Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 34 Supplement 1, Published: 2003
  • Monoclonal antibodies against an outer membrane protein from pathogenic Leptospira Medical Microbiology

    Lüdtke, Charli Beatriz; Coutinho, Mariana Loner; Jouglard, Sandra Denise Dorneles; Moreira, Cecília Nunes; Fernandes, Cláudia Hartleben Pinho; Brod, Claudiomar Soares; Haake, David A.; Ko, Albert Icksang; Dellagostin, Odir Antonio; Aleixo, José Antonio Guimarães

    Abstract in Portuguese:

    Foram obtidos dois hibridomas secretores de anticorpos monoclonais (MAbs) que reagem com uma lipoproteína (LipL32) da membrana externa de leptospiras patogênicas. Para a produção dos hibridomas, células do baço de camundongos BALB/c, imunizados com LipL32 recombinante (rLipL32), foram fusionadas com células SP2/O-Ag14, selecionadas em meio HAT e testadas em ELISA indireto. Um dos MAbs secretados pelos hibridomas é do isotipo IgG2b e o outro do isotipo IgM. A especificidade dos MAbs foi confirmada em ELISA indireto e immunoblotting usando rLipL32 purificada, Escherichia coli (E. coli) expressando LipL32 e sorovares patogênicos e saprófitas. Os dois MAbs reagiram com a maioria dos sorovares patogênicos e não reagiram com sorovares saprófitas. Os MAbs possuem potencial para uso em testes de diagnóstico de leptospirose.

    Abstract in English:

    Two hybridomas secreting monoclonal antibodies (MAbs) that react with a lipoprotein (LipL32) of the outer membrane of pathogenic Leptospira were obtained. For hybridoma production, spleen cells from BALB/c mice imunized with recombinant LipL32 (rLipL32) were fused to SP2/O-Ag14 cells, selected in HAT medium and screened in an indirect ELISA. One MAb produced was of the IgG2b isotype and the other was an IgM. MAbs specificity was confirmed by indirect ELISA and immunoblotting using purified rLipL32 and whole-cell antigen preparations from Escherichia coli (E. coli) expressing LipL32 and from pathogenic and non-pathogenic serovars. Both Mabs reacted with most of the pathogenic serovars tested and none reacted with non-pathogenic Leptospira. The MAbs described have potential for use in diagnostic tests for leptospirosis.
  • Polyclonal anti-intimin antibody: immunological characterization and its use in EPEC and EHEC diagnosis Medical Microbiology

    Koga, Paula Célia Mariko; Menezes, Caroline Anunciação; Lima, Flávia Afonso; Nara, Júlia Mitico; Magalhães, Caroline Arantes; Cianciarullo, Aurora Marques; Ferreira-Júnior, Jorge Mario da Costa; Trabulsi, Luiz Rachid; Mendes-Ledesma, Meire Roberta Bresciani; Piazza, Roxane Maria Fontes

    Abstract in Portuguese:

    EPEC e EHEC constituem um risco significativo para a saúde pública em diferentes partes do mundo. Ambas colonizam a mucosa intestinal e subvertem as funções celulares do epitélio intestinal ao produzirem uma lesão histopatológica característica, conhecida por lesão A/E (attaching-and-effacing), na qual a intimina é uma das proteínas envolvidas. A família das intiminas apresenta também uma região conservada, que compreende os aminoácidos de 388 a 667 (Int 388-667). O objetivo do presente trabalho foi a obtenção de um anticorpo policlonal contra a região conservada de intimina. A caracterização fenotípica das amostras de EPEC e EHEC utilizando este anticorpo permitiu observar-se a maneira variável que ele reconhece os diversos subtipos de intimina e sugere que ele seja uma ferramenta para detecção destes patógenos, sendo o ensaio de immuno-dot o método de captura de escolha.

    Abstract in English:

    Intimins are outer membrane proteins expressed by enteric bacterial pathogens capable of inducing intestinal attachment-and-effacement lesion (A/E). Through immunoblotting, immunofluorescence, flow citometry and immunogold we observed that the obtained polyclonal antibody against conserved intimin region recognizes the different intimin subtypes and suggests that it can be used as a tool for EPEC and EHEC detection. Besides, immuno-dot assay seems to be a possible alternative as a capture method.
  • Quality control for microbiological culture media: Is it enough to follow the NCCLS M22-A2 procedures? Medical Microbiology

    Cantarelli, Vlademir Vicente; Inamine, Everton; Brodt, Teresa Cristina Zenobin; Secchi, Carina; Pereira, Fabiana de Souza; Amaro, Maria Cristina; Batalha, Alice Aurora; Ligiero, Simone Dornellas

    Abstract in Portuguese:

    O uso de protocolos de controle de qualidade com padrões rígidos devem ser utilizados para garantir o isolamento dos microrganismos. Nosso objetivo foi o de avaliar um procedimento alternativo que nos permitisse detectar falhas de crescimento bacteriano em termos quantitativos, e comparação com o protocolo estabelecido pelo documento M22-A2 do NCCLS. Haemophilus influenzae apresentou diferença significativa de crescimento entre meio de cultivo de fontes distintas. Nos concluímos que, para alguns microrganismos fastidiosos, seja feita uma verificação quantitativa da capacidade de crescimento de cada meio de cultivo.

    Abstract in English:

    Stringent quality control protocols must be used in order to guaranty that a particular medium is able to recover all sort of organism that may be present in clinical samples. Our aim was to evaluate an alternative protocol that would allow us to detect medium failure to yield quantitative growth of selected pathogens, and compare with the document M22-A2 from NCCLS. The detection limit of Haemophilus influenzae was significantly different depending on media source. We conclude that for some fastidious microorganisms, quantitative verification of the growth capacity of the culture medium is advised.
  • Capture immunoassay for LT detection produced by enterotoxigenic Escherichia coli in bacterial isolates Medical Microbiology

    Menezes, Caroline Anunciação; Gonçalves, Danielle Silva; Amianti, Jackeline; Fernandes, Irene; Taddei, Carla Romano; Koga, Paula Célia Mariko; Trabulsi, Luiz Rachid; Martinez, Marina Baquerizo; Piazza, Roxane Maria Fontes

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p< 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.

    Abstract in English:

    A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.
  • Thymic atrophy and fungal virulence during experimental paracoccidioidomycosis Medical Microbiology

    Brito, Vânia Nieto; Souto, Paula Cristina de Souza; Gameiro, Jacy; Cruz-Höfling, Maria Alice; Verinaud, Liana

    Abstract in Portuguese:

    A imunossupressão observada em micoses sistêmicas pode estar relacionada a danos nos órgãos linfóides primários. Assim, nosso laboratório tem estudado uma possível ação do Paracoccidioides brasiliensis sobre o timo de camundongos. Neste estudo, analisamos o timo de camundongos susceptíveis e resistentes ao fungo utilizando cepas de alta e baixa virulência. Todos os grupos apresentaram atrofia tímica, perda de delimitação corticomedular e aumento da taxa de apoptose. Entretanto, as alterações foram mais precoces e pronunciadas em camundongos inoculados com a cepa virulenta do fungo, sugerindo que a virulência fúngica pode estar diretamente ligada à atrofia tímica e indução de imunossupressão.

    Abstract in English:

    The immunosuppression observed in systemic mycosis can be related to primary lymphoid organs damage. Thus, our laboratory has studied the effects of the Paracoccidioides brasiliensis infection on the thymus of mice. Here, thymuses of susceptible and resistant mice were evaluated after inoculation with highly and slightly virulent isolates of the fungus. All groups presented thymic atrophy, loss of corticomedullary delimitation and increase of apoptotic index. However, mice inoculated with high virulent strain showed earlier and stronger alterations suggesting that thymic atrophy can be directly related to the fungal virulence and to the immunosuppression.
  • Behavior of Leishmania major metacyclic promastigotes during the course of infection and immune response development in resistant versus susceptible hosts Medical Microbiology

    Dórea, Regina Coeli Cunha; Barboza-Filho, Carlos Gomes; Moreira, Dayson Friaça; Guirro, Mirian; Chaves, Ágtha de Alencar Muniz; Dunder, Ricardo José; Soares, Elaine Amorim; Santos-Júnior, Vitório; Spinosa, Wilma

    Abstract in Portuguese:

    Pouco se conhece sobre os epítopos derivados de promastigotas metacíclicos de Leishmania que são importantes para a regulação ou destruição do parasita, como alvos de ação imunológica no hospedeiro vertebrado. Neste estudo, nós investigamos um método alternativo para obter promastigotas metacíclicos de Leishmania major, pela avaliação do curso da infecção e reação de hipersensibilidade do tipo retardado (HTR) em hospedeiros resistentes e susceptíveis. Promastigotas não-infectantes (procíclicos) de L. major, recentemente isolados de amastigotas, foram selecionados pela adesão a colunas de lã de vidro negativamente carregadas, enquanto que promastigotas metacíclicos não se aderem à coluna e podem ser recuperados com facilidade. Condições ótimas de cromatografia foram validadas por análise estatística. O rendimento médio de parasitas obtidos após separação em colunas de lã de vidro e a viabilidade dos promastigotas foram estimados por microscopia óptica. Os promastigotas metacíclicos tiveram um rendimento médio de 43,5% a 57,5%. Camundongos BALB/c (susceptíveis) e camundongos C57BL/6 (resistentes) apresentaram padrões distintos de lesões cutâneas, os primeiros com lesões mais agressivas, induzidas por promastigotas metacíclicos. As respostas à reação de HTR foram maiores nos grupos de camundongos C57BL/6, submetidos à infecção com promastigotas metacíclicos. Estes resultados indicam que o novo método poderia ser integrado aos protocolos existentes para estudar a metaciclogênese de parasitas do gênero Leishmania in vivo.

    Abstract in English:

    Little is known on the epitopes derived from metacyclic promastigotes of Leishmania that are important on the regulation or destruction of the parasite, as targets of immune attack in the vertebrate host. In this study we investigated an alternative method to obtain metacyclic promasigotes of Leishmania major, as evaluated by the course of infection and delayed-type hipersensitivity (DTH) in resistant versus susceptible inbred mice. Non-infective (procyclic) promastigotes of L. major recently transformed from tissue amastigotes were attached to a negatively charged glass-wool column, whereas metacyclic promastigotes were not bound to columns and could be easily recovered. Optimal chromatography conditions were validated through statistical analyses. Parasite average yield from glass wool columns and promastigote viability were estimated by light microscopy. Metacyclic promastigotes yielded 43.5% to 57.5%. Different patterns of cutaneous lesions were obtained in BALB/c (susceptible) and C57BL/6 (resistant) mice, the former with highly infective lesions induced by metacyclic promastigotes. DTH responses proved to be higher in groups of C57BL/6 mice which were infected with metacyclic promastigotes. These results indicate that the new method could be integrated with the investigation of metacyclogenesis of Leishmania in vivo.
  • Antagonistic and protective effects against Salmonella enterica serovar typhimurium by Lactobacillus murinus in the digestive tract of gnotobiotic mice Medical Microbiology

    Vasconcelos, Ana Luiza Sampaio; Nicoli, Jacques Robert; Nardi, Regina Maria Drummond

    Abstract in Portuguese:

    No presente estudo, a produção de substâncias antagonistas por Lactobacillus murinus contra bactérias enteropatogênicas foi avaliada in vivo assim como um possível efeito protetor contra um desafio oral com Salmonella Typhimurium utilizando um modelo animal gnotobiótico. Um maior tempo médio de sobrevida (P < 0,05) foi observado nos animais associados com L. murinus (7,89 ± 3,83 dias) quando comparado com os controles (4,44 ± 0,73 dias). Lactobacillus murinus exerceu um potente efeito antagonista in vivo contra S. sonnei e com menos intensidade contra S. Typhimurium como revelado pelos halos de inibição ao redor das fezes dos animais associados com L. murinus. Os diâmetros dos halos de inibição ao redor dos conteúdos intestinais aumentaram ao longo do trato digestivo, seguindo proporcionalmente os níveis populacionais de L. murinus nas respectivas porções intestinais. Concluindo, o presente estudo mostra que a associação com L. murinus em camundongos gnotobióticos retarda a morte após um desafio oral com S. Typhimurium e que compostos inibitórios difusíveis obtidos em ensaios in vitro foram também produzidos in vivo e podem ser responsáveis por este efeito.

    Abstract in English:

    In the present study, production of antagonistic substances by Lactobacillus murinus against enteropathogenic bacteria was evaluated in vivo as well as a possible protective effect against an oral challenge with Salmonella Typhimurium using a gnotobiotic animal model. A higher mean survival time (P < 0.05) was observed in L. murinus-associated animals (7.89 ± 3.83 days) when compared with the control ones (4.44 ± 0.73 days). Lactobacillus murinus exerted a potent antagonistic effect in vivo against S. sonnei and to a lesser extent against S. Typhimurium as revealed by inhibitory halos around the feces of Lactobacillus-associated animals. Diameters of inhibitory halos around intestinal contents increased along the intestine tract, following proportionally the L. murinus population levels in the respective intestinal portions. Concluding, the present study showed that L. murinus association in gnotobiotic mice delayed the death after an oral challenge with S. Typhimurium and that inhibitory diffusible compounds obtained in in vitro assays were also produced in vivo and may be responsible for this effect.
  • ExoU contributes to late killing of Pseudomonas aeruginosa - infected endothelial cells Medical Microbiology

    Saliba, Alessandra Mattos; Nishi, Rebeca; Assis, Maria Cristina; Plotkowski, Maria Cristina

    Abstract in Portuguese:

    Para determinar o papel de ExoU na citotoxicidade tardia de P. aeruginosa, células endoteliais (CE) foram expostas às cepas PA103, PA103deltaxoU e PA103::exsA por 1h e à gentamicina em meio de cultura. Após 24h, a viabilidade das CE infectadas com PA103 (33.7 ± 14.3%) foi inferior à de CE infectadas com PA103deltaexoU (77.7 ± 6.3%) e PA103::exsA (79.5 ± 23.3%). A citotoxicidade não dependeu da capacidade de interagir com as CE porque o percentual de células com bactérias associadas em culturas expostas a PA103 foi semelhante ao percentual em culturas expostas a PA103deltaexoU e inferior em culturas expostas a PA103::exsA. O tratamento das CE com citocalasina D reduziu a internalização de PA103, mas não interferiu em sua citotoxicidade.

    Abstract in English:

    To ascertain the role of ExoU in late P. aeruginosa cytotoxicity, endothelial cells (EC) were exposed to wild type PA103, PA103deltaexoU and PA103::exsA for 1h and to gentamicin in culture medium. After 24h, the viability of PA103-infected cells (33.7 ± 14.3%) was significantly lower than the viability of PA103deltaexoU- (77.7 ± 6.3%) or PA103::exsA- (79.5 ± 23.3%) infected EC. P. aeruginosa cytotoxicity did not depend on the bacterial ability to interact with EC because the percentage of cells with associated PA103 (35.9 ± 15.8%) was similar to the percentage in PA103deltaexoU- (34.2 ± 16.0%) and lower than the percentage in PA103::exsA-infected cultures (82.9 ± 18.9%). Cell treatment with cytochalasin D reduced the PA103 internalization by EC but did not interfere with its ability to kill host cells.
  • Nosocomial outbreaks due to Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii in a Neonatal Intensive Care Unit (NICU) of the Uberlândia Federal University Hospital Medical Microbiology

    Brito, Denise Von Dolinger de; Oliveira, Elias Jose; Darini, Ana Lúcia da Costa; Abdallah, Vânia Olivetti Sttephen; Gontijo-Filho, Paulo Pinto

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo foi relatar a ocorrência de dois surtos subseqüentes na UTIN do HC-UFU, por amostras epidêmicas de P. aeruginosa e A. baumannii multirresistentes nos períodos de Mar - Set/01 e Out - Mar/02, respectivamente. O surto por P. aeruginosa incluiu sete neonatos com conjuntivite e três com bacteremia e um estudo caso-controle foi realizado no surto por A. baumannii com 11 e 22 neonatos respectivamente. Os isolados de A. baumannii foram resistentes a gentamicina e ciprofloxacina e os de P. aeruginosa a ampicilina/sulbactam além de gentamicina e ciprofloxacina. As culturas ambientais e das mãos dos profissionais de saúde foram negativas. O surto por P. aeruginosa resultou no aumento do uso de imipenem o que pode ter favorecido a emergência do surto por A. baumannii que embora suscetível a este beta-lactâmico apresentou uma multiresistência importante. A análise univariada relacionou os fatores de risco predisponentes para infecção por A. baumannii: peso < 1500g, idade < 7 dias, hospitalização > 7 dias e uso de carbapenema. O término dos surtos foi alcançado através medidas de controle de infecção e isolamento de coorte dos neonatos infectados, não sendo possível definir o reservatório e a via de transmissão.

    Abstract in English:

    The study documents the occurrence of two subsequent outbreaks in the NICU of HC-UFU, caused by epidemic strains of multiresistant Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii, that occurred between March/01 and September and between October/01 and March/02, respectively. The P. aeruginosa outbreak included seven neonates with conjunctivitis and three with bacteremia. A case-control study was conducted for the A. baumannii outbreak, with 11 and 22 neonates, respectively. The isolates of A. baumannii were resistant to gentamacin and ciprofloxacin. P. aeruginosa isolates were resistant to ampicillin/sulbactam gentamicin and ciprofloxacin. The hands of healthcare workers and environmental cultures were negative. The outbreak of P. aeruginosa resulted in the increase of use of imipenem, which could have favoured the emergence of a A. baumannii epidemic strain, despite of its susceptibility to this antibiotic. The risk factors for A. baumannii infection were: weight <1500g, age < 7 days, hospitalization > 7 days and use of carbapenems. Containment of the two outbreaks was achieved by introduction of strict hygiene measures and careful nursing care of the infected infants. The reservatory and the route of transmission were not found.
  • Microbial contamination of central supply systems for medical air Medical Microbiology

    Andrade, Carolina Machado; Brown, Tamara

    Abstract in Portuguese:

    Existem vários padrões e recomendações para a qualidade do ar respirável relacionado aos equipamentos de proteção respiratória, mas pouco tem sido feito em relação a uma possível contaminação microbiana do ar medicinal. O presente trabalho demonstra quantitativa e qualitativamente que as linhas de ar estão relacionadas à contaminação microbiológica do ar comprimido e ar sintético para uso medicinal. Amostras de ar foram coletadas por um equipamento especialmente resistente a pressão, e o conteúdo bacteriano e fúngico foi identificado após crescimento em placa. A flora bacteriana isolada tanto dos sistema periféricos de ar foi virtualmente a mesma encontrada nas instalações centralizadas, sendo uma mistura de patógenos e bactérias normais da pele. Vários fatores contribuintes para a contaminação microbiana do ar medicinal e medidas preventivas são discutidas.

    Abstract in English:

    There are many standards and recommendations for breathing air quality associated with respiratory protection equipment, but little has been done regarding the possible microbial contamination of medical air. The present study demonstrates quantitatively and qualitatively that pipelines might be incriminated as source of microbial contamination of compressed and synthetic air for medical use. Air samples were drawn into an especially pressure-resistant device and the bacterial and fungi contents were identified after growth on agar plates. The bacterial flora isolated from peripheral air outlets was virtually the same as that found in the central air-generating installations, consisting of a mixture of pathogens and normal skin bacteria. Several factors contributing to microbial contamination of medical air are mentioned and preventive measures are discussed.
  • Determination of decimal reduction time (D-value) of chemical agents used in hospital disinfection Medical Microbiology

    Mazzola, Priscila Gava; Martins, Alzira Maria da Silva; Penna, Thereza Christina Vessoni

    Abstract in Portuguese:

    Para selecionar o agente sanitizante de acordo com o nível (baixo, intermediário, alto ou esterilizante) é necessário determinar o tempo de redução decimal (valor D) para os microrganismos comumente identificados em equipamentos médico-hospitalares. O valor D é determinado inoculando-se 1 mL da suspensão de microrganismo em 100 mL da solução desinfetante. Em intervalos constantes, alíquotas de 1 mL da mistura devem ser transferidas para 8 mL de meio de cultura contendo agente neutralizante. B. stearothermophilus e E. coli se mostraram os microrganismos mais resistentes para soluções esterilizantes e desinfetantes.

    Abstract in English:

    Prior to selecting disinfectant for low, intermediate and high (sterilizing) levels, the decimal reduction time, D-value, for the most common or persistent bacteria identified on a medical device or at a health care facility should be determined. The D-value was determined by inoculating 100 mL of disinfecting solution with 1 mL of a bacterial suspension. At regular intervals, 1 mL aliquots of this mixture were transferred to 8 mL of growth media containing a neutralizing agent, and incubated at optimal conditions for the microorganism. B. stearothermophilus and E. coli were the most resistant bacteria for the disinfecting and sterilizing procedures.
  • Conventional versus molecular tests (Multiplex PCR and PCR mecA gene) for detection of methicillin resistant Staphylococcus aureus Medical Microbiology

    Ribas, Rosineide Marques; Gontijo-Filho, Paulo Pinto; Darini, Ana Lúcia da Costa

    Abstract in Portuguese:

    Nesse estudo, para detecção de S. aureus resistente à meticilina (MRSA), a amplificação do gene mecA baseada no multiplex PCR foi comparada com os testes de difusão com disco para 1 µg/mL de oxacilina, detecção da concentração inibitória mínima (CIM), meio de triagem com 4% de NaCl e 6 µg/mL de oxacilina. Na investigação de 24 isolados obtidos de sangue, o genótipo mecA foi detectado em apenas 16 (66,7%) dos isolados pelo multiplex PCR. A CIM apresentou valores variando de 0,19 a 512 µg/mL entre os isolados de MRSA. Os dados obtidos pelos testes de triagem e diluição em ágar apresentaram sensibilidades de 80,0% e 72,8% respectivamente, quando comparados com a presença do gene mecA (multiplex). Todos os isolados, incluindo os negativos, quando reavaliados com a técnica de PCR exclusivo para este gene, o resultado foi positivo. A produção de beta-lactamase foi positiva em 20/25 (80,0%) dos isolados. Cerca de ¼ dos pacientes evoluiu para óbito apesar da maioria (83,3%) ter sido tratada adequadamente. A identificação simultânea da bactéria e sua susceptibilidade aos antibióticos é necessária para a escolha de uma terapia adequada para casos de sepse estafilocócica, mas é importante considerar a sensibilidade, especificidade e validação dos kits disponíveis.

    Abstract in English:

    In this study, for detection of methicillin-resistant S. aureus (MRSA), a mecA multiplex PCR-based amplification was compared with the 1 µg oxacillin disk diffusion test, detection of minimal inhibitory concentration (MIC), and screening in agar with 4% NaCl and 6 µg/mL oxacillin. Among 24 isolates obtained from blood, mecA gene was detected in only 16 (66.7%) isolates by multiplex PCR. The MIC test showed a range of resistance to oxacillin from 0.19 to 512 µg/mL, among these isolates. Data obtained by screening and dilution tests showed that sensitivity to methicillin was 80.0% and 72.8%, respectively, when compared with the presence of mecA gene (multiplex). All isolates, including the negatives, when revaluated for mecA gene by PCR were positive. beta-lactamase production was positive for 20/25 isolates (80.0%). About ¼ of patients died dispite most of them (83.3%) were adequately treated. The simultaneous identification of the bacteria and determination of this susceptibility to antibiotics are necessary for the choice of empiric antibiotic therapy in suspected staphylococcal sepse, but is important to considering the sensibility, specificity and validation of the available kits.
  • Genetic analysis of Escherichia coli strains carrying enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) markers, isolated from children in Rio de Janeiro city, Brazil Medical Microbiology

    Regua-Mangia, Adriana Hamond; Gomes, Tânia Aparecida Tardelli; Andrade, João Ramos Costa; Vieira, Mônica Aparecida Midolli; Gonzalez, Alice Gonçalves Martins; Zahner, Viviane; Irino, Kinue; Teixeira, Lúcia Martins

    Abstract in Portuguese:

    No presente estudo, 47 amostras enteropatogênicas de Escherichia coli, previamente caracterizadas pelo sorotipo, fenótipo de aderência, habilidade de induzir a formação da lesão histopatológica e presença das seqüências genéticas eae, bfp e EAF, foram analisadas de acordo com o perfil de fragmentação do DNA cromossômico pela técnica de eletroforese em campo pulsado (PFGE), as variantes isoenzimáticas através da eletroforese de isoenzimas (MLEE) e a presença de seqüências específicas da região LEE (eae, espA, espB, tir) e respectivos alelos. A amplificação destas seqüências mostrou a presença de 18 padrões genéticos distintos. A tipagem do gene eae revelou que a maior parte das amostras apresentou intimina não-tipável (42%) seguida dos tipos alélicos beta (35%), gama e alfa (12% cada). A fragmentação do DNA cromossômico detectou um elevado polimorfismo genético entre as amostras estudadas e não foi observada uma correlação com os marcadores de virulência investigados. Por outro lado, a análise das variantes isoenzimáticas sugeriu uma distribuição clonal específica de variantes genéticas do locus eae, o que nos leva a indicar a sua utilização como um marcador promissor para definir as relações genéticas neste grupo de microrganismos.

    Abstract in English:

    In the present study, 47 enteropathogenic Escherichia coli strains identified according to serotyping, presence of eae, bfp and EAF sequences, adherence phenotype and ability to induce attaching-effacing lesions were analyzed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus enzyme electrophoresis (MLEE), and the presence of LEE genes (eae, espA, espB, tir) as well as the respective alleles. Amplification of LEE genes subtypes revealed 18 different pathotypes. Typing of the eae gene showed that most strains contained nontypable intimin (42%) followed by beta (35%), gamma and alpha genes (12% each). PFGE analysis revealed a variable degree of polymorphism among isolates and, in general, no clear correlation was observed among PFGE profiles and the virulence markers identified. Otherwise, grouping based on MLEE analysis showed a close association between eae allele and clonal cluster distribution leading us to indicate the eae profile as a promising marker to establish relatedness among such microorganisms.
  • Chronic infection of cystic fibrosis patient airways by a single clone of Burkholderia cepacia: replacement of non-mucoid to mucoid morphotype Medical Microbiology

    Carvalho, Ana Paula D'Alincourt; Ventura, Grasiella Maria de Carvalho; Folescu, Tânia Wrobel; D'Amoed, Renato Farme; Higa, Laurinda; Teixeira, Lucia Martins; Merquior, Vânia Lúcia Carreira; Marques, Elizabeth de Andrade

    Abstract in Portuguese:

    O presente trabalho descreve a emergência de cepas mucoides do complexo B. cepacia em um paciente com Fibrose Cística dentro de um acompanhamento bacteriológico prospectivo de nove anos. Os dados clínicos sugerem a associação entre o isolamento do morfotipo mucoide e a deterioração clínica do paciente. Apesar da variação fenotípica, os testes moleculares mostraram que o paciente manteve-se cronicamente infectado por cepas de mesma origem clonal.

    Abstract in English:

    Mucoid Burkholderia cepacia morphotype emerged within a nine year follow-up of a cystic fibrosis patient. Clinical data suggested a linkage between the mucoid phenotype isolation and the deterioration of the patient's condition. Despite of the phenotypic variation, molecular typing showed that the patient was chronically infected with B. cepacia complex isolates belonging to a same genetic clone.
  • Heavy metal resistance of microorganisms isolated from coal mining environments of Santa Catarina Environmental And Soil Microbiology

    Castro-Silva, Marcus Adonai; Lima, André Oliveira de Souza; Gerchenski, Ana Valéria; Jaques, Daniela Batista; Rodrigues, André Luis; Souza, Pricila Lima de; Rörig, Leonardo Rubi

    Abstract in Portuguese:

    A atividade de mineração do carvão é responsável pela geração de diferentes sub-produtos. Entre esses, está a pirita que acidifica a água e acelera o processo de solubilização de metais. Como conseqüência, o ambiente torna-se ácido e rico em metais pesados, os quais selecionam os microrganismos capazes de sobreviver nestas condições. Esses microrganismos podem, por sua vez, serem empregados como agentes para a biorremediação de áreas contaminadas com metais pesados. No presente trabalho é descrito o isolamento e a caracterização de bactérias, fungos e leveduras resistentes aos metais zinco, níquel e cádmio.

    Abstract in English:

    The coal mining activity is characterized by the generation of large amount of by-products. One of them is pyrite, which tends to acidify the water, solubilizing heavy metals. As a consequence the environment becomes acid and rich in heavy metals, selecting microorganisms able to survive in this condition, which are of great interest as bioremediation agents. This work describes the isolation and characterization of microorganisms from a coal mining area in Santa Catarina. These microorganisms comprised bacteria, fungi and yeasts resistant to zinc, nickel and cadmium.
  • Effects of the electrolytic treatment on Bacillus subtilis Environmental And Soil Microbiology

    Tolentino-Bisneto, Rodolfo; Bidoia, Ederio D.

    Abstract in Portuguese:

    Processos convencionais de desinfecção de águas podem gerar compostos tóxicos. Esse é o caso dos trialometanos formados na reação do cloro com compostos orgânicos presentes na água. O tratamento eletrolítico pode ser um substituto à cloração com vantagem de não requer a adição de nenhum composto na água. O efeito do tratamento eletrolítico, utilizando eletrodos de carbono, na viabilidade de Bacillus subtilis foi testado para se determinar o mecanismo de morte. Através de microscopia eletrônica, foi possível evidenciar que a morte do microrganismo se deu pela lise celular, provavelmente provocada pela eletroporação irreversível da membrana celular.

    Abstract in English:

    Conventional processes of water disinfection can generate toxic composites. It is the case of the trihalomethanes (carcinogenic) formed in the contact of chlorine with organic substances present in the water. The electrolytic treatment can be a substitute for the chlorination process without the need for addition of chemical substances to the process. The effect of the electrolytic treatment using carbon cathode on the viability of the microorganism Bacillus subtilis was tested to determine the death process. By means of electronic microscopy, it was observed that the main cause of the microorganism's death was the cellular lysis due to the electroporation in the cell membrane.
  • Use of molecular approach to verify the influence of a eutrophic lagoon in the nearby ocean's bacterioplankton communities Environmental And Soil Microbiology

    Taketani, Rodrigo Gouvêa; Araujo, Fábio Vieira; Weerelt, Margaretha Denise Maria van; Sanchez-Nunez, Maria Leonisa; Aniszewski, Erick; Rosado, Alexandre Soares

    Abstract in Portuguese:

    A lagoa Rodrigo de Freitas é um ambiente aquático eutrofizado, cujas águas são lançadas ao mar nas praias de Ipanema e Leblon através do canal do Jardim de Alah. Nesse trabalho, foi estudada a influência desse aporte na comunidade bacteriana dessas praias. Para isso coletou-se água de onze estações distribuídas entre a lagoa e as praias. Essas amostras foram analisadas quanto a parâmetros moleculares e microbiológicos. Foi realizado também PCR-DGGE utilizando-se iniciadores para o gene rpoB, a partir de DNA extraído das amostras de água coletadas. Resultados preliminares mostram que a influência da lagoa na comunidade bacteriana das praias pode ser verificada por todas as abordagens.

    Abstract in English:

    Rodrigo de Freitas lagoon is an eutrophic aquatic environment. The waters from the lagoon are released to the sea at Ipanema and Leblon beaches, through Jardim de Alah channel. In this work, the influence of these waters on the bacterial communities of these beaches was investigated. Eleven sampling stations were set between the lagoon and the beaches, and the samples were analyzed by molecular and microbiological parameters. PCR-DGGE of the DNA extracted from the samples was performed using rpoB primers. Preliminary results indicate that all used approaches could reveal the influence of the lagoon on the beaches bacterial communities.
  • Production of phenol-oxidases and peroxidases by fungi isolated from irrigated rice Environmental And Soil Microbiology

    Silva, Célia Maria Maganhotto de Souza; Melo, Itamar Soares de; Vieira, Rosana Faria

    Abstract in Portuguese:

    A proposta deste trabalho foi estudar o potencial das linhagens fúngicas, consideradas potenciais degradadoras dos herbicidas quinclorac e propanil, para produção de enzimas ligninolíticas. Oito linhagens fúngicas foram cultivadas em meio de cultura líquido King's B suplementado com 0,05% de Remazol Brilliant Blue R (RBBR) e em meio de cultura líquido contendo farelo de trigo como substrato. Os sistemas enzimáticos avaliados foram: lignina peroxidase, manganês peroxidase e lacases. Os resultados demonstraram padrões diferenciados quanto à produção de enzimas ligninolíticas entre as linhagens, sendo que as maiores atividades enzimáticas estiveram relacionadas à produção de lignina peroxidase. Das oito linhagens, duas (P3SA1F e P11SA2F) apresentaram descoloração do RBBR, sugerindo a possibilidade de sua aplicabilicação em estudos de biorremediação

    Abstract in English:

    The aim of this work was to study the potential of fungus strains considered as prospective degraders for the herbicides quinclorac and propanil, for ligninolytic enzyme production. Eight fungal strains were grown in King's B liquid culture medium supplemented with 0.05% Remazol Brilliant Blue R (RBBR) and in liquid culture medium containing wheat bran as substrate. The enzymatic system assessment were: lignin peroxidase, manganese peroxidase and laccases. Results indicated differential patterns of ligninolytic enzyme production; the highest enzymatic activities were related to the production of lignin peroxidase. Among the strains, two (P3SA1F and P11SA2F) showed RBBR discoloration, suggesting the possibility of their application in bioremediation studies.
  • Soil amendment with sewage sludge and its impact on soil microflora Environmental And Soil Microbiology

    Vieira, Rosana Faria; Silva, Célia Maria Maganhotto de Souza

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito de freqüentes aplicações de lodo ao solo na atividade e no C da biomassa microbiana. Os resultados demonstraram que a utilização de doses excessivas de lodo pode prejudicar a microflora do solo.

    Abstract in English:

    The objective of this work was to verify the effect of frequent sludge soil amendments on the soil's activity and microbial biomass C. Results showed that the use of excessive sludge doses could be detrimental to the soil's microflora.
  • Response of micropropagated sugarcane varieties to inoculation with endophytic diazotrophic bacteria Environmental And Soil Microbiology

    Oliveira, André Luiz Martinez de; Canuto, Erineudo de Lima; Reis, Verônica Massena; Baldani, José Ivo

    Abstract in Portuguese:

    Experimentos anteriores estimaram que a cana-de-açúcar pode obter até 60% do N acumulado via fixação biológica de nitrogênio (FBN). Neste trabalho, os efeitos da inoculação da mistura de cinco espécies de bactérias diazotróficas endofíticas foram testados em duas variedades de cana-de-açúcar micropropagadas, sob condições de campo. Após 17 meses de crescimento, a produtividade e a FBN apresentaram influência do genótipo vegetal e da localidade de cultivo. As maiores contribuições via FBN foram observadas no solo de menor fertilidade, para ambas variedades de cana-de-açúcar. Pequenos aumentos de produtividade foram observados para a variedade SP 701143 nos solos de baixa e média fertilidade. Por outro lado, a inoculação na variedade SP 813250 apresentou decréscimo de produtividade nos três tipos de solo testados.

    Abstract in English:

    Previous studies estimated that sugarcane could obtain up to 60% of total nitrogen accumulated from BNF. Here a mixture of five endophytic diazotrophic strains was tested in a field trial, inoculated in two micropropagated sugarcane varieties and three locals, to determine the effects on commercial crop conditions. The sugarcane plantlets were inoculated in vitro, and after 17 months of growing in the field, the productivity and BNF contribution showed to be influenced by the plant genotype and soil type. The highest BNF contributions was observed in the poorest soil for both varieties. Smaller increases in productivity were observed for SP 701143 variety grown in soil with low or medium fertility. In contrast, a decrease in the stem productivity was observed in the SP 813250 variety grown in the three localities.
  • Evaluation of the biological nitrogen fixation contribution in sugarcane plants originated from seeds and inoculated with nitrogen-fixing endophytes Environmental And Soil Microbiology

    Canuto, Erineudo de Lima; Oliveira, André Luis Martinez de; Reis, Verônica Massena; Baldani, José Ivo

    Abstract in Portuguese:

    A técnica de inoculação com bactérias diazotróficas endofíticas na cana-de-açúcar apresenta-se como uma prática alternativa para promover o crescimento vegetal menos dependente da adubação nitrogenada. Este trabalho teve como objetivo avaliar a contribuição da fixação biológica de nitrogênio (FBN) por diferentes estirpes de Herbaspirillum seropedicae e Gluconacetobacter diazotrophicus inoculadas em plantas de cana-de-açúcar originadas de semente. As sementes foram plantadas em vasos com solo não estéril, inoculadas com as diferentes bactérias e mantidas por 10 meses ao ar livre. As maiores contribuições da FBN ocorreram com a inoculação de estirpes Herbaspirillum seropedicae, e dependeram da espécie vegetal utilizada como testemunha. As raízes apresentaram-se como o órgão vegetal preferencial para o estabelecimento das espécies inoculadas.

    Abstract in English:

    The inoculation technique with endophytic diazotrophic bacteria in sugarcane has been shown as an alternative practice to plant growth promotion. The aim of this work was to evaluate the biological nitrogen fixation (BNF) contribution by different strains of Herbaspirillum seropedicae and Gluconacetobacter diazotrophicus in sugarcane plant inoculated from seeds. The seeds were planted in pots filled with non-sterile soil, inoculated with the bacterial strains and grown 10 months outside of the greenhouse. The BNF contribution of the inoculated bacteria varied depending on the plant species used as a control. The highest BNF contribution as well as the highest populations of reisolated bacteria was observed with inoculation of H. seropedicae strains. The roots appeared to be the preferential tissues for the establishment of the inoculated species.
  • Bioremediation of soil contaminated by diesel oil Environmental And Soil Microbiology

    Bento, Fatima Menezes; Camargo, Flávio Anastácio de Oliveira; Okeke, Benedict; Frankenberger-Júnior, Willian Thomas

    Abstract in Portuguese:

    Avaliou-se a degradação de hidrocarbonetos de petróleo (HP) em solos contaminados com óleo diesel através da atenuação natural, bioestimulação e bioaumentação. A bioaumentação apresentou a maior degradação da fração leve (72,6%) e da fração pesada (75,2%) de HP e a atenuação natural foi mais efetiva do que a bioestimulação. A maior atividade da dehidrogenase no solo Long Beach e Hong Kong foi observada nos tratamentos bioaumentação e atenuação natural, respectivamente. O número de microrganismos degradadores de diesel e a população de heterotróficos não foi influenciada pelas técnicas de biorremediação. A melhor performance para a biorremediação do solo contaminado com diesel foi obtida quando foram adicionados microrganismos pré-selecionados do ambiente contaminado.

    Abstract in English:

    Were evaluated natural attenuation, biostimulation and bioaugmentation on the degradation of total petroleum hydrocarbons (TPH) in soils contaminated with diesel oil. Bioaugmentation showed the greatest degradation in the light (C12 - C23) fractions (72.7%) and heavy (C23 - C40) fractions of TPH (75.2%) and natural attenuation was more effective than biostimulation. The greatest dehydrogenase activity was observed upon bioaugmentation of the Long Beach soil (3.3-fold) and the natural attenuation of the Hong Kong soil sample (4.0-fold). The number of diesel oil degrading microorganisms and heterotrophic population was not influenced by the bioremediation treatments. The best approach for bioremediation of soil contaminated with diesel oil is the inoculum of microorganisms pre-selected from their own environment.
  • Herbaspirillum seropedicae and sugarcane endophytic interaction investigated by using high pressure freezing electron microscopy Environmental And Soil Microbiology

    Silva, Lúcia Gracinda da; Miguens, Flávio Costa; Olivares, Fabio Lopes

    Abstract in Portuguese:

    A interação entre plântulas de cana-de-açúcar e H. seropedicae foi investigada pelo uso da técnica de congelamento por alta pressão seguida de criosubstituição. Observações microscópicas evidenciaram diferenças marcantes entre esta técnica e preparações convencionais, especialmente relacionadas a ultraestrutura da bactéria e às estruturas envolvidas na adesão à superfície da parede celular da planta hospedeira.

    Abstract in English:

    The interaction between sugar cane plantlets and H. seropedicae was investigated using High Pressure Freezing followed by Freeze Substitution. Microscopical observation showed consistent differences between this approaches when compared with the conventional preparation, specially related to appearance of the bacteria cell and the endophytic attachment to the host cell wall.
  • Laryngotracheitis: reproducibility of the disease and comparison of diagnostic methods Veterinary Microbiology

    Beltrão, Nilzane; Furian, Thales Quedi; Souza, Guilherme Fonseca de; Macagnan, Marisa; Fallavena, Luiz César Bello; Canal, Claudio Wageck

    Abstract in Portuguese:

    O vírus da laringotraqueíte (VLT) causa de leve a severa doença respiratório em galinhas, o propósito do nosso estudo foi usar um isolado brasileiro de VLT para reproduzir a doença em frangos através da infecção experimental e comparar três métodos de diagnóstico (nested PCR, isolamento viral e histopatologia) para detectar o VLT. Quarenta e oito frangos inoculados intratraquealmente com VLT e outros 48 com PBS, apresentaram sinais respiratórios leves 48 horas após a infecção (PI), mas nenhum sinal após o dia 10 PI. A cada dois dias, seis aves foram selecionados arbitrariamente do controle e do grupo infectado, sacrificados e as traquéias coletadas. Ambos nested PCR e isolamento viral detectaram o vírus do dia 2 até o dia 12 PI. No entanto, no dia 12 PI, a PCR detectou o DNA viral em 100% das amostras enquanto o isolamento viral detectou em somente 33% das amostras. Histopatologia da traquéia revelou corpúsculos de inclusão intranuclear nos dias 8 e 10 PI. Os resultados indicam que o VLT isolado de campo estudado é de baixa patogenicidade e que o protocolo de Nested PCR foi capaz de detectar amostras positivas por um período mais longo da infecção do que muitos testes de diagnósticos descritos.

    Abstract in English:

    Infectious laryngotracheitis virus (ILTV) cause mild to severe respiratory disease in chickens, the purpose of our study being to use Brazilian isolate of ILTV to reproduce ILTV disease in chickens by experimental infection and to compare three diagnostic methods (nested polymerase chain reaction (PCR), virus isolation, histopathology) for detection of ILTV. Forty-eight chickens intratracheally inoculated with ILTV and a further 48 with PBS, showing mild respiratory signs 48 hours post infection (PI) but no signs of infection after day 10 PI. Every 2 days PI, six birds were arbitrarily selected from the control and infected groups, sacrificed and the trachea collected. Both the nested PCR and virus isolation detected the virus from day 2 until day 12 PI. However, at day 12 PI, PCR detected ILTV DNA in 100% of the samples while the virus isolation method detected ILTV in only 33% of the samples. Tracheal histopathology showed intranuclear inclusion bodies on days 8 and 10 PI. The results indicate that the field-isolate of ILTV studied by us is of low pathogenicity and that our nested PCR protocol was able to detect positive samples over a longer infection period than many ILTV diagnostic test already described.
  • Influence of temperature, incubation time, antigen density and age of the culture in agglutinability of leptospires Veterinary Microbiology

    Seyffert, Núbia; Silva, Éverton Fagonde da; Bermudez, Viviane Lorenzato; Brod, Claudiomar Soares

    Abstract in Portuguese:

    Na leptospirose, o teste de soroaglutinação microscópica (MAT) é a base do diagnóstico sorológico, sendo amplamente usado. Em nosso estudo, o MAT foi aplicado para avaliar a influência da temperatura, tempo de incubação, densidade do antígeno, a idade da cultura na aglutinabilidade das leptospiras e a interferência desses fatores na interpretação do diagnóstico. Três amostras de soro com títulos de 100, 800 e 25600 para o sorovar tande (isolado local), do sorogrupo canicola foram utilizadas com combinações diferentes entre os quatro fatores. Houve uma significante relação entre todos os fatores principalmente a densidade do antígeno e a idade da cultura.

    Abstract in English:

    In leptospirosis, the Microscopic Agglutination Test (MAT) is the basis of serological diagnosis and the most widely used. In our study, the MAT was applied to evaluate the influence of temperature, incubation time, antigen density and age of the culture in the agglutinability of Leptospires and the interference of these factors in diagnosis. Three serum samples with titers of 100, 800 and 25.600 to the serovar tande (local isolate) of canicola serogroup were used with different combinations among the four factors. There was a significant relation among all factors, specially between the antigen density and age of the culture.
  • Viral DNA sequences in peripheral blood and vertical transmission of the virus: a discussion about BPV-1 Veterinary Microbiology

    Freitas, Antonio Carlos de; Carvalho, Claudemir de; Brunner, Olga; Birgel-Junior, Eduardo Harry; Dellalibera, Alice Maria Melville Paiva; Benesi, Fernando José; Gregory, Lilian; Beçak, Willy; Santos, Rita de Cassia Stocco dos

    Abstract in Portuguese:

    Neste estudo detectou-se DNA de BPV-1 em: verruga, sangue e plasma de animais afetados por papilomatose. Estes resultados trazem evidências sobre possível localização intracelular do BPV-1 no sangue. Avaliamos um animal afetado por papilomatose e positivo para BPV-1 em amostras de verruga, sangue, placenta e líquido amniótico e que teve sua cria recém-nascida também positiva para BPV-1 no sangue. Estes resultados indicam possível transmissão vertical do BPV-1.

    Abstract in English:

    This study has detected BPV-1 DNA sequences in wart, blood and plasma samples collected from animals affected by papillomatosis, suggesting viral presence inside the cell. We sellected an animal in which we could detect BPV-1 DNA sequences in wart, blood, placenta and amniotic liquid samples and her offspring which presented BPV-1 DNA sequences in blood sample collected immediately after birth. These results show a possible vertical transmission of BPV-1.
  • LTB-R1: an alternative to swine mycoplasmal pneumoniae control Veterinary Microbiology

    Conceição, Fabrício Rochedo; Michelon, André; Michelon, Marcelo; Cerqueira, Gustavo Maia de; Dellagostin, Odir Antonio

    Abstract in Portuguese:

    A Pneumonia Micoplásmica é a doença respiratória mais importante dos suínos. A forma mais eficaz de controlá-la é mediante a utilização de vacinas (bacterinas), cujo custo de produção é elevado. Uma nova alternativa para o controle desta doença, baseada em uma vacina de subunidade recombinante contendo a região R1 da adesina P97 de Mycoplasma hyopneumoniae fusionada a subunidade B da enterotoxina termolábel de Escherichia coli (rLTB-R1), foi o alvo deste trabalho. Nele abordou-se a amplificação dos genes, a fusão genética entre as seqüências codificadoras para LTB e R1, a clonagem, a construção do vetor de expressão, assim como a expressão em E. coli e purificação da rLTBR1.

    Abstract in English:

    Mycoplasmal pneumoniae is the main respiratory disease in swine. The most efficient way to control it is through the use of vaccines (bacterins), whose production cost is high. The objective of this work was to develop a new alternative for controlling Swine Mycoplasmal Pneumoniae, based on a recombinant subunit vaccine containing the R1 region of P97 adhesin of Mycoplasma hyopneumoniae fused to the B subunit of the heat-labile enterotoxin of Escherichia coli (rLTB-R1). In this work we report the amplification of the genes, genetic fusion between LTB and R1 coding sequences, cloning, construction of the expression vector, as well as expression and purification of rLTB-R1 in E. coli.
  • Bovine papillomavirus type 2 in reproductive tract and gametes of slaughtered bovine females Veterinary Microbiology

    Carvalho, Claudemir de; Freitas, Antonio Carlos de; Brunner, Olga; Góes, Luiz Gustavo Bentim; Cavalcante, Andréa Yaguiu; Beçak, Willy; Santos, Rita de Cassia Stocco dos

    Abstract in Portuguese:

    Os vírus do papiloma bovino, descritos como agentes infectantes específicos do epitélio, têm sido associados a diversas formas de câncer em diferentes espécies animais. Dada a intensa disseminação da papilomatose nos rebanhos, a investigação de diferentes formas de transmissão e seus respectivos mecanismos tem exigido especial atenção. No presente estudo, é relatada a detecção de seqüências genômicas do papilomavirus bovino (BPV) em ovócitos e tecidos do trato reprodutivo oriundos de fêmeas abatidas comercialmente, não apresentando papilomatose cutânea. A presença de DNA de BPV-2 em tecidos do trato reprodutivo, lavado uterino, ovócitos e células do cumulus traz evidências de que a infecção viral pode se desenvolver fora do tecido epitelial. Esses achados alertam para a possibilidade de transmissão do BPV através dos procedimentos de transferência de embriões e de fertilização in vitro.

    Abstract in English:

    Papillomaviruses are described selectively infecting epithelial tissues and are associated with many forms of cancer in different species. Considering the widespread dissemination of papillomatosis in livestock, interest is being centred on possible forms of viral transmission and respective mechanisms. In the present study, we report the detection of bovine papillomavirus (BPV) DNA sequences in female reproductive tract tissues, fluids and oocytes from slaughtered bovines not afflicted by cutaneous papillomatosis. BPV-2 DNA sequences were found in ovarian and uterine tissues as well as in oocytes, cumulus cells and uterine flushings. The presence of papillomavirus sequences in reproductive organ tissues and fluids shows that viral infection in organisms can be verified in others tissues, not only in epithelial ones. The present findings alert to the possibility of BPV transmission in embryo transfer programs and assisted fertilization procedures.
  • Effect of the Kozak sequence on seroconversion of mice immunized with a DNA vaccine against swine colibacilosis Veterinary Microbiology

    Michelon, André; Michelon, Marcelo; Simionatto, Simone; Lagranha, Valeska Lizzi; Conceição, Fabrício Rochedo; Vaz, Eliana Knackfus; Cerqueira, Gustavo Maia; Dellagostin, Odir Antonio

    Abstract in Portuguese:

    A diarréia neonatal em suínos causada por Escherichia coli produtora de enterotoxinas (ETEC) é responsável por alta mortalidade e baixa taxa de crescimento de leitões. A habilidade de tais cepas causar doença é dependente principalmente da capacidade de E. coli aderir-se a mucosa do intestino delgado, que é mediada por fímbrias. Neste estudo o gene faeC, que codifica a subunidade menor da fímbria de E. coli K88ab, foi clonado no vetor de expressão em eucariotos pcDNA3, associado ou não à seqüência de KozaK. DNA plasmidial das duas versões da vacina foi inoculado em camundongos via intra-muscular, em duas doses, nos dias 0 e 21. Os animais que receberam a vacina de DNA contendo o faeC associado a seqüência de Kozak apresentaram soroconversões significativamente maiores (p<0,05) que os vacinados com pcDNA3/faeC sem a seqüência de Kozak.

    Abstract in English:

    The neonatal diarrhea in swine caused by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is responsible for high mortality and low growth rate in pigs and it is mainly dependent on the capacity of E. coli to attach to the surface of the small intestine, a property mediated by fimbria. In this study the faeC gene, which codes for the minor fimbrial subunit of E. coli K88ab, was cloned in the eukaryotic expression vector pcDNA3, associated or not to the Kozak sequence. Plasmid DNA of the two versions of the vaccine candidate was inoculated in mice by the intramuscular route, in two doses, at 0 and 21 days. The animals that received the DNA vaccine containing faeC associated to the Kozak sequence presented seroconversion significantly higher (P<0.05) than the one vaccinated with pcDNA3/faeC without the Kozak sequence.
  • Performance comparison between broilers positive and negative for antibodies against the chicken anemia virus Veterinary Microbiology

    Rubin, Lauricio Librelotto; Ávila, Luiz Antônio Faccenda de; Ribeiro, Andréa Machado Leal; Wald, Vera; Canal, Cláudio Wageck

    Abstract in Portuguese:

    O vírus da anemia das galinhas (CAV - "chicken anemia virus") está presente em praticamente todos os países investigados, inclusive no Brasil. O objetivo deste trabalho foi determinar qual a diferença de desempenho, comparando frangos positivos (progênie de matrizes vacinadas ou com infecção natural) com frangos negativos para a presença de anticorpos contra o CAV, no sistema atual de criação intensiva. Como resultado, foi observado que os frangos negativos foram significativamente mais pesados que os frangos positivos. Os machos negativos tiveram um peso final 5,43% superior ao dos machos positivos. Não houve diferença significativa entre os tratamentos em relação aos parâmetros de mortalidade e conversão alimentar. Este estudo indicou que a presença de anticorpos contra o CAV em frangos de corte, seja através da vacinação ou infecção natural das matrizes, não gerou uma progênie com melhor desempenho nas condições de criação testadas.

    Abstract in English:

    The chicken anemia virus (CAV) is present in virtually every country investigated, Brazil including. The aim of this study was to determine what the difference in performance is between positive (progeny of breeders vaccinated or with natural infection) and negative broilers to the presence of antibodies against the CAV in currently intensive raising systems. As a result, it was observed that negative broilers were significantly heavier than positive broilers. Negative males had a final weight 5.43% higher than positive males. There was no significant difference among different treatments in relation to parameters as mortality and feeding conversion. These study indicated that the presence of antibodies against CAV in broilers - may it be through vaccination or natural infection of breeders - did not generate progeny with superior performance under the tested raising conditions.
  • Leptospirosis diagnosis using Nested-PCR Veterinary Microbiology

    Nassi, Fernanda; Seixas, Fabiana Kömmling; Jouglard, Sandra Denize Dorneles; Simionatto, Simone; Silva, Everton Fagonde; Seyffert, Núbia; Brod, Claudiomar Soares; Dellagostin, Odir Antonio

    Abstract in Portuguese:

    A leptospirose constitui um problema sanitário de importância mundial. Esta doença caracteriza-se por apresentar sintomas muito parecidos com os de outras doenças como a dengue e a gripe e, clinicamente é difícil de distingui-las. Técnicas de diagnóstico da leptospirose atualmente disponíveis apresentam baixa sensibilidade e ou especificidade. Por isso, tem havido um grande esforço no sentido de desenvolver testes rápidos e eficientes, baseados em técnicas de biologia molecular. Este trabalho objetivou a avaliação e otimização do Nested-PCR, para o diagnóstico de leptospirose. Para isso foi desenhado um par de primers que amplifica uma região de 264 pb do gene LipL32. A sensibilidade e especificidade do teste foram avaliadas utilizando 7 sorovares saprófitas e 35 sorovares patogênicos. Este PCR mostrou-se específico para leptospiras patogênicas, porém a sensibilidade não foi muito alta. Com o objetivo de melhorar a sensibilidade do teste , foi desenhado outro par de primers que amplifica uma região de 183 pb do gene LipL32, interna a de 264 pb para a realização do Nested-PCR. Nesta reação foi utilizado como DNA molde o produto da primeira amplificação. O Nested-PCR mostrou-se mais sensível que o PCR normal, pois foi capaz de detectar um baixo número de células bacterianas.

    Abstract in English:

    Leptospirosis is a worldwide sanitary problem. Its clinical signs resemble that of other diseases like Dengue and Flu, and it is difficult to distinguish between them. Currently available diagnostic methods shown low sensitivity and specificity. Efforts have been made to develop simpler, faster and more efficient diagnostic methods. The aim of this work was to evaluate and optimize a Nested-PCR method for diagnosis of leptospirosis. Primers were designed to amplify a 264 bp region within the LipL32 gene. The sensitivity and specificity of the assay was evaluated using seven saprophytic serovars and 35 pathogenic serovars. This technique showed to be very specific for pathogenic serovars, however it lacked sensitivity. In order to enhance the sensitivity, another primer pair was designed which amplify a 183 bp region within the 264 bp region in lipL32 gene, and used in a Nested-PCR assay. This approach was much more sensitive than traditional PCR.
  • Evaluation of antibodies production against Borrelia burgdorferi in cattle submitted to rBm86 protein Boophilus microplus tick immunization and associated challenges influence Veterinary Microbiology

    Ishikawa, Márcia Mayumi; Fonseca, Adivaldo Henrique; Yoshinari, Natalino Hajime; Osório, Ana Luiza Alves Rosa

    Abstract in Portuguese:

    Avaliou-se a produção de anticorpos da classe Ig-G anti Borrelia burgdorferi em bovinos imunizados com proteína recombinante Bm86 de Boophilus microplus, assim como a influência de imunizações e estresse associados por meio do teste ELISA indireto no período de um ano. Não houve interferência na produção de anticorpos IgG anti B. burgdorferi pelos desafios utilizados isoladamente no presente estudo. O imunógeno rBm86 não causou oscilações significantes na produção de anticorpos IgG anti B. burgdorferi capazes de interferir nos resultados sorológicos para Borreliose de Lyme em bovinos. O estudo demonstrou a possibilidade de alterações transitórias na produção de anticorpos após estímulos vacinais e de estresse associados, ressaltando a necessidade de estudos sorológicos em conjunto a dados epidemiológicos e de manejo.

    Abstract in English:

    IgG antibodies production against Borrelia burgdorferi in immunized cattle with rBm86 protein from Boophilus microplus was evaluated as well as the influence of the association between immunizations and stress through indirect ELISA test during one year. In the present study there was no influence of the isolated challenged used on the production of IgG antibodies against B. burgdorferi. The rBm86 immunogen did not cause significant oscillation in the production of IgG antibodies against B. burgdorferi capable to interfere in the serological results for Lyme Borreliosis in cattle. This study demonstrated the possibility of transitory changes in the production of antibodies after the association of vaccine stimuli and stress, emphasizing the necessity of serological studies combined with epidemiological and management data.
  • Reclassification of Candida guilliermondii FTI 20037 as Candida tropicalis based on molecular phylogenetic analysis Industrial Microbiology

    Lima, Luanne Helena Augusto; Felipe, Maria das Graças de Almeida; Torres, Fernando Araripe Gonçalves

    Abstract in Portuguese:

    As leveduras do gênero Candida possuem tanto importância clínica como diversas aplicações industriais, principalmente na indústria de alimentos. A levedura Candida guilliermondii FTI 20037 tem sido exaustivamente estudada pois pretende-se utilizá-la no estabelecimento de um processo biotecnológico para a produção de xilitol. O objetivo deste trabalho foi verificar a classificação taxonômica desta levedura por análise de sequências do rDNA e do gene xyl1. Fragmentos correspondentes a estas regiões foram amplificados por PCR e a análise destas sequências por BLAST revelou alta identidade com sequências correspondentes de Candida tropicalis. Estes resultados nos levam a propor que C. guilliermondii FTI 20037 deva ser reclassificada como C. tropicalis.

    Abstract in English:

    Yeasts of the genus Candida are of clinical importance and also have many industrial applications, mainly in the food industry. The yeast Candida guilliermondii FTI 20037 has been extensively studied in order to establish a biotechnological process for the production of xylitol. The goal of this study was to verify the taxonomic classification of this strain based on the analysis of rDNA sequences and the xyl1 gene. DNA fragments from these sequences were amplified by PCR and BLAST analysis revealed strong identity with the corresponding sequences from Candida tropicalis. Based on these results, we propose that C. guilliermondii FTI 20037 must be reclassified as C. tropicalis.
  • Regulation of Saccharomyces cerevisiae maltose fermentation by cold temperature and CSF1 Industrial Microbiology

    Hollatz, Claudia; Stambuk, Boris Ugarte

    Abstract in Portuguese:

    Foi estudado o efeito da baixa temperatura (10ºC) na fermentação de maltose por uma cepa de S. cerevisiae selvagem, e uma cepa csf1delta mutante incapaz de transportar glicose e leucina a baixas temperaturas. A baixa temperatura afeta a cinética da fermentação por diminuir a velocidade de crescimento e rendimento celular final, com quase nenhum etanol produzido a partir de maltose pelas células selvagems a 10ºC. A cepa csf1delta foi incapaz de crescer em maltose a 10ºC, indicando que o gene CSF1 é também necessário para a utilização de maltose a baixas temperaturas. Entretanto, o mutante também mostrou inibição acentuada da fermentação de glicose e maltose por estresse salino, indicando que CSF1 também estaria envolvido na regulação de outros processos fisiológicos, incluindo a homeostase iónica.

    Abstract in English:

    We studied the influence of cold temperature (10ºC) on the fermentation of maltose by a S. cerevisiae wild-type strain, and a csf1delta mutant impaired in glucose and leucine uptake at low temperatures. Cold temperature affected the fermentation kinetics by decreasing the growth rate and the final cell yield, with almost no ethanol been produced from maltose by the wild-type cells at 10ºC. The csf1delta strain did not grew on maltose when cultured at 10ºC, indicating that the CSF1 gene is also required for maltose consumption at low temperatures. However, this mutant also showed increased inhibition of glucose and maltose fermentation under salt stress, indicating that CSF1 is probably involved in the regulation of other physiological processes, including ion homeostasis.
  • Caffeine degradation by Rhizopus delemar in packed bed column bioreactor using coffee husk as substrate Industrial Microbiology

    Tagliari, Cristiane Vanessa; Sanson, Raquel K.; Zanette, André; Franco, Telma Teixeira; Soccol, Carlos Ricardo

    Abstract in Portuguese:

    Diversos microrganismos incluindo bactérias, fungos e leveduras são capazes de assimilar a cafeína de meios sintéticos ou de resíduos de café. Existem poucos trabalhos sobre a via de degradação da cafeína em fungos filamentosos, principalmente por fermentação no estado sólido (FES). Estudos de degradação da cafeína por fungos filamentosos em FES usando casca de café como substrato vêm sendo realizados. O objetivo deste trabalho foi investigar a via de degradação da cafeína por Rhizopus delemar em biorreator de colunas aeradas e comparar este metabolismo de degradação com o da fermentação em frascos de vidro. As metilxantinas foram quantificadas por análises em HPLC. Os experimentos foram realizados com as condições otimizadas previamente: pH 6,5, 28ºC, 10(6) espores/g substrato, vazão de ar 60 mL/min e 73% de umidade inicial. Após 90 horas de fermentação, 65% da cafeína foi reduzida, resultando 0,19% de cafeína e 0,014% de teofilina na casca de café. Esta cepa provou ter habilidade para degradar cafeína e teofilina por FES em biorreator de colunas.

    Abstract in English:

    Various microorganisms including bacteria, yeast and fungi can degrade caffeine. There are few publications about caffeine degradation pathway in filamentous fungi, mainly by solid-state fermentation (SSF). Studies were carried out on degradation of caffeine and their metabolites by filamentous fungi in SSF using coffee husk as substrate. The purpose of this work was to investigate the caffeine degradation pathway by Rhizopus delemar in packed bed column fermenter and to compare this degradation metabolism with glass flasks fermentation. The methylxanthines were quantified by HPLC analysis. The experiments were realized with the optimized conditions in previous experiments: pH 6.5, 28ºC, inoculation rate 10(6) spores/g substrate, aeration rate 60 mL/min and initial moisture 73%. Under these conditions, after 72 hous of fermentation was achieved only 0.19% of caffeine and 0.014% of theophylline in the coffee husk. The strain proved to be able for caffeine and theophylline degradation by SSF in packed bed column bioreactor.
  • Architecture and relevance of several strongly adhered biofilms over a polyester imide (PEI) surface Industrial Microbiology

    Soncini-Júnior, Giancarlo; Franchetti, Sandra Mara Martins; Marconato, José Carlos

    Abstract in Portuguese:

    Um estudo microscópico foi considerado para analisar a eventual adesão de fungos sobre uma superfície de poliéster-imida presente em fios de cobre esmaltados. A microscopia eletrônica de varredura, permitiu observar nestes biofilmes aderidos, uma alta quantidade de pigmentos, hifas e um arsenal enzimático possivelmente atuando na superfície desta macromolécula. Devido a natureza altamente aromática deste material e traços de derivados fenólicos usados como solventes - que se fazem ainda presentes no polímero já reticulado, uma certa atividade anti-fúngica poderia ser esperada, todavia não foram observadas alterações no crescimento dos microrganismos, bem como no processo de adesão dos fungos. Adicionalmente a este fato, os fios esmaltados revelaram total descaracterização de suas propriedades isolantes. Os estudos visam compreender e avaliar o grande potencial demonstrado pelos fungos que poderia em caráter vindouro, explorado em processos de biodeterioração e biodegradação

    Abstract in English:

    A microscopical study was undertaken to analyze the eventual fungi adhesion over a polyester imide surface in enameled copper wires. Scanning electron microscopy allowed to observe in these adhered biofilms, a high amount of pigments, hyphae and its enzymatic arsenal probably acting in the surface of the polymer. Due to the highly aromatic nature of this polyester and the residual phenol derivates still present in the reticulated polymer, an antifungal activity could be expected, but no significant changes were noted in fungal growing and in the adhesion process. Additionally, the wires showed completely failure in all insulation properties. The studies aimed to understand and evaluate the great fungi potential that could be explored in biodeterioration and biodegradation processes.
  • Vanillin production by recombinant strains of Escherichia coli Industrial Microbiology

    Converti, Attilio; Faveri, Danilo de; Perego, Patrizia; Barghini, Paolo; Ruzzi, Maurizio; Sene, Luciane

    Abstract in Portuguese:

    A produção de vanilina a partir de ácido ferúlico foi estudada utilizando-se diferentes linhagens recombinantes de Escherichia coli. Para prevenir a ocorrência de condições de aerobiose e a possível oxidação do produto, os ensaios foram realizados em frascos Erlenmeyer sob agitação moderada (150 rpm). E. coli JM109 (pBBI) mostrou-se o melhor produtor de vanilina entre os demais agentes transformantes, sendo capaz de converter 95% do ácido ferúlico inicial em produto após 1h, rendimento este que decresceu para 72% após 72h, provavelmente devido à atividade de uma oxidase não-específica responsável pela oxidação de vanilina a ácido vanílico.

    Abstract in English:

    Vanillin production from ferulate was studied using different recombinant strains of Escherichia coli. To prevent the occurrence of aerobic conditions and then possible product oxidation, tests were performed in Erlenmeyer flasks under mild mixing (150 rpm). Among other transformants, E. coli JM109(pBB1) appeared to be the best vanillin producer, being able to convert no less than 95% of starting ferulate to the product within 1h. This yield decreased down to 72% after 72h, likely because of a non-specific oxidase activity responsible for vanillin oxidation to vanillate.
  • Biotransformation of poly (epsilon-caprolactone) and poly (vinyl chloride) blend Industrial Microbiology

    Campos, Adriana de; Franchetti, Sandra Mara Martins; Agnelli, José Augusto Marcondes

    Abstract in Portuguese:

    Poli épsilon-caprolactona é um importante polímero biodegradável e miscível com o PVC, um polímero sintético industrial, termo susceptível e não biodegradável. A blenda PVC/PCL é importante em propriedades mecânicas e biodegradabilidade. Neste trabalho, há indicações que há interação dos microrganismos com a superfície polimérica e esta causa mudanças estruturais na blenda PVC/PCL.

    Abstract in English:

    Poly (caprolactone) is a famous biodegradable polymer and miscible with PVC, a commercial synthetic polymer, thermal susceptible and non-biodegradable. This blend is important concerning its mechanical properties and biodegradability. In this work, we testified the biomodification of blend films of PVC/PCL by UV-Vis. spectroscopy. The results show us that there is an interaction between the PVC/PCL film and the microrganisms.
  • Impact of engineered Streptococcus thermophilus trains overexpressing glyA gene on folic acid and acetaldehyde production in fermented milk Industrial Microbiology

    Chaves, Ana Carolina Sampaio Dória; Ruas-Madiedo, Patrícia; Starrenburg, Marjo; Hugenholtz, Jeroen; Lerayer, Alda Luiza Santos

    Abstract in Portuguese:

    O acetaldeído, responsável pelo sabor e aroma característicos de iogurte, é produzido por diferentes vias metabólicas pelas bactérias lácticas: Streptococcus thermophilus (S. thermophilus) e Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (L. bulgaricus). Neste trabalho, a atenção foi focada especificamente na reação para a formação de acetaldeído e de ácido fólico, catalisada pela enzima serina hidroximetil transferase (SHMT), codificada pelo gene glyA. A enzima SHMT catalisa diversas reações e, no caso da bactéria S. thermophilus, ela exerce também a atividade característica da enzima treonina aldolase (TA), definida como a interconversão do aminoácido treonina em glicina e acetaldeído. Foram construídas linhagens de S. thermophilus (StA2305 e StB2305) com super expressão do gene glyA. Estas linhagens modificadas apresentaram crescimento normal quando o leite foi suplementado com hidrolisado de caseína (Casitione). Quando foram usadas para fermentação de leite, observou-se: aumento na produção de ácido fólico e acetaldeído por StA2305 e aumento significativo na formação de ácido fólico por StB2305.

    Abstract in English:

    The typical yogurt flavor is caused by acetaldehyde produced through many different pathways by the yogurt starter bacteria L. bulgaricus and S. thermophilus. The attention was focused on one specific reaction for acetaldehyde and folic acid formation catalyzed by serine hydroxymethyltransferase (SHMT), encoded by the glyA gene. In S. thermophilus, this enzyme SHMT also plays the typical role of the enzyme threonine aldolase (TA) that is the interconvertion of threonine into glycine and acetaldehyde. The behavior of engineered S. thermophilus strains in milk fermentation is described, folic acid and acetaldehyde production were measured and pH and counts were followed. The engineered S. thermophilus strains StA2305 and StB2305, have the glyA gene (encoding the enzyme serine hydroxymethyltransferase) overexpressed. These engineered strains showed normal growth in milk when it was supplemented with Casitione. When they were used in milk fermentation it was observed an increase in folic acid and in acetaldehyde production by StA2305 and for StB2305 it was noticed a significative increase in folic acid formation.
  • Phage amplification assay as rapid method for Salmonella detection Food Microbiology

    Siqueira, Regina Silva de; Dodd, Christine E.R.; Rees, Catherine E.D.

    Abstract in Portuguese:

    A aplicação de métodos rápidos é crucial para a implantação de programas de HACCP em indústrias de alimentos. Neste contexto, o método de amplificação de bacteriófagos é um instrumento de diagnóstico importante porque está baseado na interação dos bacteriófagos com suas células hospedeiras. Este método, usando o bacteriófago P22, foi aplicado para detectar Salmonella em peito de frango. Amostras de 25 g de peito de frango foram diluídas e as diluições apropriadas foram usadas no método de amplificação de bacteriófagos na detecção de Salmonella. Após 3-4 horas de incubação, foi observado uma titulação de partículas virais de, aproximadamente, 10(4) ufp mL-1 (unidades formadoras de placas virais), indicando a presença de células de Salmonella na carne de frango. A comprovação da presença de Salmonella neste produto foi verificada usando-se plaqueamento direto em ágar XLD e procedimento de enriquecimento convencional. As colônias suspeitas de Salmonella foram sorologicamente testadas e identificadas como pertencendo aos sorogrupos B (grupo de S. typhimurium) e D (grupo de S. enteritidis). Portanto, concluiu-se que este método pode ser aplicado, na detecção de Salmonella em alimentos, porque fornece rápido e conclusivo resultado, reduzindo o tempo de análise e o trabalho laboratorial para 3-4 horas.

    Abstract in English:

    The application of rapid methods is crucial for the HACCP program implantation in food industry. In this context, Phage Amplification Assay is a good candidate because is based on the interactions of phage and their host bacteria. This method using phage P22 was applied with to detect Salmonella cells in chicken breast. Samples of 25 g of chicken breast were diluted and the appropriate dilutions were used in phage amplification assay for Salmonella detection. After 3-4 h of incubation, it was observed a phage titre of approximately 10(4) pfu mL-1, indicating that there were Salmonella cells which were naturally present in the meat. The presence of Salmonella cells were verified by using direct plating on XLD agar and by conventional enrichment procedure. The colonies suspected to be Salmonella were serologically tested and were identified as belonging to the serogroups B (S. typhimurium group) and D (S. enteritidis group). It can be concluded that this method provides a rapid and alternative application for Salmonella detection in food samples reducing both time and laboratory work to 3-4 hours.
  • Antibacterial activity of lactic cultures isolated of Italian salami Food Microbiology

    Maciel, Janeeyre Ferreira; Teixeira, Magdala Alencar; Moraes, Célia Alencar de; Gomide, Lúcio Alberto de Miranda

    Abstract in Portuguese:

    Bactérias láticas foram isoladas durante o processamento de salame tipo italiano, obtido a partir de duas plantas de processamento, no Estado do Paraná. Para o isolamento, foram utilizados os meios MRS, D-MRS e M17. Um total de 484 isolados teve sua atividade antibacteriana testada sobre Listeria monocytogenes (Laboratório de Microbiologia - UFV), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Salmonella enteritidis (ATCC 13076) e Escherichia coli (ATCC 25922), utilizando-se o deferred method. Cento e quinze isolados apresentaram zonas de inibição sobre, pelo menos, duas das bactérias indicadoras. Os isolados apresentaram maior inibição sobre Listeria monocytogenes. Os 45 isolados que apresentaram zonas de inibição sobre as quatro bactérias indicadoras foram identificados, utilizando-se o sistema Biolog. Lactobacillus bifermentans predominou entre os isolados identificados, obtidos no meio MRS, a partir das amostras das duas plantas de processamento.

    Abstract in English:

    Lactic acid bacteria were isolated in the MRS, D-MRS and M17 modified media, during the processing of Italian salami, obtained from two processing plants, in the State of Paraná. The 484 isolates were tested for their antibacterial activity against Listeria monocytogenes (Microbiology Laboratory-UFV), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Salmonella enteritidis (ATCC 13076) and Escherichia coli (ATCC 25922), by a deferred method. One hundred and fifteen isolates inhibited at least two of the pathogens. The isolates presented larger inhibition against L. monocytogenes. The 45 isolates with antagonistic action on the four indicator bacteria were identified by the system Biolog. Lactobacillus bifermentans prevailed among the isolates identified in MRS medium from the samples of the two processing plants.
  • Detection of virulence genes in Salmonella Enteritidis isolated from different sources Food Microbiology

    Oliveira, Sílvia Dias de; Rodenbusch, Carla Rosane; Michael, Geovana B.; Cardoso, Marisa I.R.; Canal, Cláudio Wageck; Brandelli, Adriano

    Abstract in Portuguese:

    A presença de três genes de virulência (invA, spvR e spvC) foi determinada em Salmonella Enteritidis isoladas de aves, suínos, humanos e alimentos. Todos os isolados foram positivos para o gene invA, 91,2% também foram positivos para o spvR e 90,2% para o spvC. Não existiu diferença significativa na prevalência dos genes de virulência entre isolados de diferentes origens. Os resultados indicaram que, provavelmente, exista um alto potencial de virulência nos isolados de S. Enteritidis caracterizados.

    Abstract in English:

    The presence of three virulence genes, invA, spvR, and spvC, was determined in Salmonella Enteritidis isolated from poultry, pigs, humans and food. All isolates were positive for the invA gene, with 91.2% being positive for spvR and 90.2% for spvC. There was no significant difference in the prevalence of the virulence genes between isolates from different sources. The results indicate that there is a putative high virulence potential for the S. Enteritidis isolates characterized.
  • Identification of Staphylococcus aureus, S. intermedius and S. hyicus by PCR amplification of coa and nuc genes Food Microbiology

    Silva, Wladimir Padilha da; Silva, Jorge Adolfo; Macedo, Márcia Raquel Pegoraro de; Araújo, Márcia Ribeiro de; Mata, Márcia Magalhães; Gandra, Eliezer Avila

    Abstract in Portuguese:

    Sessenta e cinco cepas de estafilococos coagulase positiva foram identificadas em nível de espécie, através da amplificação, por PCR, de seqüências do gene coa, específicas para S. aureus, e do gene nuc, específicas para S. intermedius e para S. hyicus.

    Abstract in English:

    Sixty-five strains of coagulase positive staphylococci (Staphylococcus aureus, S. intermedius and S. hyicus) were identified at species level by PCR amplification of the coa gene, specific for S. aureus, and of the nuc gene, specific for S. intermedius and for S. hyicus.
  • The effect of organic osmoprotectors on Aeromonas trota and A. hydrophila grown under high sodium chloride concentrations Food Microbiology

    Delamare, Ana Paula L.; Dalcin, Thais; Müller, Gabriela; Costa, Sergio Olavo Pinto da; Echeverrigaray, Sergio

    Abstract in Portuguese:

    O efeito de solutos orgânicos no crescimento de Aeromonas trota e A. hydrophila foi avaliado. A prolina e o ácido glutâmico não apresentaram efeito osmoprotetor, mas a betaina exerceu osmoproteção permitindo o crescimento de ambas bactérias em concentrações inibitórias de NaCl. A cinética do crescimento sugere que a diferença em halotolerância entre as linhagens está associada à síntese de osmolitos, mais do que à capacidade de acúmulo de betaina.

    Abstract in English:

    The effect of organic solutes on the growth of Aeromonas trota and A. hydrophila was evaluated. Proline and glutamic acid were not effective as osmoprotectors, but betaine exerts osmoprotection allowing the growth of both strains in inhibitory concentrations of NaCl. Growth kinetics suggests that the halotolerance difference between the strains is associated with the synthesis of osmolytes rather than betaine uptake.
  • DOD/AMB: in vivo activity of a novel amb formulation with synthetic cationic bilayer fragments Micology

    Lincopan, Nilton; Carmona-Ribeiro, Ana Maria; Mamizuka, Elsa Masae

    Abstract in Portuguese:

    A habilidade do brometo de dioctadecildimetilamônio (DOBAB), em formar bicamada de lipídio sintético e a demonstração prévia do forte poder solubilizante de anfotericina B (ANB) , incentivou-nos a realizar a avaliação da atividade de DODAB/AMB in vivo contra candidíase sistêmica em modelo de camundongos para verificar a sua sobrevida bem como a recuperação das leveduras de C. albicans dos órgãos colonizados (baço e rins). O AMB foi simplesmente adicionado à DODAB em pó previamente disperso em água e sonicado com auxílio de ponteiras, nas concentrações de <0,1e 10 mg/mL, respectivamente, assegurando-se a completa ausência de solventes orgânicos nesta formulação. O estado de agregação do AMB foi avaliado por meio do espectro de absorção da luz UV-visível e a distribuição de tamanhos das formulações estudadas, determinadas por meio de analisador ZetaPlus Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, NY) equipado com um laser de 570 nm e dynamic light scattering (90ºC) para a medição dos tamanhos (Grabowski & Morrison, 1983). AMB foi estabilizada na bicamada de DODAB em forma monomérica, eliminando-se os grandes agregados de AMB insolúveis em água. Tanto a sobrevida dos animais como os experimentos com recuperação das leveduras dos órgãos colonizados (baço e rins) mostraram eficácia equivalente à demonstrada por Fungizona (DOC/AMB) - a sobrevida foi de 100 e 70% respectivamente nas concentrações de 0.4 mg/kg/dia via i.p. por 10 dias (P>0.05), em relação a eliminação da colonização de C. albicans dos rins e baço. Em resumo, DOD/AMB foi efetivo no tratamento de candidíase sistêmica em modelo animal.

    Abstract in English:

    The ability of the versatile dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB), a bilayer-forming synthetic lipid previously shown to solubilize Amphotericin B (AMB), inspired this evaluation of in vivo activity of the DODAB/AMB formulation (DOD/AMB) against systemic candidiasis in a mouse model from survival and tissue burden experiments. AMB was simply added to a DODAB powder dispersion in water previously obtained by sonication with tip at concentrations <0.1 and 10 mg/mL, respectively, organic solvents completely absent. AMB aggregation state was evaluated from UV-visible light absorption and dynamic light scattering for aggregate sizing. AMB was stabilized by the DODAB bilayer fragments in its monomeric form, causing disappearance of large water insoluble drug aggregates. From survival and tissue burden experiments, DOD/AMB efficacy was equivalent to the one exhibited by Fungizone (DOC/AMB) - 100 and 70% survival respectively, at 0.4 mg/kg/day given i.p. for 10 days (P>0.05) -, regarding elimination of Candida colonization in spleen and kidneys. In summary, DOD/AMB, was effective for treating systemic candidiasis in a mouse model.
  • Identification of genes differentially expressed in hyphae of Candida albicans Micology

    Melo, Analy Salles de Azevedo; Serafim, Rui Cosme; Briones, Marcelo Ribeiro da Silva

    Abstract in Portuguese:

    A transição morfológica de levedura para hifa é essencial para a virulência de Candida albicans. Esta transição envolve a expressão de genes hifa-específicos que estão sob o controle de fatores transcricionais. Para descobrir genes hifa-específicos utilizamos um método de triagem diferencial, onde clones de biblioteca de DNA genômico foram hibridizados com sondas de cDNA de levedura e hifa. Dois clones com aumento de expressão em hifa foram selecionados. O sequenciamento dos insertos destes clones permitiu a identificação de dois genes metabólicos importantes: CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) e CaYLL34 (da família AAA ATPase). As ORFs completas destes genes foram caracterizadas e a análise das proteínas hipotéticas revelou que: (1) CaHxt7p tem um domínio de transportador de hexose e (2) CaYll34 tem dois domínios AAA ATPase. Este é o primeiro estudo que demonstra aumento de expressão de genes metabólicos em hifas de C. albicans. Ainda, a associação dos produtos de CaHXT7 e CaYLL34 com a formação de hifas torna estas proteínas potenciais novos alvos para drogas antifúngicas.

    Abstract in English:

    The ability to switch from yeast to hyphal forms is essential for Candida albicans virulence. This morphological switch involves the expression of hyphal-specific genes under the control of transcriptional factors. To contribute to the discovery of hyphal-specific genes, we used a differential screening method where clones of a genomic DNA library were hybridized with yeast and hyphal cDNA probes. Two clones with increased expression in hyphae were selected for study. Sequencing these clones, we found that they encoded two important metabolic genes, CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) and CaYLL34 (member of the AAA ATPase family). CaHXT7 and CaYLL34 ORFs were completely determined. Analyses of the putative proteins show that: (1) CaHxt7p has one hexose transporter domain and (2) CaYll34p has two AAA ATPase domains. These results show, for the first time, increased expression of metabolic genes in C. albicans hyphae. Also, because the proteins encoded by CaHXT7 and CaYLL34 may be necessary for the switching to hyphae, they could be new targets for antifungal drugs.
  • Effect of gamma irradiation on the inactivation of aflatoxin B1 and fungal flora in peanut Micotoxins

    Prado, Guilherme; Carvalho, Eliana Pinheiro de; Oliveira, Marize Silva; Madeira, Jovita Gazzinelli Cruz; Morais, Vanessa Drummond; Correa, Ricardo Ferracini; Cardoso, Valbert Nascimento; Soares, Thaís Veloso; Silva, Juliana Fonseca Moreira da; Gonçalves, Rúbia Carolina Pereira

    Abstract in Portuguese:

    O efeito da irradiação gama nos níveis de aflatoxina B1 e na infecção fúngica foram investigadas em amostras de amendoim, cultivar Tatu Vermelho. Dose de irradiação gama (60Co) de 10 KGy inibiu completamente o crescimento de fungos. Doses de 15, 20, 25 e 30 KGy foram suficientes para destruição de aflatoxina B1 de 55 a 74%. Pode-se concluir do presente trabalho, que a descontaminação de fungos por irradiação gama antes da produção de aflatoxina B1 é o método apropriado na preservação de amendoim.

    Abstract in English:

    The effect of gamma irradiation on aflatoxin B1 levels and fungal infection were investigated in peanut samples, Tatu Vermelho cultivar. At a radiation dose of 10 KGy, growth of molds was completely inhibited. Doses of 15, 20, 25 and 30 KGy were sufficient for destruction of aflatoxin B1 by 55-74%. The results suggested that the decontamination of molds by irradiation, before production of aflatoxin B1, is the most acceptable method in the preservation of peanut.
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