Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 36, Issue: 2, Published: 2005
  • Microbiological analyses of water from hemodialysis services in São Luís, Maranhão, Brazil Medical Microbiology

    Lima, José de Ribamar Oliveira; Marques, Sirley Garcia; Gonçalves, Azizedite Guedes; Salgado Filho, Natalino; Nunes, Paulo Cruz; Silva, Hernandes Sousa; Monteiro, Silvio Gomes; Costa, Jackson Mauricio Lopes

    Abstract in Portuguese:

    A necessidade de um controle rigoroso no serviço de hemodiálise tornou-se algo de extrema importância para garantir uma melhor qualidade de vida aos pacientes submetidos a este tratamento, uma vez que, a falta de controle de qualidade da água, tem levado a óbito vários pacientes. Este estudo teve como objetivo avaliar as características físico-químicas e bacteriológicas da água utilizada pelos serviços de hemodiálise em hospitais da cidade de São Luís. A metodologia utilizada para as análises bacteriológicas foi: método da membrana filtrante para determinação de coliformes totais, método Cult-Dipcombi-ttc-ágar para bactérias heterotróficas e método limulus amebocyte lysate para endotoxinas. Foram analisadas dezoito amostras de água em três unidades hospitalares, sendo seis amostras provenientes de cada serviço de hemodiálise, colhidas diretamente dos pontos pré e pós-tratamento. Quanto à presença de microrganismos na água utilizada pelos serviços de hemodiálise, observou-se positividade nas unidades hospitalares B e C. Não foi encontrada contaminação por bactérias heterotróficas nas amostras examinadas no pré-tratamento, entretanto a contaminação por endotoxinas foi em 100% das amostras. Nas amostras pós-tratamento encontrou-se para bactérias heterotróficas 66,6% e endotoxinas 33,3%. Os microrganismos identificados na unidade hospitalar B foram: Burkholderia cepacia, Alcalígenes xilosoxidans, Pseudomonas aeruginosa e Stenotrophomonas maltophilia. Na unidade C, foram identificados: Flavimonas oryzihabitans, Ralstônia pickettii e Burkholderia cepacia. Houve uma correlação significativa entre a presença de endotoxinas e características físico-químicas da água tais como: turbidez e condutividade. Estes dados revelaram que duas das três unidades hospitalares avaliadas necessitam rever o controle do sistema de água de hemodiálise.

    Abstract in English:

    Rigorous control of water quality in hemodialysis services is extremely important in order to guarantee a better quality of life of the patients submitted to this treatment. The lack of adequate water monitoring has caused the death of various patients in the past. The objective of the present study was to determine the physicochemical and bacteriological characteristics of water used by hemodialysis services in hospitals of the city of São Luís, Maranhão, Brazil. Bacteriological analyses included the membrane filter method for the determination of total coliform bacteria, the Cult-Dipcombi-TTC-agar method for heterotrophic bacteria and the limulus amebocyte lysate method for the determination of endotoxins. Eighteen water samples obtained from three hospital units, six samples per hemodialysis service, collected directly at the pre- and post-treatment points, were analyzed. Microorganisms were detected in the water used by the hemodialysis services in two of the three hospital units (B and C) studied. No contamination with heterotrophic bacteria was observed in pretreatment samples, while endotoxin production was detected in 100% of the samples. In post-treatment samples, heterotrophic bacteria were detected in 66.6% of the samples and endotoxins in 33.3%. The microorganisms identified in unit B were Burkholderia cepacia, Alcaligenes xylosoxidans,Pseudomonas aeruginosa and Stenotrophomonas maltophilia In unit C Flavimonas oryzihabitans,Ralstonia pickettii and Burkholderia cepacia were identified. A significant correlation was observed between the presence of endotoxins and the physicochemical characteristics of water such as turbidity and conductivity. These data indicate that two of the three hospital units studied should revise the control of their hemodialysis water system.
  • False positive reaction due to endogenous biotin activity in glandular epithelium of decidua Medical Microbiology

    Spano, Liliana Cruz; Vargas, Paulo Roberto Merçon de; Leite, José Paulo Gagliardi; Nascimento, Jussara Pereira do

    Abstract in Portuguese:

    Sondas marcadas com biotina foram utilizadas neste trabalho para detecção de infecção viral por hibridização in situ em tecidos fixados com formalina e embebidos em parafina de 11 casos obtidos de abortamento. Sondas para citomegalovírus humano (HCMV), parvovírus B19 humano (B19) e adenovírus humano tipo 2 (HAd2), foram marcadas com biotina-11-dUTP através da reação de nick-translation. Estreptavidina conjugada com fosfatase alcalina (SAP) seguida por solução de 4-nitro-azul de tetrazolio/5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato (NBT/BCIP) foram utilizadas para detecção da biotina após a reação de hibridização. Reação positiva foi observada no núcleo de células do epitélio glandular da decídua tanto no controle positivo quanto no negativo em tecidos de primeiro e segundo trimestre gestacional. Esta reação não foi inibida com solução bloqueadora da atividade endógena de fosfatase alcalina e persistiu mesmo com a omissão das sondas. O uso de controles negativos permitiu revelar atividade endógena de biotina nuclear em epitélio glandular da decídua, responsável por reações falso positivas em sistemas de detecção estreptavidina-biotina (StrepABC). Os resultados obtidos neste estudo fortemente recomendam que a detecção de ADN por hibridização in situ em endométrio gestacional seja feita com outro sistema de detecção que não o StrepABC.

    Abstract in English:

    Biotin-labeled probe was used in an in situ hybridisation assay to localize virus infection in formalin-fixed, paraffin embedded tissues taken from eleven abortion cases. Probes for human cytomegalovirus (HCMV), human Parvovirus B19 (B19) and human adenovirus type 2 (HAd2), were labeled with biotin-11-dUTP by nick-translation reaction. Streptavidin-alkaline-phosphatase (SAP) was used to detect biotin, followed by 4-nitroblue tetrazolium/5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (NBT/BCIP) solution. Positive reaction was observed in nucleus of glandular ephitelium cells of decidua either in positive or in negative control at first and second gestational trimester. The reaction was not inhibited with blocking solution for alkaline phosphatase endogenous activity and it persisted even with probes omission. The use of adequate negative control permitted to reveal the presence of nuclear biotin in glandular epithelium of decidua, responsible for false positivity in detection systems involving streptavidin biotin system (StrepABC). The stained cells resembled to cytophatic effect due to herpesvirus, which could induce further misinterpretation. The results obtained in this study strongly recommend that DNA detection by in situ hybridisation reaction in gestational endometrium should be done without using StrepABC system.
  • Identification and pathogenicity of Malassezia species isolated from human healthy skin and with macules Medical Microbiology

    Neves, Rejane Pereira; Magalhães, Oliane Maria Correia; Silva, Merivânia Lucas da; Souza-Motta, Cristina Maria de; Queiroz, Lusinete Aciole de

    Abstract in Portuguese:

    A ocorrência de espécies Malassezia em estudantes clinicamente sadios e com máculas com leve descoloração foi investigada e os isolados caracterizados quanto a fatores de patogenicidade como crescimento a 37ºC, detecção de lípase, fosfolipase e protease. Amostras clínicas de 100 estudantes de ambos os sexos, diferentes idades e sítios corpóreos foram obtidas por escarificação da superfície da pele e do couro cabeludo e examinadas com hidróxido de potássio e submetidas à cultura. As culturas foram obtidas em meio ágar Sabouraud adicionado de óleo de oliva, em placa de Petri, incubadas a temperatura ambiente e a 37ºC. A identificação foi realizada através das propriedades morfológicas e fisiológicas. A detecção de lipase, fosfolipase e protease foi analisada em meios específicos em placa de Petri pela formação de halo. O exame microscópico direto mostrou células globosas, esféricas e hifa. Malassezia furfur foi detectada em sete amostras e M. sympodialis em quatro. Todas as culturas apresentaram atividade lipásica, mas nenhuma foi fosfolipase positiva. A atividade proteásica foi observada em dois isolados de M. furfur e dois de M. simpodialis.

    Abstract in English:

    This study investigated the ocurrence of Malassezia species in clinically healthy students and with macules with a slight fawn discoloration and characterized the isolates as to the pathogenicity factors such as growth at 37ºC, lipase, phospholipase and protease detection. Clinical samples were collected from different body sites of one hundred students of different ages and both sexes. The samples, obtained by scrapping the skin surface and the scalp, were treated with potassa and cultured. Cultures were obtained in Petri dishes containing Sabouraud agar medium added of olive oil, incubated at room temperature and at 37ºC. Culture identifications were based in their morphological and physiological properties. Lipase, phospholipase and protease detection was performed in specific media on Petri dishes for formation of a zone. Globose, spherical yeast cells and hypha were investigated by direct microscopy of clinical materials. Malassezia furfur was detected in seven samples and M. sympodialis in four. All Malassezia cultures presented lipase activity, but none was phospholipase positive. Protease activity was observed in two M. furfur and two M. simpodialis isolates.
  • Improvement of an in-house ELISA for bovine paratuberculosis serology in Brazil Medical Microbiology

    Marassi, Carla Dray; Fonseca, Leila de Souza; Ristow, Paula; Ferreira, Rachel; Lilenbaum, Walter; Oelemann, Walter M.R.

    Abstract in Portuguese:

    Paratuberculose (doença de Johne) se caracteriza por uma enterite crônica de ruminantes, causada por Mycobacterium avium subesp. paratuberculosis (Map). O padrão ouro diagnóstico da infecção é a cultura e isolamento do microrganismo a partir de tecidos ou fezes. No entanto, seu crescimento demora de três a cinco meses e a excreção de Map em níveis detectáveis em cultura é irregular e não ocorre durante os primeiros estágios da infecção, o que diminui seus níveis de sensibilidade. No Brasil, existem poucos relatos de seu isolamento. Os testes imunológicos mais comuns para a identificação da infecção são: Fixação de complemento, imunodifusão em gel de agarose e ensaio imunoenzimático do tipo ELISA. No Brasil, kits comerciais ELISA de diagnóstico são importados e seu uso não está ainda aprovado. O objetivo deste estudo é melhorar um ensaio ELISA-PPA in-house previamente desenvolvido (10) e determinar sua sensibilidade e especificidade. Na primeira etapa deste estudo, as alterações do protocolo original contribuíram para diminuir as variações encontradas entre poços na mesma placa e entre placas em experimentos diferentes, o que demonstrou uma maior estabilidade e reprodutibilidade do teste. Na segunda etapa, um painel de 106 amostras de soros foi testado pelo protocolo modificado do ELISA-PPA para estimar seus índices de sensibilidade e especificidade. O ensaio apresentou sensibilidade de 76,9% e especificidade de 70,0%. Nosso estudo demonstrou que este ensaio pode ser recomendado como uma valiosa ferramenta para diagnóstico e controle da paratuberculose no Brasil e em outros países em desenvolvimento.

    Abstract in English:

    Paratuberculosis (Johne's disease) is a chronic enteritis in cattle caused by infection with Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). In Brazil, few reports describe the isolation of the organism. The gold standard test for Map is its isolation from tissues or feces. Moreover, bacterial growth is slow and test results are available only after three to five months of incubation Furthermore, shedding of bacilli at levels detectable by fecal culture is irregular and does not occur during the early stages of infection, which compromises the sensitivity of this methodology. The most common immunological tests to identify Map infection are complement fixation test (CFT), agar gel immunodiffusion (AGID) and enzyme-linked immunoassay (ELISA). In Brazil, commercial ELISA kits are imported and too expensive to be used as part of diagnostic laboratorial routine. Apart from that, their use has not yet been approved in the country. The aim of the present study was to improve an original assay PPA-ELISA protocol established by our group, and to determine sensitivity and specificity of the modified test. In a first step, we introduced modifications that minimized plate-to-plate and between-well variations, thus making the test more stable and reliable. In the second part of this study, a panel of 106 sera samples was tested by this modified PPA-ELISA protocol in order to estimate its sensitivity and specificity. The new assay presented overall sensitivity of 76.9% and specificity of 70.0%. Our study demonstrated that this assay could be recommended as a valuable tool for diagnosis and control of paratuberculosis in Brazil and other developing countries.
  • Metallo-beta-lactamase producing Pseudomonas aeruginosa strains isolated in hospitals in Recife, PE, Brazil Medical Microbiology

    Magalhães, Vera; Lins, Ana Kelly; Magalhães, Marcelo

    Abstract in Portuguese:

    De 24 linhagens hospitalares de Pseudomonas aeruginosa provenientes de Recife, Brasil, 15 (62%) produziram metalo-beta-lactamase. Tais isolados foram resistentes às principais drogas antipseudomonas, exceto polimixina B e aztreonam. A enzima responsável pela resistência aos carbapanêmicos pertence à classe SPM-1 e o gene envolvido, blaspm-1, provavelmente é plasmidial.

    Abstract in English:

    Out of 24 nosocomial strains of Pseudomonas aeruginosa from Recife, Brazil, 15 (62%) were metallo-beta-lactamase producers. Such isolates were resistant to main antipseudomonas drugs, except polymixyn B and aztreonam. The enzyme responsible for the carbapenem-resistance belongs to SPM-1 class, and the gene involved, blaspm-1, is likely plasmid located.
  • Analysis of the genetic diversity of vancomycin-resistant Staphylococcus aureus Medical Microbiology

    Melo, Geraldo B.; Melo, Michelle C.; Gama, Alexandre P.; Carvalho, Karinne S.; Jesus, Teresa C.; Bonetti, Ana M.; Gontijo Filho, Paulo P.

    Abstract in Portuguese:

    Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) e Staphylococcus coagulase negativo resistente à meticilina (MRCoNS) são os agentes mais freqüentes em infecções hospitalares mundialmente, justificando o incremento no uso de vancomicina. Neste estudo avaliamos a presença de Staphylococcus resistentes aos glicopeptideos em 41 pacientes, em uso de vancomicina, hospitalizados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia em Uberlândia-MG. Todos os isolados foram semeados em agar Mueller-Hinton acrescido do antimicrobiano. A resistência a vancomicina foi confirmada por crescimento após incubação por 24-48 horas a 35ºC. A heterorresistência foi avaliada por semeadura com inóculo mais denso (10(8) UFC/mL). Um paciente com nefrite, no programa de hemodiálise teve o fenótipo de Staphylococcus aureus com resistência intermediária à vancomicina (VISA) (CIM= 8 mig/mL) e em oito pacientes as amostras apresentaram heterorresistência (hVISA). Além do uso prévio de vancomicina outros fatores de risco incluindo três ou mais antimicrobianos, cirurgia e três ou mais procedimentos invasivos, foram observados. A análise molecular foi realizada por amplificação randômica de DNA polimórfico em reação em cadeia da polimerase (RAPD-PCR) mostrando dois clusters com duas amostras cada um, em pacientes cirúrgicos, com relação temporal espacial e com perfil de susceptibilidade semelhantes quando frente à vários outros antimicrobianos.

    Abstract in English:

    Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci (MRCoNS) are among the most frequent causes of hospital infections worldwide, thus justifying the increasing use of vancomycin. In this study, we evaluated the presence of glycopeptide-resistant staphylococci, in 41 patients hospitalized in the Clinical Hospital of the Federal University of Uberlândia in Uberlândia, MG, who were being treated with vancomycin. All isolates were plated on Mueller-Hinton agar containing vancomycin. Vancomycin resistance was confirmed by surface growth after incubation for 24-48 h at 35ºC. Heteroresistance was evaluated by plating with a large inoculum (10(8) CFU/mL). One patient with nephritis who was on a hemodialysis program was diagnosed with the phenotype isolate of vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus (VISA) (CIM = 8 mug/mL) and in eight patients, strains of heteroresistant Staphylococcus corresponding to the hVISA phenotype were isolated. In addition to the extended use of vancomycin, other risk factors associated with the presence of these microorganisms included the use of three or more antimicrobial agents, surgery, and three or more invasive procedures. Molecular analysis by randon amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction (RAPD-PCR) showed two clusters involving two samples each one of them, in surgical patients, with temporal and spatial relationship and isolates similarity concerning the susceptibility range to antimicrobial agents.
  • Characterization of Mycoplasma penetrans and Mycoplasma fermentans immunodominant proteins Medical Microbiology

    Bruder, Juliana; Godry, Renata Cristina; Takei, Kioko; Cunha, Regina Ayr Florio da

    Abstract in Portuguese:

    Micoplasmas são procariotos diminutos, desprovidos de parede celular e envoltos por uma membrana lipoproteica cujo pequeno genoma sintetiza a maioria das moléculas necessárias para crescimento e replicação. Dentre as dezesseis espécies isoladas do homem, Mycoplasma pneumoniae, agente causador da pneumonia atípica primária, e as espécies do trato urogenital como Mycoplasma hominis,Ureaplasma urealyticum e Ureaplasma parvum têm definido seu papel patogênico. M. penetrans e M. fermentans, espécies associadas ao HIV, têm sido investigadas principalmente em laboratórios de pesquisa. Considerando a importância dos micoplasmas nas doenças humanas e a peculiar variação antigênica observada em tais espécies, foram caracterizadas, neste estudo, as lipoproteínas associadas a membranas (LAMP) de Mycoplasma penetrans e Mycoplasma fermentans. Para definir peptídeos com possível valor diagnóstico, empregamos as técnicas de ELISA e de Western blot usando soros de gestantes cujas amostras cervicais foram positivas por PCR. Por meio do ELISA foram observados anticorpos IgG anti-LAMP-M. fermentans em 57,5% e IgM em 74,5% das amostras. As três amostras PCR positivas para M. penetrans apresentaram anticorpos IgG anti-LAMP-M. penetrans e uma amostra positiva para IgM. IgA não foi detectada em nenhuma das espécies. A análise da LAMP, por Western blot, revelou como principais proteinas imunoreativas: 35, 38, 42, 61 and 103 kDa para M. penetrans e 29, 38, 41, 61, 78 and 95 kDa de M. fermentans. Dentre estas podemos considerar p35 específica para M. penetrans e p29, M. fermentans.Tais proteinas são promissoras como marcadores em diagnóstico.

    Abstract in English:

    Mycoplasmas are a heterogeneous group of the smallest organisms capable of self replication and are known to cause many detrimental diseases in both animals and humans. These wall-less prokaryotes are enveloped by a lipoprotein membrane and their small genomes are sufficient to synthesize molecules required for growth and self-replication. Among sixteen species isolated from humans, Mycoplasma pneumoniae, an agent of primary atypical pneumonia, and the urogenital tract species Mycoplasma hominis,Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum have been confirmed to be pathogenic. Mycoplasma penetrans and Mycoplasma fermentans, which are species associated with HIV, have been investigated mainly in research laboratories. In this study we have characterized lipid-associated membrane proteins (LAMP) of Mycoplasma penetrans and Mycoplasma fermentans, in view of the importance of mycoplasmas in human diseases and the peculiar antigenic variation observed in these species. To characterize proteins with possible diagnostic value, we used ELISA and Western blot in sera of pregnant women whose cervical samples were positive for these species of mycoplasmas when tested by PCR. ELISA showed IgG anti-LAMP-M. fermentans antibodies to be present in 57.5% of cases and IgM antibodies to be present in 74.5% of cases. The three samples that were PCR positive for M. penetrans showed IgG anti-LAMP-M. penetrans antibodies, and one sample was positive for IgM. No IgA antibodies against either species were detected in any of the samples. LAMP analysis by Western blot revealed the 35, 38, 42, 61 and 103 kDa proteins of M. penetrans and the 29, 38, 41, 61, 78 and 95 kDa proteins of M. fermentans. Among these, will be considered p35 to M. penetrans and 29 kDa protein to M. fermentans, the main immunoreactive proteins and therefore useful markers for further laboratory diagnosis.
  • Production and use of mutanase from Trichoderma harzianum for effective degradation of streptococcal mutans Medical Microbiology

    Wiater, Adrian; Szczodrak, Janusz; Pleszczynska, Malgorzata; Próchniak, Katarzyna

    Abstract in Portuguese:

    Os parâmetros básicos que afetam a produção da mutanase por Trichoderma harzianum F-340 em frascos agitados e em fermentadores foram estabelecidos. O melhor meio para produção da enzima foi o meio Mandels com pH inicial de 5,3, suplementado com 0,3% de mutana e 0,05% de peptona e inoculado com 20% de um micélio de 72h. Demonstrou-se que a massa micelial, usada como única fonte de carbono no meio de cultura, induziu a síntese de mutanase, podendo ser empregada como um substituto barato e de fácil obtenção de mutana bacteriana. Empregando-se condições otimizadas de cultura, foi possível obter um alto rendimento de produção de mutanase (0,6-0,7 U/mL, 2,0-2,5 U/mg de proteína) em pouco tempo (3-5 dias), ultrapassando os melhores resultados relatados na literatura. A enzima bruta foi estável em pH de 4,5 até 6,0 e em temperatura até 40ºC. A atividade máxima foi obtida a 45ºC e pH 5,5. A mutanase obtida deste fungo foi bastante estável durante a seu armazenamento e apresentou um levado potencial hidrolítico sobre as ligações mistas (alfa-1,3, alfa-1,6) da mutana estreptocócica insolúvel em água (a taxa de hidrólise em 24 horas foi 69%). Os produtos resultantes da reação enzimática durante a hidrólise indicaram que a mutanase possuía uma ação tipo exo sobre a mutana. A análise cromatográfica em camada delgada mostrou que o principal produto resultante da ação da mutanase sobre a mutana era glicose. O potencial de aplicação de mutanase na estomatologia é discutido.

    Abstract in English:

    Basic cultural parameters affecting mutanase production by Trichoderma harzianum F-340 in shaken flasks and aerated fermenter cultures have been standardized. The best medium for enzyme production was Mandels medium A with initial pH 5.3, supplemented with 0.3% mutan and 0.05% peptone and inoculated with 20% of the 72-h mycelium as inoculum. It was shown that mycelial mass, used in the culture medium as a sole carbon source, induced mutanase synthesis and could be utilized as an inexpensive and easily available substitute for bacterial mutan. Application of optimized medium and cultural conditions enabled us to obtain a high mutanase yield (0.6-0.7 U/mL, 2.0-2.5 U/mg protein) in a short period of time (3-5 days), which was much higher than the best reported in literature. The enzyme in crude state was stable in the pH range of 4.5-6.0, and at temperatures of up to 40ºC; its maximum activity was recorded at 45ºC and at pH 5.5. The mutanase preparation obtained from the T. harzianum fungus was relatively stable under storage conditions, and showed a high hydrolytic potential in reaction with a mixed-linkage (alpha-1,3, alpha-1,6) water-insoluble mutan of streptococcal origin (hydrolysis yield reached a value of 69% in 24 h). Steady-state measurement of the enzymic reaction products during the hydrolysis revealed that mutanase exhibited an exo type of action on mutan. Thin-layer chromatographic analysis showed that glucose was the primary final product of mutan hydrolysis with mutanase. The potential application of mutanase in dentistry is discussed.
  • Evaluation of three enrichment broths and five plating media for Salmonella detection in poultry Food Microbiology

    Rall, Vera Lúcia Mores; Rall, Ricardo; Aragon, Lina Casale; Silva, Márcia Guimarães da

    Abstract in Portuguese:

    A eficiência dos caldos selenito cistina (SC), tetrationato verde brilhante (TBG) e Rappaport Vassiliadis (RV) foi avaliada quanto ao isolamento de Salmonella. Também foram testados três meios clássicos de isolamento, ágar Salmonella-Shigella (SS), ágar Verde Brilhante (VB) e ágar xilose lisina desoxicolato (XLD) e dois meios cromogênicos, Rambach (RA) e CHROMagar (CAS). Entre 100 carcaças de frango examinadas, 29 foram positivas para Salmonella usando todos os meios combinados. Os caldos RV (69%) e TT (58,6%) foram mais eficientes que o SC (24,1%). Os meios cromogênicos mostraram melhores resultados do que os clássicos na detecção de Salmonella e apresentaram uma quantidade menor de colônias falso-positivas. O meio cromogênico mais eficiente foi o CAS, que detectou Salmonella em 23 das 29 amostras positivas (79,3%), seguido pelo RA (48%). Entre os meios clássicos, a detecção foi de 13,8% para VB, 27,6% para SS e 34,5% para XLD.

    Abstract in English:

    We evaluated the effectiveness of Selenite Cystine (SC), Tetrathionate Brilliant Green (TBG) and Rappaport Vassiliadis (RV) broths for Salmonella isolation. We also tested three classic plating media, Salmonella-Shigella Agar (SS), Brilliant Green Agar (BGA), Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLD) and two chromogenic agars, Rambach (RA) and CHROMagar Salmonella (CAS). Among 100 poultry carcasses, 29 were positive for Salmonella using all plating media combined. RV broth (69%) and TT broth (58.6%) were more effective than SC broth (24.1%). The chromogenic media gave better results than the classic ones with less false-positive colonies. The most effective isolation medium was CHROMagar, where Salmonella was identified in 23 (79.3%) of the 29 positive samples, followed by Rambach (48%). Positivity for Salmonella using classic media was 13.8% for BGA, 27.6% for SS and 34.5% for XLD.
  • Action of nisin and high pH on growth of Staphylococcus aureus and Salmonella sp. in pure culture and in the meat of land crab (Ucides cordatus) Food Microbiology

    Grisi, Teresa Cristina S. de Lima; Gorlach-Lira, Krystyna

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de inibição de nisina e o pH elevado em relação à multiplicação de Staphylococcus aureus e Salmonella sp. em culturas puras e inoculadas na carne de caranguejo-uçá. Em culturas puras, a multiplicação de S. aureus foi fortemente inibida por nisina e a de Salmonella sp. por nisina-EDTA (20 mM). A multiplicação de S. aureus foi inibida até 8h de incubação, enquanto que a de Salmonella sp. foi inibida durante todo o experimento (24h). O pH elevado (tampão NaHCO3-NaOH, pH 10 e 11) mostrou-se efetivo na inibição da multiplicação de S. aureus e Salmonella sp. Nisina e o pH elevado aplicados na carne contaminada não apresentaram o mesmo efeito. A nisina não mostrou eficiência na inibição dos patógenos quando inoculados na carne de caranguejo, enquanto que o tampão em pH 10 demonstrou inibição significante sobre a multiplicação de Salmonella sp. Estes resultados sugerem que o pH elevado apresenta um potencial como agente antibacteriano, podendo ser útil na preservação química da carne de caranguejo.

    Abstract in English:

    The aim of this study was to evaluate the potential of nisin and high pH to inhibit the growth of Staphylococcus aureus and Salmonella sp. in broth culture and when inoculated into meat of land crab. In pure cultures, the growth of S. aureus was bly inhibited by nisin and the growth of Salmonella sp. was inhibited by nisin-EDTA (20 mM). The inhibition of S. aureus lasted for eight hours and Salmonella sp. growth was inhibited throughout the experiment (24 h). The high pH (pH 10.0 and 11.0 with NaHCO3-NaOH buffer) was very effective for in vitro inhibition of S. aureus and Salmonella sp. Nisin and high pH, when applied to the contaminated meat, did not yield the same effect. Nisin was not effective in preventing growth of both pathogens in the crab meat, while pH 10.0 showed significant inhibitory effect on Salmonella sp. The results suggest that high pH has a potential as antibacterial agent, and may be useful in chemical preservation of crab meat.
  • Sources of poultry meat contamination with thermophilic Campylobacter before slaughter Food Microbiology

    Franchin, Paulo Rogério; Aidoo, Kofi E.; Batista, Cleide Rosana Vieira

    Abstract in Portuguese:

    As possíveis fontes de contaminação com Campylobacter termofílicos em carne de frango, antes do abate, foram estudadas através da análise de amostras de penas, cloaca, cama de aviário, gaiolas de transporte, água de lavagem da máquina de lavar gaiola e o suporte para peito de frango na linha de abate, imediatamente antes do atordoamento. As amostras foram coletadas em 8 aviários de 8 produtores diferentes, da região Sul do Brasil. O estudo foi realizado durante o período de um ano, onde cada aviário foi amostrado três vezes, perfazendo um total de 24 coletas nos aviários.Campylobacter foi encontrado em 79,2% das amostras de penas, seguido por cloaca (75,0%), gaiola de transporte (50,0%), cama de aviário (37,5%), suporte para peito (33,3%) e água de lavagem de gaiola (25,0%). Considerando-se a combinação dos resultados encontrados entre amostras de cloaca, penas e cama de aviário, 21 (87,5%) dos 24 lotes de frango a serem abatidos apresentaram Campylobacter termofílico pelo menos em uma dessas amostras. Campylobacter termofílico foi encontrado em 22 dos 24 lotes de aves destinados ao abate, o que significa 91,7% dos lotes contaminados.

    Abstract in English:

    The possible sources of Campylobacter spp. in poultry meat before slaughter were studied by examining samples of feathers, cloaca swabs, litter swabs, transport coops, rinse water from coop washing equipment, and chicken breast supports in the slaughter line just before stunning. The samples were collected from 8 broiler houses and from 8 different producers, from a poultry integration system in southern Brazil. The study was carried out over a 12-month period, and each broiler house was sampled in three consecutive flocks, for a total of 24 flocks/broiler house. Campylobacter was found in 79.2% of the feather samples, followed by cloacal swabs (75.0%) and transport coop (50.0%), litter (37.5%), breast support (33.3%) and coop rinse water (25.0%) samples. Considering the combined results of cloacal, feather and litter samples, 21 (87.5%) of the 24 chicken batches contained thermophilic Campylobacter in at least one of these samples prior to slaughter. Thermophilic Campylobacter were found in 22 of 24 chicken batches destined to slaughter, corresponding to 91.7% contaminated batches.
  • Production and caracterization of monoclonal antibodies for the detection of Salmonella enterica in chicken meat Food Microbiology

    Schneid, Andréa dos Santos; Lüdtke, Charli Beatriz; Diel, Cristiane; Aleixo, José AntonioGuimarães

    Abstract in Portuguese:

    Foi obtido um painel de 13 anticorpos monoclonais que reagem com proteínas de membrana externa de Salmonella Enteritidis. Dois MAbs foram classificados como IgM, 6 foram do isotipo IgG2a, três foram do isotipo IgG3 e um do isotipo IgG2b. A reatividade dos anticorpos monoclonais (MAbs) com diferentes sorovares de Salmonella e outras bactérias foi investigada através de um ELISA indireto. Cinco MAbs reagiram apenas com Salmonella Enteritidis. Dois MAbs apresentaram reação cruzada com antígenos termoextraídos de Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii e Enterobacter aerogenes. O MAb 424H apresentou amplo espectro de reatividade, detectando antígenos de Salmonella pertencentes aos sorogrupos B, C, D, E, e G. O limite de detecção de diferentes sorovares de Salmonella em um ELISA indireto com o MAb 424H variou de 1,0 x 10(4) UFC/mL para Salmonella London a 1,4 x 10(6) UFC/mL para Salmonella Gallinarum e Salmonella Typhimurium. A avaliação do desempenho do ELISA indireto com o MAb 424H na detecção de diferentes sorovares de Salmonella em amostras de carne de frango, mostrou ser possível detectar todos os sorovares após o enriquecimento das amostras, nos três níveis de contaminação utilizados. A análise de alíquotas de amostras de carne de frango não contaminadas artificialmente, feita em paralelo, foi negativa para Salmonella tanto no método convencional quanto no ELISA.

    Abstract in English:

    A panel of 13 monoclonal antibodies (MAbs) that react against outer membrane proteins of Salmonella Enteritidis was obtained. Two MAbs were classified as IgM, six were IgG2a, three were IgG3 and one was of the IgG2b isotype. The reactivity of the MAbs against different serovars of Salmonella enterica and other bacteria was investigated using an indirect ELISA. Five MAbs reacted only against Salmonella Enteritidis. Two MAbs presented crossed reactions with thermo-extracted antigens of Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii and Enterobacter aerogenes. MAb 424H presented wide spectrum of reactivity, detecting antigens of Salmonella belonging to serogroups B, C, D, E and G. The detection limit of different serovars of Salmonella in a indirect ELISA with MAb 424H varied from 1.0 x 10(4) CFU/mL for Salmonella London to 1.4 x 10(6) CFU/mL for Salmonella Gallinarum and Salmonella Typhimurium. Evaluation of the performance of the ELISA with MAb 424H in the detection of Salmonella in samples of chicken meat artificially contaminated revealed that the ELISA was able to detect all serovars after sample enrichment using two levels of contamination. Samples of chicken meat not artificially contaminated analysed in parallel were negative for Salmonella in both the conventional and the ELISA methods.
  • Production of ß-Glucosidase by Penicillium purpurogenum Biotechnology

    Dhake, A.B.; Patil, M.B.

    Abstract in Portuguese:

    Verificou-se que Penicillium purpurogenum foi capaz de produzir ß-glucosidase intracelular, com atividade máxima sobre a sacarose. Vários parâmetros culturais para produção da enzima foram otimizados. Verificou-se que a produção máxima da enzima ocorria após 96 h de cultivo a 30º;C. A adição dos amino-ácidos histidina e cisteína induziram a síntese da enzima até certo ponto. A temperatura e pH ótimos para atividade da enzima foram 50º;C e 5,5, respectivamente. A ß-glucosidase de Penicillium purpurogenum foi estável em pH 2,0, o que torna a enzima ideal para uso na indústria de sucos de frutas e vinhos.

    Abstract in English:

    The fungus Penicillium purpurogenum was found to produce intracellular ß-glucosidase. Maximum activity of ß-glucosidase was observed on sucrose. Various cultural parameters of cultivation of P. purpurogenum for production of ß-glucosidase were optimized. Maximum enzyme content was observed after 96 hours of cultivation at 30º;C. Addition of amino acids histidine and cysteine induced ß-glucosidase synthesis to certain extent. The optimum temperature and pH for ß-glucosidase activity was 50º;C and 5.5 respectively. ß-glucosidase of P.purpurogenum shows stability at pH 2 thus it could be an ideal enzyme for debittering in fruit juice and wine industries.
  • Partial characterization of ribosomal operons of Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 Biotechnology

    Magalhães, Juliana Teixeira de; Floresta, Fernanda; Moraes, Célia Alencar de

    Abstract in Portuguese:

    Operons ribossomais têm sido instrumentos importantes na caracterização de comunidades microbianas e no estudo de relacionamentos entre microrganismos, principalmente em bactérias do ácido láctico. Operons ribossomais da linhagem probiótica, Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20, foram parcialmente caracterizados. Um banco genômico da linhagem foi construído e os clones, contendo parte do operon ribossomal, foram subclonados pelo método de "shot gun", para em seguida serem seqüenciados com primer "forward". As seqüências indicaram a presença da extremidade 3' do rDNA 16S seguida da região espaçadora curta 1 (16S-23S) e a presença da extremidade 3' do rDNA 23S seguido da região espaçadora 2 (23S-5S), que por sua vez precedia o rDNA 5S. Adjacente ao gene rDNA 5S deste operon rrn uma região codificadora de 6 tRNAs foi detectada.

    Abstract in English:

    Ribosomal operons are great tools for microbe community characterization and for microorganisms relationship study, particularly in the case of the acid lactic bacteria. The ribosomal operon of the probiotic strain Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 was partially characterized. A genomic library of this strain was constructed and the clones with partial ribosomal operon were sub-cloned using the shot-gun method for subsequent sequencing with the forward primer. The sequence analysis revealed that the 3' end of the rDNA 16S was following by the short spacer region 1 (16S-23S) and that the 3' end of the rDNA 23S was following by the short spacer region 2 (23S-5S), which preceded the rDNA 5S. In the flanking region of the rDNA 5S gene of this operon rrn, a region encoding six tRNAs was detected.
  • Development of a transformation system for Penicillium brevicompactum based on the Fusarium oxysporum nitrate reductase gene Basic Microbiology

    Varavallo, Maurílio Antônio; Queiroz, Marisa Vieira de; Pereira, Jorge Fernando; Ribeiro, Ronney Adriano; Soares, Marcos Antônio; Ribeiro, João Batista; Araújo, Elza Fernandes de

    Abstract in Portuguese:

    Penicillium brevicompactum é um fungo filamentoso que apresenta um potencial para a aplicação industrial devido a sua eficiente produção de enzimas do complexo pectinolítico. Neste trabalho foi desenvolvido um sistema de transformação heterólogo para P. brevicompactum baseado na complementação de um mutante nitrato redutase. Mutantes nitrato redutase foram obtidos pela resistência ao clorato de sódio em uma taxa de 23,24%. O mutante denominado 4457-18X foi escolhido para os experimentos de transformação com o vetor pNH24, que contém o gene da nitrato redutase de Fusarium oxysporum. Uma freqüência de cerca de 3 transformantes/mg de DNA foi obtida utilizando-se o vetor pNH24 na forma circular e um aumento de cerca de 10 vezes nessa freqüência foi alcançado com a utilização desse vetor linearizado com a enzima de restrição Xba I. A análise dos transformantes pela técnica de hibridização revelou uma tendência do vetor linearizado diminuir o número de integrações em relação ao vetor circular. A integração foi aleatória e estável nos transformantes analisados. O estabelecimento de um sistema de transformação para P. brevicompactum é essencial para a manipulação genética desse microrganismo.

    Abstract in English:

    Penicillium brevicompactum is a filamentous fungus that presents a potential for industrial use due its efficient pectinase production. A heterologous transformation system was developed for P. brevicompactum based on the complementation of a nitrate reductase mutant. Nitrate reductase mutants were obtained by resistance to chlorate in a rate of 23.24% when compared to other mutations that lead to the chlorate resistance. One mutant named 4457-18X was chosen for the transformation experiments with the pNH24 vector containing de Fusarium oxysporum nitrate reductase gene. A frequency of approximately 3 transformants/µg DNA was obtained using the circular vector pNH24. This frequency was multiplied about 10 fold using the linearized vector with the Xba I restriction enzyme. Southern analysis of the transformants showed a tendency of the linearized vector to diminish the number of integrations compared to the use of the circular vector. The integration was random and stable in the analyzed transformants. The establishment of a transformation system for P. brevicompactum is fundamental for genetic manipulation of this microorganism.
  • Effect of benzene compounds from plants on the growth and hyphal morphology in Neurospora crassa Basic Microbiology

    Neves, Fabrícia Mendonça; Kawano, Cristina Yoshiko; Said, Suraia

    Abstract in Portuguese:

    Os efeitos de compostos benzênicos de plantas, respectivamente ácido cinâmico, ácido coumárico, ácido ferúlico, ácido cafeico e aldeído cinâmico, sobre o crescimento da colônia e a morfologia das hifas de Neurospora crassa foram investigados. Ácido cinâmico, ácido ferúlico e aldeído cinâmico inibiram o crescimento colonial, mas não produziram diferenças visíveis sobre as hifas. Ácido cafeico e ácido coumárico não inibiram o crescimento, mas alteraram a morfologia das hifas. Os resultados sugerem que os ácidos cafeico e coumárico afetam provavelmente a manutenção da polaridade (a contínua deposição de material da parede na ponta em extensão), enquanto aldeído cinâmico e os ácidos cinâmicos e ferúlico diminuem a velocidade de crescimento, mas não alteram a polaridade das hifas. Actina no citoesqueleto e no Spitzenkörper apareceu difuso e não estava claramente visível na presença de um dos compostos benzênicos na cultura.

    Abstract in English:

    The effects of the benzene compounds from plants, respectively cinnamic acid, coumaric acid, ferulic acid, caffeic acid, and cinnamic aldehyde on growth and hyphal morphology of Neurospora crassa, were investigated. Cinnamic acid, ferulic acid and cinnamic aldehyde inhibited colony growth, but produced no visible alterations on hyphae. Caffeic acid and coumaric acid did not inhibit growth, but changed hyphal morphology. The results suggest that caffeic and coumaric acids probably affect polarity maintenance (the continued deposition of wall material at the extending tip), while cinnamic aldehyde, ferulic and cinnamic acids decrease growth rate, but did not change hyphal polarity. The actin cytoskeleton and the Spitzenkörper appeared diffuse and not clearly visible when one of the benzene compounds was present in the culture.
  • Histopathology of Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera; Noctuidae) treated with Nucleopolyhedrovirus and Bacillus thuringiensis serovar kurstaki Environmental And Soil Microbiology

    Knaak, Neiva; Fiuza, Lidia Mariana

    Abstract in Portuguese:

    A Anticarsia gemmatalis é responsável pelo uso de inseticidas químicos na cultura da soja, ocasionando um significativo aumento nos custos das lavouras e um grande desequilíbrio no ecossistema. O uso de agentes microbianos, como Bacillus thuringiensis sorovar kurstaki (Btk) e Vírus de Poliedrose Nuclear de Anticarsia gemmatalis (VPNAg), é uma alternativa para o controle químico de insetos-praga. Na análise da interação de bactérias e vírus entomopatogênicos, considera-se importante o modo de ação in vitro desses agentes de controle microbiano. Assim, o presente trabalho objetiva a análise histopatológica do sistema digestivo das lagartas de A. gemmatalis, após a interação dos entomopatógenos Btk e VPNAg, representados nas formulações Dipel e Baculovirus anticarsia, respectivamente. As avaliações foram realizadas com lagartas de 2º ínstar, onde a mortalidade foi avaliada diariamente, e a histopatologia foi realizada com lagartas coletadas nos períodos de 1, 3, 6, 12 e 24 horas após a aplicação dos tratamentos. Os resultados dos ensaios in vivo, revelam que o tratamento referente à associação VPNAg/Btk (98.68% de mortalidade) foi mais eficiente que VPNAg (81.28% de mortalidade) isoladamente, porém o Btk isoladamente causou 100% de mortalidade. Os tratamentos mostraram diferenças significativas (P <0,05) entre AgNPV e Btk,AgNPV e AgNPV/Btk. As análises de patogenicidade do VPNAg e Btk em lagartas de A. gemmatalis sugerem que os produtos Dipel e Baculovirus anticarsia foram mais eficientes, quando utilizados simultaneamente, pois a ação do VPNAg foi intensificada quando utilizada em associação com Btk, provocando alterações no intestino médio das lagartas a partir de 6 horas após os tratamentos. Quando os entomopatógenos foram utilizados isoladamente, as alterações das células intestinais foram observadas apenas 12 horas após a aplicação dos tratamentos.

    Abstract in English:

    The Anticarsia gemmatalis is responsible for the use of chemical insecticides in the soybean culture, causing a significant increase in the costs of farming and a great unbalance in the ecosystem. The use of microbial agents, like Bacillus thuringiensis serovar kurstaki (Btk) and Anticarsia gemmatalis nucleopolyhedrovirus (AgNPV), they are an alternative to chemical control of the pest insects. In the interaction analysis of the entomopathogenic bacteria and virus it is considered important the in vitro action mode of these microbiology control agents. Therefore, the present study aims the histopathological analysis of the A. gemmatalis larvae digestive system after the interaction in vivo of the entomopathogenic Btk and AgNPV, represented the Dipel and Baculovirus anticarsia formulations, respectively. The evaluations were realized in larvae of 2nd instar, in which the mortality was evaluated daily, and a histopathology was done with collected larvae in time of 1, 3, 6, 12 and 24 hours after the treatments application. The results of the in vivo assays reveal that the treatment using the association of AgNPV-Btk (98.68% of mortality) was more efficient than using AgNPV isolatedly (81.28% of mortality), but the Btk when used isolatedly had a mortality of 100%. The treatments showed significant (P<0.05) differences between AgNPV and Btk,AgNPV and AgNPV/Btk. The histopathological analysis of the AgNPV and Btk in A. gemmatalis larvae suggests that the Dipel and Baculovirus anticarsia products were more efficient when they were used simultaneously, because the action of AgNPV was intensified when used in association with Btk, causing changes in the larvae midgut after 6 hours of treatments. When the entomopathogens were used isolating the gut cells alterations were observed only 12 hours after the treatments.
  • Isolation of Candida spp from vaginal microbiota of healthy canine females during estrous cycle Veterinarian Microbiology

    Cleff, Marlete Brum; Lima, Alzira Pacheco de; Faria, Renata Osório de; Meinerz, Ana Raquel Mano; Antunes, Tatiana de Ávila; Araújo, Flávia Biasoli de; Nascente, Patrícia da Silva; Nobre, Márcia de Oliveira; Meireles, Mário Carlos Araújo

    Abstract in Portuguese:

    As leveduras são organismos comensais da pele, trato genital e gastrointestinal, e de outras mucosas de mamíferos. O gênero Candida vem sendo isolado freqüentemente de animais domésticos e silvestres. O isolamento de Candida spp da mucosa vaginal de mulheres é freqüente, porém na espécie canina são escassos os estudos referentes à microbiota fúngica vaginal, especialmente do gênero candida, não se tendo conhecimento de sua relação com o ciclo reprodutivo. O presente trabalho teve como objetivo isolar leveduras do gênero Candida em fêmeas caninas hígidas e identificar as espécies isoladas, relacionando-as com as diferentes fases do ciclo estral. Foram analisadas 224 amostras obtidas da mucosa vaginal de 14 fêmeas caninas. Candida spp foi observada em 83 (37%) amostras, destas, nove (42,9%) foram obtidas no proestro, 14 (43,8%) no estro, 31 (62%) no diestro, 24 (21,1%) no anestro e cinco (71,4%) de gestantes. Nas amostras caracterizadas, C. parapsilosis foi a espécie isolada com maior freqüência (21,7%), seguida de C. guillermondii (8,4%), C. kefir (6%) e C. albicans (4,8%). Com base neste estudo pode-se concluir que Candida spp faz parte da microbiota vaginal de fêmeas caninas hígidas, e que o isolamento é influenciado pelo ciclo reprodutivo.

    Abstract in English:

    Yeasts are commensal organisms found in the skin, genital and gastrointestinal tracts, and other mucosa in mammalians. Candida spp has been frequently isolated from domestic and sylvan animals. Yeast isolation from vaginal mucus is frequent in women, especially of Candida genus. In canine females, however, studies about vaginal fungal microbiota are rare and the connection with estrous cycle is unknown. The purpose of this study was to isolate yeast 5 of Candida genus from healthy canine females and identify the isolated species, establishing their connection with estrous cycle phases. Two hundred twenty-four samples taken from vaginal mucus of 14 canine females were analyzed in this study. Candida spp was observed in 83 (37%) from these samples; nine samples were taken in proestrus, 14 in oestrus, 31 in dioestrus, 24 in anoestrus and five samples were obtained during pregnancy. Candida parapsilosis the most frequently isolated specie (21.7%), followed by C. guillermondii (8.4%), C. kefir (6%) and C. albicans (4.8%). We concluded that Candida spp is a commion component of healthy canine females' vaginal microbiota, and isolation varies according to the estrous cycle phase.
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