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Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 36, Issue: 1, Published: 2005
  • Susceptibility to heat and antifungal agents of Cryptococcus neoformans var. neoformans (serotype D) isolated from Eucalyptus spp in Rio Grande do Sul, Brazil Medical Microbiology

    Horta, Jorge A; Faganello, Josiane; Rosa e Silva, Lívia K; Oliveira, Loiva T; Santurio, Jânio M; Vainstein, Marilene H; Alves, Sydney Hartz

    Abstract in Portuguese:

    Este estudo foi realizado com os primeiros isolados ambientais de C. neoformans sorotipo D, obtidos no Rio Grande do Sul. Objetivando-se avaliar a susceptibilidade a agentes antifúngicos de forma mais rigorosa, utilizou-se a técnica de referência proposta pelo NCCLS, Caldo Yeast Nitrogen Base (YNB) proposto por Ghannoum et al., Antibiotic medium 3, caldo YNB adequado à metodologia do NCCLS e o E-test. Os resultados indicaram que todos os isolados foram sensíveis à anfotericina B (0,0625-0,5 µg/mL), fluconazol (0,125-4,0 µg/mL), itraconazol (0,031-0,25 µg/ml) e fluorocitosina (0,125-4,0 µg/mL) através das técnicas empregadas. Nos testes de termotolerância (47ºC/30 min), observou-se que as culturas de C. neoformans sorotipo D são mais sensíveis do que as de C. neoformans sorotipo A.

    Abstract in English:

    In this work we studied the susceptibility to heat and antifungal agents of the first strains of environmental Cryptococcus neoformans var neoformans (serotype D) isolated in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. In order to achieve a rigorous analysis, we employed the methodology recommended by NCCLS, Yeast Nitrogen Base (YNB) proposed by Ghannoum et al (YNB-1), Antibiotic medium 3 (AM3) indicated by others, YNB adjusted to the NCCLS methodology (YNB-2) and Etest. Our results indicate that all strains were susceptible to amphotericin B (0.0625-0.5 µg/mL), fluconazole (0.125-8.0 µg/mL), itraconazole (0.031-0.25 µg/mL) and flucytosine (0.125-4.0 µg/mL). The C. neoformans serotype D strains were more susceptible to heat (47ºC/30 min) than C. neoformans serotype A.
  • Production of hydrolytic enzymes by the plant pathogenic fungus Myrothecium verrucaria in submerged cultures Medical Microbiology

    Moreira, Fabiana Guillen; Reis, Simone dos; Costa, Maria Aparecida Ferreira; Souza, Cristina Giatti Marques de; Peralta, Rosane Marina

    Abstract in Portuguese:

    A capacidade do fungo fitopatogênico Myrothecium verrucaria produzir enzimas hidrolíticas extracelulares em culturas submersas foi estudada utilizando diversos substratos. O fungo foi capaz de produzir diferentes depolimerases e glicosidases, sendo xilanases, pectinases e proteases as mais importantes. Atividade lipase foi encontrada nos filtrados das culturas desenvolvidas na presença de óleo de oliva, enquanto atividade proteolítica foi detectada em todas as culturas. Xilanase e pectinase foram otimamente ativas em pH 4,5 a 5,5, enquanto protease foi ativa em ampla faixa de pH (3,5 a 11,0). As três enzimas foram otimamente ativas 40ºC e estáveis por várias horas a temperaturas até 50ºC.

    Abstract in English:

    The capability of the plant pathogenic fungus Myrothecium verrucaria to produce extracellular hydrolytic enzymes in submerged cultures was studied using several substrates. The fungus was able to produce different depolymerases and glycosidases, being xylanase, pectinase and protease the most important. Lipase was found in cultures developed in the presence of olive oil, while protease activity was detected in all cultures. Xylanase and pectinase were optimally active at pH 4.5-5.5, while protease was active in a large range of pH 3.5 to 11.0. All three enzymes were maximally active at 40ºC and they were stable for several hours at temperature up to 50ºC.
  • Comparison of histological and molecular diagnosis of Helicobacter pylori in benign lesions and gastric adenocarcinoma Medical Microbiology

    César, Ana Cristina Gobbo; Cury, Patrícia Maluf; Payão, Spencer Luiz Marques; Liberatore, Paula Rahal; Silva, Ana Elizabete

    Abstract in Portuguese:

    A colonização do Helicobacter pylori está associada com gastrite crônica, úlcera péptica, metaplasia intestinal, adenocarcinoma e linfoma gástrico. O objetivo desse estudo foi comparar os resultados do diagnóstico histológico usado de rotina na detecção do H. pylori com o diagnóstico molecular. Foram utilizadas amostras de 80 lesões gástricas (gastrite crônica, gastrite atrófica, úlcera gástrica e metaplasia intestinal), 18 amostras de adenocarcinoma gástrico e 10 amostras de mucosa gástrica normal H. pylori negativas (controle). Todas as amostras foram avaliadas histologicamente (coloração com hematoxilina-eosina e Giemsa) e pela PCR com a amplificação dos genes antígeno espécie-específico (H3H4) e urease A (H5H6) do H. pylori e pelo gene humano CYP1A1, como controle da qualidade do DNA. Nas amostras de lesão benigna e adenocarcinoma gástrico, a infecção foi detectada em 43% (42/98) e 71% (70/98), respectivamente, para os diagnósticos histológico e molecular (p = 0,0001). O teste de PCR detectou o H. pylori em 27,5% (22/80) das lesões gástricas benignas e em 50% (9/18) dos adenocarcinomas gástricos, com diagnóstico histológico negativo para essa bactéria. Cerca de 2,5% das amostras, exclusivamente de lesões benignas, com diagnóstico histológico positivo apresentaram resultado molecular negativo, para ambos os primers. Diferenças estatisticamente significantes foram encontradas entre os métodos histológico e molecular, em metaplasia intestinal (p = 0,0461) e adenocarcinoma gástrico (p = 0,0011), devido à subdetecção do H. pylori pelo método histológico, e provavelmente pela baixa densidade da bactéria conseqüente à atrofia severa da mucosa gástrica, nesses dois tipos de lesões. Nossos achados demonstram que o método de PCR é mais eficaz para diagnosticar a infecção por H. pylori, principalmente, em metaplasia intestinal e adenocarcinoma gástrico.

    Abstract in English:

    Helicobacter pylori colonization is associated with chronic gastritis, peptic ulcers, intestinal metaplasia, adenocarcinoma and lymphoma of the stomach. The objective of this study was to compare the results of the routinely used histology with molecular diagnosis for the detection of H. pylori. Eighty samples from gastric lesions (chronic gastritis, atrophic gastritis, gastric ulcer, and intestinal metaplasia), 18 gastric adenocarcinoma and 10 normal mucosa H. pylori-negative (control) samples were obtained. All samples were examined histologically (hematoxylin-eosin and Giemsa staining), and PCR amplifications of the species-specific antigen gene (H3H4) and urease A gene segment (H5H6) of H. pylori were made, using the human gene CYP1A1 for DNA quality control. In the benign lesion and adenocarcinoma the infection was detected in 43% (42/98) and 71% (70/98) by histological and molecular diagnosis (p = 0.0001), respectively. The PCR test detected H. pylori in 27.5% (22/80) of the benign gastric lesions and in 50% (9/18) of the gastric adenocarcinoma cases, the histological diagnosis being negative for this bacterium. About 2.5% of the samples, exclusively from benign lesions and with a positive histological diagnosis, showed negative molecular results for both primers. Statistically significant differences were found between the histological and the molecular method in intestinal metaplasia (p = 0.0461) and gastric adenocarcinoma (p = 0.0011), due to underdetection of H. pylori by the histological method, which is probably due to the low density of the bacterium as a consequence of the severe atrophy of the gastric mucosa. Our findings suggest that PCR is the more efficient method for the assessment of H. pylori infection, especially in metaplasia and gastric adenocarcinoma.
  • Pathogenic factors and antimicrobial resistance of Staphylococcus epidermidis associated with nosocomial infections occurring in intensive care units Medical Microbiology

    Michelim, Lessandra; Lahude, Michele; Araújo, Patricia R.; Giovanaz, Dirce S. H.; Müller, Gabriela; Delamare, Ana P.L.; Costa, Sérgio Olavo Pinto da; Echeverrigaray, Sérgio

    Abstract in Portuguese:

    As infecções nosocomiais constituem um importante problema em hospitais, sendo que as unidades de terapia intensiva (UTI) apresentam a maior incidência deste tipo de infecções. Os estafilococos, especialmente S. epidermidis e S. aureus, estão entre os microrganismos mais importantes associados às infecções nosocomiais. S. epidermidis é uma espécie colonizante da pele, sendo frequentemente inoculado durante procedimentos invasivos ou veiculado pela equipe de saúde, e essa situação é agravada pela emergência de cepas multirresistentes endêmicas no ambiente hospitalar. No presente trabalho foi avaliada a resistência a antibióticos e presença de distintos fatores de patogenicidade em 98 isolados clínicos de S. epidermidis obtidos de vários materiais em unidades de terapia intensiva e 20 colonizantes de pele de voluntários saudáveis. Os resultados obtidos mostraram elevada freqüência de isolados clínicos multirresistentes a antibióticos (76,5%), enquanto esta não foi detectada em isolados de voluntários saudáveis. A frequência de isolados multiresistentes foi 67,7% na UTI neonatal, 66,6% na UTI pediátrica, e 60,8% na UTI adulto, a menor freqüência de isolados multirresistentes na UTI adulto é indicativo de maior incidência de cepas comunitárias nesse local. As diferenças significativas na freqüência de isolados com atividades hemolítica, proteolítica e formação de biofilme, encontradas entre isolados clínicos e controles, indica a maior incidência de cepas com potencial patogênico no ambiente hospitalar. Não foi observada correlação entre multirresistência e fatores de patogenicidade, exceto uma baixa correlação positiva com a atividade hemolítica.

    Abstract in English:

    Nosocomial infections constitute an important problem in hospitals, intensive care units (ICU) having the highest incidence of this type of infection. Staphylococci, especially Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus, are among the most important microorganisms associated with nosocomial infections. S. epidermidis is a common skin resident, and can be introduced into the clinical environment by patients and hospital staff. The situation in hospitals is aggravated by the emergence of multiresistant strains. We evaluated 98 hospital S. epidermidis isolates collected at neonatal, pediatric and adult ICUs and 20 S. epidermidis control skin resident isolates from healthy volunteers, for resistance to ten antibiotics and chemotherapeutic agents, and other pathogenicity factors. A high frequency (76.5%) of multiresistance was detected in clinical isolates, whereas community isolates were resistant to penicillin and ampicillin only. The frequency of multiresistant strains was 67.7% in the neonatal ICU, 66.6% in the pediatric ICU and 60.8% in the adult ICU, the lower frequency of multiresistant isolates in the adult ICU indicates a higher incidence of community strains in this unit. There were significantly higher frequencies of hemolytic, proteolytic and biofilm-forming isolates in the clinical isolates than the community isolates, indicating a higher incidence of strains with pathogenic potential in the hospital environment. Except for slight correlation with hemolytic activity there was no correlation between antibiotic multiresistance and pathogenicity factors.
  • Growth of Aspergillus ochraceus, A. carbonarius and A. niger on culture media at different water activities and temperatures Medical Microbiology

    Palacios-Cabrera, Héctor; Taniwaki, Marta Hiromi; Hashimoto, Jorge Minoru; Menezes, Hilary Castle de

    Abstract in Portuguese:

    Esporos de A. ochraceus, A. carbonarius e A. niger foram inoculados em três meios de cultura: Agar extrato de levedura Czapeck (CYA), Agar Glicerol 18% com dicloran (DG18), Agar Extrato de levedura e malte com 40% de glicose (MY40G). As placas foram incubadas em 5 temperaturas diferentes: 8, 25, 30, 35 e 41ºC. O crescimento dos fungos foi avaliado medindo o diâmetro da colônia a cada 24h. O objetivo deste trabalho foi determinar a influência de três meios de cultura com atividade de água diferente tempo de incubação e temperaturas, sobre o crescimento de A. ochraceus, A. carbonarius and A. niger. Nenhuma das espécies cresceu à 8ºC em nenhum dos meios de cultura. Para A. carbonarius, 30ºC foi a melhor temperatura para o seu crescimento enquanto para A. niger temperaturas acima de 30ºC foram melhores em todos os meios de cultura. A. ochraceus apresentou bom crescimento a 25 e 30ºC em todos os meios de cultura, enquanto seu crescimento à 35ºC foi mais lento, especialmente no meio CYA. A 41ºC, A. ochraceus não cresceu em nenhum dos meios de cultura estudados e A. carbonarius foi significantemente inibido. A. niger cresceu à temperatura de 41ºC e apresentou-se como o fungo mais xerofílico, comparado com A. carbonarius e A. ochraceus.

    Abstract in English:

    The objective of this paper was to determine the influence of three culture media with different water activities, times of incubation and temperatures on the growth of A. ochraceus, A. carbonarius and A. niger. Spores of A. ochraceus, A. carbonarius and A. niger were inoculated onto three culture media: Czapeck Yeast extract Agar (CYA), Dichloran 18% Glycerol Agar (DG18) and Malt Yeast extract 40% Glucose Agar (MY40G). The plates were incubated at five different temperatures (8, 25, 30, 35 and 41ºC). The growth of fungi was evaluated every 24h, measuring the colony diameter (mm). None of the species grew at 8ºC in any culture media. For A. carbonarius, 30ºC was the best temperature for growth while for A. niger temperatures above 30ºC were better in all culture media. A. ochraceus presented good growth at 25 and 30ºC in all culture media, while at 35ºC, growth was slower, especially on CYA. At 41ºC, A. ochraceus did not grow in any culture media and A. carbonarius was significantly inhibited. A. niger grew at 41ºC and was shown to be the most xerophilic fungi when compared to A. carbonarius and A. ochraceus.
  • Application of broad-range bacterial PCR amplification and direct sequencing on the diagnosis of neonatal sepsis Medical Microbiology

    Ruppenthal, Rubia Denise; Pereira, Fabiana de Souza; Cantarelli, Vlademir Vicente; Schrank, Irene Silveira

    Abstract in Portuguese:

    Primers universais, que amplificam regiões conservadas de rDNA 23S, foram utilizados para analisar 306 amostras de cultivo de sangue obtidas de 295 neonatos com um ano ou menos de idade admitidos em unidades hospitalares de tratamento intensivo. O diagnóstico molecular baseado em seqüenciamento dos produtos de PCR foi comparado com os resultados obtidos do cultivo das amostras de sangue. Os resultados foram concordantes para 277 (90.5%) das 306 amostras testadas, incluindo 263 amostras PCR-negativo e cultura-negativa e 29 amostras cultura-positiva e PCR-positivo. Comparado com o método de cultivo, a técnica de PCR combinada com seqüenciamento, apresentou maior especificidade, 88% e 96,3% respectivamente, com valores preditivos positivos e negativos de 74,3 e 98,5% respectivamente. Concluímos que a técnica baseada em PCR utilizando amostras de cultivo de sangue, obtidas de neonatos com suspeita de sepse bacteriana, apresenta boa correlação com os métodos de cultivo convencionais. A metodologia de PCR/seqüenciamento apresenta aplicabilidade como técnica complementar para o diagnóstico da sepse neonatal. Esta metodologia fácil de ser executada fornece resultados confiáveis podendo ser recomendada para utilização no diagnóstico de amostras obtidas durante o tratamento antimicrobiano especialmente quando o resultado do cultivo permanece negativo. Apresenta, também, potencial de utilização na identificação de espécies bacterianas com problemas de classificação pelos métodos convencionais microbiológicos.

    Abstract in English:

    A broad-range bacterial PCR target to conserved regions of the 23S rDNA was applied to 306 blood culture samples from 295 infants (up to one year of age) admitted to a neonatal intensive care unit. Classic blood culture results were compared to DNA sequencing analysis of the PCR amplification products. Culture results were in agreement to DNA sequencing in 90.5% (277) of 306 samples tested, including 263 PCR and culture negative samples and 29 culture and PCR positive samples. The sensitivity of the PCR method combined with sequencing was 88%, and the specificity was 96.3%, with positive and negative predictive values of 74.3 e 98.5%, respectively. The PCR-based approach directly applied to blood culture samples, correlated well with blood culture results from neonates with presumptive diagnosis of bacterial sepsis. The PCR/sequencing approach is suggested to be a valuable complementary data for diagnosis of neonatal sepsis. This methodology is relatively easy and reliable giving accurate results that can be applied to samples colleted during antimicrobial treatment or by a hospital clinical procedure, especially when routine cultures are negative. It can also be useful for the identification of rare bacterial species and for those isolates not readily identified by microbiological tests.
  • Pathogenic aspects of Epidermophyton floccosum langeron et milochevitch as possible aethiological agent of Tinea capits Medical Microbiology

    Macêdo, Danielle Patrícia Cerqueira; Neves, Rejane Pereira; Magalhães, Oliane Maria Correia; Souza-Motta, Cristina Maria de; Queiroz, Lusinete Aciole de

    Abstract in Portuguese:

    O propósito desta pesquisa foi verificar a capacidade de 15 isolados de Epidermophyton floccosum perfurarem cabelo in vitro e caracterizar quanto a fatores de patogenicidade como crescimento a 37ºC e produção de proteinase e fosfolipase. Dos isolados, 14 perfuraram o cabelo tendo 12 formado órgãos de perfuração. Todos os isolados cresceram a 37ºC e secretaram proteinase, mas não fosfolipase. Nossos resultados sugerem E. floccosum como possível agente etiológico de tinea capitis.

    Abstract in English:

    The aim of this research was to verify the ability of 15 isolates of Epidermophyton floccosum to perforate hair in vitro and characterize them for pathogenicity factors such as growth at 37ºC and proteinase and phospholipase production. Fourteen isolates perforated hair and from these twelve produced perforating organs. All isolates grew at 37ºC and produced proteinase, but not phospholipase. These results suggest that E. floccosum may be a possible aethiological agent of tinea capitis.
  • Leptospires detection in kidney, liver and uterus of cows slaughtered in Paraná State, Brazil Veterinary Microbiology

    Silva, Francielle Gibson da; Freitas, Julio Cesar de; Anzai, Eleine Kuroki; Hashimoto, Vanessa Yumi; Giraldi, Nilson; Delbem, Ádina Cléia B.; Bracarense, Ana Paula F.R.L.; Reis, Antônio Carlos F. dos; Vasconcellos, Silvio Arruda

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo deste trabalho foi detectar leptospiras em fragmentos de rim, fígado e útero de 96 fêmeas bovinas com histórico sanitário desconhecido, escolhidas aleatoriamente durante o abate em um frigorífico no Estado do Paraná, Brasil. Todas as 96 amostras de urina foram submetidas ao exame direto em microscópio de campo escuro. As amostras positivas neste exame e todos os fragmentos de rim, fígado e útero foram semeados nos meios de cultura EMJH modificado e Tween 80/40/LH. Os cortes histológicos de rim, fígado e útero foram submetidos à coloração de Hematoxilina-Eosina (HE) e a prova de imunoperoxidase indireta com soros hiperimunes contra o sorovar Hardjo (Hardjoprajitno) e contra a estirpe Londrina (LO14), do sorovar Canicola, isolada no norte do Paraná, Brasil, utilizados como anticorpo primário. O exame direto detectou leptospiras na urina de quatro animais. Todas as tentativas de isolamento das urinas e fragmentos de rim, fígado e útero foram negativas após 16 semanas de incubação. No exame histopatológico foi observado infiltrado focal de células mononucleares no interstício renal da maioria dos animais. Na prova de imunoperoxidase indireta com o soro hiperimune contra a estirpe LO14, o rim de um animal foi o único a apresentar resultado positivo. Todos os fragmentos de rim, fígado e útero testados com o soro hiperimune contra o sorovar Hardjo foram negativos.

    Abstract in English:

    The objective of this trial was to detect leptospires in fragments of kidney, liver and uterus of 96 cows with unknown sanitary status, randomly chosen at slaughter in Paraná, Brazil. All 96 urine samples were submitted to direct examination using dark field microscopy. Positive samples in the direct examination and all kidney, liver and uterus fragments were cultured in EMJH modified medium and Tween 80/40/LH. Sections cut of kidney, liver and uterus were stained by Hematoxylin-Eosin (HE) and indirect immunoperoxidase with hyperimmune serum against serovar Hardjo (Hardjoprajitno) and strain Londrina 14 (LO14), from serovar Canicola, which was isolated in the northern region of Paraná state, Brazil, used as primary antibodies. Direct examination detected leptospires in the urine of four animals. All attempts to isolate leptospires from urine and kidney, liver and uterus fragments were negative after 16 weeks of incubation. In the HE stain, focal infiltrate of mononuclear inflammatory cells was observed in the renal interstitial area of most animals. In the indirect immunoperoxidase assay using hyperimmune serum against LO14 strain, the kidney of only one animal presented positive results. All fragments of kidney, liver and uterus tested with hyperimmune serum against serovar Hardjo were negative.
  • Detection of Leptospira spp. in the semen and urine of bulls serologically reactive to Leptospira interrogans serovar hardjo Veterinary Microbiology

    Magajevski, Fernanda Senter; Girio, Raul Jose Silva; Mathias, Luis Antonio; Myashiro, Simone; Genovez, Margareth Élide; Scarcelli, Eliana Pinheiro

    Abstract in Portuguese:

    O presente trabalho avaliou a PCR na detecção de leptospiras em sêmen e urina de dez touros sorologicamente reagentes, comparando seus resultados com aqueles obtidos por outras técnicas de diagnóstico. Foram realizadas duas colheitas de materiais em dias alternados. As amostras de sêmen e de urina foram separadas em alíquotas para visualização direta em microscopia de campo escuro, inoculação em hamsters (apenas para o sêmen), isolamento em meio de cultura e PCR. Nenhum hamster apresentou positividade na prova de soroaglutinação microscópica (SAM); fragmentos de rins e fígado desses animais foram utilizados para a tentativa de isolamento em meio de cultura, sendo positivo o cultivo a partir do rim de hamster inoculado com semen de um touro, e do fígado de hamsters inoculados com o semen de três touros. O isolamento em meio de cultura foi negativo para todas as amostras de sêmen, mas foi positivo para cinco amostras de urina. Na PCR não houve resultado positivo para as amostras de sêmen, e apenas uma amostra de urina apresentou resultado positivo, sendo coincidente com uma das culturas positivas. Não foi possível visualizar leptospiras em nenhuma das amostras por exame direto em microscopia de campo escuro.

    Abstract in English:

    This study evaluated PCR for the detection of leptospires in semen and urine of ten serologically reactive bulls, comparing these results with those obtained with other diagnosis techniques. Two collections of materials were done in alternate days. Semen and urine samples were separated in aliquots for: direct visualization in dark field microscopy; inoculation in hamsters (for semen only); isolation in culture media; and PCR. No hamster was positive by the microscopic agglutination test (MAT); kidney and liver fragments from the hamsters were used in an isolation attempt in culture media, with one positive isolation from the kidney of a hamster inoculated with semen of one bull, and from liver of hamsters inoculated with semen of three bulls. Isolation in culture was negative for all semen samples, but positive for five urine samples by direct inoculation. In PCR there was no positive result for semen samples, and only one urine sample was positive, which was coincident with one of the positive cultures. It was not possible to visualize leptospires in any of the samples by dark field microscopy.
  • Comparison of serological methods for the diagnostic of Caprine arthritis-encephalitis (CAE) in Rio de Janeiro, Brazil Veterinary Microbiology

    Cortez-Moreira, Madelayne; Oelemann, Walter M.R.; Lilenbaum, Walter

    Abstract in Portuguese:

    Soros de 562 caprinos foram submetidos à pesquisa de Artrite-encefalite caprina através dos testes de imunodifusão em gel de agarose (AGID) de teste imunoenzimático (ELISA). Das amostras testadas, 79 (14,1%) foram reativas em ambos os testes, mas 141 (25,1%) foram positivos apenas no ELISA. Assim, a sensibilidade do ELISA em relação ao AGID foi de 100% e a especificidade de 70,8%.

    Abstract in English:

    Serum samples of 562 goats were tested for Caprine arthritis-encephalitis using agar gel immunodiffusion test (AGID) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Seventy-nine samples (14.1%) were reactive by both testes but 141 (25.1%) were reactive only by ELISA. ELISA, when compared to AGID, presented 100% sensitivity and 70.8% specificity.
  • Experimental infection of laying hens with Salmonella enterica serovar Gallinarum Veterinary Microbiology

    Oliveira, Gláucia Helaine de; Berchieri Junior, Angelo; Fernandes, Alexandre César

    Abstract in Portuguese:

    Infecções experimentais por Salmonella enterica serovar Gallinarum foram realizadas em aves de postura comercial, incluindo uma linhagem branca resistente e uma linhagem vermelha susceptível ao desenvolvimento da enfermidade clínica. As aves de linhagem susceptível apresentaram doença clínica dependente da dose administrada. Excreção fecal foi observada em aves da linhagem susceptível próximo ao momento da morte e, eventualmente, em aves da linhagem resistente e aves convalescentes. A remoção das aves mortas do meio ambiente reduziu a taxa de mortalidade/morbidade, procedimento este que pode ser utilizado como medida de controle.

    Abstract in English:

    Experimental infections were set up in commercial laying birds, comprising a white relatively resistant line and a red susceptible line infecting with Salmonella enterica serovar Gallinarum. The major findings were that in susceptible birds clinical disease occurred in a dose-dependent manner. Faecal excretion occurred in susceptible birds almost up to death but also occurred in the more resistant line and in birds, which were convalescing. Removal of birds, which had died from the disease, from the environment, reduced the resultant mortality/morbidity and may be regarded as a useful measure for control.
  • Technological application of an extracellular cell lytic enzyme in xanthan gum clarification Biotechnology

    Shastry, Suresh; Prasad, M.S.

    Abstract in Portuguese:

    Uma enzima extracelular celulolítica produzida por Pseudomonas sp. foi ativa sobre células de Xanthomonas campestris mortas pelo calor. A atividade lítica causou a digestão enzimática de goma xantana de X. campestris. A digestão foi eficiente tanto para xantana nativa altamante viscosa (2,0% w/v) como para xantana comercial Sigma (2,5% w/v). Observações por microscopia eletrônica de varredura demonstraram a ação celulolítica sobre células de X. campestris.

    Abstract in English:

    An extracellular cell lytic enzyme from Pseudomonas sp. was active on heat killed cells of Xanthomonas campestris. The lytic activity caused enzymatic digestion of X.campestris xanthan gum. Digestion was effective for highly viscous native xanthan 2.0% (w/v) and 2.5% (w/v) commercial Sigma xanthan. Scanning electron microscopy and SDS-PAGE observations confirmed the cell lytic action on X.campestris cells.
  • Pectinase and polygalacturonase production by a thermophilic Aspergillus fumigatus isolated from decomposting orange peels Biotechnology

    Phutela, Urmila; Dhuna, Vikram; Sandhu, Shobhna; Chadha, B.S.

    Abstract in Portuguese:

    Através da tiragem de 120 cepas de fungos, isolou-se uma cepa capaz de produzir tanto pectinase quanto poligalacturonase. A cepa foi identificada como Aspergillus fumigatus Fres. MTCC 4163. Empregando cultivo em estado sólido, determinou-se os níveis ótimos das variáveis para a produção de pectinase e de poligalacturonase. Os níveis máximos de atividade enzimática foram obtidos quando a cultura era realizada em meio contendo farelo de trigo, sacarose, extrato de levedura e (NH4)2SO4 por 2-3 dias a uma temperatura de 50ºC. A atividade máxima de pectinase (1116 Ug-1) e de poligalacturonase (1270 Ug-1) foi obtida em pH 4,0 e 5,0, respectivamente.

    Abstract in English:

    A thermophilic fungal strain producing both pectinase and polygalacturonase was isolated after primary screening of 120 different isolates. The fungus was identified as Aspergillus fumigatus Fres. MTCC 4163. Using solid-state cultivation, the optimum levels of variables for pectinase and polygalacturonase (PG) production were determined. Maximal levels of enzyme activities were achieved upon growing the culture in a medium containing wheat bran, sucrose, yeast extract and (NH4)2SO4 after 2-3 days of incubation at a temperature of 50ºC. Highest enzyme activities of 1116 Ug-1 for pectinase and 1270 Ug-1 for polygalacturonase were obtained at pH 4.0 and 5.0, respectively.
  • Analysis of the secondary compounds produced by Saccharomyces cerevisiae and wild yeast strains during the production of "cachaça" Biotechnology

    Dato, Maria Cecília Fachine; Pizauro Júnior, João Martins; Mutton, Márcia Justino Rossini

    Abstract in Portuguese:

    O presente trabalho visou estabelecer uma comparação entre composição de cachaças produzidas por Saccharomyces cerevisiae (Sc) e estirpes de leveduras selvagens [Pichia silvicola (Ps), Pichia anomala 1 (Pa1), Pichia anomala 2 (Pa2) e Dekkera bruxelensis (Db)], isoladas em destilarias da região de Jaboticabal-SP. Os componentes secundários da fração denominada coração foram determinados por cromatografia gasosa. Os níveis dos componentes secundários foram influenciados pelo pH dos respectivos vinhos, os quais dependem da estirpe de levedura empregada no processo fermentativo. A Saccharomyces cerevisiae apresentou valores ligeiramente superiores de componentes secundários, enquanto as estirpes selvagens produziram maiores teores de álcoois superiores. As estirpes selvagens de leveduras mostraram-se adequadas para obtenção de uma cachaça de boa qualidade.

    Abstract in English:

    The aim of this study is to compare the composition of "cachaças" produced in 10 fermentation cycles by Saccharomyces cerevisiae (Sc) and wild yeast strains [Pichia silvicola (Ps), Pichia anomala 1 (Pa1), Pichia anomala 2 (Pa2) and Dekkera bruxelensis (Db)], isolated from distilleries in Jaboticabal - SP, Brazil. The secondary components of the heart fraction were determined by gas chromatography. The levels of secondary components were influenced by the wine pH, which varied among yeast strains. S. cerevisiae showed slightly more secondary components, whereas wild strains produced more higher alcohols. Wild yeast strains were shown to be adequate for the production of a high quality "cachaça".
  • Production of thermostable glucoamylase by newly isolated Aspergillus flavus A 1.1 and Thermomyces lanuginosus A 13.37 Biotechnology

    Gomes, Eleni; Souza, Simone Regina de; Grandi, Roseli Picolo; Silva, Roberto da

    Abstract in Portuguese:

    Entre 13 linhagens de fungos filamentosos isolados a partir de amostras de solo agrícola, tubérculos e de material em compostagem, duas foram selecionadas em função da capacidade de crescer em meio líquido contendo amido como única fonte de carbono, a 45ºC, e produzir consideráveis quantidades de glucoamilase. Essas linhagens, identificadas como Aspergillus flavus A1.1 e Thermomyces lanuginosus A13.37, foram utilizadas para desenvolvimento de experimentos para avaliar os efeitos do tipo de amido (milho e mandioca), do pH inicial do meio de cultura (4,0; 5,0 e 6,0) e da temperatura de incubação (40 e 45ºC), em um modelo fatorial (2x3x2), sobre a produção da glucoamilase. O tipo de amido usado como fonte de carbono para o cultivo dos fungos influenciou significativamente a produção de glucoamilase por A. flavus, sendo obtida uma maior quantidade da enzima em meio contendo amido de mandioca do que em meio com amido de milho. A produção da enzima por T. lanuginosus também foi maior em meio contendo amido de mandioca, porém, a diferença não foi estatisticamente significativa. As atividades enzimáticas sobre amido (0,3%), maltose (0,3%) ou sobre mistura de 0,3% de amido com 0,1% de maltose, indicaram que as enzimas de Aspergillus hidrolisaram, preferencialmente, o amido, embora tenham mostrado atividade considerável sobre a maltose. A maior liberação de glicose a partir da mistura de substratos sugeriu que o fungo em questão possa secretar dois tipos diferentes de enzimas. Enzimas produzidas por T. lanuginosus hidrolisaram o amido e a maltose e não liberaram maiores teores de glicose quando o substrato constou de mistura de amido e maltose. As enzimas de Aspergillus e Thermomyces apresentaram elevada temperatura ótima de atividade (65 e 70ºC, respectivamente) com boa termoestabilidade na ausência de substrato (manutenção de 50% da atividade por 5 e 8h respectivamente), além de estabilidade em ampla faixa de pH. Os resultados apresentados indicam uma importante fonte alternativa de glucoamilase para uso no processamento industrial de amido.

    Abstract in English:

    Thirteen thermophilic fungal strains were isolated from agricultural soil, tubers and compost samples in tropical Brazil. Two strains were selected based on of their ability to produce considerable glucoamylase activity while growing in liquid medium at 45ºC with starch as the only carbon source. They were identified as Aspergillus flavus A1.1 and Thermomyces lanuginosus A 13.37 Tsiklinsky. The experiment to evaluate the effect of carbon source, temperature and initial pH of the medium on enzyme production was developed in a full factorial design (2x2x3). Enzyme productivity was influenced by the type of starch used as carbon source. Cassava starch showed to be a better substrate than corn starch for glucoamylase production by A. flavus but for T. lanuginosus the difference was not significant. Enzyme activities were determined using as substrates 0.3% soluble starch, 0.3% maltose or 0.3% of starch plus 0.1% maltose. The enzymes from A. flavus A1.1 hydrolyzed soluble starch preferentially but also exhibited a significant maltase activity. Moreover higher quantities of glucose were released when the substrate used was a mixture of starch and maltose, suggesting that this fungus produced two types of enzyme. In the case T. lanuginosus A 13.37, the substrate specificity test indicated that the enzyme released also hydrolyzed starch more efficiently than maltose, but there was no increase in the liberation of glucose when a mixture of starch and maltose was used as substrate, suggesting that only one type of enzyme was secreted. Glucoamylases produced from A. flavus A1.1 and T. lanuginous A.13-37 have high optimum temperature (65ºC and 70ºC) and good thermostability in the absence of substrate (maintaining 50% of activity for 5 and 8 hours, respectively, at 60ºC) and are stable over in a wide pH range. These new strains offer an attractive alternative source of enzymes for industrial starch processing.
  • Evaluation of bacteriocin-producing Lactobacillus sakei 1 against Listeria monocytogenes 1/2a growth and haemolytic activity Food Microbiology

    Martinez, Rafael C.R.; De Martinis, Elaine C.P.

    Abstract in Portuguese:

    Lactobacillus sakei 1 produtor de bacteriocina foi cultivado em caldo Infusão Cérebro-Coração por 24h a 25ºC. O sobrenadante da cultura foi neutralizado, esterilizado por filtração e usado para testar a atividade da bacteriocina frente a Listeria monocytogenes 1/2a, a 8ºC e 15ºC. Lactobacillus sakei ATCC 15521 não bacteriocinogênico, foi utilizado como controle negativo. L. monocytogenes 1/2a foi inoculada no sobrenadante da cultura de L.sakei 1 e L. sakei ATCC 15521 e as populações listeriais foram determinadas após 0, 5 e 10 dias. A produção de bacteriocina foi quantificada como unidades arbitrárias por mL (UA/mL), utilizando-se o teste de antagonismo em ágar. Adicionalmente, para investigar se o padrão de virulência de L. monocytogenes poderia ter mudado após exposição à bacteriocina, foi avaliada a habilidade de L. monocytogenes em causar hemólise em hemáceas de carneiro, antes e após exposição à bacteriocina a 8ºC. Na presença do peptídeo antimicrobiano, a 8ºC, a população de L. monocytogenes foi reduzida, mas o desenvolvimento de células resistentes foi observado. A 15ºC, não houve diferença entre os grupos controle e teste. Além disso, a atividade hemolítica de L. monocytogenes 1/2a não foi alterada pela exposição à bacteriocina de L. sakei, 1/2a não foi alterada pela exposição à bacteriocina de L. sakei, o que sugere que não houve mudança em seu padrão de virulência.

    Abstract in English:

    Bacteriocin-producing Lactobacillus sakei 1 was cultivated in Brain-Heart Infusion broth (24 h at 25ºC). The culture supernatant was neutralized, filter sterilized and used to test the activity of bacteriocin against Listeria monocytogenes 1/2a, at 8ºC and 15ºC. Non-bacteriocinogenic Lactobacillus sakei ATCC 15521 was used as a negative control. L. monocytogenes 1/2a was inoculated in culture supernatant medium from L. sakei 1 and L. sakei ATCC 15521 and the listerial populations were determined after 0, 5 and 10 days. The bacteriocin production was quantified as arbitrary units per mL (AU/mL) using agar antagonism test. Additionally, to investigate if L. monocytogenes virulence pattern could be changed after bactericion exposure, the ability of L. monocytogenes to cause haemolysis in sheep red blood cells was determined, before and after exposure to bacteriocin at 8ºC. In the presence of the antimicrobial peptide, at 8ºC, L. monocytogenes population decreased, but growth of resistant cells was observed. At 15ºC, there was no difference between test and control. Furthermore, the haemolytic activity of L. monocytogenes 1/2a was not altered by exposure to L. sakei 1 bacteriocin, which suggests no change in its virulence pattern.
  • Investigation of influenza in migrating birds, the primordial reservoir and transmitters of influenza in Brazil Virology

    Kawamoto, Adélia Hiroko Nagamori; Mancini, Dalva Assunção Portari; Pereira, Luiz Eloy; Cianciarullo, Aurora Marques; Cruz, Aurea Silveira; Dias, Andrea Luppi Fernandes; Mendonça, Rita Maria Zucatelli; Pinto, José Ricardo; Durigon, Edison Luiz

    Abstract in Portuguese:

    Os mais importantes reservatórios do vírus influenza são os pássaros. A manutenção do vírus influenza em hospedeiros naturais, inclusive o homem, permite que esse vírus realize rearranjos entre as suas cepas. O recente relato de uma cepa influenza aviária A(H5N1), em humanos, se deu em uma criança com doença respiratória fatal, na China em 1977. O presente estudo foi conduzido para elucidar o transporte da influenza por pássaros que migram, anualmente, através de ambos hemisférios o do Norte e do Sul, com especial atenção voltada à espécies Vireo olivaceo [Juruviara(BR) e Red-eyed vireo(USA)] que viaja do USA para o Brasil, e vice-versa, e a espécie Elaenia mesoleuca [Tuque(BR) e (USA)] que voa por todo o Hemisfério Sul. Essas espécies de pássaros, que residem e migram em São Paulo, e que demonstram transportar o vírus influenza, foram selecionadas. As partículas virais isoladas foram observadas por microscópio eletrônico. O vírus influenza foi detectado pelos testes: House Duplex/PCR e Gloria. Os resultados revelam que os pássaros das espécies: Elaenia mesoleuca e Vireo olivaceus são transportes do vírus influenza enquanto cruzam ambos Hemisférios. Para o conhecimento da função que os pássaros migratórios podem desempenhar na epidemia de influenza, no Brasil, caracterização dos subtipos deste vírus estão sendo realizados.

    Abstract in English:

    Birds are the most important reservoirs of the influenza virus. Its maintenance in its natural hosts, including man, allows the influenza virus to reassorts its strains. The recent report of an avian influenza A (H5N1) virus in humans, was in a child with fatal respiratory illness in China, 1997. The current study was conducted to elucidate the transportation of the influenza by birds that migrate, annually, through the both Northern and Southern hemispheres, with special attention paid to the Vireo olivaceus [Juruviara(BR) or Red-eyed vireo(USA)] species, which travels from the USA to Brazil, and vice versa, and the Elaenia mesoleuca [Tuque(BR) or (USA)] species that flies over the entire Southern Hemisphere. There are two species of birds, which breed and migrate in São Paulo State, Brazil, and which were demonstrated to carry Influenza virus, were selected. The viral particles isolated were observed by electron microscopy. The influenza virus was detected by the House Duplex/PCR and Gloria molecular biology tests. The results demonstrated that the Elaenia mesoleuca and Vireo olivaceus bird species are carrying the Influenza virus whilst crossing both the Northern and Southern hemispheres. To understand the role that these migrating birds may play in epidemic influenza, in Brazil, characterization of avian influenza subtypes will be done.
  • Effectiveness of Metarhizium anisopliae against immature stages of Anastrepha fraterculus fruitfly (Diptera : Tephritidae) Environmental And Soil Microbiology

    Destéfano, Ricardo Henry Rodrigues; Bechara, Ivanira José; Messias, Claudio Luiz; Piedrabuena, Aquiles Eugênico

    Abstract in Portuguese:

    O estudo avaliou a eficácia de Metarhizium anisopliae var. anisopliae, (Hyphomycetes : Moniliales) linhagem E9, isolada da cigarrinha das pastagens Deois flavopicta (Hemiptera : Cercopidae), contra larvas, prepupas, pupas e adultos emergentes de Anastreha fraterculus, a mosca Sul Americana das frutas. Os bioensaios foram conduzidos simulando condições de campo em solo autoclavado (AS) e não autoclavado (NAS) de pomares típicos de citros no Estado de São Paulo, sudeste do Brasil. Várias concentrações de conídios foram incorporadas no solo. A mortalidade calculada sobre a porcentagem de adultos emergentes, foi de 86% para as concentrações mais altas de conídios: 2,52 x 10(10) para AS e 2,52 x 10(10) para NAS. A concentração letal (LC50) expressa pela concentração de conídios, foi 8,44 x 10(9) conídios/g de solo para AS e 12,2 x 10(9) conídios/g/S para NAS.

    Abstract in English:

    The study evaluated the effectiveness of Metarhizium anisopliae var. anisopliae (Hyphomycetes : Moniliales) strain E9, isolated from the pasture spittlebug Deois flavopicta (Hemiptera : Cercopidae), against larvae, prepupae and pupae stage and emergent adults of Anastrepha fraterculus, the South American fruitfly. The bioassay was carried out simulating field conditions, on autoclaved (AS) and non-autoclaved (NAS) soil from typical citrus orchards in the State of São Paulo, Southeastern region of Brazil. Various concentrations of conidia were incorporated into the soil the mortality, calculated based on the percentage of adult emergence, was 86% for the highest conidia concentrations: 2.52 x 10(10) for AS and 2.52 x 10(10) for NAS. The lethal concentration (LC50), expressed as conidia concentration, was 8.44 x 10(9) conidia/g of soil (S) for AS and 12.23 x 10(9) conidia/g of soil for NAS.
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