Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 34, Issue: 1, Published: 2003
  • Selection of 5-fluorocytosine-resistant mutants from an Aspergillus niger citric acid-producing strain Micology

    Conte, Ana Paula de F.; Marin, José M.

    Abstract in Portuguese:

    Através de mutagênese com UV, foram isolados mutantes de Aspergillus niger, verificando-se sua resistência ou sensibilidade à 5-fluorocitosina. Alguns mutantes apresentaram um aumento na produção de ácido cítrico sem um aumento correspondente da quantidade de proteína intracelular ou de ions amônio. A resistência à 5-fluorocitosina mostrou ser uma abordagem racional para o isolamento de mutantes com maior capacidade de produção de ácido cítrico. O melhor mutante selecionado, FR13, produziu o dobro da quantidade de ácido cítrico em relação à linhagem parental.

    Abstract in English:

    Mutants of Aspergillus niger N402, induced by UV mutagenesis, were selected and tested for resistance or sensitivity to 5-fluorocytosine. Some mutants showed increased citric acid production, which did not correlate with the intracellular amount of protein or ammonium ion. The resistance to 5-fluorocytosine proved to be a rational approach for isolation of new mutants with improved production of citric acid. The best mutant (FR13) accumulated double the amount of citric acid produced by the parental strain.
  • Presence of the yeast Candida tropicalis in figs infected by the fruit fly Zaprionus indianus (dip.: Drosophilidae) Micology

    Gomes, Luiz H.; Echeverrigaray, Sergio; Conti, José H.; Lourenço, Marcus Vinicius M.; Duarte, Keila M.R.

    Abstract in Portuguese:

    Nos últimos anos, a mosca-africana-do-figo Zaprionus indianus tem se tornado a praga mais importante desta cultura no Brasil. Um processo fermentativo está associado com a infecção dos frutos por esta mosca. Uma única espécie de levedura, Candida tropicalis, foi identificada nos figos infectados. A presença de uma única espécie de levedura e a baixa variabilidade genética (RAPD) dos isolados indica uma relação muito estreita entre C. tropicalis e Z. indianus.

    Abstract in English:

    In the last years, the fruit fly Zapronius indianus became the most important plague of Brazilian fig production. A fermentation process is associated with infection of the fruit by this fly. A single yeast species, Candida tropicalis, was identified in all the infected figs. The presence of one species and the low genetic variability (RAPD) of the isolates indicates an uncommonly strict interaction between C. tropicalis and Z. indianus.
  • Template preparation for rapid PCR in Colletotrichum lindemuthianum Micology

    Roca, M. Gabriela; Davide, Lisete C.; Wheals, Alan E.

    Abstract in Portuguese:

    A extração de DNA para realização de PCR é demorada e envolve vários reagentes. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia rápida e fácil que permita utilizar a técnica de PCR sem necessidade de extração de DNA. Diferentes isolados de Colletotrichum lindemuthianum foram utilizados. Para obtenção do DNA moldes foram testados protoplastos obtidos através do uso de enzimas líticas, incubados sob altas temperaturas e diferentes metodologias. Uma metodologia rápida (10 minutos) foi desenvolvida para produtos de PCR menores (<750 pb).

    Abstract in English:

    Isolation of DNA for PCR is time-consuming and involves many reagents. The aim of this work was to optimise a rapid and easy PCR methodology without previous DNA isolation. Different strains of the phytopathogenic fungus Colletotrichum lindemuthianum were used. Protoplasts were generated using lytic enzymes under high incubation temperatures using different methodologies to obtain the template. A rapid (10 minute) methodology was successful for smaller amplicons (<750 bp).
  • Survey of moniliformin in corn cultivated in the state of São Paulo and in corn products commercialized in the city of Campinas, SP Micology

    Leoni, Luís Antonio B.; Soares, Lucia M. Valente

    Abstract in Portuguese:

    Moniliformina, uma toxina produzida por Fusarium, foi pesquisada em 22 amostras de milho, sendo 18 provenientes de 17 municípios do Estado de São Paulo, e 4 de estações experimentais do Instituto Agronômico de Campinas. A toxina foi investigada também em 68 amostras de produtos de milho comercializados em Campinas, SP. Moniliformina não foi detectada em nenhuma das amostras estudadas.

    Abstract in English:

    Moniliformin, a toxin produced by Fusarium, was investigated in 22 samples of corn, 17 coming from districts of the state of São Paulo and 4 from experimental plots of the Campinas Institute of Agronomy, Brazil. The toxin was also investigated in 68 samples of corn products commercialized in Campinas, SP. Moniliformin was not detected in any sample.
  • Influence of metal ions on pellet morphology and polygalacturonase synthesis by Aspergillus niger 3T5B8 Industrial Microbiology

    Couri, Sônia; Pinto, Gustavo Adolfo Saavedra; Senna, Lilian Ferreira de; Martelli, Hebe Labarthe

    Abstract in Portuguese:

    O efeito da adição de cátions na morfologia do agregado e na síntese de poligalacturonase (PG) por Aspergillus niger 3T5B8 foi estudado e comparado com um sistema controle. Fe(II), Cu(II), Zn(II) and Mn(II) foram adicionados ao meio de fermentação, tanto separadamente, como em grupos de cátions. A adição dos íons Fe2+ e/ou Zn2+ foi positivamente significante para a produção da enzima. Um efeito similar no teor de biomassa, contudo, só pode ser observado quando os mesmos íons foram adicionados isoladamente. Por outro lado, os íons Cu2+ e Mn2+ não afetaram significativamente estes parâmetros. Utilizando-se técnicas de processamento de imagens para o estudo da morfologia dos pellets, observou-se que pequenos aglomerados, com pequenos núcleos, foram geralmente obtidos quando os cátions Fe2+ e Zn2+ foram adicionados ao meio, seja isolada ou simultaneamente. Os aglomerados produzidos em meios contendo íons Fe2+ ou Zn2+ eram compactos, enquanto que aqueles produzidos em meios contendo ambos os cátions foram considerados difusos. A autólise do núcleo foi observada para os grandes agregados produzidos no meio controle, devido ao transporte deficiente de nutrientes para o seu interior. Os agregados produzidos em meio contendo os íons Fe2+ e Zn2+ foram grandes produtores de enzima, provavelmente devido a uma morfologia mais "frouxa", induzida pela presença combinada destes metais no meio, favorecendo o transporte de nutrientes.

    Abstract in English:

    The effects of cations addition on pellet morphology and polygalacturonase (PG) synthesis by Aspergillus niger 3T5B8 were studied and compared with a control system. Fe(II), Cu(II), Zn(II) and Mn(II) were added to the fermentation medium separately, and also as combined groups of cations. The addition of Fe2+ and/or Zn2+ ions was significantly positive to the enzyme production. A positive effect in the biomass content, however, was only obtained when the same metal ions were added separately. On the other hand, Cu2+ and Mn2+ ions had almost no effect on these parameters. The morphology of the pellets was studied by image processing techniques. Small pellets with small cores were usually obtained when Fe2+ and Zn2+ ions were individually or collectively added to the medium. The pellets produced in media containing Fe2+ or Zn2+ ions were compact, while the ones produced in a medium containing both cations were considered diffuse. Autolysis of the core was observed for large control pellets, due to the deficient nutrient transfer to the interior of the pellet. The pellets obtained in a medium containing both Fe2+ and Zn2+ ions were high enzyme producers, probably due to a loose morphology, induced by the presence of combined groups of metal ions in the medium, favoring the nutrient transfer.
  • Use of photocatalytic reduction to hasten preparation of culture media for saccharolytic Clostridium species Industrial Microbiology

    Fukushima, Romualdo S.; Weimer, Paul J.; Kunz, Daniel A.

    Abstract in Portuguese:

    A cisteína é o agente redutor preferido para o preparo de meios de cultura para muitos microrganismos estritamente anaeróbicos; no entanto, a ação redutora do potencial redox da cisteína é muito lenta, tornando-a inconveniente, para o uso imediato do meio ou em grande quantidade. O tempo requerido para reduzir o meio de cultura contendo resazurina (um indicador redox) foi bastante encurtado quando o meio, após ter sido injetado com o agente redutor cisteína, foi irradiado com luz incandescente proveniente de duas lâmpadas de halogênio. A intensidade da iluminação afetou o tempo gasto na redução: tubos mantidos no escuro alcançaram o nível desejado de anaerobiose (medido espectrofotometricamente pela descoloração do indicador, a resazurina) somente após 12 h, enquanto os tubos mantidos sob iluminação, encontrada em um laboratório comum, levaram cerca de 2 h. Por outro lado, os tubos irradiados com máxima intensidade de luz (equivalente a uma lâmpada normal de 100 watt) tornaram-se totalmente incolores em menos de 20 min. A cisteína mostrou-se ser um reagente indispensável para que a redução da resazurina ocorresse. Evidências de que a anaerobiose do meio de cultura, acelerada pela alta irradiação de luz artificial, foi alcançada, foram fornecidas pelo fato de que quatro cepas de Clostridium e uma de Thermoanaerobacter mostraram crescimento similar (medido através de tempo de duração da fase lag, velocidade de crescimento e crescimento máximo) em meio de cultura reduzido através de exposição a alta intensidade luminosa ou em meio preparado de maneira convencional.

    Abstract in English:

    Cysteine is the preferred reducing agent used in the preparation of culture media for the growth of many strictly anaerobic microorganisms; however, redox potential reduction of cysteine is very slow, making it inconvenient if the medium is needed immediately or in large quantity. The time required to reduce culture medium containing resazurin (an indicator of reducing conditions) was dramatically shortened when the medium, after being injected with the reducing agent cysteine, was irradiated with incandescent light from a halogen lamp. Light intensity had an effect upon reduction time: tubes kept in the dark took more than 12 h to achieve the desired degree of anaerobiosis (measured spectrophotometrically by the bleaching of the indicator, resazurin) while tubes subjected to ordinary laboratory illumination were reduced in about 2 h. When exposed to maximum light intensity (equivalent to a regular 100 watt bulb lamp) tubes could be made anaerobic in less than 20 min. Cysteine was essential for the bleaching of resazurin. Evidence that adequate anaerobiosis was achieved by light irradiation was provided by the fact that four Clostridium strains and one Thermoanaerobacter strain displayed similar growth (measured by lag time, growth rate, and extent of growth) in media reduced under high intensity light or under normal laboratory illumination.
  • Polysaccharide production in batch process of Neisseria meningitidis serogroup C comparing Frantz, modified Frantz and Cartlin 6 cultivation media Industrial Microbiology

    Paz, Marcelo Fossa da; Baruque-Ramos, Júlia; Hiss, Haroldo; Vicentin, Márcio Alberto; Leal, Maria Betania Batista; Raw, Isaías

    Abstract in Portuguese:

    O polissacarídeo de N. meningitidis sorogrupo C constitui o antígeno para a elaboração da vacina contra a meningite C. O objetivo deste trabalho foi comparar três meios de cultivo para produção desse polissacarídeo: Frantz, Frantz modificado (com a substituição de glicose por glicerol) e Catlin 6 (meio sintético com glicose). Os critérios comparativos foram baseados nas concentrações finais de polissacarídeo e o fator de conversão célula/polissacarídeo (Y P/X). Também foram determinados os parâmetros cinéticos de pH, consumo de substrato e crescimento celular. Para essa finalidade, foram efetuados nove cultivos em um biorreator New Brunswick de 80 L, sob as seguintes condições: 42 L de meio de cultura, temperatura de 35ºC, vazão de ar de 5 L/min, freqüência de agitação de 120 rpm e pressão da dorna de 6 psi, sem controles de oxigênio dissolvido ou pH. Os cultivos foram divididos em 3 grupos, com 3 repetições cada um. O cultivo usando o meio de Frantz apresentou os melhores resultados: medias de concentração final de polissacarídeo de 0,134 g/L e Y P/X=0,121, seguidos pelo meio de Catlin 6, com resultados de 0,095 g/L e 0,067 respectivamente. Considerando as principais vantagens do uso do meio sintético, como por exemplo, facilitação do cultivo e etapas de purificação do processo de produção do polissacarídeo, há a possibilidade do meio de Catlin 6 substituir o tradicional meio de Frantz em futuro próximo.

    Abstract in English:

    Polysaccharide of N. meningitidis serogroup C constitutes the antigen for the vaccine against meningitis. The goal of this work was to compare three cultivation media for production of this polysaccharide: Frantz, modified Frantz medium (with replacement of glucose by glycerol), and Catlin 6 (a synthetic medium with glucose). The comparative criteria were based on the final polysaccharide concentrations and the yield coefficient cell/polysaccharide (Y P/X). The kinetic parameters: pH, substrate consumption and cell growth were also determined. For this purpose, 9 cultivation runs were carried out in a 80 L New Brunswick bioreactor, under the following conditions: 42 L of culture medium, temperature 35ºC, air flow 5 L/min, agitation frequency 120 rpm and vessel pressure 6 psi, without dissolved oxygen or pH controls. The cultivation runs were divided in three groups, with 3 repetitions each. The cultivation using the Frantz medium presented the best results: average of final polysaccharide concentration = 0.134 g/L and Y P/X=0.121, followed by Catlin 6 medium, with results of 0.095 g/L and 0.067 respectively. Considering the principal advantages in the use of the synthetic medium, i.e. facilitation of a cultivation and purification steps of the polysaccharide production process, there is a possibility that in the near future, Catlin 6 will replace the traditional Frantz medium.
  • Production of hydrolytic enzymes by Trichoderma isolates with antagonistic activity against Crinipellis perniciosa, the causal agent of witches' broom of cocoa Industrial Microbiology

    Marco, Janice Lisboa De; Valadares-Inglis, Maria Cléria; Felix, Carlos Roberto

    Abstract in Portuguese:

    Dois isolados de Trichoderma os quais reduzem a incidência da doença "vassoura-de-bruxa", causada em plantações de cacau pelo fungo Crinipellis perniciosa, foram avaliados quanto ao seu potencial de produção de hidrolases em meio líquido. Na ausência de qualquer substrato nenhuma atividade hidrolítica foi produzida. As atividades de quitinase, N-acetilglicosaminidase, beta-1,3-glucanase, celulase total, endoglucanase, aril-beta-glucosidase, beta-glucosidase, protease e amilase aumentaram significativamente durante o crescimento dos isolados em meio líquido contendo os respectivos substratos. As maiores atividades foram encontradas nos tempos de 72 a 120 horas de crescimento. Com exceção das enzimas N-acetilglicosaminidase e beta-glucosidase, os maiores níveis de hidrolases foram encontrados nas culturas do isolado 1051 de Trichoderma harzianum. O possível envolvimento destas enzimas na interação antagonística entre Trichoderma e C. perniciosa é discutido.

    Abstract in English:

    Two isolates of Trichoderma, which reduce the incidence of witches'broom disease caused in cocoa by Crinipellis perniciosa, were evaluated for their potential to produce hydrolases in liquid medium. Very low or no hydrolytic activity was produced in the absence of any substrate. The activities of chitinase, N-acetylglucosaminidase, beta-1,3-glucanase, total cellulase, endoglucanase, aryl- beta-glucosidase, beta-glucosidase, protease and amylase increased dramatically within 72-120 h of growth in the presence of specific substrates. Except for N-acetylglucosaminidase and beta-glucosidase Trichoderma harzianum isolate 1051 produced the largest amounts of hydrolases. The possible involvement of these enzymes in the antagonistic interaction between Trichoderma and C. perniciosa is discussed.
  • Nondiphtherial Corynebacterium species isolated from clinical specimens of patients in a university hospital, Rio de Janeiro, Brazil Medical Microbiology

    Camello, Thereza Cristina Ferreira; Mattos-Guaraldi, Ana Luiza; Formiga, Luiz Carlos Duarte; Marques, Elizabeth Andrade

    Abstract in Portuguese:

    Durante um período de cinco anos, foram isoladas 163 amostras de Corynebacterium sp. a partir de espécimes clínicos obtidos de pacientes de um Hospital Universitário brasileiro. Os microrganismos foram predominantemente observados (46.62%) em materiais oriundos de sítios intravenosos e trato geniturinário. Amostras de Corynebacterium amycolatum (29.55%), Corynebacterium minutissimum (20.45%) e Corynebacterium pseudodiphtheriticum (13.63%) foram predominantemente isoladas do trato geniturinário; C. minutissimum (24.14%) e Corynebacterium propinquum (17.24%) de feridas cirúrgicas e/ou outras lesões cutâneas e abscessos; Corynebacterium xerosis (25%), C. amycolatum (21.87%) e C. pseudodiphtheriticum (18.75%) de sítios intravenosos; C. pseudodiphtheriticum (33.33%) e C. propinquum (33.33%) do trato respiratório inferior. A maioria das espécies exibiu resistência a antimicrobianos do grupo dos beta-lactâmicos e todas as amostras foram vancomicina-sensíveis. Dentre as espécies de corinebactérias isoladas, as amostras exibiram perfis heterogêneos de susceptibilidade aos antimicrobianos. Além de C. jeikeium, a multirresistência aos antimicrobianos também foi observada em amostras de C. xerosis, C. minutissimum, C. afermentans, C. propinquum, C. amycolatum e C. pseudodiphtheriticum. Os dados enfatizam a necessidade de clínicos e microbiologistas permanecerem atentos à possibilidade de processos infecciosos nosocomiais serem ocasionados por Corynebacterium sp., particularmente por amostras multiresistentes aos antimicrobianos.

    Abstract in English:

    Over a five-year period, 163 strains of Corynebacterium sp. were recovered from different clinical specimens of patients from a Brazilian University hospital. Genitourinary tract and intravenous sites specimens were the most frequent sources of corynebacteria (46.62%). Corynebacterium amycolatum (29.55%), Corynebacterium minutissimum (20.45%) and Corynebacterium pseudodiphtheriticum (13.63%) were the predominant species found in genitourinary tract. C. minutissimum (24.14%) and Corynebacterium propinquum (17.24%) in surgical and/or other skin wounds and abscesses; Corynebacterium xerosis (25%), C. amycolatum (21.87%) and C. pseudodiphtheriticum (18.75%) in intravenous sites; C. pseudodiphtheriticum (33.33%) and C. propinquum (33.33%) in lower respiratory tract. Microorganisms were all susceptible to vancomycin and most of the species was predominantly resistant to beta-lactams. Antimicrobial susceptibility patterns of corynebacteria were not predictable. Multiple antibiotic resistance observed in C. jeikeium was also found among C. xerosis, C. minutissimum, C. afermentans, C. propinquum, C. amycolatum and C. pseudodiphtheriticum strains. Data suggest awareness of clinicians and microbiologists to nosocomial infections especially due to antimicrobial multiresistant strains of Corynebacterium sp.
  • Species identification, slime production and oxacillin susceptibility in coagulase-negative staphylococci isolated from nosocomial specimens Medical Microbiology

    Alcaráz, Lucía E.; Satorres, Sara E.; Lucero, Rodolfo M.; Centorbi, Olga N. Puig de

    Abstract in Portuguese:

    Noventa e duas amostras de Staphylococcus coagulase negativo (SCN), (45 amostras clínicas e 47 ambientais), coletadas em um hospital de San Luis, Argentina, durante o período de março a junho de 1999, foram identificadas até espécies, empregando-se os sistemas ID 32 Staph e API Staph (bioMérieux). A produção de "slime" foi investigada através de métodos quantitativo e qualitativo. A susceptibilidade à oxacilina foi determinada por métodos de difusão em discos (1 µg), diluição em ágar (0,125 a 4 mg/ml) e ágar screen (6 µg/ml). A presença do gene mecA foi pesquisada por PCR. As espécies de SCN de origem clínica mais comumente isoladas foram S. epidermidis, S.saprophyticus, S.hominis e S.haemolyticus. Observou-se uma freqüência similar na produção de "slime" nas amostras de origem clínica e ambiental (25/45 e 27/47, respectivamente), tendo havido concordância nos resultados obtidos pelos métodos quantitativo e qualitativo. O gene mecA foi observado em todas as cepas de S. epidermidis, S. haemolyticus e S. hominis que foram resistentes a oxacilina pelos métodos fenotípicos, mas não foi detectado em S. klossii, S. equorum, S. xylosus e S. capitis. O gene também não foi detectado em duas das seis amostras de S.saprophyticus, duas das três S. conhii subsp. urealyticum e duas das cinco S. conhii subsp. conhii, as quais resultaram resistentes à oxacilina segundo a CIM. Esse gene não foi encontrado nas cepas sensíveis à oxacilina. A maioria das amostras de SCN (ambientais e clínicas) que foram produtoras de slime foram resistentes à oxacilina, o que obriga a uma detecção precisa desses microorganismos e ao controle de sua disseminação em hospitais, particularmente entre pacientes imunocomprometidos.

    Abstract in English:

    Ninety-two coagulase negative staphylococci (CNS) (forty-five of clinical origin and forty-seven of environmental origin), collected in a hospital in San Luis, Argentina, from March to June, 1999, were identified to species level by the ID 32 Staph and API Staph System (bioMérieux). Slime production was investigated by the quantitative and qualitative methods. Oxacillin susceptibility was determined by the disk diffusion test (1 µg), the agar dilution method (0.125 to 4 mg/ml) and agar screen (6 µg/ml). The presence of mecA gene was investigated by PCR. The clinical CNS species most commonly isolated were S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis and S. saprophyticus. The frequency of slime production by clinical and environmental isolates was similar (25/45 and 27/47, respectively) and the results obtained by the quantitative and the qualitative methods correlated well. The mecA gene was detected in all S. epidermidis, S. haemolyticus and S. hominis isolates, which were resistant to oxacillin by the phenotypic methods. However, this gene was not present in S. klossii, S. equorum, S. xylosus and S. capitis strains. The gene was neither found in two out of the six S. saprophyticus isolates, in two out of three S. cohnii subsp. urealyticum isolates and in two out of five S. cohnii subsp. cohnii isolates, all of which resulted oxacillin resistant according to MIC. The gene was not found in oxacillin-susceptible strains either. Most of the CNS isolates (enviromental and clinical) that were slime producers were found to be oxacillin resistant, which makes the early detection of these microorganisms necessary to prevent their dissemination in hospitals, particularly among immunocompromised patients.
  • A case of acute diarrhea due to the emerging pathogen Campylobacter jejuni subsp. doylei in Southern Chile Medical Microbiology

    Fernández, Heriberto; Rodríguez, Roxana; Barudi, Carmen; Lobos, Marta

    Abstract in Portuguese:

    O primeiro caso documentado de diarréia aguda por C. jejuni subsp. doylei no sul do Chile é apresentado. As características clínicas, a ausência de outros enteropatógenos, vírus ou parasitas, e o fato de C. jejuni subsp. doylei ter sido a única bactéria isolada, permitem assumir que este microrganismo é o agente etiológico neste caso de diarréia.

    Abstract in English:

    The first documented case of acute diarrhea due to C. jejuni subsp. doylei in Chile is reported. The clinical findings, the absence of other enteropathogens, virus or parasites and the fact that C. jejuni subsp. doylei was the only bacteria isolated support the assumption that it was the etiological agent of this diarrheal case.
  • Factors involved with cadmium absorption by a wild-type strain of Saccharomyces cerevisiae Environmental Microbiology

    Adamis, Paula D.B.; Panek, Anita D.; Leite, Selma G.F.; Eleutherio, Elis C.A.

    Abstract in Portuguese:

    Na concentração usada neste trabalho (10 ppm), cádmio foi removido eficientemente do meio ambiente por células de leveduras de fase estacionária do crescimento. Enquanto células coletadas na fase exponencial demonstraram uma baixa capacidade de absorção, células de fase estacionária do crescimento removeram 97% do cádmio do meio em 24h. Verificamos ainda que células mortas não foram capazes de absorver cádmio. Independentemente da fase do crescimento em que eram coletadas, as células apresentaram uma alta tolerância à 10 ppm de cádmio: cerca de 80% das células mantinham-se viáveis após 24h de exposição ao metal. No entanto, quando as células foram inicialmente desidratadas, a tolerância ao metal caiu drasticamente. Utilizando uma prova fluorescente sensível ao nível de espécies reativas de oxigênio, observamos que quando as células de levedura absorvem cádmio do meio há um aumento do nível de oxidação intracelular, o qual pode ser responsável pelos efeitos tóxicos do metal. Extratos de células de fase estacionária, quando tratadas com metal, apresentaram um aumento de cerca de 10 vezes no nível de fluorescência, o que não foi observado em células de fase exponencial. Células desidratadas quando expostas ao cádmio, apresentaram um aumento no nível de oxidação intracelular, mas este efeito foi provocado principalmente pelo processo de desidratação.

    Abstract in English:

    At the concentration used in this work (10 ppm), cadmium was efficiently removed from the environment by stationary yeast cells. While exponential phase cells showed low capacity of cadmium absorption, stationary cells removed 97% of the original metal in 24 hours. Total cadmium absorption shown by dry cells was lower than that of fresh ones, although both cells removed 50% of metal during the first hour of treatment. We also verified that only viable cells were capable of absorbing cadmium. Independently of the growth phase, cells showed high tolerance to 10 ppm CdSO4 and about 80% of cells remained viable after 24 hours exposure to cadmium. However, when stationary phase cells were previously dehydrated and then exposed to cadmium, they exhibited poor survival. By using an oxidation-dependent fluorescent probe, we observed that, once absorbed by cells, cadmium increases the intracellular level of oxidation, which may be responsible for its toxic effect. Crude extracts from stationary phase cells exposed to cadmium showed a 10-fold increase in fluorescence, while extracts from cells of exponential phase did not increase in fluorescence. Dry cells treated with the metal showed a high increase in fluorescence, mainly caused by dehydration.
  • Supplementation of sugarcane bagasse with rice bran and sugarcane molasses for shiitake (Lentinula edodes) spawn production Environmental Microbiology

    Rossi, Ivan Henrique; Monteiro, Antonio Carlos; Machado, José Octavio; Barbosa, José Carlos

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo deste trabalho foi avaliar a velocidade de miceliação, o vigor do micélio e a "biomassa estimada" de Lentinula edodes (Berk.) Pegler cultivado em substrato à base de bagaço de cana-de-açúcar, suplementado com farelo de arroz e melaço de cana-de-açúcar, para a produção de "semente" do fungo. As proporções de farelo de arroz usadas foram 0, 10, 15, 20, 25, 30 e 40% (peso seco/peso seco de bagaço) e as concentrações de melaço de cana-de-açúcar empregadas foram 0, 10, 20, 30, 40, 50 e 60g/kg (peso seco/peso seco de bagaço mais farelo de arroz). A velocidade de miceliação diminuiu quando se adicionou as maiores quantidades de farelo de arroz. As suplementações com 25 e 30% de farelo de arroz proporcionaram maior estimulação do vigor micelial. A adição de melaço de cana-de-açúcar não estimulou tanto a velocidade de miceliação como o vigor micelial. Os valores de "biomassa estimada" foram similares quando se usou as proporções intermediárias de farelo de arroz e para todas as concentrações de melaço de cana-de-açúcar. Através da superfície de resposta obtida com os dados da "biomassa estimada" verificou-se que os valores mais altos foram observados quando os substratos continham 20 a 25% de farelo de arroz combinado com 10 a 30g de melaço de cana-de-acúçar, embora o último suplemento não tenha, isoladamente, estimulado o crescimento de L. edodes.

    Abstract in English:

    The purpose of this study was to assess the myceliation rate, mycelial vigor and "estimated biomass" of Lentinula edodes (Berk.) Pegler, grown on a sugarcane bagasse substrate enriched with rice bran and sugarcane molasses for spawn production. The proportions of rice bran used were 0, 10, 15, 20, 25, 30 and 40% (dry weight/dry weight of bagasse) and the sugarcane molasses concentrations tested were 0, 10, 20, 30, 40, 50 and 60 g/kg (dry weight/dry weight of bagasse plus rice bran). The myceliation rate was decreased by the addition of the higher quantities of rice bran. The 25 and 30% rice bran proportions induced the highest stimulation of mycelial vigor. The addition of sugarcane molasses did not change myceliation rate or mycelial vigor. The "estimated biomass" values were similar when intermediate rice bran proportions were used and for all sugarcane molasses concentrations. Based on response surface obtained for the "estimated biomass" data, higher values were obtained with substrates containing 20 to 25% rice bran combined with 10 to 30 g sugarcane molasses, although the latter supplement was not considered to stimulate L. edodes growth.
  • Shiitake (lentinula edodes) production on a sterilized bagasse substrate enriched with rice bran and sugarcane molasses Environmental Microbiology

    Rossi, Ivan Henrique; Monteiro, Antonio Carlos; Machado, José Octavio; Andrioli, João Luciano; Barbosa, José Carlos

    Abstract in Portuguese:

    Este trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar a eficiência biológica (EB), o peso e número médio (PMC e NMC) e a qualidade dos cogumelos de Shiitake [ Lentinula edodes (Berk.) Peger] cultivado em substrato esterilizado, elaborado à base de bagaço de cana-de-açúcar, enriquecido com farelo de arroz e melaço de cana-de-açúcar. As proporções de farelo de arroz usadas foram 0, 15, 20, 25 e 30% (peso seco/peso seco de bagaço) e as concentrações de melaço de cana-de-açúcar utilizadas foram 0, 30 e 60 g/kg(peso seco/peso seco de bagaço mais farelo de arroz). Obteve-se quatro colheitas, constituindo três produções acumuladas que foram usadas para as análises de produção. Os substratos contendo 25 e 30% de farelo de arroz produziram os maiores valores de EB (98,42 e 99,4%, respectivamente, cerca de 230 dias após a inoculação) e PMC, e inicialmente, produziram um NMC menor que os substratos contendo 15 e 20% de farelo de arroz. Qualquer quantidade de farelo de arroz adicionado ao bagaço de cana-de-açúcar melhorou a qualidade dos cogumelos e a melhor produção de cogumelos comercializáveis foi obtida com a adição de 15% de farelo de arroz. A maior quantidade de melaço de cana-de-açúcar (60 g/kg) aumentou a EB (90,3 e 23,6%, na primeira e segunda produções acumuladas, respectivamente) e PMC, e nenhuma quantidade adicionada influenciou a qualidade dos cogumelos.

    Abstract in English:

    This investigation was performed to evaluate the biological efficiency (BE), mean mushroom weight (MMW), mean number of mushroom (MNM) and mushroom quality of Shiitake [ Lentinula edodes (Berk.) Pegler] when grown on a sterilized substrate composed by sugarcane bagasse enriched with rice bran and sugarcane molasses. The proportions of rice bran were 0, 15, 20, 25 and 30% (dry weight/dry weight of bagasse); and the concentrations of sugarcane molasses were 0, 30 and 60 g/kg (dry weight/dry weight of bagasse plus rice bran). Four flushes were obtained during the production cycle, providing 3 accumulated productions which were used for production analysis. The substrate supplemented with 25 and 30% rice bran yielded the highest BE (98.42 and 99.84%, respectively, about 230 days after spawning) and MNM and initially produced a lower MMW than the substrates supplemented with 15 and 20% rice bran. Any amount of rice bran added to the sugarcane bagasse improved mushroom quality, with the best production of marketable mushrooms obtained by the addition of 15% rice bran. The largest amount of sugarcane molasses (60 g/kg) increased BE (90.3 and 23.6%, on first and second accumulated productions, respectively) and MNM and no quantity affected mushroom quality.
  • Evaluation of the mycelial network formed by arbuscular mycorrhizal hyphae in the rhizosphere of papaya and other plants under intercropping system Soil Microbiology

    Cruz, André Freire; Ishii, Takaaki; Matsumoto, Isao; Kadoya, Kazuomi

    Abstract in Portuguese:

    Um experimento foi conduzido em casa-de-vegetação para observar a distribuição de hifas de fungos micorrízicos arbusculares (FMA), na rizosfera do mamoeiro intercalado com outras plantas. Para isto foram construídos vasos de acrílico divididos em três compartimentos. Mudas de mamoeiro (Carica papaya L.) foram transplantadas para um dos compartimentos laterais em todos os vasos, enquanto que mudas de grama batatais (Paspalum notatum Flügge) e milheto (Pennisetum glaucum L. R. Br.) foram separadamente transplantadas para o outro compartimento situado na outra extremidade. Um outro tratamento foi constituído de mudas de mamoeiro em um compartimento e 25% de extrato metanólico de raízes de grama batatais (BRE) ou de milheto (MRE), fracionados em cromatógrafo de coluna. Um vaso com apenas mudas de mamoeiro foi preparado como testemunha. O compartimento central foi inoculado com o fungo Gigaspora margarita. A densidade de hifas, a percentagem de infecção micorrízica e o número de esporos nos compartimentos com grama batatais e milheto foram maiores do que naqueles com mamoeiro. Nos compartimentos com BRE e MRE e algumas hifas e esporos foram observados nestes compartimentos. Naqueles sem planta, foram observadas poucas hifas ou esporos.

    Abstract in English:

    An experiment was carried out under greenhouse conditions to observe the distribution of arbuscular mycorrhizal (AM) hyphae in the rhizosphere of papaya and other plants under intercropping system. Special acrylic root boxes with three compartments, separated by nylon mesh screens, were constructed. One outer compartment contained seedlings of papaya (Carica papaya L.) and other contained seedlings of bahiagrass (Paspalum notatum Flügge) or millet (Pennisetum glaucum L. R. Br.). The central compartment was inoculated with an AM fungus (Gigaspora margarita). In another experiment, the outer compartments were treated with 25% MeOH eluates of bahiagrass (BRE) and millet (MRE) root extracts. A control box, containning only papaya seedlings was also prepared. Hyphal density, root infection levels and spore numbers were higher in the bahiagrass and millet compartments than in the papaya compartment. Similar results were found for the percentage of AM infection and the number of AM spores. In the compartments treated with BRE and MRE the density of AM hyphae was around 20%, and a few spores were found in those compartments. Few AM hyphae and spores were observed in the control compartment.
  • Detection of rotavirus in dogs with diarrhea in Brazil Virology

    Gabbay, Yvone B.; Homem, Valéria S.F.; Munford, Veridiana; Alves, Antonia S.; Mascarenhas, Joana D.P.; Linhares, Alexandre C.; Rácz, Maria Lúcia

    Abstract in Portuguese:

    Rotavírus foi detectado pela técnica imunoenzimática (ELISA) nas fezes de um cachorro que apresentava diarréia. Partículas virais com morfologia típica de rotavírus foram visualizadas por microscopia eletrônica direta. Essa amostra foi posteriormente testada para os quatro principais sorotipos humanos de rotavírus (G1-G4) por ELISA utilizando anticorpos monoclonais. Genotipagem para G foi realizada por RT-PCR usando "primers" específicos para G1-G6 e G8-G11. Nenhum resultado positivo foi obtido. Também utilizando RT-PCR, foi possível caracterizar essa amostra canina como genotipo P [ 3] . Este é o primeiro rotavirus canino descrito no Brazil.

    Abstract in English:

    Rotavirus was detected by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the faeces of a diarrheic dog. Virus particles with morphology typical of rotavirus were visualized by direct electron microscopy. This sample was subsequently tested for the four main human serotypes (G1-G4), by ELISA with monoclonal antibodies. G genotyping was attempted by RT-PCR using G1-G6 and G8-G11 primers but no positive results could be yielded. Also using RT-PCR it was possible to characterize this canine strain as belonging to P[ 3] genotype. This is the first canine rotavirus detected in Brazil.
  • PCR detection of four periodontopathogens from subgingival clinical samples Oral Microbiology

    Avila-Campos, Mario Julio

    Abstract in Portuguese:

    Em nosso estudo quatro periodontopatógenos foram isolados e identificados de placas subgengivais de 50 pacientes com doença periodontal e de 50 indivíduos sadios. As placas subgengivais foram coletadas com pontas de papel e transportadas em VMGA III. Foram realizadas diluições seriadas das amostras clínicas (1:10), e os DNA foram obtidos por fervura. Iniciadores específicos para cada bactéria foram usados no PCR. As amplificações mostraram-se sensíveis na identificação de A. actinomycetemcomitans, B. forsythus, P. gingivalis e F. nucleatum. As reações de PCR produziram bandas específicas para cada espécie e podem ser usadas na identificação desses organismos periodontais diretamente das amostras clínicas. Os valores de odds ratio para a detecção de A. actinomycetemcomitans e B. forsythus foram significativamente associados com a doença periodontal mostrando altos valores de OR para B. forsythus (2,97, 95% CI 1,88 - 4,70). Esses resultados sugerem uma forte associação entre os organismos estudados e a lesão periodontal.

    Abstract in English:

    In this study, A. actinomycetemcomitans, B. forsythus, P. gingivalis and F. nucleatum were identified from subgingival plaque from 50 periodontal patients and 50 healthy subjects. Subgingival clinical samples were collected with sterilized paper points and transported in VMGA III. From all the diluted clinical samples (1:10), DNA was obtained by boiling, and after centrifugation the supernatant was used as template. Specific primers for each bacterial species were used in PCR. PCR amplification was sensitive to identify these organisms. PCR products from each species showed a single band and can be used to identify periodontal organisms from clinical specimens. PCR detection odds ratio values for A. actinomycetemcomitans and B. forsythus were significantly associated with disease showing a higher OR values for B. forsythus (2.97, 95% CI 1.88 - 4.70). These results suggest a strong association among the studied species and the periodontal lesion.
  • Isolation and characterization of Caulobacter mutants impaired in adaptation to stationary phase Basic Microbiology

    Italiani, Valéria C. S.; Marques, Marilis V.

    Abstract in Portuguese:

    A entrada em fase estacionária causa uma mudança no padrão de expressão gênica de bactérias, quando as células devem expressar um novo conjunto de genes envolvidos principalmente com resistência à carência alimentar e a estresses ambientais. Em uma tentativa de identificar genes importantes para a sobrevivência de Caulobacter crescentus em fase estacionária, nós varremos uma biblioteca de 5.000 clones gerados por transposição aleatória em busca de mutantes que mostrassem viabilidade reduzida após crescimento prolongado. Quatro clones foram selecionados, que mostraram menor viabilidade ou um maior tempo de recuperação da fase estacionária. Os genes interrompidos foram identificados, e os produtos gênicos mostraram-se estar envolvidos principalmente com o metabolismo de aminoácidos (glutamato N-acetiltransferase, 4-hidroxifenilpiruvato dioxigenase e L-aspartato oxidase) ou com recombinação (exonuclease RecJ). Cada mutante foi testado para resistência a estresses, como oxidativo, salino, ácido, calor e exposição à luz UV, mostrando respostas diferentes. Embora as mutações obtidas não tenham sido em genes envolvidos especificamente com fase estacionária, nossos resultados sugerem que o metabolismo de aminoácidos tem papel importante na manutenção da viabilidade durante esta fase do crescimento.

    Abstract in English:

    The entry into stationary phase causes a change in the pattern of gene expression of bacteria, when the cells must express a whole set of genes involved mainly with resistance to starvation and to environmental stresses. As an attempt to identify genes important for the survival of Caulobacter crescentus in stationary phase, we have screened a library of 5,000 clones generated by random transposon mutagenesis for mutants that showed reduced viability after prolonged growth. Four clones were selected, which displayed either lower viability or a longer time of recovery from stationary phase. The genes disrupted were identified, and the gene products were found to be mainly involved with amino acid metabolism (glutamate N-acetyltransferase, 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase and L-aspartate oxidase) or with recombination (exonuclease RecJ). Each mutant was tested for resistance to stresses, such as oxidative, saline, acidic, heat and UV exposure, showing different responses. Although the mutations obtained were not in genes involved specifically in stationary phase, our results suggest that amino acids metabolism may play an important role in keeping viability during this growth phase.
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