação à linhagem selvagem.

    Abstract in English:

    Five mutants (MaE10, MaE27, MaE24, MaE41 e MaE49) of Metarhizium anisopliae wild strain E9 were analysed for DNA profile through the RAPD technique and for changes in total protein content by spectrophotometry, polyacrylamide gel electrophoresis and densitometry. The pattern of RAPD markers showed genetic polymorphism among the strains: out of twenty primers seven were selected, producing 113 bands. Forty seven bands were present in all strains (41.6% of monomorphic bands) and 66 showed polymorphism (58.4%). The mean coefficient of similarity among all strains was 0.75 (75%). The total protein content varied, staining in the interval of 6.0-8.0 µg/µl. The electrophoresis analysis, through zymogram and protein fraction profiles by densitometry, allowed the observation of seven bands for the wild strain E9 and five bands for the mutants MaE10, MaE27, MaE34, MaE41 and MaE49, evidence of variations in µg% among protein fractions. The RAPD technique was very sensitive to detect genetic differences between the wild type and the mutants obtained through gamma radiation. The total protein analysis also showed changes in quantity and pattern of bands after electrophoresis in the mutants compared to the wild type.
  • Antagonism of Trichoderma species on Cladosporium herbarum and their enzimatic characterization Environmental and Soil Microbiology

    Barbosa, Maria Angélica G.; Rehn, Kurt Georg; Menezes, Maria; Mariano, Rosa de Lima R.

    Abstract in Portuguese:

    O maracujá (Passiflora edulis Sims.), um fruto tropical amplamente consumido, tem sua produção e a qualidade dos seus frutos reduzidos pela verrugose causada por Cladosporium herbarum. Este trabalho objetivou investigar o antagonismo de espécies de Trichoderma (T. polysporum, T.koningii, T. viride e T. harzianum) contra C. herbarum, e estudar a produção de enzimas hidrolíticas extracelulares pelo fitopatógeno e antagonistas. Os resultados mostraram considerável potencial antagônico para o biocontrole dos isolados de C. herbarum por todas as espécies de Trichoderma, exceto T. koningii. O efeito mais promissor foi observado para T. polysporum. Em relação ao padrão de esterase obtido por eletroforese em gel de poliacrilamida, a maior atividade apresentada pelos isolados foi observada cinco dias após a incubação. Os isolados de C. herbarum produziram enzimas extracelulares, lipase, pectinase, cellulase e protease, todas possivelmente relacionadas ao processo de infecção do hospedeiro. A excreção de amilase que parece não estar associada com fitopatógenos foi detectada nas espécies de Trichoderma, mas não em C. herbarum. Além disso, todas as espécies de Trichoderma testadas produziram também celulase e pectinase, exceto T. koningii com relação a esta última enzima. A demonstração de várias isoesterases no zimograma das espécies de Trichoderma e isolados de C. herbarum, foi notavelmente melhorada através da lavagem do micélio com detergentes ou EDTA. Este fato sugere que uma grande fração de enzimas extracelulares pode permanecer presa externamente na parede celular fúngica após excreção.

    Abstract in English:

    The verrucose caused by Cladosporium herbarum reduces production and quality of Passion fruit (Passiflora edulis Sims.), a largely consumed tropical fruit. This work aimed to investigate the antagonism of Trichoderma species (T. polysporum, T. koningii, T. viride and T. harzianum) against Cladosporium herbarum, and to study the production of extracellular hydrolytic enzymes by the pathogen and the antagonists. The results showed considerable antagonistic potential for the biocontrol of C. herbarum isolates by all Trichoderma species, except T. koningii. The most distinguished effect was observed for T. polysporum. In relation to the pattern of esterase obtained by electrophoresis in poliacrylamyde gel, the major activity presented by the isolates was observed after five days of incubation. The C. herbarum isolates produced extracellular enzymes, lipase, pectinase, cellulase, and protease, all possibly related to the infection process. Amylase excretion, not known to be associated with phytopathogens, was detected in Trichoderma species, but not in C. herbarum. In addition to amylase, all Trichoderma species tested produced also extracellular cellulase and pectinase, except T. koningii in relation to the latter enzyme. The demonstration of various esterase isoenzymes in zymograms of the Trichoderma species and C. herbarum isolates was markedly improved by washing the mycelia with detergents or EDTA. This fact suggested that a major fraction of extracelular enzymes may remain attached to outside fungal cell wall after being excreted.
  • Detection of cry1 genes in Bacillus thuringiensis isolates from South of Brazil and activity against Aanticarsia gemmatalis (Lepidoptera:Noctuidae) Environmental and Soil Microbiology

    Bobrowski, Vera Lucia; Pasquali, Giancarlo; Bodanese-Zanettini, Maria Helena; Fiuza, Lidia Mariana

    Abstract in Portuguese:

    A bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) é caracterizada pela sua habilidade de produção de corpos paraesporais durante a esporulação. As proteínas cry1 têm atividade inseticida e são altamente específicas para certos insetos e não são tóxicas para outros insetos, plantas e vertebrados. Neste trabalho, a patogenicidade de doze isolados foram testados contra Anticarsia gemmatalis, um dos mais importantes insetos pragas da cultura da soja. Para tanto, foi aplicada sobre a superfície da dieta uma suspensão de esporo-cristal e a mortalidade de lagartas de Anticarsia gemmatalis foi avaliada sete dias após a aplicação. Quando comparado com uma linhagem de Bt controle, conhecido pela sua alta toxicidade para lagartas da soja, quatro novos isolados exibiram atividade tóxica superior, acima de 90% de mortalidade. Foi utilizada a técnica de PCR para amplificar fragmentos de DNA de regiões codificantes de genes cry1. Os isolados de Bt com alta mortalidade produziram produtos de PCR de tamanho esperado, em torno de 280 pb, isolados não tóxicos ou pouco tóxico não produziram qualquer produto de PCR ou mostraram fragmentos amplificados com padrões diferentes do esperado. Os isolados de Bt com alta atividade contra a lagarta da soja mostraram a presença de proteínas com tamanho de aproximadamente 150 kDa, quando o extrato protéico total foi analisado em SDS-PAGE.

    Abstract in English:

    The bacterium Bacillus thuringiensis (Bt) is characterized by its ability to produce proteic crystalline inclusions during sporulation. Cry1 protein has insecticidal activity and is highly specific to certain insects and not toxic to unrelated insects, plants or vertebrates. In this work, the patogenicity of twelve Bt isolates was tested against Anticarsia gemmatalis, one of the most important insect pests of soybeans. Spore-crystal complex was applied to the surface of artificial diets and the mortality of A. gemmatalis larvae was assessed seven days after each treatment. When compared to a control Bt isolate known by its high toxicity to A. gemmatalis larvae, four novel Bt isolates exhibited even higher toxic activities against the insect, resulting in more than 90% mortality. PCR was used to amplify DNA fragments related to known cry1 genes. Bt strains with high toxicity produced expected PCR products of around 280 bp, whereas non-toxic or low toxic strains did not produce any PCR product or showed amplified fragments of different sizes. Toxic Bt isolates also exhibited an expected protein profile when total protein extracts were evaluated by SDS-PAGE.
  • Cross protection by heat and cold shock to lethal temperatures in Clostridium perfringens Food Microbiology

    García, Santos; Limón, Julio C.; Heredia, Norma L.

    Abstract in Portuguese:

    Um pré-tratamento com choque térmico em Clostridium perfringens resulta em proteção contra letalidade a uma posterior exposição a choque pelo frio, e vice-versa. Células submetidas a choque pelo calor foram mais tolerantes ao frio (redução de um log em 65 min) do que células controle (redução de um log em 34 min). Por outro lado, células submetidas à choque pelo frio foram mais termotolerantes (D55=17 min) do que os controles (D55=6,5 min). A adição de cloranfenicol (um inibidor de síntese protéica) nos experimentos indica que síntese de novas proteínas era necessária para a proteção cruzada pelos dois tratamentos.

    Abstract in English:

    A heat shock pre-treatment of Clostridium perfringens provides protection against lethality from subsequent exposure to cold shock and vice versa. Heat shocked cells were more cold tolerant (one log reduction in 65 min) than control cells (one log reduction in 34 min). On the other hand, cold-shocked cells were more thermotolerant (D55= 17 min) than the control (D55= 6.5 min). The addition of chloramphenicol (an inhibitor of protein synthesis) in the experiments indicates that synthesis of new proteins was necessary for cross protection between both treatments.
  • Detection of Listeria species in refrigerated chicken carcasses using Clearview tm and a modified conventional culture method Food Microbiology

    Pelisser, Márcia R.; Mendes, Sandra D.C.; Sutherland, Alastair D.; Batista, Cleide R.V.

    Abstract in Portuguese:

    Avaliou-se a ocorrência de Listeria spp em carcaças refrigeradas de frango, comparando-se a metodologia convencional recomendada pelo FDA, modificada pela introdução de uma segunda etapa de enriquecimento antes do plaqueamento, e o método rápido ClearviewTM (Oxoid, UK, Ltd). Foram analisadas 48 carcaças de frango de diferentes marcas e supermercados de Florianópolis, Brasil. Listeria spp foi encontrada em 21 (43,7%) amostras. Através do método Clearview encontrou-se 17 (35,4%) amostras positivas para Listeria spp, das quais 11 (23%) eram L. monocytogenes, 4 (8.3%) L. innocua, 1 (2.1%) L. welshimeri e 1 (2.1%) L. seeligeri. Através do método convencional modificado obteve-se um total de 14 (29.2%) amostras positivas para Listeria spp, das quais 7 (14.6%) eram L. monocytogenes, 6 (12.5%) L. innocua e 1 (2.1%) L. seeligeri. Com o método Clearview + API Listeria, obteve-se resultados confirmados à nível de espécie em 115-139 h, e com o método convencional modificado + API Listeria os resultados foram obtidos em 120-160 h. No entanto, o método Clearview pode indicar a presença de Listeria spp em apenas 43 h. Os resultados obtidos pelos métodos utilizados mostraram-se moderadamente concordantes e não apresentaram diferença significativa num intervalo de confiança de 95%.

    Abstract in English:

    The occurence of Listeria species in refrigerated chicken carcasses was evaluated, comparing the conventional culture methodology of FDA, modified by the introduction of a secondary enrichment step prior plating, and the ClearviewTM rapid method (Oxoid, UK Ltd). Forty-eight refrigerated whole chicken carcasses purchased from supermarkets in Florianópolis, SC, Brazil, were analysed. Listeria species occured in 21 (43.7%) samples. Using the Clearview method, 17 (35.4%) samples were positive for Listeria species. Of these isolates, 11 (23%) were L. monocytogenes, 4 (8.3%) L. innocua, 1 (2.1%) L. welshimeri and 1 (2.1%) L. seeligeri. Using the conventional culture methodology of FDA (with modifications), 14 (29.2%) samples were positive for Listeria species. Among these 7 (14.6%) were L. monocytogenes, 6 (12.5%) L. innocua and 1 (2.1%) L. seeligeri. With the Clearview rapid method plus API Listeria for identification, results were confirmed to Listeria species level within 115-139 h. Using the conventional culture method of FDA (with modifications) plus API Listeria, results were confirmed within 120-160 h. However, the Clearview method could indicate the presence of Listeria organisms in only 43 h. Results given by the methods were in moderate concordance and the differences between them were not significant (C.I. = 95%).
  • Isolation and identification of yeasts and filamentous fungi from yoghurts in Brazil Food Microbiology

    Moreira, Silvia Regina; Schwan, Rosane Freitas; Carvalho, Eliana Pinheiro de; Wheals, Alan E.

    Abstract in Portuguese:

    Setenta e duas embalagens de iogurtes de quatro indústrias diferentes foram analisadas durante três épocas diferentes com intervalo mensal. A população microbiana total encontrada foi em torno de 6 x 10(7) células g-1 de iogurte. A contagem de leveduras variou entre 1 a 2.700 células g-1. Não foi possível observar uma sistemática contaminação, mas este estudo longitudinal revelou que contaminação ad hoc e armazenamento impróprio pode levar a elevadas populações de leveduras. De modo geral foi detectada uma contaminação maior nos meses mais quentes do ano mas em valores inferiores aos encontrados em outros países. Um total de 577 isolados de leveduras foram identificados como pertencentes a 10 espécies. As leveduras mais abundantes foram, em ordem, Debaryomyces hansenii, Saccharomyces cerevisiae, Mrakia frigida, Hansenula spp., Candida parapsilosis, Debaryomyces castellii e Candida maltosa. A levedura psicrófila, Mrakia frigida foi pela primeira vez mencionada como isolada a partir de iogurtes. Foi encontrada em algumas amostras uma pequena contaminação por espécies de Monilia e Penicillium. Os testes utilizados para crescimento sugeriram que habilidade para fermentar sacarose, crescimento a 5ºC e na presença de 300 µg g-1 de sorbato foram as três propriedades fisiológicas mais importantes para a presença destas leveduras em iogurtes. Os dados também sugerem que clima mais quente e refrigeração inadequada são as principais causas de alta nível de contaminação, aumento da diversidade e mudança na microbiota presente.

    Abstract in English:

    Seventy-two cartons of yoghurt were sampled three times at monthly intervals from four different local manufacturers. Total counts were close to 6 x 10(7) cells g-1 of yoghurt. Yeast counts varied from 1 to 2,700 g-1. There was no evidence of systematic contamination at source but this longitudinal study revealed that ad hoc contamination and improper storage led to the higher yeast counts. Contamination was generally higher in the hotter months but was lower overall than reported from other countries. A total of 577 yeast isolates were identified belonging to ten species. The most abundant yeasts were, in order, Debaryomyces hansenii, Saccharomyces cerevisiae, Mrakia frigida, Hansenula spp., Candida parapsilosis, Debaryomyces castellii and Candida maltosa. The psychrophilic yeast Mrakia frigida is reported for the first time in yoghurts. Low level contamination with Monilia and Penicillium species was found in a few samples. Growth tests suggested that ability to ferment sucrose, growth at 5° C and in the presence of 300 µg g-1 sorbate preservative, were the three most significant physiological properties to account for these yeasts in yoghurts. The data also suggest that warmer weather and inadequate refrigeration are the principal causes of higher levels of contamination, increased diversity and change in microbial flora.
  • Antifungal properties of clove oil (Eugenia caryophylata) in sugar solution Mycology

    Núñez, Lidia; D'Aquino, Miguel; Chirife, Jorge

    Abstract in Portuguese:

    No estudo avaliou-se o efeito da temperatura, concentração e tempo de contato na atividade antifúngica do óleo essencial do cravo disperso em solução concentrada de açúcar. Os ensaios foram feitos a 21ºC e a 37ºC, utilizando suspensão de óleo essencial de 0.2 a 0.8% v/v. Os microorganismos utilizados foram Candida albicans, Penicillium citrinum, Aspergillus niger e Trichophyton mentagrophytes. A melhor atividade fungicida ocorreu a 37ºC, onde um minuto de contato foi suficiente para matar uma população de 10(6) u.f.c./ml de Candida albicans. Não obstante, P. citrinum, A. niger, T. mentagrophytes foram mais resistentes, embora uma importante ação letal da essência tenha sido observada. Em 60 minutos, o óleo essencial de cravo (0,4% v.v.) em solução concentrada de açúcar reduziu em 99,6% um inóculo de 10(6) u.f.c./ml de T. mentagrophytes. O efeito letal do óleo essencial de cravo sobre C. albicans, após 2 minutos de contato, foi semelhante ao de desinfectantes comumente usados em hospitais, como povidona-iodo e cloroxilenol.

    Abstract in English:

    The effect of temperature, concentration and contact time on the fungicidal effect of clove oleoresin dispersed in a concentrated sugar solution at 21 and 37ºC, and clove oleoresin at 0.2 to 0.8% (v/v) was studied. The test microorganisms were Candida albicans, Penicillium citrinum, Aspergillus niger and Trichophyton mentagrophytes. The fungicidal effect was enhanced at 37ºC; at this temperature short contact times (e.g. 1 min.) were enough to eliminate a microbial inoculum of 10(6) c.f.u./ml of C. albicans. Although clove oleoresin caused important lethal effect, P. citrinum and A. niger were more resistant. After 60 minutes, clove oleoresin dispersed (0.4% v/v) in concentrated sugar solution caused a 99.6% reduction of the initial population (10(6) c.f.u./ml) of Trichophyton mentagrophytes. The fungicidal activity of clove-sugar on C. albicans, after 2 min contact, was similar to that presented by disinfectants commonly used in hospitals, such as povidone-iodine and chloroxylenol.
  • Activity of the aqueous extract from Polymnia sonchifolia leaves on growth and production of aflatoxin B1 by Aspergillus flavus Mycology

    Pinto, Marina M.; Gonçalez, Edlayne; Rossi, Maria H.; Felício, Joana D.; Medina, Cláudia S.; Fernandes, Maria J.B.; Simoni, Isabela C.

    Abstract in Portuguese:

    Neste trabalho verificou-se a atividade do extrato aquoso de folhas de Polymnia sonchifolia no crescimento e na produção de aflatoxinas B1 por Aspergillus flavus. Suspensões de esporos de A. flavus foram inoculadas em 50 mL de meio de YES com diferentes concentrações do extrato aquoso. A aflatoxina B1 foi extraída e analisada por cromatografia de camada delgada e quantificada por fotodensitometria. Todas as concentrações testadas inibiram a produção de aflatoxina B1. O extrato aquoso apresentou citotoxicidade em células Vero somente em concentrações acima de 500 µg/mL.

    Abstract in English:

    The aqueous extract from Polymnia sonchifolia leaves (AE) was tested for inhibitory activity on aflatoxin B1(AFB1) production and growth of Aspergillus flavus. The cytotoxicity of AE on Vero cells was also performed. Suspensions of A. flavus spores were inoculated into 50 mL of YES medium together with different concentrations of the AE. The aflatoxin B1 was extracted, analyzed by thin layer chromatography and quantified by photodensitometry. All the concentrations of AE induced inhibition of AFB1 production. The aqueous extract showed in vitro cytotoxicity to Vero cells only at concentrations above 500 µg/mL.
  • In vitro activity of antifungal and antiseptic agents against dermatophyte isolates from patients with tinea pedis Mycology

    Soares, Maria Magali Stelato Rocha; Cury, Arlete Emily

    Abstract in Portuguese:

    A atividade in vitro de antifúngicos e anti-sépticos foram avaliadas frente a dermatófitos isolados de pacientes com tinea pedis. Os antifúngicos estudados foram: ciclopirox olamine, cetoconazol, tolciclato e terbinafina, e os anti-sépticos foram: iodo povidine (PVPI), própolis, Fungol®, Andriodermol®e ácido bórico. A concentração inibitória mínima (CIM) ou a diluição inibitória mínima (DIM) foi determinada pelo método de diluição em ágar utilizando "yeast nitrogen" base modificado, e a concentração fungicida mínima (CFM) ou diluição fungicida mínima (DFM) foi determinada por subcultura em Saboraud dextrose ágar. Todas as drogas estudadas foram ativas frente aos dermatófitos em concentrações menores do que as utilizadas em produtos e/ou preparações farmacêuticas para uso tópico. Alguns antifúngicos, principalmente a terbinafina e o tolciclato, foram mais eficazes do que outras drogas estudadas, apresentando CIMs e CFMs mais baixos. Concluíu-se que os anti-sépticos representam uma ótima alternativa para tratamento tópico de vários casos de tinea pedis sendo, entretanto, os antifúngicos reservados para formas severas de tinea.

    Abstract in English:

    The in vitro activity of antifungal and antiseptic agents were evaluated against dermatophytes isolated from patients with tinea pedis. The antifungals studied were: ciclopirox olamine, cetoconazole, tolciclate and terbinafine, and the antiseptics were: povidine iodine (PVPI), propolis, Fungol®, Andriodermol®, and boric acid. The minimum inhibitory concentration (MIC) or the minimal dilution concentration (MDC) was determined by an agar dilution method using modified yeast nitrogen agar base, and the minimum fungicidal concentration (MFC) or minimum fungicidal dilution (MFD) was determined with subcultures on Sabouraud dextrose agar. All drugs studied were active against the dermatophytes at lower concentrations than those used in products and/or pharmaceutical preparations for topical use. Some antifungal agents, mainly terbinafine and tolciclate, presented higher efficacy than the other drugs, with lower MICs and MFCs values. It was concluded that the use of these antiseptic drugs represent an excellent alternative for the topical treatment of tinea pedis. For the treatment of severe cases these are the antifungal agents of choice.
  • Production of pectin lyase by Penicillium griseoroseum in bioreactors in the absence of inducer Industrial Microbiology

    Piccoli-Valle, Roberta Hilsdorf; Passos, Flávia Maria Lopes; Passos, Frederico José Vieira; Silva, Daison Olzany

    Abstract in Portuguese:

    Penicillium griseoroseum foi cultivado em biorreatores em meio mineral suplementado com extrato de levedura e sacarose. As influências das concentrações do inóculo e da fonte de carbono, da aeração e do pH do meio de cultivo sobre a produção de pectina liase (PL), bem como a capacidade de P. griseoroseum em produzir PL quando cultivado em caldo de cana diluído foram avaliadas. A concentração do inóculo não influenciou significativamente a produção de PL. O cultivo do fungo em biorreatores não aerados favoreceu a produção da PL em detrimento aos biorreatores com injeção de ar. Maior produção de PL foi obtida com o cultivo de P. griseoroseum em meio com pH 6,3 - 7,2, adicionado de 60 mM de sacarose. Quando cultivado em caldo de cana diluído, 25% (v/v), sem suplementação com extrato de levedura, a atividade máxima de PL alcançada foi igual as das condições citadas acima.

    Abstract in English:

    Penicillium griseoroseum was grown in bioreactors on mineral medium supplemented with yeast extract and sucrose. The influence of inoculum and carbon source concentrations, aeration and pH on pectin lyase (PL) production, as well as the capacity of P. griseoroseum to produce PL when grown on sugar cane syrup as carbon source were evaluated. Inoculum concentration did not influence PL production. Production was higher in non-aerated than in aerated medium. The best results were obtained using 60 mM sucrose at pH 6.3-7.2. Production using cane syrup 25% (v/v), without yeast extract supplement, was equal to that obtained under the conditions cited above.
  • Production of xylan-degrading enzymes by a Trichoderma harzianum strain Industrial Microbiology

    Cacais, André O.Guerreiro; Silveira, Fabiane Q. de Paula; Ferreira Filho, Edivaldo Ximenes

    Abstract in Portuguese:

    O fungo Trichoderma harzianum linhagem 4 produziu, enzimas xilanolíticas quando crescido em meios de cultura líquido contendo xilana como indutor. Atividade celulolítica não foi detectada. O tipo de xilana presente no meio de cultura influenciou a indução das enzimas xilanolíticas. As enzimas foram detectadas em diferentes períodos de incubação. SDS-PAGE de amostras de meios de cultura apresentou uma variedade de bandas protéicas com alto e baixo pesos moleculares.

    Abstract in English:

    Trichoderma harzianum strain 4 produced extracellular xylan-degrading enzymes, namely beta-xylanase, beta-xylosidase and alpha-arabinofuranosidase, when grown in liquid medium cultures containing oat spelt xylan as inducer. Cellulase activity was not detected. The pattern of xylan-degrading enzymes induction was influenced by the form of xylan present in the medium. They were detected in different incubation periods. Electrophoretic separation of the proteins from liquid culture filtrates by SDS-PAGE showed a variety of bands with high and low molecular weights.
  • Characterization of Aujeszky's disease virus isolates from South and Southeast Brazil by RFLP analysis Veterinarian

    Piatti, Rosa Maria; Ikuno, Alice Akimi; Cunha, Elenice Sequetin; D'Ambros, Régia; Gregori, Fábio; Soares, Rodrigo Martins; Cortez, Adriana; Richtzenhain, Leonardo José

    Abstract in Portuguese:

    O DNA genômico de 30 amostras do vírus da doença de Aujeszky (VDA), isoladas nas regiões Sul e Sudeste do Brasil no período de 1982 a 1996, foram caracterizadas por análise do perfil de restrição utilizando a enzima BamHI. Vinte e sete amostras foram isoladas de suínos, uma de bovino, uma de felino e uma de canino. Através de uma sistemática previamente descrita, as 30 amostras de VDA foram classificadas como pertencentes ao tipo genômico I (n = 2) e tipo genômico II (n = 28). O tipo genômico III não foi observado. Neste primeiro estudo de caracterização genômica de isolados de VDA do Brasil, foi possível demonstrar a ocorrência dos tipos genômicos I e II, com marcante predomínio do tipo II.

    Abstract in English:

    The genomic DNA of thirty strains of Aujeszky's disease virus (ADV) isolated in the South and Southeast regions of Brazil from 1982 to 1996 were characterized by restriction endonuclease analysis with BamHI. Twenty seven strains were isolated from pigs, 1 from cattle, 1 from cat and 1 from dog. Using a systematization previously described, the 30 ADV strains could be classified as genomic types I (n = 2) and II (n = 28). Genomic type III was not observed. In this first study of genomic type characterization of brazilian ADV strains, we could demonstrate the occurence in Brazil of the genomic types I and II, with a large predominance of genomic type II.
  • Evaluation of the counterimmunoelectrophoresis reaction as a serodiagnosis test for swine leptospirosis Veterinarian

    Genovez, Margareth Élide; Yasuda, Paulo Hideki; Vasconcellos, Silvio Arruda; Scarcelli, Eliana; Cardoso, Maristela Vasconcellos; Girio, Raul da Silva

    Abstract in Portuguese:

    Avaliou-se a reação de contraimunoeletroforese (CIE) como teste gênero-específico para diagnóstico da leptospirose suína, usando-se três extratos solúveis de Leptospira sp, sorovares pomona, icterohaemorrhagiae e patoc, obtidos pelo tratamento com Triton X-100 a quente e aplicados a amostras de soro de suínos subdivididos em três grupos: Grupo 1, 10 suínos experimentalmente infectados com estirpe Pomona; Grupo 2, 50 suínos naturalmente infectados e Grupo 3, controle. As amostras de soros foram submetidas à reação de CIE e os resultados comparados aos da Soroaglutinação Microscópica (SAM), técnica de referência pela WHO. Os Grupos 1 e 3 foram monitorados por 93 dias após a inoculação (p.i.). Pela SAM a soroconversão do Grupo 1 ocorreu por volta do 10º dia p.i., enquanto pela CIE, empregando-se qualquer extrato antigênico, foi anterior à SAM. Quando a CIE foi realizada frente a antigeno homólogo à infecção, seus resultados foram equivalentes aos da SAM, não se verificando o mesmo frente aos antígenos heterólogos. Neste aspecto, os Grupos 1 e 3 mostraram comportamento diferente pois não houve diferença significativa entre os resultados da CIE frente aos três antígenos, o que poderia significar serem independentes do sorovar responsável pelo surto ou infectante. Embora a CIE seja segura, rápida, de fácil execução, de baixo custo e ideal para análise em grande escala de amostras, revelou-se de limitada capacidade gênero-específica, o que não é desejavel para testes de triagem de campo; mas poderia ser útil na detecção precoce de resposta sorológica em relação à SAM.

    Abstract in English:

    The Counterimmunoelectrophoresis reaction (CIE) was tested as a genus specific test for swine leptospirosis diagnosis using three soluble extracts obtained from Leptospira sp, serovars pomona, icterohaemorrhagiae and patoc. The extracts were treated with hot Triton X-100 and applied to serum samples of animals divided in three groups: Group 1, 10 swines experimentally infected with the Pomona strain; Group 2, 50 naturally infected swines and Group 3, 10 swines control. These animals were serologically evaluated by CIE and by the Microscopic Agglutination Test (MAT), the WHO reference technique. Groups 1 and 3 were monitored during a period of 93 days after infection (a.i.). Group 1 serum convertion took place around the 10th day a.i. by MAT but ocurred earlier by CIE using any antigen. When CIE was carried out with the homologous antigen to the experimental infection, the results were consistent with MAT, but not when the heterologous antigens were used. Groups 1 and 3 showed distinct results: in Group 3, diferences between results of CIE accomplished with any three antigen extracts were not significant, indicating lack of dependence on the serovar responsible for the outbreak. Although being safe, fast, easy to perform, inexpensive and ideal for analysis of large number of samples, CIE revealed limited genus specificity, which is not convenient for field screening tests. The advantage of CIE is the capability to detect antibodies earlier than MAT.
  • Polymerase chain reaction detection of adenovirus DNA sequences in human lymphocytes Medical

    Araújo, Aufra A.; Yokosawa, Jonny; Durigon, Edison L.; Ventura, Armando M.

    Abstract in Portuguese:

    Seqüências de DNA de adenovirus são freqüentemente encontradas em linfócitos humanos, tendo sido utilizadas para tal as técnicas de PCR e "Southern blot". Isto é possível apesar dessas células não serem permissivas à replicação de adenovírus, sugerindo persistência do genoma viral. Para investigar esse fenômeno, procuramos detectar em voluntários não sintomáticos DNA adenoviral e expressão do gene E1A. Amostras de DNA obtidas de glóbulos brancos periféricos de 51 voluntários, foram submetidas à PCR utilizando oligonucleotídeos para uma seqüência conservada do gene hexon, seguindo-se uma "nested PCR". Seqüências de adenovirus foram encontradas em 27 amostras (52,9%). Depois de mais de um ano, novas amostras desses voluntários positivos foram analisadas e em 70,8% dos casos o resultado foi mantido. Como isto poderia ser devido à persistência, decidimos verificar se o gene precoce E1A estava relacionado analisando sua expressão através de RT-PCR. Os resultados foram negativos para todas as amostras. O par de oligonucleotídeos desenvolvido para essa finalidade, que tem como alvo uma região conservada em E1A, permitiu detectar seqüências de adenovírus diretamente por PCR. A concordância encontrada entre essa análise e a pesquisa para o gene hexon foi de 84%. Nossos dados sugerem alta ocorrência e persistência de genoma adenoviral em linfócitos humanos, e indicam que uma região distinta de E1A é responsável pela persistência. Podemos também afirmar que a PCR para o gene E1A é uma boa opção quando se quer detectar adenovírus, evitando-se o alto risco de contaminação da "nested PCR" necessária para identificar a presença do gene hexon.

    Abstract in English:

    Human lymphoid cells frequently carry adenoviruses and DNA sequences have been identified in peripheral blood lymphocytes by Southern blot and PCR, although these cells are not permissive for virus replication, suggesting persistence of the viral genome. In order to investigate this phenomenon we screened non-symptomatic volunteers for adenovirus DNA presence and E1A gene expression. DNA samples extracted from peripheral blood mononuclear cells of 51 volunteers were submitted to PCR using primers for a conserved hexon sequence, followed by nested PCR. Adenovirus sequences were detected in 27 samples (52.9%). After more than one year, new samples of these positive volunteers were analyzed and in 70.8% of the cases the result was maintained. Since this could be due to a possible persistence we checked if the early gene E1A was involved analyzing its expression by RT-PCR. For that purpose we developed a pair of primers to target a conserved region in the E1A gene. The RT-PCR results for E1A were negative for all samples. Using these primers it was possible to detect adenovirus sequences directly by PCR in DNA samples and we found 84% agreement in comparison to the hexon analysis. Our data suggest a high occurrence and persistence of adenovirus genome sequences in human lymphoid cells, and an indication that a region other than E1A is involved in persistence. We also can say that E1A gene is a good choice for amplification as a tool in adenovirus detection, avoiding the high risk of contamination in the nested PCR procedure necessary for hexon detection.
  • Levels of infection and colonization of some oral bacteria after use of naf, chlorhexidine and a combined chlorhexidine with naf mouthrinses Oral

    Lima, Kenio Costa; Neves, Aline A.; Beyruth, Janine B.; Magalhães, Fernando A.C.; Uzeda, Milton de

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de infecção de bactérias cariogênicas e estreptococos orais e sua colonização após uso de bochechos com NaF, clorexidina e clorexidina e NaF associados. Associação de clorexidina e NaF foi o único agente que reduziu os níveis de Streptococcus mutans (grupo) por 30 dias.

    Abstract in English:

    This study was carried out to evaluate levels of infection of bacteria involved in caries and oral streptococci and their colonization after use of mouthrinses with NaF, chlorhexidine and chlorhexidine plus NaF. Combination of chlorhexidine and fluoride was the only agent that reduced levels of Streptococcus mutans (group) for 30 days.
  • Erratum vol. 32(1), 2001 Errata

Sociedade Brasileira de Microbiologia USP - ICB III - Dep. de Microbiologia, Sociedade Brasileira de Microbiologia, Av. Prof. Lineu Prestes, 2415, Cidade Universitária, 05508-900 São Paulo, SP - Brasil, Ramal USP 7979, Tel. / Fax: (55 11) 3813-9647 ou 3037-7095 - São Paulo - SP - Brazil
E-mail: bjm@sbmicrobiologia.org.br