É altamente desejável desenvolver testes analíticos com resultados de elevada qualidade e reduzir o tempo que é utilizado para esta finalidade. Neste contexto, um novo método de metilação de ácidos graxos assistido por ultra-som, rápido e eficiente para obtenção de ésteres com melhor qualidade para análise de alimentos, foi otimizado e validado através da aplicação da metodologia de superfície de resposta, sendo obtido um tempo de esterificação ideal de 11,72 min, 71% mais rápido do que o melhor método, que é comumente utilizado para esta finalidade. O novo processo de metanólise pode ser eficazmente aplicado a amostras com ácidos graxos livres e os teores de umidade superior a 10 e 5%, respectivamente, sem o risco de oxidação de compostos durante o processo.