Neste trabalho são descritos o isolamento e a identificação de eupafolina e hispidulina das folhas secas de Eupatorium littorale (Asteraceae). Foi desenvolvido também um método para a detecção desses flavonóides e de rutina na planta, utilizando a técnica de CLAE em fase reversa com detetor de arranjo de fotodiodos. Eupafolina e hispidulina foram quantificados sendo encontradas as concentrações de 0,29% e 0,21%, respectivamente.