Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 36, Issue: 3, Published: 2005
  • Isolation of bovine coronavirus (BCoV) in monolayers of HmLu-1 cells Veterinarian Microbiology

    Jerez, José Antonio; Gregori, Fábio; Brandão, Paulo Eduardo; Rodriguez, Cesar Alejandro Rosales; Ito, Fumio Honma; Buzinaro, Maria da Glória; Sakai, Takeo

    Abstract in Portuguese:

    A partir de 20 amostras fecais de bezerros, com quadro clínico de diarréia, positivas para BCoV por hemaglutinação/inibição da hemaglutinação (HA/HI), procedeu-se o isolamento viral em monocamadas de células da linhagem HmLu-1. Até a quinta passagem seriada, 13 apresentaram efeito citopático do tipo sincicial, semelhante à amostra padrão Kakegawa de BCoV. Ao serem submetidas a uma reação de soroneutralização com gamaglobulina anti-coronavírus bovino, 8 delas foram consideradas positivas, uma vez que o efeito citopático foi neutralizado. Ao serem tituladas e submetidas à reação de soroneutralização em microplacas, apenas 3 delas puderam ser confirmadas como positivas. As células da linhagem HmLu-1 mostraram-se permissivas para o isolamento de BCoV, todavia a baixa intensidade na replicação viral demonstrou ser necessário o desenvolvimento de novas metodologias para se poder alcançar esse intuito e a confirmação do isolamento por soroneutralização.

    Abstract in English:

    Isolation of BCoV was performed in monolayers of HmLu-1 cells, using 20 fecal samples from clinical cases of diarrhea in calves. Samples were positive for BCoV by means of hemagglutination / hemagglutination inhibition (HA/HI). Up to the fifth serial passage, 13 of these isolates presented syncytial cytopathic effect, similar to Kakegawa standard strain. When isolates were submitted to seroneutralization with gammaglobulin anti-bovine coronavirus, 8 of them were considered to be positive, once cytopathic effect was neutralized. After titration and seroneutralization in microplates, only three of them were confirmed as positive. The lineage HmLu-1 showed higher permissivity to BCoV isolation, but the low intensity of viral replication demonstrated that new methodologies should be developed for this purpose and then submitted to confirmation of isolation by means of seroneutralization.
  • Prevalence and molecular analysis of Anaplasma platys in dogs in Lara, Venezuela Veterinarian Microbiology

    Huang, Haibin; Unver, Ahmet; Perez, Miriam J.; Orellana, Nelson G.; Rikihisa, Yasuko

    Abstract in Portuguese:

    Amostras de sangue coletadas de cães clinicamente sadios pertencentes ao exército da Venezuela e de seus treinadores foram analisadas pela técnica de PCR 16S rRNA específica para Anaplasma platys, A. phagocytophilum ou Ehrlichia ewingii. Dezesseis por cento (7/43) dos cães foram positivos, enquanto que todas as amostras de origem humana [25] foram negativas para A. platys. Todas as amostras, tanto de humanos quanto de caninos, foram negativas para E. ewingii ou A. phagocytophilum. Doze carrapatos da espécie Rhipicephalus sanguineus, coletados dos cães, foram negativos para A. platys pelo teste de PCR de transcrição reversa. As seqüênciasquase inteiras do gene 16S rRNA (1.364 pb) e do operon groESL (1.646 pb) de A. platys isolado de um cão foram determinadas, revelando que ambas as seqüências estão estreitamente relacionadas às seqüências de A. platys detectadas em carrapatos R. sanguineus na República Democrática do Congo.

    Abstract in English:

    Blood specimens from clinically normal military dogs and their trainers, in Lara, Venezuela were screened for Anaplasma platys, A. phagocytophilum, or Ehrlichia ewingii using 16S rRNA PCR tests. Sixteen percent (7/43) of dog specimens were positive by A. platys PCR test followed by sequencing of the PCR products, and all human blood specimens [25] were negative. All specimens from these dogs and humans were PCR negative for E. ewingii or A. phagocytophilum. Twelve Rhipicephalus sanguineus ticks removed from these dogs were negative for A. platys by reverse transcription PCR test. Almost the entire 16S rRNA gene (1,364 bp) and groESL operon (1,646 bp) sequences of A. platys isolated from a dog were determined, revealing that both sequences were closely related to the sequences of an A. platys strain detected in R. sanguineus ticks from the Democratic Republic of Congo.
  • Shigatoxigenic Escherichia coli serogroups O157, O111 and O113 in feces, water and milk samples from dairy farms Veterinarian Microbiology

    Vicente, Hinig Isa Godoy; Amaral, Luiz Augusto do; Cerqueira, Aloysio de Mello Figueiredo

    Abstract in Portuguese:

    Este trabalho teve como objetivo determinar a prevalência de Escherichia coli Shigatoxigênicas dos sorogrupos O157, O111 e O113 em bovinos leiteiros, água e leite de propriedades rurais do Município de Jaboticabal/SP. Para isso, foram colhidas 454 amostras de fezes, 54 amostras de água e 30 amostras de leite e pesquisada a presença de seqüências stx1, stx2 e eae pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Todas as amostras stx e/ eae positivas foram submetidas a uma nova reação de PCR para detecção das seqüências rfb O157, rfb O111 e rfb O113. Uma alta ocorrência (59,9%) de stx foi detectada nas fezes dos bovinos. Os coeficientes de prevalência das seqüências rfb O157, O111 e O113 nas fezes dos bovinos foram, respectivamente, 18,9%, 3,3% e 30,4%. Todas as seqüências foram encontradas com maior freqüência em bezerros e novilhas. As seqüências eae e stx2 foram as mais detectadas entre as amostras de fezes. Foram detectados 1,9% e 3,3% de seqüências stx na água e no leite, respectivamente. Nas amostras de água observou-se uma baixa prevalência de O113 e não foram detectadas O157 e O111. Nenhum dos sorogrupos pesquisados foi encontrado nas amostras de leite. STEC foram identificadas em todos os rebanhos (100%) e os sorogrupos O157, O111 e O113 foram observados em 40,0%, 50,0% e 90,0% dos rebanhos. Conclui-se que a prevalência de STEC em fezes de bovino, no Município de Jaboticabal/SP é alta, caracterizando-a como importante via de contaminação ambiental para esses microrganismos.

    Abstract in English:

    The objective of this study was to determine the prevalence of Shigatoxigenic Escherichia coli (STEC) and STEC serogroups O157, O111 and O113 in feces, water and milk sampled in dairy farms in Jaboticabal, SP, Brazil. Feces (n=454), water (n=54) and milk samples (n=30) were collected from 10 herds and assessed for the presence of the virulence genes stx1, stx2 and eae by polymerase chain reaction (PCR). All stx and eae positive samples were submitted to a second PCR reaction targeting the sequences rfb O157, rfb O111 and rfb O113. High prevalence of stx was detected (59.9%) in fecal samples, whereas the prevalence of sequences rfb O157, rfb O111 and rfb O113 was 18.9%, 3.3% and 30.4%, respectively. All sequences were detected more frequently in calves and heifers. Sequences stx2 and eae were prevalent in the fecal samples. stx sequences were detected in 1.9% and 3.3% of water and milk samples, respectively. Low prevalence of E. coli O113 was observed in water samples, whereas no E. coli O157 or E. coli O111 was detected. Furthermore, none of the serogroups were identified in milk samples. STEC was identified in all herds (100%), and serogroups O157, O111 and O113 were observed in 40%, 50% and 90% of the herds, respectively. In conclusion, the high STEC prevalence detected in dairy herds evidences that bovine feces might play an important role as a contamination source in the region of Jaboticabal, Brazil.
  • Hepatitis E virus antibodies in swine herds of Mato Grosso state, Central Brazil Veterinarian Microbiology

    Guimarães, Flávio R.; Saddi, Thelma M.; Vitral, Cláudia Lamarca; Pinto, Marcelo A.; Gaspar, Ana Maria C.; Souto, Francisco José D.

    Abstract in Portuguese:

    A infecção pelo vírus da hepatite E (VHE) ainda não foi detectada entre suínos na região central do Brasil. Com o intuito de avaliar se o VHE circula entre suínos no estado de Mato Grosso, um estudo de soroprevalência foi realizado em suínos de 17 propriedades rurais, correspondentes a 13 municípios. Os animais foram escolhidos aleatoriamente em lotes no momento da chegada para abate em dois frigoríficos entre dezembro de 2002 e fevereiro de 2003. Amostras de soro foram coletadas e testadas para a presença de anticorpos de classe IgG contra o VHE (anti-VHE) por ensaio imuno-enzimático (EIE). Este EIE foi executado utilizando-se duas proteínas recombinantes como antígenos. Uma proteína mosaico (MP-II) e outra proteína contendo a região dos aminoácidos 452 a 617 da ORF2 da cepa Burma do VHE. 211 dos 260 animais examinados eram anti-VHE reativos. A soropositividade não variou com gênero e idade, mas variou entre 15% a 100% de uma propriedade para outra. Nossos resultados apontaram que o VHE parece circular entre suínos do estado de Mato Grosso, sugerindo que o vírus encontra-se disseminado na região, como verificado em outros países ao redor do mundo.

    Abstract in English:

    There is no information about evidence of hepatitis E virus (HEV) infection in swines in Central Brazil. In order to assess if HEV circulates in swines of the State of Mato Grosso, Central Brazil, a seroprevalence study was conducted including pigs from 17 farms, corresponding to 13 counties. The animals were randomly chosen among pigs arriving to two slaughterhouses between December 2002 and February 2003. Serum samples were collected and tested for IgG antibodies against HEV (anti-HEV) by enzyme immunoassay (EIA). This EIA uses two HEV recombinant proteins as antigens, a mosaic protein (MP-II) and a protein containing region 452-617 of the ORF2 of the HEV Burma strain as coating antigens. 211 out of 260 pigs (81.2%; 95CI = 75.7%, 85.6%) were anti-HEV reactive. The seropositivity did not vary with gender or age, but ranges from 15% to 100% among the farms. Our results point out that HEV seems to circulate among pigs in Mato Grosso State, suggesting that this virus is spread over the region, as seen in other countries worldwide.
  • Production of glucosyltransferase by Erwinia sp. using experimental design and response surface methodology Industrial Microbiology

    Kawaguti, Haroldo Yukio; Manrich, Eiric; Fleuri, Luciana Francisco; Sato, Hélia Harumi

    Abstract in Portuguese:

    A glicosiltransferase obtida pela linhagem Erwinia sp. é uma enzima intracelular que catalisa a conversão de sacarose em isomaltulose. A isomaltulose é um dissacarídeo redutor, não cariogênico e comercialmente utilizado em alimentos como substituto da sacarose. A metodologia de superfície de resposta e planejamento fatorial composto central-2³ foram utilizados para otimizar o meio de cultivo para a produção de glicosiltransferase de Erwinia sp. em frascos sob agitação a 200 rpm e 30ºC. As três variáveis independentes envolvidas no estudo foram o melaço de cana de açúcar, a água de maceração de milho e o extrato de levedura Prodex Lac SD. As análises estatísticas dos resultados mostraram que, dentro da faixa estudada das concentrações dos componentes de meio de cultivo, todas as variáveis apresentaram efeito significativo na produção de glicosiltransferase. O meio de cultivo otimizado foi composto de 100 gL-1 de melaço de cana de açúcar, 60 gL-1 de água de maceração de milho e 8 gL-1 de extrato de levedura Prodex Lac SD, apresentando atividade de glicosiltransferase de 6.65 U mL-1.

    Abstract in English:

    Glucosyltransferase produced by strain Erwinia sp. is an intracellular enzyme that catalyzes the formation of isomaltulose from sucrose. Isomaltulose is a non-cariogenic reducing dissacharide commercially used in foods. Response surface methodology and 2³-factorial central composite design were employed to optimize a fermentation medium for the production of glucosyltransferase by Erwinia sp. in shaken flasks at 200 rpm and 30ºC. The three variables involved in this study were sugar cane molasses (SCM), corn steep liquor (CSL) and yeast extract Prodex Lac SD (YEP). The statistical analysis of the results showed that, in the range studied, all the factors had a significant effect on glucosyltransferase production and the optimum medium composition for enzyme production was (in g l-1) SCM-100, CSL-60 and YEP-8, which lead to a glucosyltransferase activity of 6.65 U mL-1.
  • Production of xylanase and CMCase on solid state fermentation in different residues by Thermoascus aurantiacus miehe Industrial Microbiology

    Silva, Roberto da; Lago, Ellen S.; Merheb, Carolina W.; Macchione, Mariana M.; Park, Yong Kun; Gomes, Eleni

    Abstract in Portuguese:

    O emprego de residuos como matéria prima é importante como estrategia governamental e para o balanço ambiental. O propósito deste trabalho foi estudar a produção de CMCase e xilanase de uma linhagem de Thermoascus aurantiacus isolado de solo brasileiro em fermentação em estado sólido (SSF) usando diferentes resíduos agrícolas (farelo de trigo, bagaço de cana, bagaço de laranja, sabugo de milho, grama verde, grama seca, serragem de eucalipto e palha de milho) como substratos sem enriquecimento dos meios e caracterizar as enzimas. O estudo das enzimas hemiceluloliticas extracelulares mostrou que o fungo T. arantiacus é mais xilanolítico do que celulolítico. Ele produziu maiores níveis das enzimas em meios contendo sabugo de milho, grama e palha de milho. Todas as enzimas foram estáveis por 24 h à temperatura ambiente numa ampla faixa de pH (3,0 - 9,0) e também foram estáveis a 60ºC por 1 h. O pH ótimo e temperatura ótima para xilanase e CMCase foram 5,0- 5,5 e 5,0 e 75ºC, respectivamente. O microrganismo cresceu muito bem estacionariamente no meio simples, de baixo custo. As enzimas estáveis secretadas extracelularmente apresentam as características necessárias para sua aplicação industrial.

    Abstract in English:

    The use of waste as raw material is important for government economy and natural balance. The purpose of this work was to study the production of CMCase and xylanase by a Brazilian strain of Thermoascus aurantiacus in solid state fermentation (SSF) using different agricultural residues (wheat bran, sugarcane bagasse, orange bagasse, corncob, green grass, dried grass, sawdust and corn straw) as substrates without enrichment of the medium and characterize the crude enzymes.The study of the extracellular cellulolytic and hemicellulolytic enzymes showed that T. arantiacus is more xylanolytic than cellulolytic. The highest levels of enzymes were produced in corncob, grasses and corn straw. All the enzymes were stable at room temperature by 24 h over a broad pH range (3.0-9.0) and also were stable at 60ºC for 1 h. The optimum pH and temperature for xylanase and CMCase were 5.0-5.5 and 5.0 and 75ºC, respectively. The microorganism grew quickly in stationary, simple and low cost medium. The secreted extracellular enzymes presented properties that match with those frequently required in industrial environment.
  • Screening of filamentous fungi for production of myrosinase Industrial Microbiology

    Rakariyatham, Nuansri; Butrindr, Bordin; Niamsup, Hataichanoke; Shank, Lalida

    Abstract in Portuguese:

    A linhagem Aspergillus sp. NR46FB, isolada de solo através da técnica do ágar sulfato de bário-sinigrina, foi testada quanto à produção de mirosinase. O fungo degradou completamente o glicosinolato e produziu 3,19 U.mL-1 de mirosinase, após 48 h de cultivo. Devido à alta produção de mirosinase, esse novo isolado é um potente candidato para aplicações industriais.

    Abstract in English:

    Aspergillus sp. NR46F13, isolated from soil via sinigrin-barium sulphate agar technique, was tested for myrosinase production. The fungus degraded glucosinate and produced 3.19 U mL-1 of myrosinase after 48h cultivation. due to the high myrosinase production, this new isolate is a potential candidate for industrial applications.
  • Ligninolytic enzymes production and Remazol brilliant blue R decolorization by tropical brazilian basidiomycetes fungi Industrial Microbiology

    Machado, Kátia M. G.; Matheus, Dácio R.; Bononi, Vera L. R.

    Abstract in Portuguese:

    O corante azul brilhante Remazol R (RBBR) foi usado como substrato para avaliar 125 fungos basidiomicetos isolados de ecossistemas tropicais brasileiros quanto a atividade ligninolítica. A descoloração do RBBR por extratos obtidos do crescimento de fungos em meio sólido e em solo contaminado com organoclorados foi também avaliada. Cento e seis fungos descoloriram o RBBR durante o crescimento em meio sólido (agar extrato malte); noventa e seis desses fungos mostraram crescimento micelial e descoloração superiores a uma cepa de Phanerochaete chrysosporium usada como referência. Trinta e cinco fungos foram crescidos em meio sólido contendo bagaço de cana-de-açúcar (BGS) e seus extratos foram avaliados quanto a descoloração do RBBR e a produção de atividade de peroxidases. Todos os fungos mostraram atividade de peroxidases, mas 5 foram incapazes de descolorir o RBBR. Diferentes padrões de enzimas lignolíticas foram detectados em 12 desses extratos fúngicos, porém todos mostraram atividade de laccase. Atividade de peroxidase dependente de manganês (MnP) foi produzida por Melanoporia nigra, Peniophora cinerea, Psilocybe castanella, três cepas de Trametes villosa, T. versicolor e Trichaptum byssogenum. Trogia buccinalis apresentou a maior descoloração do RBBR e não produziu MnP. Descoloração do RBBR sem produção de MnP foi também observada para as três cepas de Lentinus testadas. Altos níveis de atividades de peroxidases e laccases não mostraram relação com significativa descoloração do RBBR. Foi observada descoloração do RBBR por extratos obtidos de P. castanella, L. crinitus, P. cinerea e duas cepas de T. Villosa durante crescimento em solos contaminados com pentaclorofenol e hexaclorobenzeno. Estes fungos mostraram maior descoloração de RBBR na presença de compostos organoclorados do que em solos não contaminados.

    Abstract in English:

    Remazol Brilliant Blue R (RBBR) dye was used as substrate to evaluate ligninolytic activity in 125 basidiomycetous fungi isolated from tropical ecosystems. The extracellular RBBR decolorizing activity produced when selected fungi were grown in solid media and in soil contaminated with organochlorines was also evaluated. A total of 106 fungi decolorized the RBBR during the growth in malt extract agar (MEA, 2%); 96 fungi showed a mycelia growth and decolorization activity stronger than the P. chrysosporium used as reference. Extracellular extracts of 35 selected fungi grown on solid medium with sugar cane bagasse (BGS) were evaluated for RBBR decolorization and peroxidase activity. All fungi showed peroxidase activities, but 5 of those were unable to decolorize the RBBR. Different patterns of ligninolytic enzymes were detected in 12 fungi extracts. Mn-dependent peroxidase (MnP) was produced by Peniophora cinerea, Psilocybe castanella, three strains of Trametes villosa, T. versicolor, Melanoporia nigra and Trichaptum byssogenum. All 12 fungi had laccase activity. Trogia buccinalis showed the highest RBBR decolorization and did not produce MnP activity. RBBR decolorization without MnP production was also observed for three strains of Lentinum tested. Higher levels of peroxidase and laccase cannot be related to high RBBR decolorization. RBBR decolorization by extracellular extract was also detected during the growth of P. castanella, L. crinitus, P. cinerea and two strains of T. Villosa in pentachlorophenol- and hexachlorobenzene-contaminated soils. These fungi showed higher RBBR decolorization when grown in the presence of organochlorine compounds than when in non contaminated soil.
  • Bacterial diversity in rice-field water in Rio Grande do Sul Environmental And Soil Microbiology

    Reche, Maria Helena Lima Ribeiro; Fiuza, Lídia Mariana

    Abstract in Portuguese:

    As bactérias são as mais diversas formas de vida na terra e somente uma fração dessas espécies têm sido identificadas. Esse trabalho objetivou a análise da diversidade de bactérias mesófilas, heterotróficas presentes em amostras de água de irrigação de lavouras de arroz do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. As amostras foram coletadas em cinco regiões produtoras de arroz, sendo em seguida o isolamento, a multiplicação e a caracterização bacteriana. A identificação das espécies foi baseada em testes bioquímicos (Sistema API, bioMérieux). A diversidade bacteriana foi determinada pelo índice de Shannon & Weaner e Pielou. Os resultados obtidos quanto a diversidade de bactérias revelaram 26 espécies. Representantes dos gêneros Bacillus, Corynebacterium, Staphylococcus e Lactobacillus foram os mais abundantes com uma distribuição homogênea em todas as regiões orizícolas estudadas, assim como nas áreas correspondentes ao canal de irrigação e a parcela de cultivo do arroz. A água do canal de irrigação apresentou maior diversidade (H'= 1,00) quando comparada à parcela (H' = 0,77). O canal também apresentou uma distribuição mais uniforme das espécies (e = 0,73) enquanto a parcela (e = 0,59) teve a maior dominância que foi representada pelo gênero Bacillus. As regiões e as fases da cultura não influenciaram significativamente à diversidade bacteriana nas áreas de estudo (F4,12=1,04; P>0,05). Os resultados revelam que o manejo da cultura pode influenciar nas populações bacterianas da água.

    Abstract in English:

    Bacteria are the most diverse living beings on earth and only a fraction of them have been identified. This paper aims at the analysis of the diversity of mesophilic and heterotrophic bacteria found in samples of irrigation water from rice-fields areas in Rio Grande do Sul State, Brazil. Sample collection was carried out in five rice crop regions areas and followed by isolation, multiplication and bacterial characterization. The species' identification was based on biochemical tests (API-System, bioMérieux). Bacterial diversity was determined by the Shannon & Weaner and Pielou index. The results regarding bacterial diversity revealed 26 species. The most abundant representatives belonged to the Bacillus, Corynebacterium, Staphylococcus and Lactobacillus genera, homogeneously distributed in all studied rice crop areas, and in those areas corresponding to the irrigation channel and the rice growing plot as well. The water of the irrigation channel showed the greatest diversity (H'= 1.00) when compared to the plot (H'= 0.77). The channel also presented a more even species distribution (e = 0.73), while the plot (e = 0.59) had the greatest prevalence represented by the Bacillus genus. The areas and the cultivation phases did not significantly affect the bacterial diversity in the study areas (F4,12=1.04; P>0.05). The results showed that culture management could affect water bacterial populations.
  • Benzene, toluene and xylene biodegradation by Pseudomonas putida CCMI 852 Environmental And Soil Microbiology

    Otenio, Marcelo Henrique; Silva, Maria Teresa Lopes da; Marques, Maria Luiza Oliveira; Roseiro, José Carlos; Bidoia, Ederio Dino

    Abstract in Portuguese:

    Meio mineral líquido contendo benzeno (B) ou tolueno (T) ou xileno (X) a 100 mg L-1 e suas misturas de BT, BX e TX (50 + 50 mg L-1 cada mistura) e BTX (33,3 + 33,3 + 33,3 mg L-1 cada mistura) foram utilizados para avaliar a atividade de degradação de B, T e X por Pseudomonas putida CCMI 852 contendo um plasmídeo TOL. Após 18 a 24 horas de homogenização da mistura, o inoculo foi adicionado e o decréscimo da concentração dos solventes foi determinado entre 24 e 25 horas por GC. Pseudomonas putida CCMI 852 foi capaz de metabolizar T e X, mas não B. Na mistura BTX, B não foi metabolizado também e a velocidade de degradação de T e X decresceu cerca de 50% comparado com soluções contendo apenas T ou X.

    Abstract in English:

    A minimal liquid medium containing benzene (B), toluene (T) and xylene (X) and mixtures thereof, was used to evaluate degradation activity of Pseudomonas putida CCMI 852 containing a TOL plasmid. Experiments were developed with B, T and X (100 mg L-1), with mixtures of BT, BX, and TX (50 + 50 mg L-1 each) and BTX (33.3 + 33.3 + 33.3 mg L-1 each), added to 500 mL of medium. After 18 to 24 hours, the inoculum was added and solvent disappearance was determined after 24 to 25 hours by GC. Results showed that P. putida CCMI 852 was able to metabolize T and X, but B was not metabolized. In a BTX mixture, B was not metabolized and T and X degradation rate decreased 50%.
  • Seasonal dynamics of arbuscular mycorrhizal fungi in plants of Theobroma grandiflorum Schum and Paullinia cupana Mart. of aN agroforestry system in Central Amazonia, Amazonas State, Brazil Environmental And Soil Microbiology

    Oliveira, Arlem Nascimento de; Oliveira, Luiz Antonio de

    Abstract in Portuguese:

    A dinâmica sazonal de fungos micorrízicos arbusculares (FMA) foi investigada na rizosfera de duas espécies frutíferas em um ecossistema de terra firme na Amazônia Central. Adotou-se o delineamento inteiramente casualizado, em arranjo fatorial 2 x 9, onde os fatores representaram duas espécies frutíferas (Theobroma grandiflorum e Paullinia cupana) e nove meses de coleta (agosto, setembro e dezembro/1998, fevereiro, abril, maio e dezembro/1999, fevereiro e maio/2000), com cinco repetições. O percentual de colonização micorrízica para as duas espécies atingiu valores máximos nos meses de fevereiro e maio de 2000 (estação chuvosa). Similarmente, nos meses de abril e maio de 1999, fevereiro e maio de 2000 (estação chuvosa) foram registrados os maiores números de esporos de FMA para ambas espécies. A precipitação pluvial foi significativamente e positivamente correlacionada com o número de esporos para as duas espécies, e significativamente correlacionada apenas com a colonização micorrízica de P. cupana. O teor de umidade do solo foi positivamente correlacionado com o número de esporos e colonização por FMA para ambas espécies. A colonização micorrízica e o número de esporos de FMA foram positivamente correlacionados com os teores de Mg e K no solo. O número de esporos foi ainda negativamente correlacionado com a CTC efetiva do solo. A colonização micorrízica e o número de esporos de FMA na rizosfera de P. cupana foram positivamente correlacionadas com o pH e a concentração de Mn no solo. A colonização micorrízica foi também positivamente correlacionada com o número de esporos de FMA para as duas espécies avaliadas. Em conclusão, esse estudo mostrou que tanto a colonização micorrízica como a esporulação são sazonais e dependentes da espécie de planta hospedeira, precipitação pluvial, teor de umidade e da química do solo, nas condições da Amazônia Central.

    Abstract in English:

    The seasonal dynamics of Arbuscular Mycorrhizal Fungi (AMF) was investigated in the rhizosphere of two fruit species in a terra firme (upland) ecosystem in Central Amazonia. Two host species (Theobroma grandiflorum and Paullinia cupana) and nine sampling months (August, September and December/1998, February, April, May and December/1999, February and May/2000) were studied in a completely randomized design, with five replications, set in a 2 x 9 factorial experiment. Soil (0-20 cm depth) and root samples were collected between August 1998 and May 2000. The mean percent colonization of AMF for both species reached maximal values in February and May 2000 (rainy season). In April and May 1999, February and May 2000 (rainy season) the highest AMF spore numbers were registered. The pluvial precipitation was significantly positively correlated with AMF number spores for both fruit species, and significant positive correlation only with AMF colonization of P. cupana. Soil moisture content was positively correlated with colonization and spore numbers of AMF for both species evaluated. AMF colonization and AMF spore numbers of T. grandiflorum were positively correlated with soil Mg and K concentrations. AMF spore numbers of T. grandiflorum were also negatively correlated with effective cation exchange capacity (ECEC). AMF colonization and AMF spore numbers in the rhizosphere of P. cupana were positively correlated with pH and Mn concentrations. AMF colonization was also positively correlated with AMF spore numbers for both species evaluated. In conclusion, this study showed that AMF colonization and sporulation are seasonal and dependent on host plant species, pluvial precipitation, soil moisture content and soil chemistry in Central Amazonia conditions.
  • Isolation and partial characterization of a mutant of Bacillus thuringiensis producing melanin Environmental And Soil Microbiology

    Vilas-Bôas, Gislayne T.; Vilas-Bôas, Laurival A.; Braz, Veridiana T.; Saridakis, Halha O.; Santos, Clelton A.; Arantes, Olívia M. N.

    Abstract in Portuguese:

    Um mutante (407-P) da linhagem Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis 407 produtor de melanina foi obtido após tratamento com o agente mutagênico etil-metano-sulfonato. Diversas propriedades microbiológicas e bioquímicas das duas linhagens foram analisadas e os resultados foram similares. O mutante 407-P foi incorporado em amostras de solo não esterilizado, recuperado, facilmente identificado e quantificado, possibilitando seu uso em estudos de ecologia de B. thuringiensis.

    Abstract in English:

    A mutant (407-P) of Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis strain 407 producing a melanin was obtained after treatment with the mutagenic agent ethyl-methane-sulfonate. Several microbiological and biochemical properties of the two strains were analyzed and the results were similar. The mutant 407-P was also incorporated into non-sterilized soil samples, recovered, easily identified, and quantified, what enables its use in ecology of B. thuringiensis.
  • Detection of mixed microbial biofilms on central venous catheters removed from Intensive care Unit Patients Medical Microbiology

    Storti, Anisio; Pizzolitto, Antonio Carlos; Pizzolitto, Elisabeth Loshchagin

    Abstract in Portuguese:

    Cateteres venosos centrais inseridos em pacientes internados em unidade de terapia intensiva foram avaliados por métodos microbiológicos (cultura semi-quantitativa) e microscopia eletrônica de varredura a fim de detectar adesão microbiana e correlacionar com a cultura de sangue. Durante o período de estudo, foram avaliados 59 pacientes com cateter venoso central. A idade dos pacientes, sexo, sítio de inserção e tempo de permanência do cateter foram anotados. O cateter era de poliuretano não tunelizado e de único lúmen. O sangue para cultura foi coletado no momento da remoção do cateter. De 63 pontas de cateteres, 30 (47,6%) foram colonizadas e a infecção encontrada em 5 (23,8%) cateteres. A infecção foi mais prevalente em 26 pacientes (41,3%) com cateteres inseridos em veia subclávia do que nos 3 (3,2%) inseridos em veia jugular. A infecção foi observada com mais freqüência em cateteres com tempo de permanência maior do que sete dias. Os microrganismos isolados incluíram 32 estafilococos coagulase-negativa (29,7%), 61 bactérias Gram-negativas (52,9%), 9 estafilcocos coagulase-positiva (8,3%) e 3 leveduras (2,7%). Como agentes causais de infecções em unidade de terapia intensiva foram isolados E. aerogenes, P. aeruginosa, A. baumannii. Os antimicrobianos com maior atividade in vitro contra as bactérias Gram-negativas foram o imipenem e contra as Gram-positivas vancomicina, cefepime, penicilina, rifampicina e tetraciclina. As análises por microscopia eletrônica de varredura revelaram biofilmes sobre a superfície de todos os cateteres examinados.

    Abstract in English:

    Central venous catheters from intensive care unit patients were subjected to microbiological methods (semiquantitative culture) and scanning electron microscopy in order to assess microbial attachment and correlate it with blood cultures. During the period of the survey, 59 patients with inserted central venous catheters were studied. The type of catheter used was nontunneled, noncuffed, single lumen, made of polyurethane. Blood samples for cultures were collected at the moment of catheter removal. Data on the patient's age, gender, catheter insertion site, and duration of catheterization were also obtained. From 63 catheters tips analysed, 30 (47.6%) showed microbial colonization. Infection proved to be more prevalent in 26 (41.3%) patients with catheters inserted via subclavia vein than in 2 (3.2%) inserted via the jugular vein. Infection was observed more frequently in catheters which were kept in place more than seven days. A. baumannii, Citrobacter freundii, E. aerogenes, P. aeruginosa and S. saprohyticus were isolated as causal agents of catheter-related bloodstream infections. The antimicrobial agent with greater in vitro activity against Gram-negative bacteria was imipenen and against Gram-positive were vancomycin, cefepime, penicillin, rifampin and tetracycline. The SEM analyses revealed biofilms on surfaces of all the catheters examined.
  • Prevotella intermedia and Porphyromonas gingivalis isolated from osseointegrated dental implants: colonization and antimicrobial susceptibility Medical Microbiology

    Pfau, Eduardo Augusto; Avila-Campos, Mario Julio

    Abstract in Portuguese:

    Neste estudo foram avaliadas a colonização e a susceptibilidade a antimicrobianos de P. intermedia e P. gingivalis isolados de amostras de sulcus gengivais e peri-implantares. As amostras foram coletadas de 30 pacientes submetidos a implantes, em três tempos diferentes: no momento da cirurgia, 20 e 60 dias após a instalação do implante. Os organismos foram identificados por testes bioquímicos ou por kit comercial API 32-A e por PCR. A susceptibilidade antimicrobiana foi determinada usando-se o método de diluição em ágar. Foram isolados dezenove P. intermedia (quatro de peri-implantites e 15 de sulco gengival) e somente sete P. gingivalis de sulco gengival. Pelo PCR os organismos foram detectados de sete amostras sete peri-implantares e de 32 gengivais. As bactérias foram susceptíveis aos antibióticos usados exceto para azitromicina com 65% de resistência para P. intermedia. As espécies avaliadas foram sensíveis para cádmio, níquel e paládio, e mostraram diferentes faixas de resistência para titânio, alumínio e bicloreto de mercúrio. A maioria de P. intermedia foi resistente para chumbo, prata, cobre, titânio, zinco, alumínio e bicloreto de mercúrio. As bactérias colonizaram implantes após 60 dias de cirurgia e PCR pode ser usado como ferramenta para a detecção bacteriana na implantodontia.

    Abstract in English:

    The colonization and antimicrobial susceptibility of P. intermedia and P. gingivalis isolated from peri-implant and gingival sulcus samples were determined. Samples were collected from 30 patients submitted to implant in three different times: at the moment of the surgery, 20 and 60 days after the implant installation. Organisms were identified by using a biochemical tests or API 32-A kit and by PCR. The antimicrobial susceptibility was determined by using an agar dilution method. Nineteen P. intermedia (4 from peri-implant sites and 15 from gingival sulcus), and only seven P. gingivalis from gingival sulcus were isolated. Organisms were detected by PCR from seven peri-implant and 32 gingival samples. Bacteria were susceptible to the used antibiotics except to azithromycin with 65% of resistance for P. intermedia strains. Both tested species were susceptible to cadmium, nickel and palladium, and showed different resistance rates to titanium, aluminum and mercuric chloride. Most of P. intermedia strains were resistant to lead, silver, copper, titanium, zinc, aluminum and mercuric chloride. Bacteria colonized implants after 60 days of surgery and PCR may be used as a tool for bacterial detection in implantology.
  • Susceptibility of Arcobacter butzleri to heavy metals Medical Microbiology

    Otth, Laura; Solís, Gabriela; Wilson, Myra; Fernández, Heriberto

    Abstract in Portuguese:

    Arcobacter butzleri é um bacilo Gram negativo de caráter zoonótico, pertencente à Família Campylobacteraceae, que tem sido associado a diarréia e septicemia no ser humano. A susceptibilidade de 50 amostras de A. butzleri isoladas de fígados de frango [12], mariscos [18], água de rio [6] e fezes de bovinos [5], patos [2] e pelicanos [7] aos metais pesados mercúrio (Hg), cromo (Cr), prata (Ag), níquel (Ni), cobalto Co), ferro (Fe), manganês (Mn), molibdênio (Mo) e chumbo (Pb) foi determinada.Todas as amostras foram resistentes a Mo, Mn, Ni, Co, Pb e Fe, sendo susceptíveis a Hg, Ag e Cr. Os valores das CIM apresentaram alta variabilidade indicando um comportamento não homogêneo entre as amostras.

    Abstract in English:

    The susceptibility of 50 strains of Arcobacter butzleri isolated from chicken liver [12], mussels [18], river water [6] and bovine [5], duck [2] and pelicans [7] feces to mercury (Hg), chromium (Cr), silver (Ag), nickel (Ni), cobalt (Co), iron (Fe), manganese (Mn), molybdenum (Mo) and lead (Pb) was determined.All the strains were resistant to Mo, Mn, Ni, Co, Pb and Fe and susceptible to Hg, Ag and Cr. MIC values showed high variability, indicating a non homogeneous behavior among the strains.
  • Aflatoxins, ochratoxin A and zearalenone in maize-based food products Food Microbiology

    Sekiyama, Beatriz Leiko; Ribeiro, Alessandra Braga; Machinski, Paulo André; Machinski Junior, Miguel

    Abstract in Portuguese:

    A ocorrência de aflatoxinas B1 (AFB1), B2 (AFB2), G1 (AFG1) e G2 (AFG2), ocratoxina A (OA) e zearalenona (ZEA) foi avaliada em 121 amostras de alimentos à base de milho, que foram coletadas no comércio da cidade de Maringá, PR, Brasil, entre os meses de Janeiro/2002 a Fevereiro/2003. A cromatografia em camada delgada foi empregada para a determinação das micotoxinas. As médias das recuperações foram 106,6%, 109,4%, 106,6%, 109,4%, 101,8% e 101,7% para AFB1, AFB2, AFG1, AFG2, OA e ZEA, respectivamente. Três amostras (2,5%) foram positivas para AFB1 (8 a 59 µg/kg), duas (1,7%) para AFB2 (2,4 µg/kg), uma (0,8%) para OA (64 µg/kg) e uma (0,8%) para ZEA (448 µg/kg). A maior freqüência de amostras positivas e também a mais alta concentração de AFB1 foi encontrada nas amostras de pipoca (8,3%, 59 µg/kg). Os dados demonstraram uma baixa freqüência de micotoxinas em produtos à base de milho comercializados em Maringá, mas a Ingestão Diária Provável Média (IDP M) de AFB1 foi alta nos produtos analisados. Portanto, torna-se necessário a realização de uma vigilância ativa destas micotoxinas nestes produtos alimentícios, a fim de proporcionar segurança à saúde da população brasileira.

    Abstract in English:

    The occurrence of aflatoxins B1 (AFB1), B2 (AFB2 ), G1 (AFG1 ) and G2 (AFG2 ), ochratoxin A (OA) and zearalenone (ZEA) was evaluated in 121 maize-based food samples collected in the commerce of Maringá City, Paraná State, Brazil. The study was carried out between January 2002 and February 2003. Thin-layer chromatographic method was used to determine the mycotoxins. The recovery averages were 106.6%, 109.4%, 106.6%, 109.4%, 101.8% and 101.7% to AFB1, AFB2, AFG1, AFG2, OA and ZEA, respectively. Three samples (2.5%) were positive to AFB1 (8 to 59 µg/kg), two (1.7%) to AFB2 (2.4 µg/kg), one (0.8%) to OA (64 µg/kg) and one (0.8%) to ZEA (448 µg/kg). The greater frequency of positive samples and also the highest concentration of AFB1 were found in popcorn samples (8.3%, 59 µg/kg). The data showed a low frequency of mycotoxins in products based on maize traded in Maringá, but the Probable Average Daily Intake (PDI) of AFB1 in them was high. Therefore, it is necessary to accomplish an active vigilance of these mycotoxins in such food products in order to provide safety to Brazilian people health.
  • Performance of two ready-to-use systems for enumeration of aerobic mesophilic microorganisms in frozen goat milk Food Microbiology

    Tavolaro, Paula; Ferrati, Analí Ramazotti; Destro, Maria Teresa; Landgraf, Mariza; Franco, Bernadette Dora Gombossy de Melo

    Abstract in Portuguese:

    Foi demonstrado que a enumeração de microrganismos aeróbios em leite bovino brasileiro pasteurizado utilizando-se as placas PetrifilmTM AC e SimplateTM TPC pode ser influenciada pela microbiota autóctone. O presente estudo foi conduzido para se determinar se o mesmo ocorreria com leite de cabra pasteurizado. Foram analisadas 62 amostras de leite pasteurizado e congelado, vendidas no comércio varejista de São Paulo, SP. As amostras foram submetidas à contagem de microrganismos aeróbios mesófilos utilizando-se placas PetrifilmTM AC e SimplateTM TPC, comparando-se os resultados com a semeadura em profundidade. Um índice de correlação acima de 0,90 foi classificado como "excelente", entre 0,80 e 0,89 como "bom", entre 0,79 e 0,50 como "fraco", e abaixo de 0,50, como "ruim". O índice de correlação para as contagens em placas PetrifilmTM AC foi "bom", mas foi "ruim" quando se usou as placas SimplateTM TPC. A comparação entre os resultados obtidos com as placas PetrifilmTM AC e SimplateTM TPC também produziu um índice de correlação "ruim". Os resultados sugerem que a microbiota autóctone têm pouca ou nenhuma influência sobre a performance destes dois sistemas, pois boas correlações foram obtidas com o uso das placas PetrifilmTM AC.

    Abstract in English:

    Enumeration of aerobic microorganisms in Brazilian pasteurized bovine milk using PetrifilmTM AC and SimplateTM TPC was shown to be influenced by the nature of autochthonous microbiota. This study was conducted to assess if the same occurs in pasteurized goat milk. Pasteurized frozen goat milk (n=62) was purchased in retail stores in São Paulo, SP, Brazil, and submitted to mesophilic aerobic counts using PetrifilmTM AC and SimplateTM TPC, comparing results with those of conventional pour-plates. Correlation indexes above 0.90 were ranked "excellent"; those between 0.80 and 0.89, "good", those from 0.79 to 0.50, "fair", and those below 0.50, "poor". Correlation indexes for PetrifilmTM AC counts were "good", but "poor" using SimplateTM TPC. Comparison of PetrifilmTM AC and SimplateTM TPC also produced "poor" correlation indexes. Results suggest that autochthonous microbiota have little, if any, influence on the performance of these two systems, since good correlations were achieved using PetrifilmTM AC.
  • Reversion by calcium of a yeast-like development to the original filamentous form, of the 10V10 5-fluorocytosine-sensitive mutant of Aspergillus niger General Microbiology

    Goulart, Rosangela de Carvalho; Marin, José Moacir

    Abstract in Portuguese:

    Alguns fungos filamentosos apresentam o fenômeno de dimorfismo, sendo que as alterações da estrutura morfológica podem induzir alterações metabólicas. A linhagem de Aspergillus niger 10v10, produtora de ácido cítrico foi submetida à ação mutagênica da radiação ultravioleta selecionando mutantes sensíveis ou resistentes ao antifúngico 5-fluorocitosina (5-FC). Os mutantes selecionados como sensíveis a 5-FC apresentaram uma alteração morfológica com desenvolvimento leveduriforme. Nestes mutantes foram avaliados o efeito da alteração de pH, a adição de sais (KH2PO4, NH4NO3, MgSO4e MnCl2), a presença de estabilizadores osmóticos, cloreto de cálcio, e o seu efeito sobre a reversão morfológica e a produção de ácido. A reversão morfológica para a forma filamentosa ocorreu apenas na presença de CaCl2 (500mM) para as linhagens mutantes 1 e 2, enquanto que a produção de ácido ocorreu nas duas formas, leveduriforme e filamentosa.

    Abstract in English:

    Some filamentous fungi present the phenomenon of dimorphism, their morphological structure alterations being capable of inducing metabolism changes. The Aspergillus niger strain 10v10, a producer of citric acid, was submitted to the mutagenic action of ultraviolet irradiation which respectively selects mutants sensitive or resistant to the antifungi agent 5 fluorocytosine (5-FC). 5-FC sensitive mutants presented a morphological alteration to a yeast-like form. The effects of pH changes, addition of salts (KH2PO4, NH4NO3, MgSO4 and MgCl2), the presence of osmotic stabilizers, as well as of calcium chloride, on morphological reversal and acid production were studied. Morphological reversal to the filamentous form was observed only in the presence of CaCl2 (500mM) for the mutants strains 1 and 2, while the acid production occurred in both, yeast-like and filamentous forms.
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