• Assessing the diversity of bacterial communities associated with plants Review

    Andreote, Fernando Dini; Azevedo, João Lúcio; Araújo, Welington Luiz

    Abstract in Portuguese:

    As interações planta-bactéria resultam de um reconhecimento recíproco de ambas espécies. Estas interações são responsáveis por processos biológicos essenciais para o desenvolvimento e a proteção das plantas. Este trabalho revisa as metodologias aplicadas na investigação de alterações nas comunidades bacterianas associadas às plantas. Uma descrição das técnicas é feita, desde o isolamento até a aplicação de técnicas independentes de cultivo, destacando as técnicas de qPCR, Gel de Eletroforese em Gradiente Desnaturante (DGGE), construção e análise de bibliotecas de clones, a aplicação de análise multivariada em dados de ecologia microbiana, e as novas metodologias de alto processamento de amostras como microarranjos e pirosequenciamento. Em resumo, esta revisão fornece informações sobre o desenvolvimento das técnicas tradicionais e uma visão geral sobre as novas tendências dos estudos de comunidades bacterianas associadas às plantas.

    Abstract in English:

    Plant-bacteria interactions result from reciprocal recognition between both species. These interactions are responsible for essential biological processes in plant development and health status. Here, we present a review of the methodologies applied to investigate shifts in bacterial communities associated with plants. A description of techniques is made from initial isolations to culture-independent approaches focusing on quantitative Polymerase Chain Reaction in real time (qPCR), Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE), clone library construction and analysis, the application of multivariate analyses to microbial ecology data and the upcoming high throughput methodologies such as microarrays and pyrosequencing. This review supplies information about the development of traditional methods and a general overview about the new insights into bacterial communities associated with plants.
  • Development of a polymerase chain reaction assay for the detection of pseudorabies virus in clinical samples Veterinary Microbiology

    Pérez, Lester J.; Arce, Heidy Díaz de

    Abstract in Portuguese:

    A doença de Aujeszky, também conhecida como pseudo-raiva, causa perdas econômicas graves na indústria suína e afeta a criação de suínos em todo o mundo. O procedimento de diagnóstico convencional é demorado, podendo ocorrer resultados falso-negativos em animais infectados de forma latente. Este estudo apresenta o desenvolvimento, otimização e avaliação de um ensaio de Reação de Polimerase em Cadeia para o diagnóstico da pseudo-raiva. O ensaio baseou-se na amplificação do fragmento genético viral gD altamente conservado. Os produtos da PCR de tamanho esperado foram obtidos a partir de isolados de PRV. Não foram observadas reações inespecíficas quando foram testados herpes-vírus relacionados, outros vírus DNA de suínos e células não infectadas. A sensibilidade analítica estimada do teste foi 1,34 TCID50/50 uL. A análise de homogenatos feitos com tecidos de animais naturalmente infectados mostrou que o método é útil para o diagnóstico rápido da doença no campo, sendo um ensaio rápido, sensível e específico para detectar o vírus da pseudo-raiva em amostras clinicas.

    Abstract in English:

    Aujeszky's disease, also known as pseudorabies causes severe economic losses in swine industry and affects the pig husbandry all over the world. The conventional diagnostic procedure is time-consuming and false-negative results may occur in submissions from latently infected animals. The development, optimization and evaluation of a polymerase chain reaction (PCR) assay are presented for the diagnosis of pseudorabies infection. This assay was based on the amplification of a highly conserved viral gD gene fragment. PCR products of the expected size were obtained from PRV strains. Non-specific reactions were not observed when a related herpesvirus, other porcine DNA genome viruses and uninfected cells were used to assess PCR. The analytical sensitivity of the test was estimated to be 1.34 TCID50/50 uL. The analysis of tissue homogenate samples from naturally infected animals proved the potential usefulness of the method for a rapid disease diagnosis from field cases. A rapid, sensitive and specific PCR-based diagnostic assay to detect pseudorabies virus in clinical samples is provided.
  • Comparative efficacies of Zataria multiflora essential oil and itraconazole against disseminated Candida albicans infection in BALB/c mice Veterinary Microbiology

    Khosravi, A.R.; Shokri, H.; Tootian, Z.; Alizadeh, M.; Yahyaraeyat, R.

    Abstract in Portuguese:

    A candidíase disseminada é um problema sério de saúde publica decorrente da invasão por espécies de Candida, e Candida albicans em particular. O objetivo deste estudo foi comparar a eficiência do óleo essencial de Zataria multiflora e itraconazol na remoção de C. albicans das vísceras de camundongos BALB/c com candidíase disseminada. O óleo essencial de Zataria multiflora foi extraído empregando um aparelho do tipo Clevenger e analisado por cromatografia a gás e espectrometria de massa (GC-MS). Para os experimentos de remoção, camundongos (20-25g, n=8 por grupo) receberam óleo essencial nas doses de 30, 48 e 64 mg/kg e itraconazol na dose de 200 mg/kg via intraperitoneal (IP) por dois dias antes e após a inoculação intravenosa de 0,5 x 10(6) blastósporos de C. albicans. Os animais tratados foram sacrificados no vigésimo dia e 0,1g dos tecidos homogeneizados foram semeados em meios específicos. De acordo com o GC-MS, os principais componentes do óleo essencial foram carvacrol (61,29%) e timol (25,28%). Os resultados mostraram que a administração IP de 64 mg/kg de óleo essencial apresentou a eficiência mais alta na redução de C. albicans e resultou na redução de 39,5, 21,8, 141,5, 174 e 501 vezes na contagem média de C. albicans por 0,1g do fígado, baço, pulmões, cérebro e rins, respectivamente, quando comparado ao controle positivo. O itraconazol apresentou redução de C. albicans maior do que o óleo essencial na dose de 30mg/kg nos rins (P<0,02), cérebro (P<0,02) e baço (P<0,04) e menor no cérebro (P<0,01), pulmões (P<0,0005) e rins (P<0,0005) na dose de 64 mg/kg, enquanto não houve diferença entre esse droga e óleo essencial na dose de 48mg/kg. Estes resultados explicam a remoção aumentada de leveduras e a disseminação reduzida para as vísceras de camundongos tratados com Z. multiflora.

    Abstract in English:

    Disseminated candidiasis is a serious problem in public health that results from the invasion of Candida species, in particular Candida albicans. The aim of this study was to compare the efficacies of Zataria multiflora essential oil and itraconazole in clearing C. albicans from the visceral organs of BALB/c mice suffered from disseminated candidiasis. Zataria multiflora essential oil was extracted using Clevenger-type apparatus and analyzed by gas chromatography mass spectrometry (GC-MS). For clearance experiment, mice (20-25 g, N=8 per group) received essential oil at doses of 30, 48 and 64 mg/kg and itraconazole at dose of 200 mg/kg intraperitoneally (IP) 2 days before and after intravenous inoculation of 0.5×10(6) C. albicans blastospores. The treated animals were sacrificed on day 20, and 0.1 g of the tissue homogenates was plated onto specific media. In GC-Mass, the main components of the essential oil were carvacrol (61.29%) and thymol (25.18%). The results demonstrated that IP administration of 64 mg/kg of the essential oil had the highest efficacy in reducing C. albicans and produced 39.5, 21.8, 141.5, 174 and 501-fold reductions in mean CFUs per 0.1 gram in Candida infections of the liver, spleen, lungs, brain and kidneys, respectively, compared to positive control. Itraconazole showed significantly more responsiveness than the essential oil at dose of 30 mg/kg in clearing C. albicans from the kidneys (P<0.02), brain (P<0.02) and spleen (P<0.04), and less responsiveness than that of 64 mg/kg in clearing the organism from the brain (P<0.01), lungs (P<0.0005) and kidneys (P<0.0005), whereas no significant difference was observed between this drug and Z. multiflora at dose of 48 mg/kg. These data explain the increased rate of yeast clearance and reduced dissemination to the viscera of Z. multiflora treated mice.
  • Isolation of rabies virus from the parotid salivary glands of foxes (Pseudalopex vetulus) from Paraíba State, Northeastern Brazil Veterinary Microbiology

    Silva, Maria Luana Cristiny Rodrigues; Lima, Fabiano da Silva; Gomes, Albério Antônio de Barros; Azevedo, Sérgio Santos de; Alves, Clebert José; Bernardi, Fernanda; Ito, Fumio Honma

    Abstract in Portuguese:

    Para determinar a presença de vírus rábico em glândulas salivares parótidas, 12 raposas (Pseudalopex vetulus) atropeladas em rodovias e positivas para raiva foram testadas pelo teste de imunofluorescência direta (IFD) e teste de inoculação em camundongos (IC). Todas as 12 glândulas salivares parótidas foram positivas em ambos os testes, embora, em alguns casos, várias passagens terem sido necessárias. Os achados do presente trabalho reforçam a importância das raposas como reservatórios de raiva no semi-árido do Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil.

    Abstract in English:

    To determine the presence of rabies virus in the parotid salivary glands, 12 road-killed rabies-positive hoary foxes (Pseudoalopex vetulus) were tested by using the fluorescent antibody test (FAT) and mouse inoculation test (MIT). All 12 parotid salivary glands were positive for both tests, although in some cases several passages were required. The findings of this study support the importance of the hoary fox as rabies reservoir in the semi-arid region of Paraíba State, Northeastern Brazil.
  • Occurrence of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli and their biotypes in beef and dairy cattle from the south of Chile Veterinary Microbiology

    Fernández, Heriberto; Hitschfeld, Marianne

    Abstract in Portuguese:

    Foi estabelecida a prevalência de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli e seus biotipos, em bovinos de corte e de leite do sul do Chile. Campylobacter foi estatisticamente mais prevalente nos bovinos de corte (35,9%) do que nos bovinos de leite (21,3%), sendo C. jejuni a espécie mais frequentemente isolada.

    Abstract in English:

    The prevalence of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli and their biotypes in beef and dairy cattle from the South of Chile was established. Campylobacter were statistically more prevalent among beef cattle (35.9%) than among dairy cattle (21.3%), being C. jejuni the species most frequently isolated.
  • Potentially pathogenic mycoplasmas in the external ear canal of clinically normal cattle in Southeast Brazil: first report Veterinary Microbiology

    Santos, Sandra Batista dos; Nascimento, Elmiro Rosendo do; Faccini, João Luiz Horácio; Barreto, Maria Lúcia; Pereira, Virginia Léo de Almeida

    Abstract in Portuguese:

    Foram pesquisados micoplasmas no conduto auditivo de 60 bovinos no Brasil. A prevalência obtida foi de 80%. A porcentagem das espécies tipificadas foi de M. alkalenses, 12,5%; M. arginini, 2,1%; M. bovirhinis, 8,35%; M. bovis, 2,1%; M. conjunctivae, 25,0%; M. mycoides subsp. mycoides LC, 14,6% e M. capricolum, 10,4%.

    Abstract in English:

    Mycoplasmas were searched in the ear canal flushing of 60 bovine in Brazil. The prevalence obtained was 80%. The percentages of typified species were 12.5%, for M. alkalenses; 2.1%, M. arginini; 8.35%, M. bovirhinis; 2.1%, M. bovis; 25.0%, M. conjunctivae; 14.6%, M. mycoides subsp. mycoides LC and 10.4% M. capricolum.
  • Mannanoligosaccharide agglutination by Salmonella enterica strains isolated from carrier pigs Veterinary Microbiology

    Borowsky, Luciane; Corção, Gertrudes; Cardoso, Marisa

    Abstract in Portuguese:

    Fímbrias tipo 1 estão presentes na maioria dos sorovares de Salmonella enterica e são fatores essenciais para a colonização do hospedeiro. Mananoligossacarídeo (MOS), um prebiótico que aglutina com fímbria tipo 1, tem sido proposto para o controle da colonização de enterobactérias e pode ser uma alternativa para o controle da infecção por Salmonella sp. em suínos. O objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade in vitro de aglutinação ao MOS em cepas de Salmonella sp. isoladas de suínos. Um total de 108 cepas de Salmonella sp. foram avaliadas quanto à presença dos genes fimA e fimH, aglutinação ao MOS e hemaglutinação. Em todas as cepas testadas, fragmentos de tamanho esperado foram amplificados para ambos os genes. Nos testes de hemaglutinação, 31 (28,7%) cepas apresentaram aglutinação de hemácias inibida pela manose, indicando que havia expressão de fímbria tipo 1. Considerando apenas as cepas com a expressão de fímbria tipo 1, 23 (74,2%) apresentaram uma aglutinação forte ao MOS, 3 (9,6%) uma reação fraca e 5 (16,2%) não aglutinaram. Os resultados indicam que MOS pode aglutinar in vitro de forma efetiva com cepas de Salmonella enterica que estejam expressando fímbria tipo 1.

    Abstract in English:

    Type-1 fimbriae are associated with most Salmonella enterica serovars and are an essential factor for host colonization. Mannanoligosaccharides (MOS), a prebiotic that is agglutinated by type-1 fimbriae, are proposed for the control of enterobacteria colonization and may be an alternative to Salmonella control in pigs. The aim of this study was to evaluate the capability of porcine Salmonella strains to adhere to MOS in vitro. A total of 108 strains of Salmonella sp. isolated from carrier pigs were evaluated for the amplification of fimA and fimH genes, agglutination of MOS and hemagglutination. In all tested strains, amplicons of expected size were detected for both fimA and fimH gene. In the hemagglutination assays, 31 (28.7%) strains presented mannose-sensitive agglutination of erythrocytes, indicating that the strains were expressing type-1 fimbriae. Considering only strains expressing the type-1 fimbriae, 23 (74.2%) presented a strong agglutination of MOS, 3 (9.6%) a weak reaction and 5 (16.2%) none. The results indicate that Salmonella enterica strains expressing type-1 fimbriae can agglutinate effectively in vitro to MOS.
  • First detection of canine parvovirus type 2c in Brazil Veterinary Microbiology

    Streck, André Felipe; Souza, Carine Kunzler de; Gonçalves, Karla Rathje; Zang, Luciana; Pinto, Luciane Dubina; Canal, Cláudio Wageck

    Abstract in Portuguese:

    No Brasil, a presença do parvovírus canino do tipo 2 (CPV-2), 2a e 2b já havia sido descrita, contudo, ainda não havia sido verificada a presença do tipo 2c. No presente trabalho, sete de nove amostras de cães com diarréia foram caracterizadas como CPV-2c, indicando que este vírus já está circulando na população canina no Brasil.

    Abstract in English:

    The presence of canine parvovirus type 2 (CPV-2), 2a and 2b has been described in Brazil, however, the type 2c had not been reported until now. In the current study, seven out of nine samples from dogs with diarrhea were characterized as CPV-2c, indicating that this virus is already circulating in the Brazilian canine population.
  • Performance of transport and selective media for swine Bordetella bronchiseptica recovery and it comparison to polymerase chain reaction detection Veterinary Microbiology

    Coutinho, Tania Alen; Bernardi, Mari Lourdes; Cardoso, Marisa Ribeiro de Itapema; Borowski, Sandra Maria; Moreno, Andrea Micke; Barcellos, David Emilio Santos Neves de

    Abstract in Portuguese:

    Três ensaios comparativos foram feitos com o objetivo de aperfeiçoar a sensibilidade do diagnóstico da infecção pela Bordetella bronchiseptica a partir de suabes nasais de leitões. O experimento inicial comparou a recuperação de B. bronchiseptica a partir de suabes, simultaneamente inoculados com B. bronchiseptica e algumas bactérias interferentes, imersos em três formulações para transporte (meio Amies com carvão, caldo tripticaseína de soja e tampão de fosfatos segundo Soerensen suplementado com 5% de soro fetal bovino) e submetidos a diferentes temperaturas (10ºC e 27ºC) e períodos de incubação (24, 72 e 120 horas). O experimento subseqüente comparou três meios seletivos (ágar MacConkey, meio seletivo G20G modificado e o meio de ceftiofur) em relação às suas capacidades de recuperação a partir de amostras clínicas. O último experimento comparou a reação em cadeia pela polimerase aos três meios seletivos. No primeiro experimento, a recuperação de B. bronchiseptica nos sistemas de transporte foi melhor a 27ºC e as três formulações tiveram boas performances nesta temperatura, mas o conjunto das análises qualitativa e quantitativa apontou para o uso preferencial do meio Amies para o transporte de suabes nasais. O segundo experimento indicou que o ágar MacConkey e o G20G modificado mostraram resultados similares e foram superiores ao meio de ceftiofur. No experimento final, a técnica de reação em cadeia pela polimerase apresentou uma capacidade de detecção da B. bronchiseptica superior a do cultivo.

    Abstract in English:

    Three comparative assays were performed seeking to improve the sensitivity of the diagnosis of Bordetella bronchiseptica infection analyzing swine nasal swabs. An initial assay compared the recovery of B. bronchiseptica from swabs simultaneously inoculated with B. bronchiseptica and some interfering bacteria, immersed into three transport formulations (Amies with charcoal, trypticase soy broth and phosphate buffer according to Soerensen supplemented with 5% of bovine fetal serum) and submitted to different temperatures (10ºC and 27ºC) and periods of incubation (24, 72 and 120 hours). A subsequent assay compared three selective media (MacConkey agar, modified selective medium G20G and a ceftiofur medium) for their recovery capabilities from clinical specimens. One last assay compared the polymerase chain reaction to the three selective media. In the first assay, the recovery of B. bronchiseptica from transport systems was better at 27ºC and the three formulations had good performances at this temperature, but the collection of qualitative and quantitative analysis indicated the advantage of Amies medium for nasal swabs transportation. The second assay indicated that MacConkey agar and modified G20G had similar results and were superior to the ceftiofur medium. In the final assay, polymerase chain reaction presented superior capability of B. bronchiseptica detection to culture procedures.
  • Evaluation of DNA extraction protocols for Brucella abortus pcr detection in aborted fetuses or calves born from cows experimentally infected with strain 2308 Veterinary Microbiology

    Matrone, M.; Keid, L.B.; Rocha, V.C.M.; Vejarano, M.P.; Ikuta, C.Y.; Rodriguez, C.A.R.; Ferreira, F.; Dias, R.A.; Ferreira Neto, J.S

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo do presente estudo foi aperfeiçoar a detecção de Brucella abortus pela PCR em homogeneizados de órgãos de fetos abortados por vacas infectadas, importante mecanismo para descobrir focos da doença na fase de erradicação. Assim, foram comparados diferentes protocolos de extração de DNA, visando à detecção de B. abortus pela PCR em amostras clínicas colhidas de abortos ou de bezerros oriundos de vacas desafiadas com a estirpe 2308 de B. abortus. Para tanto, foram construídos dois grupos padrão ouro com base na bacteriologia clássica, constituídos por: 32 pulmões (17 positivos), 26 baços (11 positivos), 23 fígados (8 positivos) e 22 linfonodos bronquiais (7 positivos). Todas essas amostras foram submetidas a três protocolos de extração de DNA, seguidos do mesmo processo de amplificação com os primers B4 e B5. Nos resultados acumulados por órgão, a proporção de positivos nos pulmões foi maior que a encontrada nos fígados (p=0,04) e nos linfonodos bronquiais (p=0,004), e igual a verificada nos baços (p=0,18). Nos resultados acumulados por método de extração de DNA, a proporção de positivos para o protocolo de Boom foi maior que a verificada para o PK (p<0,0001) e GT (p=0,0004). Não houve diferença entre os protocolos PK e GT (p=0,5). Algumas amostras positivas ao isolamento foram negativas à PCR e vice-versa. Assim, a melhor estratégia para se pesquisar B. abortus em tecidos de fetos abortados ou de bezerros nascidos de vacas infectadas é a utilização, em paralelo, do isolamento e da PCR, com extração do DNA pelo método do Boom.

    Abstract in English:

    The objective of the present study was to improve the detection of B. abortus by PCR in organs of aborted fetuses from infected cows, an important mechanism to find infected herds on the eradication phase of the program. So, different DNA extraction protocols were compared, focusing the PCR detection of B. abortus in clinical samples collected from aborted fetuses or calves born from cows challenged with the 2308 B. abortus strain. Therefore, two gold standard groups were built based on classical bacteriology, formed from: 32 lungs (17 positives), 26 spleens (11 positives), 23 livers (8 positives) and 22 bronchial lymph nodes (7 positives). All samples were submitted to three DNA extraction protocols, followed by the same amplification process with the primers B4 and B5. From the accumulated results for organ, the proportion of positives for the lungs was higher than the livers (p=0.04) or bronchial lymph nodes (p=0.004) and equal to the spleens (p=0.18). From the accumulated results for DNA extraction protocol, the proportion of positives for the Boom protocol was bigger than the PK (p<0.0001) and GT (p=0.0004). There was no difference between the PK and GT protocols (p=0.5). Some positive samples from the classical bacteriology were negative to the PCR and viceversa. Therefore, the best strategy for B. abortus detection in the organs of aborted fetuses or calves born from infected cows is the use, in parallel, of isolation by classical bacteriology and the PCR, with the DNA extraction performed by the Boom protocol.
  • In vitro antimicrobial susceptibility of staphylococci isolated from canine pyoderma in Rio de Janeiro, Brazil Veterinary Microbiology

    Penna, B.; Varges, R.; Medeiros, L.; Martins, G.M.; Martins, R.R.; Lilenbaum, W

    Abstract in Portuguese:

    O estudo se propõe a avaliar a etiologia e a susceptibilidade de estafilococos isolados de cães com dermatite. Os isolados foram identificados por provas bioquímicas e testados quanto a sua susceptibilidade a 15 antimicrobianos. Trinta e nove isolados de Staphylococci foram obtidos, e S. pseudintermedius foi mais freqüente (47,4%). Todos isolados apresentaram resistência a pelo menos uma droga e 77,1% foram multirresistentes. A oxacilina foi a droga mais eficaz. O estudo demonstra níveis alarmantes de resistência antimicrobiana nos Staphylococcus de pioderma canino.

    Abstract in English:

    The study aimed to determine the etiology and antimicrobial resistance of staphylococci isolated from canine pyoderma. Samples were obtained from dogs with pyoderma and isolates were identified by biochemical reactions and tested for susceptibility to 15 antimicrobials. Thirty nine staphylococci isolates were obtained, and S. pseudintermedius was the most frequent (47.4%). All isolates showed resistance to at least one drug and 77.1% were multiresistant. The most effective drug was oxacillin. The study reports the alarming antimicrobial resistance of Staphylococcus isolated from canine pyoderma samples.
  • A defective mutant of Salmonella enterica Serovar Gallinarum in cobalamin biosynthesis is avirulent in chickens Veterinary Microbiology

    Paiva, Jacqueline Boldrin de; Penha Filho, Rafael Antonio Casarin; Arguello, Yuli Melisa Sierra; Berchieri Junior, Ângelo; Lemos, Manuel Victor Franco; Barrow, Paul A.

    Abstract in Portuguese:

    Salmonella enterica serovar Gallinarum (SG) é o agente do tifo aviário, doença severa que provoca mortalidade em até 80% do plantel de aves. SG encontra-se entre os poucos sorotipos de Salmonella que são agentes etiológicos de enfermidade específica, à semelhança de Salmonella Typhi em seres humanos podendo, portanto, servir de modelo experimental para outras salmoneloses hospedeiro especíifcas. Além dos mecanismos de virulência, a bactéria utiliza mecanismos de sobrevivência para permanecer no hospedeiro. A ativação desses mecanismos pode ou não estar associada à ativação dos mecanismos de virulência. Entre os mecanismos fisiológicos, está a produção de vitamina B12 que Salmonella spp. realiza em ambientes anaeróbicos, como quando encontra-se intracelularmente no organismo hospedeiro. Neste estudo, analisou-se a infecção de aves por cepas de SG, que tiveram genes alterados que participam da biossíntese de vitamina B12. Foram produzidos mutantes de SG contendo os genes cbiA e cobS alterados e um terceiro, contendo ambos os genes alterados. A sobrevivência e a ação patogênica de SG não foi modificada pela alteração simples de um dos genes, mas tornou a cepa de SG completamente atenuada quando os dois foram modificados. A mortalidade provocada pela cepa selvagem de SG foi de 64,52%, enquanto que não observou-se mortalidade alguma no grupo de aves infectadas com SGNal r"cobs"cbiA. Estudos futuros deverão ser realizados para elucidar este processo fisiológico bacteriano e para avaliar a utilização desta cepa de SG como cepa vacinal.

    Abstract in English:

    Salmonella enterica serovar Gallinarum (SG) is a fowl typhoid agent in chickens and is a severe disease with worldwide economic impact as its mortality may reach up to 80%. It is one of a small group of serovars that typically produces typhoid-like infections in a narrow range of host species and which therefore represents a good model for human typhoid. The survival mechanisms are not considered to be virulent mechanisms but are essential for the life of the bacterium. Mutants of Salmonella Gallinarum containing defective genes, related to cobalamin biosynthesis and which Salmonella spp. has to be produced to survive when it is in an anaerobic environment, were produced in this study. Salmonella Gallinarum is an intracellular parasite. Therefore, this study could provide information about whether vitamin B12 biosynthesis might be essential to its survival in the host. The results showed that the singular deletion in cbiA or cobS genes did not interfere in the life of Salmonella Gallinarum in the host, perhaps because single deletion is not enough to impede vitamin B12 biosynthesis. It was noticed that diluted SG mutants with single deletion produced higher mortality than the wild strain of SG. When double mutation was carried out, the Salmonella Gallinarum mutant was unable to provoke mortality in susceptible chickens. This work showed that B12 biosynthesis is a very important step in the metabolism of Salmonella Gallinarum during the infection of the chickens. Further research on bacterium physiology should be carried out to elucidate the events described in this research and to assess the mutant as a vaccine strain.
  • Phylogenetic relationships between Bacillus species and related genera inferred from 16s rDNA sequences General Microbiology

    Wei Wang, Mi Sun

    Abstract in Portuguese:

    Árvores utilizando os métodos de neighbor-joining, máxima parcimônia, evolução mínima, máxima verossimilhança e bayesiana, construídas baseadas em seqüências de rDNA 16S de 181 linhagens-tipo de espécies de Bacillus e taxa relacionados, mostraram a formação de nove grupos filogenéticos. A análise filogenética mostrou que Bacillus não é um grupo monofilético. B. subtilis se colocou no Grupo 1. Grupos 4, 6 e 8, respectivamente, consistiram de bacilos termofílicos, halofílicos ou halotolerantes e alcalifílicos. Grupos 2, 4 e 8 consistindo de espécies de Bacillus e gêneros relacionados demonstraram que o sistema taxonômico corrente não concorda perfeitamente com as árvores evolucionárias por rDNA 16S. A posição de Caryophanaceae e Planococcaceae no Grupo 2 sugere que estes podem ser transferidos para Bacillaceae, e a heterogeneidade do Grupo 2 implica em que algumas espécies de Bacillus neste grupo podem pertencer a vários novos gêneros. O Grupo 9 foi principalmente composto de gêneros de Bacillaceae (excluindo Bacillus), portanto algumas espécies de Bacillus no Grupo 9: B. salarius, B. qingdaonensis e B. thermcloacae podem não pertencer a Bacillus. Quatro espécies de Bacillus, B. schlegelii, B. tusciae, B. edaphicus e B. mucilaginosus foram claramente colocadas fora dos nove grupos.

    Abstract in English:

    Neigh-borjoining, maximum-parsimony, minimum-evolution, maximum-likelihood and Bayesian trees constructed based on 16S rDNA sequences of 181 type strains of Bacillus species and related taxa manifested nine phylogenetic groups. The phylogenetic analysis showed that Bacillus was not a monophyletic group. B. subtilis was in Group 1. Group 4, 6 and 8 respectively consisted of thermophiles, halophilic or halotolerant bacilli and alkaliphilic bacilli. Group 2, 4 and 8 consisting of Bacillus species and related genera demonstrated that the current taxonomic system did not agree well with the 16S rDNA evolutionary trees. The position of Caryophanaceae and Planococcaceae in Group 2 suggested that they might be transferred into Bacillaceae, and the heterogeneity of Group 2 implied that some Bacillus species in it might belong to several new genera. Group 9 was mainly comprised of the genera (excluding Bacillus) of Bacillaceae, so some Bacillus species in Group 9: B. salarius, B. qingdaonensis and B. thermcloacae might not belong to Bacillus. Four Bacillus species, B. schlegelii, B. tusciae, B. edaphicus and B. mucilaginosus were clearly placed outside the nine groups.
  • Molecular analysis of endophytic bacteria from the genus Bacillus isolated from tropical maize (Zea mays L.) General Microbiology

    Figueiredo, José Edson Fontes; Gomes, Eliane Aparecida; Guimarães, Claudia Teixeira; Lana, Ubiraci Gomes de Paula; Teixeira, Marta Aparecida; Lima, Guilherme Vitor Corrêa; Bressan, Wellington

    Abstract in Portuguese:

    Bactérias endofíticas desempenham papel importante na agricultura, melhorando a performance e adaptação de plantas contra estresses bióticos e abióticos. No presente estudo, métodos moleculares foram empregados para identificar bactérias endofíticas do gênero Bacillus isoladas de cultivares de milho doce brasileiro. SDS-PAGE de extratos protéicos totais de quarenta e dois isolados revelaram elevado número de bandas escrutináveis. Vinte e quatro isolados formaram nove grupos diferentes de réplicas bactérianas e dezoito foram considerados como únicos. Entre os isolados, alguns polipeptídios, de tamanhos variados, foram altamente acumulados. Seqüenciamento parcial do gene ribosomal 16S revelou que todos os isolados pertencem ao gênero Bacillus e que, entre treze isolados com padrão protéico similar, dois eram linhagens diferentes. Entre os quarenta e dois isolados identificados por seqüenciamento de rDNA, Bacillus subtilis e B. pumilus foram mais frequentes (15 e 12 isolados, respectivamente), seguido por, B. licheniformes (7 isolados), B. cereus (5 isolados) e B. amiloliquefascens (3 isolados). Baseado nos resultados, conclui-se que a técnica de SDS-PAGE poderá ser usada como primeiro procedimento, rápido e barato, para identificar variação inter-específica em coleções de bactérias endofíticas isoladas do milho, enquanto o método de seqüenciamento de rDNA poderá ser aplicado para analisar variações intra-específica entre isolados com padões similares de proteínas e estudos de taxonomia.

    Abstract in English:

    Endophytic bacteria play an important role in agriculture by improving plant performance and adaptation against biotic and abiotic stresses. In the present study molecular methods were used for identifying Bacillus endophytic bacteria isolated from Brazilian sweet corn. SDS-PAGE of wholecell protein extract of fortytwo isolates revealed a high number of scrutinable bands. Twenty-four isolates were identified in nine different groups of duplicated bacteria and eighteen were identified as unique. Some high-accumulated polipeptides with variable length were observed in almost isolates. Partial sequencing of 16S ribosomal gene revealed that all isolates are Bacillus sp. and among thirteen isolates with similar protein profiles, two were different strains. Among the forty-two isolates identified by rDNA sequencing, Bacillus subitilis and B. pumilus were the most frequenty species (15 and 12 isolates, respectively) followed by B. licheniformes (7 isolates), B. cereus (5 isolates) and B. amiloliquefascens (3 isolates). According to present results, SDS-PAGE technique could be used as a fast and cheap first tool for identifying interspecific variation in maize endophytic bacterial collections while rDNA sequencing could be applied for analyzing intraspecific variation among isolates with similar protein profile as well as for taxonomic studies.
  • Determination of the antibacterial activity of crude extracts and compounds isolated from Hortia oreadica (Rutaceae) against oral pathogens General Microbiology

    Severino, Vanessa Gisele Pasqualotto; Silva, Maria Fátima das Graças Fernandes da; Lucarini, Rodrigo; Montanari, Lilian Bueno; Cunha, Wilson Roberto; Vinholis, Adriana Helena Chicharo; Martins, Carlos Henrique Gomes

    Abstract in Portuguese:

    Extratos brutos de Hortia oreadica, forneceram quatro derivados do ácido diidrocinâmico, que foram isolados do extrato n-hexânico, bem como as substâncias guianina e dictamina, isoladas do extrato em diclorometano. Os extratos brutos e as substâncias isoladas foram avaliados frente a alguns patógenos bucais com o objetivo de investigar a atividade antibacteriana. Os resultados demonstraram que o extrato bruto n-hexânico e a substância dictamina foram os mais ativos frente ao conjunto de microrganismos avaliados.

    Abstract in English:

    Extracts from Hortia oreadica afforded four dihydrocinnamic acid derivatives, isolated from the n-hexane extract, as well as limonoid guyanin and the furoquinoline alkaloid dictamnine, both isolated from the dichloromethane extract. The extracts and the isolated compounds were tested against some oral pathogens, so as to investigate their antibacterial activity. The results showed that the n-hexane extract and the compound dictamnine are the most active against the selected microorganisms.
  • Evaluation of the sterilization efficacy of domestic electric drills used in orthopaedic surgeries General Microbiology

    Goveia, Vania Regina; Pinto, Flavia Morais Gomes; Machoshvili, Irene Alexeevna; Penna, Thereza Christina Vessoni; Graziano, Kazuko Uchikawa

    Abstract in Portuguese:

    Estima-se que há mais de 50 anos, as furadeiras elétricas têm sido empregadas em cirurgias ortopédicas nos hospitais brasileiros para a perfuração óssea. Trata-se de equipamento elétrico, termossensível, não indicado para uso cirúrgico, não avaliado anteriormente quanto à eficácia da esterilização, suspeitando-se de risco para infecções. Esse estudo avaliou a eficácia da esterilização por óxido de etileno (ETO) de furadeiras novas intencionalmente contaminadas com esporos de Bacillus atrophaeus. Foi desenvolvida pesquisa experimental, laboratorial, randomizada e aplicada onde foram analisadas 16 furadeiras elétricas, além de controle positivo e negativo. Todos os equipamentos previamente limpos e esterilizados foram submetidos à contaminação com esporos. O grupo experimental foi submetido à limpeza e esterilização por ETO e teste de esterilidade por filtração por membrana de 0,45 µm. As membranas foram cultivadas e para resultados positivos foram realizadas coloração de Gram e Wirtz-Conklin para visualização dos esporos. Foi comprovada a eficiência de 99,99999881% do processo de esterilização por ETO, com a probabilidade de sobrevivência de 1,19 x 10-8. Nas condições do desenvolvimento do experimento, a eficácia da esterilização das FE por ETO foi comprovada.

    Abstract in English:

    It is estimated that electric drills (ED) have been used in orthopaedic surgeries for bone drilling for more than 50 years in Brazilian hospitals. It is an electric, thermosensitive equipment, not indicated for surgical use, which has not been previously evaluated regarding the sterilization efficacy, being suspect of infection risk. This study evaluated the efficacy of sterilization by ethylene oxide (EtO) of new drills that were intentionally contaminated with Bacillus atrophaeus spores. An experimental, laboratory, randomized applied research was developed, where 16 electric drills were analyzed, in addition to positive and negative controls. All the previously cleaned and sterilized equipment were submitted to contamination by spores. The experimental group was submitted to cleaning and sterilization by EtO and test of sterility by filtration through a 0.45 µm membrane. The membranes were cultivated and Gram and Wirtz-Conklin staining were carried out in positive results for spore visualization. An efficacy of 99.99999881% of the process of sterilization by EtO was confirmed, with a probability of survival of 1.19 x 10-8. Under the development conditions of the experiment, the efficacy of the sterilization of ED by EtO was confirmed.
  • Bacteriophage: laboratorial diagnosis and phage therapy General Microbiology

    Silva, Joas L. Da; Hirata, Rosario D.C.; Hirata, Mario H.

    Abstract in Portuguese:

    Bacteriófagos têm sido pesquisados como uma alternativa ao uso de antibióticos. Estes vírus infectam as bactérias e utilizam a maquinaria celular para multiplicar o próprio material genético. O estudo de bacteriófagos no Brasil levará ao desenvolvimento de tratamentos de baixo custo, novos testes diagnósticos e vantagens para a industria alimentícia.

    Abstract in English:

    Bacteriophages have been researched as a new alternative to antibiotics. These viruses inject their genetic material into bacteria and use their host machinery to multiply themselves. The research of bacteriophages in Brazil will certainly provide low-cost treatment of multidrug resistant bacteria, new microbiological diagnosis and advantages for the Brazilian food industry.
  • Aggregatibacter actinomycetemcomitansarcB influences hydrophobic properties, biofilm formation and adhesion to hydroxyapatite General Microbiology

    Longo, PL; Ota-Tsuzuki, C; Nunes, ACR; Fernandes, BL; Mintz, K; Fives-Taylor, P; Mayer, MPA

    Abstract in Portuguese:

    A regulação da expressão gênica do patógeno oral Aggregatibacter actinomycetemcomitans não está completamente descrita. O sistema de dois componentes ArcAB permite que bactérias anaeróbias facultativas percebam diferenças nas condições respiratórias durante sua multiplicação e adaptem a expressão de genes à estas condições. Este estudo investigou em A. actinomycetemcomitans o papel de arcB na regulação da formação de biofilme, aderência à hidroxiapatita recoberta por saliva (SHA) e nas propriedades hidrofóbicas celulares. Estas características fenotípicas foram determinadas para uma linhagem de A. actinomycetemcomitans deficiente em arcB e para uma linhagem selvagem. Foram observadas diferenças nas propriedades hidrofóbicas entre as linhagens quando estas foram cultivadas em ambiente microaerófilo até início e final de fase exponencial e quando foram cultivadas em ambiente anaeróbio até final de fase exponencial. A linhagem arcB mutante formou menos biofilme do que a linhagem selvagem quando estas foram cultivadas sob incubação anaeróbica, porém, apresentou maior formação de biofilme quando a incubação foi realizada em condições de microaerofilia. A aderência à SHA apresentada pela linhagem mutante foi significantemente menor do que a observada pela linhagem selvagem. Estes estudos sugerem que a quinase sensora arcB, em A. actinomycetemcomitans, percebe as condições redox de multiplicação e regula a expressão de componentes de superfície bacterianos relacionados à formação de biofilme e adesão a superfícies recobertas com saliva.

    Abstract in English:

    The regulation of gene expression in the oral pathogen Aggregatibacter actinomycetemcomitans is still not fully elucidated. ArcAB is a two-component system which allows facultative anaerobic bacteria to sense various respiratory growth conditions and adapt their gene expression accordingly. This study investigated in A. actinomycetemcomitans the role of arcB on the regulation of biofilm formation, adhesion to saliva coated hydroxyapatite (SHA) and the hydrophobic properties of the cell. These phenotypic traits were determined for an A. actinomycetemcomitansarcB deficient type and a wild type strain. Differences in hydrophobic properties were shown at early and late exponential growth phases under microaerobic incubation and at late exponential phase under anaerobiosis. The arcB mutant formed less biofilm than the wild type strain when grown under anaerobic incubation, but displayed higher biofilm formation activity under microaerobic conditions. The adherence to SHA was significantly lower in the mutant when compared with the wild type strain. These results suggest that the transmembrane sensor kinase arcB, in A. actinomycetemcomitans, senses redox growth conditions and regulates the expression of surface components of the bacterial cell related to biofilm formation and adhesion to saliva coated surfaces.
  • Biotransformation of a cage-like diels-alder adduct and derivatives by Mucor ramosissimus samutsevitsch General Microbiology

    Ito, Felicia Megumi; Mena, Ana Elisa Maciel; Marques, Maria Rita; Lima, Dênis Pires de; Beatriz, Adilson

    Abstract in Portuguese:

    Neste trabalho avaliou-se a capacidade de biotransformação do aduto de Diels-Alder triciclo[6.2.1.0(2-7)]undeca-4,9-dien-3,6-diona (1) e dois derivados sintéticos pelo fungo sapróbio Mucor ramosissimus Samutsevitsch. Produtos de oxidação, isomerização e redução regiosseletiva e enantiosseletiva foram obtidos.

    Abstract in English:

    The present study aimed to evaluate the ability for biotransformation of the Diels-Alder adduct tricyclo[6.2.1.0(2,7)]undeca-4,9-dien-3,6-dione (1) and two synthetic derivatives by the saprobe fungus Mucor ramosissimus Samutsevitsch. Products from oxidation, isomerization and, regioselective and enantioselective reduction were achieved.
  • Occurrence of Salmonella spp. in broiler chicken carcasses and their susceptibility to antimicrobial agents Food Microbiology

    Duarte, Dalila Angélica Moliterno; Ribeiro, Aldemir Reginato; Vasconcelos, Ana Mércia Mendes; Santos, Sylnei Barros; Silva, Juliana Vital Domingos; Andrade, Patrícia Lúcia Arruda de; Falcão, Lúcia Sadae Pereira da Costa de Arruda

    Abstract in Portuguese:

    O presente estudo teve como objetivo verificar a ocorrência de Salmonellae em amostras de carcaças de frango e a suscetibilidade dos isolados a agentes antimicrobianos. Das 260 carcaças analisadas, 25 (9,6%) foram positivas para Salmonella. Salmonella Enteritidis foi o sorovar predominante. Com relação à suscetibilidade a agentes antimicrobianos, 94,7% das cepas de Salmonella testadas, apresentaram resistência a um ou mais agentes antimicrobianos. Os perfís de resistência mais comumente observados entre os isolados foram a resistência à estreptomicina (73,7%), nitrofurantoína (52,3%), tetraciclina (31,6%) e ácido nalidíxico (21%).

    Abstract in English:

    The present study was carried out to evaluate the occurrence of Salmonellae in broiler chicken carcasses and to determine the antimicrobial resistance profile of the isolated strains. Twenty-five out of the 260 broiler chicken carcasses samples (9.6%) were positive for Salmonella. S. Enteritidis was the most frequent serovar. Nineteen Salmonella isolates were tested for antimicrobial resistance, and the results indicated that 94.7% were resistant to at least one antimicrobial agent. Resistance to streptomycin (73.7%), nitrofurantoin (52.3%), tetracycline (31.6%), and nalidixic acid (21%) were the prevalent amongst Salmonella strains tested.
  • Characterization of Listeria monocytogenes isolated from a fresh mixed sausage processing line in Pelotas-RS by PFGE Food Microbiology

    von Laer, Ana Eucares; Lima, Andréia Saldanha de; Trindade, Paula dos Santos; Andriguetto, Cristiano; Destro, Maria Teresa; Silva, Wladimir Padilha da

    Abstract in Portuguese:

    Listeria monocytogenes é uma bactéria com capacidade de formar biofilmes e de colonizar superfícies de equipamentos e utensílios. Esse microrganismo pode persistir por longos períodos em plantas de processamento de alimentos, sendo capaz de contaminar o produto final. O objetivo deste estudo foi traçar a rota de contaminação de L. monocytogenes em uma linha de processamento de lingüiça mista frescal, desde a matéria-prima até o produto final. Os isolados obtidos foram caracterizados por sorotipagem e por tipagem molecular, através de Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), usando as enzimas de restrição ApaI and AscI. L. monocytogenes foi detectada em 25% das amostras. Nenhuma amostra da matéria-prima apresentava o patógeno, entretanto, o microrganismo foi detectado em 21% das amostras ambientais (com e sem contato com o alimento), 20,8% dos equipamentos, 20% das amostras de mãos de manipuladores, 40% da massa pronta para o embutimento, e em todas as amostras do produto final. Isso demonstra que a contaminação do produto final ocorreu durante o processamento, e a importância da contaminação cruzada. PFGE produziu 22 pulsotipos e a sorotipagem produziu 3 sorotipos e 1 sorogrupo, entretanto, a presença dos sorotipos 4b e 1/2b no produto final é de grande importância para a saúde pública. Os perfis de macrorestrição mostraram que algumas cepas são adaptadas e persistiram no ambiente de processamento dessa indústria.

    Abstract in English:

    Listeria monocytogenes is a bacterium capable to adhere to the surfaces of equipment and utensils and subsequently form biofilms. It can to persist in the food processing environmental for extended periods of time being able to contaminate the final product. The aim of this study was to trace the contamination route of L. monocytogenes on a fresh mixed sausage processing line, from raw material to the final product. The isolates obtained were characterized by serotyping and molecular typing by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using the restriction enzymes ApaI and AscI. L. monocytogenes was detected in 25% of the samples. The samples of raw material were not contaminated, however, the microorganism was detected in 21% of the environmental samples (food contact and non-food contact), 20.8% of the equipments, 20% of the food worker's hands, 40% of the mass ready to packaging and in all the final products samples, demonstrating that the contamination of final product occurred during the processing and the importance of cross contamination. PFGE yielded 22 pulsotypes wich formed 7 clusters, and serotyping yielded 3 serotypes and 1 serogroup, however, the presence of serotypes 4b and 1/2b in the final product is of great concern for public health. The tracing of contamination showed that some strains are adapted and persisted in the processing environment in this industry.
  • Potential of chitosan from Mucor rouxxi UCP064 as alternative natural compound to inhibit Listeria monocytogenes Food Microbiology

    Bento, Roberta A.; Stamford, Tânia L.M.; Campos-Takaki, Galba M. de; Stamford, Thayza C.M.; Souza, Evandro L. de

    Abstract in Portuguese:

    Listeria monocytogenes apresentase como um microrganismo amplamente distribuído na natureza, sendo que a infecção listeriose é reconhecida como uma potencial ameaça a saúde humana devido a sua taxa de mortalidade. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de crescimento e de produção de quitosana por Mucor rouxxi UCP 064 cultivado em meio jacatupé (Pachyrhizus erosus L. Urban), bem como avaliar a eficácia anti-L. monocytogenes da quitosana produzida com vistas a uma possível aplicação em alimentos. Os mais elevados valores de biomassa de M. rouxxi (16,9 g.L¹) e o maior rendimento na produção de quitosana (62 mg.g-1) foram encontrados após 48 horas de cultivo. As quantidades residuais de glicose e nitrogênio no meio de crescimento após 96 horas foram 4,1 e 0,02 g.L¹ , respectivamente. A quitosana obtida apresentou grau de deacetilação de 85% e peso molecular de 2,6 x 10(4) g.mol-1. Os valores da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) da quitosana sobre L. monocytogenes ATCC 7664 foram, respectivamente, 2,5 e 5,0 mg.mL-1. Nas concentrações de 2,5 e 5,0 mg.mL-1a quitosana fúngica causou um efeito bactericida em um tempo máximo de 4 horas. Valores de contagens menores que 2 log ufc.mL-1foram encontrados a partir de 2 horas, sendo que nenhuma recuperação no crescimento bacteriano foi encontrado até 96 horas. Estes resultados mostram o potencial biotecnológico do meio jacatupé para produção de quitosana por Mucor rouxxi, bem como suportam o possível uso racional de quitosana fúngica como antimicrobiano natural para controlar o crescimento de L. monocytogenes.

    Abstract in English:

    Listeria monocytogenes is widely distributed in nature and the infection listeriosis is recognized as a potential threat for human health because of its mortality rate. The objective of this study was to evaluate the growth profile and chitosan production by Mucor rouxxi UCP 064 grown in yam bean (Pachyrhizus erosus L. Urban) medium. It was also to assess the anti-L. monocytogenes efficacy of the obtained chitosan. Higher values of biomass of M. rouxxi (16.9 g.L¹) and best yield of chitosan (62 mg.g-1) were found after 48 h of cultivation. Residual glucose and nitrogen in the growth media were 4.1 and 0.02 g.L¹ after 96 h, respectively. Obtained chitosan presented 85 % of degree of deacetylation and 2.60 x 10(4) g.mol-1of viscosimetric molecular weight. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) values of chitosan against L. monocytogenes ATCC 7644 were, respectively, 2.5 and 5.0 mg.mL-1. At 2.5 and 5.0 mg.mL-1 chitosan caused cidal effect in a maximum time of 4 h. Bacterial count below 2 log cfu.mL-1were found from 2 h onwards and no recovery in bacterial growth was noted in the remainder period. These results show the biotechnological potential of yam bean medium for chitosan production by Mucor rouxxi and support the possible rational use of chitosan from fungi as natural antimicrobial to control L. monocytogenes.
  • Microbial diversity in a bagasse-based compost prepared for the production of Agaricus brasiliensis Food Microbiology

    Silva, Cristina Ferreira; Azevedo, Raquel Santos; Braga, Claudia; Silva, Romildo da; Dias, Eustáquio Souza; Schwan, Rosane Freitas

    Abstract in Portuguese:

    Os cogumelos comestíveis são apreciados pelas suas propriedades nutricionais e medicinais e, por essa razão, possuem alto valor econômico. A produção de cogumelos depende da composição química dos substratos básicos, dos suplementos utilizados e da preparação do composto no qual o fungo será cultivado. Considerando-se que os custos de produção precisam ser minimizados, os resíduos agroindustriais representam uma fonte alternativa e econômica para a preparação do composto. A interação da microbiota natural dos resíduos agrícolas durante o processo de compostagem influencia a subseqüente colonização do cogumelo. Visando-se a produção de A. brasiliensis, o presente trabalho objetivou isolar e identificar a microbiota presente no composto preparado a partir de bagaço de cana e capim coast-cross. O processo de compostagem durou 14 dias com reviragens da pilha a cada dois dias, o qual foi seguido de pasteurização (55 65 ºC) em duas fases por 15 h cada. As bactérias (principalmente Bacillus, Paenibacillus e espécies da família Enterobacteriaceae) foram os microrganismos predominantes durante todo o processo com uma densidade populacional média de 3.0 x 10(8) UFC/g. Os actinomicetos, principalmente os do gênero Streptomyces, estiveram bem representados, com uma densidade populacional de 2.0 a 3.0 x 10(8) UFC/g. Os fungos filamentosos foi a classe de microrganismos com menor densidade populacional e menor diversidade, embora a espécie Aspergillus fumigatus esteve presente durante todo o processo de compostagem e também após a pasteurização do composto.

    Abstract in English:

    Edible mushrooms are renowned for their nutritional and medicinal properties and are thus of considerable commercial importance. Mushroom production depends on the chemical composition of the basic substrates and additional supplements employed in the compost as well as on the method of composting. In order to minimise the cost of mushroom production, considerable interest has been shown in the use of agro-industrial residues in the preparation of alternative compost mixtures. However, the interaction of the natural microbiota present in agricultural residues during the composting process greatly influences the subsequent colonisation by the mushroom. The aim of the present study was to isolate and identify the microbiota present in a sugar cane bagasse and coast-cross straw compost prepared for the production of Agaricus brasilienses. Composting lasted for 14 days, during which time the substrates and additives were mixed every 2 days, and this was followed by a two-step steam pasteurisation (55 - 65ºC; 15 h each step). Bacteria, (mainly Bacillus and Paenibacillus spp. and members of the Enterobacteriaceae) were the predominant micro-organisms present throughout the composting process with an average population density of 3 x 10(8) CFU/g. Actinomycetes, and especially members of the genus Streptomyces, were well represented with a population density of 2 - 3 x 10(8) CFU/g. The filamentous fungi, however, exhibited much lower population densities and were less diverse than the other micro-organisms, although Aspergillus fumigatus was present during the whole composting process and after pasteurisation.
  • Microbial modeling of thermal resistance of Alicyclobacillus acidoterrestris CRA7152 spores in concentrated orange juice with nisin addition Food Microbiology

    Peña, Wilmer Edgard Luera; Massaguer, Pilar Rodriguez de; Teixeira, Luciano Quintão

    Abstract in Portuguese:

    Estudou-se o efeito da nisina na inativação térmica dos esporos de Alicyclobacillus acidoterrestris CRA 7152 em suco de laranja concentrado (64 ºBrix). Foram avaliadas as concentrações de 0, 50, 75 e 100 UI de nisina/ml de suco nas temperaturas de 92, 95, 98 e 102 ºC. Foi utilizado o modelo polinomial quadrático para analisar os efeitos dos fatores e suas interações. A contagem dos esporos sobreviventes foi feita através de plaqueamento em meio K (pH = 3,7). De acordo com os resultados obtidos encontrouse um valor de D sem adição de nisina de 25,5; 12,9; 6,1 e 2,3 min para as temperaturas de 92, 95, 98 e 102 ºC respectivamente. Quando a nisina foi adicionada ao suco observouse uma queda na resistência térmica em função do aumento da concentração de nisina para os mesmos valores de temperatura. Ao utilizar as concentrações de 30, 50, 75 e 150 IU/ml a 95 ºC, o valor de D obtido foi de 12,34; 11,38; 10,49; 9,49; e 9,42 min respectivamente demonstrando que a adição de nisina provoca um decréscimo de até 27 % no valor de D. O modelo polinomial de segunda ordem ajustado com r² = 0,995 mostrou que a resistência do microorganismo foi afetada pela temperatura seguida da concentração de nisina. A adição de nisina é, portanto, uma alternativa para reduzir o rigor do tratamento térmico em A. acidoterrestris CRA 7152.

    Abstract in English:

    The nisin effect on thermal death of Alicyclobacillus acidoterrestris CRA 7152 spores in concentrated orange juice (64ºBrix) was studied. Concentrations of 0, 50, 75 and 100 IU of nisin/ml juice, at temperatures of 92, 95, 98 and 102ºC were evaluated. The quadratic polynomial model was used to analyze the effects of the factors and their interaction. Verification of surviving spores was carried out through plating in K medium (pH 3.7). The results showed that the D values without nisin addition were 25.5, 12.9, 6.1 and 2.3 min for 92, 95, 98 and 102ºC respectively. With addition of nisin into the juice there was a drop of heat resistance as the concentration was increased at a same temperature. With 30, 50, 75, 100 and 150 IU/ml at 95ºC, the D values were 12.34, 11.38, 10.49, 9.49 and 9.42 min respectively, showing that a decrease in the D value up to 27% can be obtained. The second order polynomial model established with r² = 0.995 showed that the microorganism resistance was affected by the action of temperature followed by the nisin concentration. Nisin therefore is an alternative for reducing the rigor of the A. acidoterrestris CRA 7152 thermal treatment.
  • Production of thermostable invertases by Aspergillus caespitosus under submerged or solid state fermentation using agroindustrial residues as carbon source Food Microbiology

    Alegre, Ana Cláudia Paiva; Polizeli, Maria de Lourdes Teixeira de Moraes; Terenzi, Héctor Francisco; Jorge, João Atílio; Guimarães, Luis Henrique Souza

    Abstract in Portuguese:

    O fungo filamentoso Aspergillus caespitosus foi um bom produtor de invertases intracelular e extracelular em fermentação submersa (FSbm) ou em estado sólido (FES), usando resíduos agroindustriais como fonte de carbono, sendo que para ambas as condições de cultivo, a maior produtividade foi obtida empregandose farelo de trigo. A produção da forma extracelular em FES mantido a 30ºC, por 72 horas, foi aumentada usandose solução de sais SR (1:1, m/v) para umidificar o substrato, sendo aproximadamente 5,5 vezes maior se comparada a FSbm (Meio Khanna) com a mesma fonte de carbono. Entretanto, a mistura de farelo de trigo e farinha de aveia em FES levou a um aumento de 2,2 vezes na produção enzimática se comparada ao uso isolado do farelo de trigo. A produção enzimática, em ambas as condições de cultivo, foi afetada pela adição suplementar de fontes de nitrogênio e fosfato. A adição de glicose em FSbm e em FES promoveu a diminuição da enzima extracelular, mas favoreceu um acúmulo intracelular de 35 vezes maior. A temperatura ótima de atividade para as invertases produzidas em FES e em FSbm foi de 50ºC e 60ºC, respectivamente, sendo estáveis a 50ºC por mais de 60 minutos. Todas as formas enzimáticas apresentaram atividade máxima em uma faixa de pH de 4.0-6.0.

    Abstract in English:

    The filamentous fungus Aspergillus caespitosus was a good producer of intracellular and extracellular invertases under submerged (SbmF) or solid-state fermentation (SSF), using agroindustrial residues, such as wheat bran, as carbon source. The production of extracellular enzyme under SSF at 30ºC, for 72h, was enhanced using SR salt solution (1:1, w/v) to humidify the substrate. The extracellular activity under SSF using wheat bran was around 5.5-fold higher than that obtained in SbmF (Khanna medium) with the same carbon source. However, the production of enzyme with wheat bran plus oat meal was 2.2-fold higher than wheat bran isolated. The enzymatic production was affected by supplementation with nitrogen and phosphate sources. The addition of glucose in SbmF and SSF promoted the decreasing of extracellular activity, but the intracellular form obtained in SbmF was enhanced 3-5-fold. The invertase produced in SSF exhibited optimum temperature at 50ºC while the extraand intracellular enzymes produced in SbmF exhibited maximal activities at 60ºC. All enzymatic forms exhibited maximal activities at pH 4.0-6.0 and were stable up to 1 hour at 50ºC.
  • Production, purification and application of extracellular chitinase from Cellulosimicrobium cellulans 191 Industrial Microbiology

    Fleuri, Luciana F.; Kawaguti, Haroldo Y.; Sato, Hélia H.

    Abstract in Portuguese:

    O presente estudo visou a produção, purificação e aplicação da quitinase extracelular da linhagem Cellulosimicrobium cellulans 191. A maior produção de quitinase em frascos agitados foi 6,9 U/mL após 72 h de fermentação a 25ºC e 200 rpm. Em fermentador de 5 L utilizando aeração de 1,5 vvm, a maior atividade da enzima foi 4,19 U/mL após 168 h de fermentação a 25ºC e 200 rpm; e com 3 vvm, foi obtido 4,38 U/mL após 144 h de fermentação. A quitinase (61 KDa) foi purificada cerca de 6,65 vezes em coluna de filtração em gel Sepharose CL 4B 200 com um rendimento de 46,61%. A enzima purificada foi capaz de lisar a parede celular de alguns fungos e formar protoplastos.

    Abstract in English:

    This study concerned the production, purification and application of extracellular chitinase from Cellulosimicrobium cellulans strain 191. In shaken flasks the maximum yield of chitinase was 6.9 U/mL after 72 h of cultivation at 25ºC and 200 rpm. In a 5 L fermenter with 1.5 vvm aeration, the highest yield obtained was 4.19 U/mL after 168 h of fermentation at 25ºC and 200 rpm, and using 3 vvm, it was 4.38 U/mL after 144 h of fermentation. The chitinase (61 KDa) was purified about 6.65 times by Sepharose CL 4B 200 gel filtration with a yield of 46.61%. The purified enzyme was able to lyse the cell walls of some fungi and to form protoplasts.
  • Obtaining partial purified xylose reductase from Candida guilliermondii Industrial Microbiology

    Tomotani, Ester Junko; Arruda, Priscila Vaz de; Vitolo, Michele; Felipe, Maria das Graças de Almeida

    Abstract in Portuguese:

    A bioconversão enzimática da xilose em xilitol pela xilose redutase (XR) é uma alternativa para as vias química e microbiológica. Avaliouse a purificação parcial da XR, utilizando os três seguintes procedimentos: uma coluna de agarose, um reator com membrana ou tubos de ultracentrifugação Amicon Ultra-15 50K, com rendimento de 40%, 7% ou 67%, respectivamente.

    Abstract in English:

    The enzymatic bioconversion of xylose into xylitol by xylose reductase (XR) is an alternative for chemical and microbiological processes. The partial purified XR was obtained by using the following three procedures: an agarose column, a membrane reactor or an Amicon Ultra-15 50K Centrifugal Filter device at yields of 40%, 7% and 67%, respectively.
  • Exo-polygalacturonase production by Bacillus subtilis CM5 in solid state fermentation using cassava bagasse Industrial Microbiology

    Swain, Manas R.; Kar, Shaktimay; Ray, Ramesh C.

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo desta investigação foi estudar a produção de exo-poligalacturonase (exo-PG) por Bacillus subtilis CM5 por fermentação em estado sólido empregando bagaço de mandioca. Empregou-se a metodologia de superfície de resposta para avaliar o efeito de quatro variáveis na produção da enzima: período de incubação, pH inicial do meio, MHC e temperatura de incubação. Os resultados experimentais mostraram que os ótimos de temperatura, período de incubação, MHC e temperatura para produção de exo-PG foram seis dias, 7,0, 70% e 50ºC, respectivamente.

    Abstract in English:

    The purpose of this investigation was to study the effect of Bacillus subtilis CM5 in solid state fermentation using cassava bagasse for production of Exo-polygalacturonase (exo-PG). Response surface methodology was used to evaluate the effect of four main variables, i.e. incubation period, initial medium pH, moisture holding capacity (MHC) and incubation temperature on enzyme production. A full factorial Central Composite Design was applied to study these main factors that affected exo-PG production. The experimental results showed that the optimum incubation period, pH, MHC and temperature were 6 days, 7.0, 70% and 50ºC, respectively for optimum exo-PG production.
  • A thin layer electrochemical cell for disinfection of water contaminated with Staphylococcus aureus Industrial Microbiology

    Gusmão, Isabel C. P.; Moraes, Peterson B.; Bidoia, Ederio D.

    Abstract in Portuguese:

    Uma célula eletroquímica de camada delgada foi utilizada e desenvolvida para a desinfecção de água contaminada artificialmente com Staphylococcus aureus. A eletrólise foi executada com uma fonte de corrente direta utilizando 75 mA cm-2 (3 A) ou 25 mA cm-2 (1 A). Um anodo dimensionalmente estável (DSA) de titânio revestido com uma camada do óxido de 70%TiO2 e 30%RuO2 (w/w) e distanciado por 3 milímetros de um catodo de aço inoxidável 304 foi utilizado para gerar uma camada delgada de suspensão bacteriana passando pela célula de camada delgada. As suspensões utilizadas eram feitas apenas com Na2SO4 0,08 M e livre de íons cloretos de forma a inativar as células bacterianas no tratamento eletroquímico sem a geração de cloro, este pode promover a formação dos trialometanos (THM). As taxas de fluxo em recirculação foram 200 ou 500 L h-1. A inativação do S. aureus aumentou com o tempo de eletrólise e a uma taxa de fluxo menor. Assim, a inativação de 100% para o S. aureus foi observada após 30 min a 5,6 V e 75 mA cm-2. Em 500 L h-1 e 75 mA cm-2 a inativação decresceu em três logs de unidades formadoras de colônias por mL após 60 min. O tratamento eletroquímico utilizando uma camada delgada promove a desinfecção completa de S. aureus sem a necessidade de adicionar substâncias oxidantes ou a geração de cloro.

    Abstract in English:

    A thin layer electrochemical cell was tested and developed for disinfection treatment of water artificially contaminated with Staphylococcus aureus. Electrolysis was performed with a low-voltage DC power source applying current densities of 75 mA cm-2(3 A) or 25 mA cm-2 (1 A). A dimensionally stable anode (DSA) of titanium coated with an oxide layer of 70%TiO2 plus 30%RuO2 (w/w) and a 3 mm from a stainless-steel 304 cathode was used in the thin layer cell. The experiments were carried out using a bacteria suspension containing 0.08 M sodium sulphate with chloridefree to determine the bacterial inactivation efficacy of the thin layer cell without the generation of chlorine. The chlorine can promote the formation of trihalomethanes (THM) that are carcinogenic. S. aureus inactivation increased with electrolysis time and lower flow rate. The flow rates used were 200 or 500 L h-1. At 500 L h-1 and 75 mA cm -2 the inactivation after 60 min was about three logs of decreasing for colony forming units by mL. However, 100% inactivation for S. aureus was observed at 5.6 V and 75 mA cm-2 after 30 min. Thus, significant disinfection levels can be achieved without adding oxidant substances or generation of chlorine in the water.
  • Pseudomonas aeruginosa KUCd1, a possible candidate for cadmium bioremediation Environmental Microbiology

    Sinha, Sangram; Mukherjee, Samir Kumar

    Abstract in Portuguese:

    Descreve-se a cepa Pseudomonas aeruginosa KUCd1 resistente a cádmio (8mM) que apresenta elevado acumulo de cádmio em condições de aerobiose in vitro. Durante a fase ativa de multiplicação, a cepa apresentou capacidade de remover mais de 75% e 89% de cádmio solúvel do meio de cultura e da água residual industrial contendo Cd. A microscopia eletrônica de transmissão (TEM) e espectroscopia de raio X energia dispersiva indicaram a presença de Cd nas células na fase estacionária intermediária. O fracionamento celular indicou serem a membrana e o periplasma os pontos de maior acúmulo. A natureza química do Cd acumulado foi avaliada através de análise de difração de Raios X.

    Abstract in English:

    A cadmium (8 mM) resistant Pseudomonas aeruginosa strain KUCd1 exhibiting high Cd accumulation under in vitro aerobic condition has been reported. The isolate showed a significant ability to remove more than 75% and 89% of the soluble cadmium during the active growth phase from the growth medium and from Cd-amended industrial wastewater under growth supportive condition. Transmission electron microscopy (TEM) and energy dispersive X-ray spectroscopy (EDXS) suggest the presence of Cd in the cells from mid-stationary phase. The cell fractionation study revealed membrane and periplasm to be the major accumulating site in this strain. The chemical nature of the accumulated Cd was studied by X-ray powder diffraction analysis.
  • Rapid polyvalent screening for largescale environmental Spiroplasma surveys Environmental Microbiology

    French, Frank E.; Whitcomb, Robert F.; Williamson, David L.; Regassa, Laura B.

    Abstract in Portuguese:

    A sorologia de superfície é um determinante importante na sistemática de Spiroplasma. Reações antígeno-anticorpo entre spiroplasmas e antisoro individuais delineiam os 38 grupos e espécies descritos. No entanto, reações sorológicas são impraticáveis em estudos em larga-escala. Esse relato descreve uma metodologia de triagem bem sucedida a ser empregada no exame de isolados em levantamentos ambientais.

    Abstract in English:

    Surface serology is an important determinant in Spiroplasma systematics. Reciprocal antigen/antibody reactions between spiroplasmas and individual antisera delineate the 38 described groups and species. However, reciprocal serology is impractical for largescale studies. This report describes a successful, streamlined polyvalent screening approach used to examine isolates from an environmental survey.
  • Genetic variability of Brazilian isolates of Alternaria alternata detected by AFLP and RAPD techniques Environmental Microbiology

    Dini-Andreote, Francisco; Pietrobon, Vivian Cristina; Andreote, Fernando Dini; Romão, Aline Silva; Spósito, Marcel Bellato; Araújo, Welington Luiz

    Abstract in Portuguese:

    A mancha marrom ou mancha de Alternaria é uma doença causada pelo fungo Alternaria alternata f. sp. citri, encontrada no Brasil desde 2001 em plantas de tangerina e seus híbridos. Por se tratar de uma doença recente no Brasil, a epidemiologia e variabilidade genética deste patógeno compõem importantes pontos a serem estudados. Este trabalho teve como objetivo avaliar a variabilidade genética deste patógeno por meio da caracterização de vinte e quatro isolados de A. alternata f. sp. citri de plantas de citros juntamente com quatro isolados endofíticos de manga, sendo um deles identificado como Alternaria tenuissima e outros três como Alternaria arborescens. A análise de componentes principais (PCA) do perfil de bandas obtidos pela aplicação de duas técnicas de marcadores moleculares, Amplificação Aleatória de Polimorfismos de DNA (RAPD) e Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos Amplificados (AFLP), mostrou a formação de quatro grupos distintos. Apesar do mais amplo perfil de análise por meio da técnica de AFLP, não foi observado nenhuma modificação significativa dentro dos grandes grupos obtidos quando comparado ao RAPD, exceto no posicionamento dos isolados LRS 39/3 e 25M. Além disso, em ambas as análises, somente os isolados de plantas de limão agruparam entre si. Considerando outros hospedeiros ou tecidos de planta não foi possível encontrar grupos específicos. Concluindo, ambas as análises (RAPD e AFLP) são eficientes no estudo de variabilidade genética de Alternaria spp., fornecendo informações sobre a diversidade genética desta espécie, servindo como base para futuramente correlacionar este estudo com estudos adicionais objetivando o controle da doença.

    Abstract in English:

    The Alternaria brown spot (ABS) is a disease caused in tangerine plants and its hybrids by the fungus Alternaria alternata f. sp. citri which has been found in Brazil since 2001. Due to the recent occurrence in Brazilian orchards, the epidemiology and genetic variability of this pathogen is still an issue to be addressed. Here it is presented a survey about the genetic variability of this fungus by the characterization of twenty four pathogenic isolates of A. alternata f. sp. citri from citrus plants and four endophytic isolates from mango (one Alternaria tenuissima and three Alternaria arborescens). The application of two molecular markers Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) and Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) had revealed the isolates clustering in distinct groups when fingerprintings were analyzed by Principal Components Analysis (PCA). Despite the better assessment of the genetic variability through the AFLP, significant modifications in clusters components were not observed, and only slight shifts in the positioning of isolates LRS 39/3 and 25M were observed in PCA plots. Furthermore, in both analyses, only the isolates from lemon plants revealed to be clustered, differently from the absence of clustering for other hosts or plant tissues. Summarizing, both RAPD and AFLP analyses were both efficient to detect the genetic variability within the population of the pathogenic fungus Alternaria spp., supplying information on the genetic variability of this species as a basis for further studies aiming the disease control.
  • Low genetic diversity among pathogenic strains of Erwinia psidii from Brazil Environmental Microbiology

    Teixeira, Ana C. O.; Marques, Abi S. A.; Ferreira, Marisa A. S. V.

    Abstract in Portuguese:

    Erwinia psidii é o agente causal da seca-dos-ponteiros ou bacteriose da goiabeira no Brasil. A caracterização fenotípica e molecular através de rep-PCR de 42 estirpes patogênicas de diferentes regiões mostrou que as populações de E. psidii no Brasil têm um baixo nível de diversidade genética e sugere que material de propagação infectado é a principal fonte de disseminação do patógeno para novas áreas no país.

    Abstract in English:

    Erwinia psidii causes bacterial disease of guava in Brazil. Phenotypic and molecular characterization through rep-PCR fingerprinting of 42 strains from different geographical regions showed that E. psidii populations in Brazil have a low level of genetic diversity and suggest that contaminated plant material is the main source for pathogen dissemination in the country.
  • Molecular epidemiology of Shigella spp strains isolated in two different metropolitam areas of southeast Brazil Medical Microbiology

    Angelini, Michelle; Stehling, Eliana Guedes; Moretti, Maria Luiza; Silveira, Wanderley Dias da

    Abstract in Portuguese:

    Shigella spp., o patógeno humano responsável pela shiguelose, apresenta grande poder infeccioso, mesmo em pequenas doses. A incidência de shiguelose varia de acordo com a distribuição geográfica, o índice de desenvolvimento humano local e a faixa de idade, sendo alto entre crianças com menos de 5 anos de idade. No Brasil, alguns trabalhos indicam que os casos de shiguelose são subnotificados sendo, S. flexneri e S. sonnei os principais agentes responsáveis pelos casos ocorridos. O presente estudo usou a técnica de eletroforese em campo pulsado (PFGE) para investigar a epidemiologia molecular de 119 linhagens de S. flexneri e S. sonnei, isoladas de casos de shiguelose que ocorreram nas regiões metropolitanas das cidades de Ribeirão Preto e Campinas, estado de São Paulo, na região Sudeste do Brasil. Os resultados indicam (i) a existência de apenas alguns grupos clonais para ambas as espécies, mas com variabilidade de genótipos indicando ou um alto índice de variação genética, ou a constante introdução de vários genótipos, considerando o movimento migratório intenso de pessoas nestas duas áreas metropolitanas, e (ii) a prevalência de genótipos específicos em cada área geográfica, o que sugere a existência de genótipos com maior capacidade de adaptação às condições ambientais locais. Os resultados indicam a necessidade de barreiras sanitárias mais eficientes para prevenir surtos e epidemias de Shigella spp.

    Abstract in English:

    Shigella spp., the human pathogen responsible for shigellosis, is highly infectious even at low levels. The incidence rate of shigellosis varies with geographical distribution, location human development index, and age groups, being higher among children aged under 5 years. In Brazil, a few works indicate that shigellosis cases are underestimated, with S. flexneri and S. sonnei strains being the major agents responsible for the shigellosis cases. The present study used pulsed field gel electrophoresis (PFGE) to investigate the molecular epidemiology of 119 strains of S. sonnei and S. flexneri isolated from shigellosis cases that occurred in the metropolitan areas of Ribeirão Preto and Campinas Cities, São Paulo Sate, southeast Brazil. The results indicated (i) the existence of just a few strain clusters for both species, but with genotype variability with either a high speed of genetic change or constant introduction of several genotypes, considering the intense migration to these two metropolitan areas, and (ii) the prevalence of specific genotypes in each geographical area, which suggests the successful adaptation of some genotypes to the local environmental conditions. Our results indicate the need of more efficacious sanitary barriers to prevent Shigella spp. outbreaks and epidemics.
  • Identification, antimicrobial resistance and genotypic characterization of Enterococcus spp. isolated in Porto Alegre, Brazil Medical Microbiology

    Bender, Eduardo André; Freitas, Ana Lúcia Peixoto de; Reiter, Keli Cristine; Lutz, Larissa; Barth, Afonso Luís

    Abstract in Portuguese:

    Nas últimas duas décadas os membros do gênero Enterococcus emergiram como importantes patógenos nosocomiais ao redor do mundo. No presente estudo, nós avaliamos a resistência antimicrobiana e as características genotípicas de 203 Enterococcus spp. obtidos de diferentes fontes clínicas em dois hospitais de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil. As espécies foram identificadas por testes bioquímicos convencionais e por um sistema automatizado. A diversidade genética de E. faecalis demonstrando resistência à altos níveis de aminoglicosídeos (HLAR) foi avaliada através da análise do DNA cromossômico após digestão com a enzima SmaI, seguido por eletroforese em campo pulsado. O E. faecalis foi a espécie mais freqüente (93,6%), seguido por E. faecium (4,4%). O perfil de resistência antimicrobiana foi: 2,5% para ampicilina, 0,5% para vancomicina, 0,5% para teicoplanina, 33% para cloranfenicol, 2% para nitrofurantoína 66,1% para eritromicina, 66,5% para tetraciclina, 24,6% para rifampicina, 30% para ciprofloxacino e 87,2% para quinupristina-dalfopristina. Um total de 10,3% dos isolados apresentaram HLAR para ambos gentamicina e estreptomicina (HLR-ST/GE), sendo 23,6% resistentes somente a gentamicina (HLR-GE) e 37,4% somente a estreptomicina (HLR-ST). Um grupo clonal predominante foi encontrado em E. faecalis HLR-GE/ST. A prevalência de resistência a antibióticos ²-lactâmicos, e em particular aos glicopeptídeos, foi muito baixa. Entretanto, neste estudo, houve um número crescente de Enterococcus HLAR que podem estar se disseminando intra e interhospitais.

    Abstract in English:

    In the past two decades the members of the genus Enterococcus have emerged as important nosocomial pathogens worldwide. In the present study, we evaluated the antimicrobial resistance and genotypic characteristics of 203 Enterococcus spp. recovered from different clinical sources from two hospitals in Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. The species were identified by conventional biochemical tests and by an automated system. The genetic diversity of E. faecalis presenting high-level aminoglycoside resistance (HLAR) was assessed by pulsed-field gel electrophoresis of chromosomal DNA after SmaI digestion. The E. faecalis was the most frequent specie (93.6%), followed by E. faecium (4.4%). The antimicrobial resistance profile was: 2.5% to ampicillin, 0.5% to vancomycin, 0.5% teicoplanin, 33% to chloramphenicol, 2% to nitrofurantoin, 66.1% to erythromycin, 66.5% to tetracycline, 24.6% to rifampicin, 30% to ciprofloxacin and 87.2% to quinupristin-dalfopristin. A total of 10.3% of the isolates proved to be HLAR to both gentamicin and streptomycin (HLRST/GE), with 23.6% resistant only to gentamicin (HLR-GE) and 37.4% only to streptomycin (HLRST). One predominant clonal group was found among E. faecalis HLR-GE/ST. The prevalence of resistance among beta-lactam antibiotics and glycopeptides was very low. However, in this study there was an increased number of HLR Enterococcus which may be spreading intra and inter-hospital.
  • Proinflammatory signal transduction pathway induced by Shigella flexneri porins in caco-2 cells Medical Microbiology

    Elena, Grimaldi; Giovanna, Donnarumma; Brunella, Perfetto; Anna, De Filippis; Alessandro, Melito; Antonietta, Tufano Maria

    Abstract in Portuguese:

    O reconhecimento de componentes bacterianos nas células epiteliais intestinais ocorre através de receptores toll-like e é seguido de indução de uma resposta imune inata efetiva. Neste estudo foram analisadas as vias de expressão do receptor e sinalização envolvidas na ativação de células humanas de adenocarcinoma do colon após a estimulação com porinas e LPS de Shigella flexneri. Foram também analisadas a expressão e produção de algumas citoquinas, da molécula -1 de adesão intercelular, de ²-defensinas humanas a peptídios antimicrobianos e da forma indutível de oxido nítrico sintase. Os resultados demonstraram que TLR-2 está envolvido no reconhecimento de porinas, enquanto TLR4 com MD2 é necessário para o reconhecimento de LPS.

    Abstract in English:

    The recognition of bacterial components on the intestinal epithelial cells occurs through the toll-like receptors and is followed by the induction of an effective innate immune response. We analyzed receptor expression and signaling pathways involved in activation of human colon adenocarcinoma cells after stimulation with porins and LPS of Shigella flexneri. We also analyzed the expression and production of some cytokines, of intercellular adhesion molecule-1, of antimicrobial peptides human ²-defensins, and of the inducible form of nitric oxide synthase. Our data demonstrate that TLR2 is involved in porin recognition, whereas TLR4 with MD2, is required for LPS recognition.
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