Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial, Volume: 42, Issue: 6, Published: 2006
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  • Espectrômetro de massa: um novo instrumento analítico para o laboratório clínico Editorial

    Fonseca, Armando A.
  • Frequency of individuals with impaired fasting glucose in a university hospital: comparison of diagnostic criteria Medicina Laboratorial

    Cipriano, Dilênia de Oliveira; Lima, Heidy Vieira; Souza, Ana Aparecida dos Santos; Silva, Maria Cleide Freire Clementino da; Santos, Ana Célia Oliveira dos

    Abstract in Portuguese:

    A intolerância à glicose de jejum (IGJ), uma condição metabólica que na maioria das vezes precede o diabetes, geralmente não causa sintomas, necessitando da dosagem da glicemia de jejum para ser diagnosticada. Em 2003, o Comitê de Especialistas em Diagnóstico e Classificação do Diabetes Mellitus (Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus) recomendou a redução do ponto de corte para o diagnóstico da IGJ de 110mg/dl para 100mg/dl, endossado pela Sociedade Brasileira de Diabetes (SBD), em 2005. No entanto ainda não há consenso sobre a adoção desses valores. O objetivo deste estudo foi avaliar a freqüência de pacientes com IGJ atendidos, de agosto a novembro de 2005, no Hospital Universitário Oswaldo Cruz da Universidade de Pernambuco (HUOC/UPE), comparando os critérios de diagnóstico. Foram avaliadas glicemias de 428 indivíduos, sendo 65% do sexo feminino. A média de idade dos pacientes foi de 52,3 anos (± 15,4), sendo que 78,3% desses estavam na faixa etária 40 anos. Do total da amostra, 4% tiveram glicemia de jejum sugestiva de diabetes ( 126mg/dl), enquanto 7% dos resultados foram compatíveis com IGJ, segundo os critérios anteriormente adotados ( 110mg/dl e < 126mg/dl), e esses pacientes tinham idade 40 anos. Porém, utilizando os novos critérios de diagnóstico ( 100mg/dl e < 126mg/dl), a incidência de indivíduos com IGJ passou para 14,7% e a faixa etária dos indivíduos acometidos para 20 anos. Esses resultados indicam maior sensibilidade na detecção de pacientes com IGJ, após redefinição dos critérios de diagnóstico, nas faixas etárias avaliadas.

    Abstract in English:

    Impaired fasting glucose (IFG), a condition that most times precedes diabetes, generally does not produce any symptoms. In 2003, the Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus recommended a lower cutoff point (from 110mg/dl to 100mg/dl) for fasting plasma glucose to confirm its diagnosis, a measure officially endorsed by the Brazilian Society of Diabetes (BSD) in 2005. The objective of this study was to evaluate the frequency of patients who presented IFG seen at the State University Hospital Oswaldo Cruz, utilizing both criteria of diagnosis, from August to November 2005. The sample consisted of 428 individuals, 65% of whom were females, with a mean age of 52.3 years (± 15.4) and a percentage of 78.3% of this population were 40 years old. From the total sample, 4% presented a fasting glucose level suggestive of diabetes ( 126mg/dl), while 7% presented glycemia values between 110mg/dl and < 126mg/dl, all of these patients were aged 40 years. The new criteria proposed for the diagnosis of IFG showed that the frequency of IFG patients has increased to 14.7% and their age has fallen to > 20. These results suggest, with this new diagnosis criterion, a higher sensibility in the detection of IFG among subjects in the age range studied.
  • Prevalence of thalassemias and variant hemoglobins in the state of Goiás, Brazil Medicina Laboratorial

    Melo-Reis, Paulo Roberto de; Naoum, Paulo Cesar; Diniz-Filho, José Alexandre Felizola; Dias-Penna, Karlla Greick Batista; Mesquita, Mauro Meira de; Balestra, Fernando Amorim; Ternes, Yves Mauro Fernandes; Mascarenhas, Cíntia do Couto; Chen, Lee Chen

    Abstract in Portuguese:

    As anemias hereditárias, em especial as talassemias e hemoglobinas (Hb) variantes, são as mais comuns das alterações genéticas humanas; sua freqüência na população brasileira é muito variável, dependendo dos grupos raciais formadores de cada região. O povoamento de Goiás, que teve início logo após o seu descobrimento, em 1726, motivado pela procura de ouro, foi composto principalmente por portugueses e escravos africanos, contexto que favoreceu a mestiçagem entre eles. Considerando que esses povos apresentam genes para as hemoglobinas anormais com freqüências variadas, é esperado que se encontrem essas alterações genéticas na nossa população. O objetivo deste trabalho foi avaliar a prevalência de talassemias e hemoglobinas variantes na população de Goiás. Para isso a casuística foi composta por 404 alunos participantes dos diversos cursos da Universidade Católica de Goiás (UCG), oriundos de 55 cidades do estado de Goiás. A prevalência de anemia hereditária por talassemias e hemoglobinas variantes em Goiás foi de 10,1%, cuja ordem decrescente foi a seguinte: talassemia alfa heterozigótica (5,2%), heterozigose para hemoglobina S (Hb AS) (2,2%), heterozigose para hemoglobina C (Hb AC) (1%), talassemia beta menor (0,7%), associação entre talassemia alfa e heterozigose para Hb S (0,5%), associação entre talassemia alfa e heterozigose para Hb C (0,3%) e heterozigose para hemoglobina D (Hb AD) (0,3%). Nenhum caso de homozigose foi encontrado no presente estudo. Este trabalho demonstrou a dispersão dos genes para Hb S, Hb C e Hb D, bem como de talassemias alfa e beta em uma população do estado de Goiás. Por essa razão, concluímos que é importante realizar programas com maior abrangência da população para estudo da epidemiologia das talassemias e hemoglobinas variantes no estado de Goiás.

    Abstract in English:

    The hereditary anemias, especially the thalassemies and hemoglobinopathies are the most common human genetic abnormalities. Their frequency in the Brazilian population is very variable depending on the racial groups typical of each region. The settlement of Goiás, that had its beginning after discovery in 1726 owing to the search for gold, was composed basically by Portuguese and African slaves, a context that favored the racial mixing among them. Considering that these groups present genes for abnormal hemoglobins with varied frequencies it is expected the finding of these genetic abnormalities within our population. The objective of this study was to evaluate the prevalence of thalassemies and variant hemoglobins in the population of Goiás. For this purpose the sample was composed by 404 participating students from several graduate courses of the Catholic University of Goiás originally from 55 cities of the state of Goiás. Laboratory tests were used taking into account the historical and demographic factors of the population. The prevalence of hereditary anemias by thalassemias and variant hemoglobins in Goiás was 10.1%, in which the decreasing order of these abnormalities was: alfa heterozygous thalassemy (5.2%); heterozygous hemoglobin S (Hb AS) (2.2%); heterozygous hemoglobin C (Hb AC) (1%); beta short thalassemy (0.7%); association between alpha thalassemy and heterozygous for hemoglobin S (0.5%); association between alpha thalassemy and heterozygous for hemoglobin C (0.3%); and heterozygous for hemoglobin D (0.3%). No homozygosity was found in the study group. This study demonstrates the need for large scale screening in human populations for epidemiological studies of the thalassemies and variant hemoglobins in the state of Goiás.
  • Serum markers and mass spectrometry in the diagnosis of cancer Medicina Laboratorial

    Carvalho, Paulo Costa; Fischer, Juliana de Saldanha da Gama; Degrave, Wim M.; Carvalho, Maria da Gloria da Costa

    Abstract in Portuguese:

    Esta revisão abrange as principais técnicas, limitações e utilidades da espectrometria de massa aplicada à análise de fluidos biológicos para buscar biomarcadores com potencialidade de diagnóstico médico. Atualmente esse método é capaz de discernir, em segundos, padrões moleculares diferencialmente expressos entre indivíduos controles e com câncer. Resultados da literatura apontam a espectrometria de massa como metodologia promissora no futuro do diagnóstico.

    Abstract in English:

    This manuscript reviews mass spectrometry methods and limitations for analisys of biological fluids in the search for biomarkers that can aid medical diagnosis. Currently, mass spectrometry has the ability to discriminate differentially expressed molecular patterns among cancer patients and control subjects. Results in the literature point mass spectrometry as having a major role in the future of medical diagnosis.
  • Alkaptonuria (ochronosis) Medicina Laboratorial

    Cotias, Ricardo B.; Daltro, Gildásio C.; Rodrigues, Luiz Erlon A.

    Abstract in Portuguese:

    A ocronose, manifestação clínica da alcaptonúria nos tecidos conectivos, geralmente leva a uma degeneração discal grave, com quadro radiológico exuberante e pouca sintomatologia, sendo o tratamento cirúrgico raramente necessário. Este trabalho relata o caso de um paciente com ocronose que desenvolveu uma radiculopatia em L5, à esquerda, secundária a hérnia discal paramediana esquerda, entre L4 e L5, que não melhorou com o tratamento fisioterápico efetuado durante quatro meses. Optou-se por tratamento cirúrgico com discectomia isolada, e o resultado foi o desaparecimento dos sintomas da radiculopatia em L5, sem recidiva nos 26 meses subseqüentes de acompanhamento.

    Abstract in English:

    Ochronosis, alkaptonuric clinical presentation in connective tissues, often runs with severe disc degeneration. In these patients, symptoms and clinical signs of disc degeneration usually are not as prominent as might be expected from the extent of disease observed on X-ray, and discectomy is rarely needed. We report a case of disc herniation in an ochronotic patient with left L5 radiculopathy, with symptoms and clinical signs not responsive to 4-month physical therapy. Discectomy was performed, with sustained good results after a 26-month follow-up.
  • Controle da qualidade em colpocitologia: visão rápida com campo marcado Citopatologia

    Bonilha, Jane Lopes; Valença, Cláudia de Fátima Moriel; Micelli, Juliana Pignatari; Zanovelo, Eliane Milhacrix; Silva, Janice; Cury, Patrícia Maluf

    Abstract in Portuguese:

    INTRODUÇÃO: No Departamento de Patologia e Medicina Legal da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP), adotou-se um sistema de gestão da qualidade (SGQ) segundo as normas brasileiras preconizadas pela International Organization for Standardization (NBR ISO) 9001: 2000. Esse procedimento foi adotado para assegurar a confiabilidade técnica dos exames realizados, em que a qualidade é considerada como julgamento do cliente, ou seja, solução às suas expectativas. Neste estudo, focamos a qualidade dos exames colpocitológicos realizados pelo Departamento. Embora a evolução de lesões do colo do útero para carcinoma invasor seja lenta, o êxito do tratamento depende do seu diagnóstico precoce. Assim, entre as possíveis falhas do exame preventivo, diagnóstico falso-negativo é a que mais agravo causa, pois posterga o início do tratamento. OBJETIVO: Testar três métodos diferentes, procurando aquele com menor número de diagnósticos falso-negativos. MATERIAL E MÉTODO: Com a mesma equipe examinadora e com os mesmos critérios de diagnóstico, testamos o método 1 (M1), preconizado pelo Ministério da Saúde (MS), que faz revisão aleatória de 10% dos casos negativos, em 3.500 colpocitologias; o método 2 (M2): revisão rápida (RR), proposto na literatura, que consiste de revisão rápida de 100% dos casos, após o escrutínio, em 7.373 casos; e o método 3 (M3): visão rápida (VR) com campo marcado, delineado pela pesquisadora, propõe o exame rápido pré-escrutínio de todos os casos, marcando-se um campo em que existam células alteradas, quando visualizadas, em 8.096 citologias ginecológicas. RESULTADOS: Foram encontradas as seguintes porcentagens de diagnósticos falso-negativos: M1: 2,4%; M2: 1,7% e M3: 1,2%. CONCLUSÃO: O método M3 foi o melhor, apresentando menor quantidade de diagnósticos falso-negativos.

    Abstract in English:

    INTRODUCTION: The Pathology and Forensic Medicine Department of the Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, SP had decided to develop a Quality Control System following the NBR ISO 9001: 2000 guidelines. Some procedures were adopted to verify technical reliability for the exams performed, where quality is defined as the clients' judgement, i.e., the solution for the clients' requests and expectations. In this study we have focused on the quality of the cervical cytology performed in the Department. Although the development of cervical lesions through cervical carcinoma takes place slowly, the treatment will have a better chance of success in case of an early diagnosis. Considering all the possible diagnostic mistakes, the false-negative exam is the most dangerous, as it delays the beginning of the treatment. OBJECTIVE: To test three different methods looking for the one with the smaller number of false-negative results. MATERIAL AND METHODS: For the same team of technicians, and with the same diagnostic criteria the three different techniques were tested. Methodology 1 (M1): in accordance to the Brazilian Ministry of National Health, with a random review of 10% of the false-negative results, in the 3,500 cytologies; Methodology 2 (M2): rapid review (RR), as suggested in literature, consists of a rapid review of 100% of the smears, after their routine evaluation, and was done in 7,373 cytologies; Methodology 3 (M3): rapid prescreening (RP) with marked field, was proposed by the researcher and consists of a rapid screening of all cases, pointing out a field were there are abnormal cells, and after that the normal screening, in 8,096 cytologies. RESULTS: The three techniques tested showed the following false-negative rates: M1: 2.4%; M2: 1.7% and M3: 1.2 %. CONCLUSION: The M3 was the best methodology, presenting less false-negative diagnosis.
  • Determination of HPV DNA viral load by hybrid capture assay and its association with cytological findings Citopathology

    Tozetti, Inês Aparecida; Scapulatempo, Ilzia Doraci Lins; Levi, José Eduardo; Ferreira, Antonio Walter

    Abstract in Portuguese:

    OBJETIVO: Comparar a relação entre a carga viral do HPV por captura híbrida II (HCII) e os achados citológicos. METODOS: Trezentas e sessenta e duas amostras reagentes para DNA de HPV por HCII tiveram suas cargas virais classificadas em quatro categorias e correlacionadas aos resultados citológicos. RESULTADOS: Vinte e duas amostras (6,1%) foram reagentes somente para os tipos de baixo risco oncogênico (grupo A) e 340 (93,9%) foram reagentes para os tipos de alto risco oncogênico (grupo B). A correlação entre carga viral das amostras reagentes para o grupo A e resultados citológicos mostrou predominância (50%) de lesão escamosa intraepitelial de baixo grau (LSIL). A maioria das amostras desse grupo teve carga viral entre 1 e < 10RLU/PCA. Nos pacientes reagentes para o grupo B observamos que 52,1% tiveram citologia LSIL e 38,2% tiveram citologia negativa para lesão intraepitelial e malignidade (NILM). Os pacientes com LSIL tiveram a carga viral bem distribuída, com ligeira predominância da categoria de 100 a < 1.000RLU/PCB. As amostras com carga viral entre 1 e < 10RLU/PCB mostraram predominância de citologia NILM (48.1%). Lesões escamosas de alto grau (3,4%) foram presentes nas amostras com carga viral entre 100 e < 1.000RLU/PCB (p = 0,023). Houve correlação entre a mediana da carga viral para o grupo B e os resultados LSIL/HSIL. CONCLUSÕES: A quantificação da carga viral, principalmente para os tipos de HPV de alto risco oncogênico, pode ser uma ferramenta útil para o acompanhamento de pacientes com lesões suspeitas.

    Abstract in English:

    OBJECTIVE: To compare the relation between HPV viral load by hybrid capture II test (HCII) and cytological findings. METHODS: Three hundred sixty-two reagent samples to HPV DNA by HCII had their viral loads classified in four categories and correlated to cytological results. RESULTS: Twenty-two samples (6.1%) were reagent only to low-risk oncogenic types (group A) and 340 (93.9%) were reagent to high-risk oncogenic types (group B). The correlation between viral load for the reagent samples to group A and cytological results showed low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL) predominance (50%). Most of this group samples had viral load between 1 to <10RLU/PCA. Of the patients that were reagent to group B 52.1% had LSIL cytology and 38.2% were negative to intraepithelial lesion and malignancy (NILM) cytology. The patients with LSIL had viral load well distributed with a slight predominance of 100 to < 1,000RLU/PCB category. The samples had viral load between 1 to <10RLU/PCB showed NILM cytology predominance (48.1%). High-grade squamous intraepithelial lesions (3.4%) were present on the samples with viral load between 100 to <1,000RLU/PCB (p = 0.023). There was a correlation between the median for group B viral load and LSIL/HSIL results. CONCLUSIONS: The quantification of viral load, mainly of high-risk HPV types, may be a useful tool for dealing with patients who have suspicious lesions.
  • Digital image analysis of skin neoplasms evaluated by lectin histochemistry: potential marker to biochemical alterations and tumour differential diagnosis Pathology

    Melo-Júnior, Mario R.; Araújo-Filho, Jorge Luiz S.; Patu, Vasco José Ramos M.; Machado, Marcos Cezar F. de Paula; Beltrão, Eduardo I.C.; Carvalho Jr., Luiz B.

    Abstract in Portuguese:

    O presente estudo objetivou avaliar, através da histoquímica com lectinas, as alterações na expressão dos carboidratos da superfície celular entre lesões benignas e malignas da pele usando análise de imagens computadorizadas. Fragmentos de pele foram obtidos através de biópsias e diagnosticados como carcinoma basocelular (CBC), carcinoma epidermóide (EpC), tricoepitelioma (TE), cerato acantoma (KA), ceratose seborreica (CS) e ceratose actínica (CA). As lectinas Con A, WGA, PNA, UEA-I e LTA foram usadas no estudo histoquímico. A análise de imagens foi realizada numa estação de análise usando o sistema OPTIMAS TM de análises. A PNA tem sido largamente utilizada no estudo de tumores, evidenciando a expressão de D-galactose nas neoplasias epidérmicas; esse açúcar apresenta alta expressão quando comparado com os outros reconhecidos pelas demais lectinas. Entre as neoplasias benignas, KA apresentou alta expressão glucose/manose; resíduos de alfa-fucose e D-galactose apresentaram intensa marcação com ConA (94,7%) LTA (84,2%) e PNA (89,4%), respectivamente. Os tumores malignos mostraram marcações distintas: EpC apresentou marcação significativa somente com a lectina PNA; CBC apresentou diferente padrão de marcação quando comparado ao observado nas lesões benignas assim como no TE. Os resultados qualitativos (análise de imagens) e quantitativos (histoquímica com lectinas) desse estudo evidenciaram que as lectinas têm grande potencial como marcadores de alterações bioquímicas nas neoplasias da pele.

    Abstract in English:

    The present study aims to evaluate, through lectin histochemistry, the alterations in the expression of cell surface carbohydrate between benign and malignant lesions of skin using computer image analysis. Skin fragments were obtained through biopsies and diagnosed as basal cell carcinoma (BCC), epidermoid carcinoma (EpC), trichoepithelioma (TE), keratoacanthoma (KA), seborrheic keratosis (SK) and actinic keratosis (AK). Lectins Con A, WGA, PNA, UEA-I and LTA were used in histochemistry study. Image analysis was carried out in a workstation using OPTIMAS TM software system. PNA strong binding pattern to studied tumours evidenced the high expression of D-galactose residues in the epidermal neoplasms when compared to other sugars recognized by the other lectins. Among benign neoplasms, KA presented a high expression of glucose/mannose, alpha-fucose and D-galactose residues evidenced by the intense staining of Con A (94.7%), LTA (84.2%) and PNA (89.4%), respectively. Malignant tumours showed distinct binding patterns. EpC presented significant binding only by PNA lectin. BCC was differentially stained in comparison to the staining pattern observed in benign lesions such as TE. Qualitative (lectin histochemistry) and quantitative (digital image analysis) data obtained in this study evidenced those lectins are potential markers to biochemical alterations in skin neoplasms.
  • Correlation between clinical and autopsy diagnoses: a retrospective analysis of 680 patients Patologia

    Segura, Marcos Emanuel de Alcântara; Rocha, Erudith Mendes; Lourenço, Alexandre Alves; Veloso, Moema Gonçalves Pinheiro; Moraes, Waldete Cabral

    Abstract in Portuguese:

    OBJETIVO: Analisar a concordância entre os diagnósticos clínicos e os achados anatomopatológicos obtidos por meio do exame necroscópico, a fim de determinar a freqüência com que a necropsia revela diagnósticos principais inesperados, que são relevantes para a causa do óbito. MÉTODOS: Foram analisadas retrospectivamente 680 necropsias realizadas no Hospital de Base do Distrito Federal (HBDF), de janeiro de 1997 a dezembro de 2002. Para a comparação entre os achados clínicos e anatomopatológicos utilizou-se a classificação de Goldman, e fez-se a correlação segundo o sexo, a idade do paciente, a unidade de internação e o tempo de permanência hospitalar. Foram utilizados, como fonte de dados, os pedidos de necropsia, preenchidos pelos médicos-assistentes, e os laudos finais de necropsia. RESULTADOS: A necropsia confirmou os diagnósticos principais formulados pela clínica em 69% das amostras. Em relação aos casos discordantes, 18% foram classificados como classe I (com potencial impacto na sobrevida do paciente) e 13% como classe II (sem o questionável impacto na sobrevida do paciente). Os principais diagnósticos discordantes mais freqüentes foram doenças do aparelho circulatório (acidente vascular cerebral, insuficiência cardíaca congestiva e miocardiopatia hipertrófica), moléstias infecciosas (meningite bacteriana, tuberculose miliar e neurotoxoplasmose) e neoplasias (linfomas). CONCLUSÕES: Evidenciou-se significativa discordância entre os diagnósticos clínicos e anatomopatológicos post mortem, mostrando que a necropsia ainda é um procedimento importante para o esclarecimento diagnóstico, bem como para a melhoria dos serviços de saúde.

    Abstract in English:

    OBJECTIVE: To analyze the discrepancies between clinical and postmortem diagnoses in order to determine the frequency of relevant missed diagnoses detected at autopsy. METHOD: Six hundred and eighty patients autopsied at the Hospital de Base do Distrito Federal, Brazil, between January 1997 and December 2002 were retrospectively investigated. Agreement between clinical and postmortem findings was compared using Goldman's system. Medical records and final autopsy reports were reviewed. RESULTS: Major clinical diagnoses were confirmed in 69% of analyzed autopsies. Eighteen percent of cases were classified as Goldman class I missed diagnosis (if known before death, might have led to prolonged survival) and 13% as class II (clinically missed major diagnosis for which survival would not have been changed). Most frequent missed major diagnoses were cardiovascular diseases (cerebral hemorrhagic infarction, congestive heart failure and hypertrophic cardiomyopathy), infectious diseases (purulent meningitis, miliar tuberculosis and neurotoxoplasmosis) and neoplasia (lymphoma). CONCLUSION: This study has found significant disagreement between clinical and postmortem examinations and reinforces the importance of autopsy in improving clinical diagnosis and in providing data that could be integrated in quality assurance programs.
  • Galectin-3 in prostatic tumours: immunohistochemistry and digital image analysis Patologia

    Araújo-Filho, Jorge Luiz Silva; Melo-Júnior, Mario Ribeiro de; Lins, Consuelo Antunes Barreto; Lins, Romero Antunes Barreto; Machado, Marcos Cezar Feitosa de P.; Carvalho-jr, Luiz Bezerra de; Pontes Filho, Nicodemos Teles de

    Abstract in Portuguese:

    A imuno-histoquímica é uma técnica de grande ajuda no diagnóstico de doenças da próstata, incluindo os tumores. De igual importância, a análise digital de imagens vem sendo cada vez mais utilizada em estudos de alterações na próstata. O presente estudo teve como objetivo quantificar morfometricamente a expressão da galectina-3 através da imuno-histoquímica em tecidos de próstata normal (PN), hiperplasia benigna da próstata (HPB) e adenocarcinoma prostático (AP). Fragmentos cirúrgicos de tecido prostático com AP (n = 10), HPB (n = 12) e PN (n = 10) foram fixados em formalina, submetidos à rotina histológica e embebidos em parafina. Foram feitos cortes histológicos (4µm) montados em lâminas e corados com hematoxilina e eosina (HE) para confirmar o diagnóstico. As amostras teciduais selecionadas foram incubadas com anticorpo monoclonal antigalectina-3 por uma hora em temperatura ambiente (37ºC) e então incubadas com um anticorpo secundário. A revelação foi realizada após incubação com diaminobenzidina (DAB) e peróxido de hidrogênio. A análise morfométrica foi realizada mediante uma estação de análise digital de imagens, que consiste num microscópio óptico acoplado a uma câmera digital ligada a um computador equipado com o software de análise OPTIMAS®. Nas células de adenocarcinoma foi observada diminuição significativa na marcação (p < 0,001) da imuno-histoquímica para galectina-3. A partir da análise digital de imagens das áreas médias marcadas obtivemos os seguintes resultados: HPB (875,9 ± 52,1µm²), AP (120,2 ± 23,3µm²) e PN (238,4 ± 27,6µm²). Os diferentes perfis de expressão da galectina-3 diferenciaram as células neoplásicas da próstata de células normais e demonstraram significativas alterações na expressão da galectina-3 nas lesões tumorais investigadas.

    Abstract in English:

    Immunohistochemistry helps pathologists in the diagnosis of prostatic diseases, mainly carcinomas. Equally important, digital image analysis is being increasingly used to study alterations in the prostate. The present work aims to morphometrically quantify the immunostain of galectin-3 expressed in normal prostate (NP), benign hyperplasia (BH) and prostatic adenocarcinoma (PA) in humans. Immunohistochemistry was developed using monoclonal anti-galectin-3 antibody. Surgical specimens from different patients with BH (n = 12), PA (n = 10) and NP (n = 10) were fixed in formalin, processed and embedded in paraffin. Hematoxylin and eosin staining was used to confirm the diagnosis. Tissue slices (4µm) were incubated with anti-galectin-3 antibody solution for one hour at room temperature and then incubated with a secondary anti-body conjugated to peroxidase (30 minutes). The stain pattern was visualized with diaminobenzidine (DAB) and hydrogen peroxide. Image analysis was carried out using a workstation consisting of a standard light microscope equipped with a digitalizing camera connected to a desktop personal computer. Image storage and retrieval was managed using the OPTIMAS® software system. For prostatic adenocarcinoma cells a significant decreased (p < 0.001) staining pattern for galectin-3 was observed. Computer image analysis detected stained areas of atypic prostatic cells: BH (875.9 ± 52.1µm²), PA (120.2 ± 23.3µm²) and NP (238.4 ± 27.6µm²). The different patterns of galectin-3 expression distinguished the neoplasic cells from normal prostatic ones and significant alterations in the galectin-3 expression into the studied tumor lesions.
  • Construction of low cost tissue microarrays using alternative equipment for immunohistochemical study of breast tumors Patologia

    Rocha, Rafael Malagoli; Andrade, Victor Piana; Nunes, Cristiana Buzelin; Rocha, Gislene Fátima Silva; Sanches, Fernanda Squárcio Fernandes; Oliveira, Flávio Nepomuceno; Gobbi, Helenice

    Abstract in Portuguese:

    INTRODUÇÃO: Tissue microarrays (TMA) são blocos contendo numerosos cilindros de tecido parafinado organizados em linhas e colunas que permitem analisar muitas amostras numa única lâmina. Equipamentos disponíveis comercialmente são importados e têm alto custo (entre 11 e 24 mil dólares). OBJETIVOS: Descrever uma forma alternativa de construção de arrays de tumores mamários de baixo custo e relatar nossa experiência na sua utilização em estudo imuno-histoquímico (IIQ). METODOLOGIA: Utilizou-se modelo que consiste numa minirretífica com agulha de biópsia hepática de 2mm de diâmetro acoplada à bancada com suporte (Dremel). Inicialmente preparou-se o bloco receptor fazendo o número de furos desejável (55). Cilindros de tecido foram obtidos com o mesmo dispositivo e colocados nos orifícios do bloco receptor. De cada bloco doador, obteve-se dois cilindros de diferentes áreas representativas do tumor. Em cada array foram incluídos cilindros de tumor (controle positivo e negativo) para cada anticorpo testado na IIQ, e cilindro marcador de iniciação da leitura da lâmina (fígado). Cortes seqüenciais de 4µm obtidos do array foram submetidos à IIQ. A primeira e a última lâmina foram coradas pela hematoxilina e eosina (HE) para avaliar: número de discos de tecido, preservação tecidual e adequabilidade da amostra. Foi realizada IIQ empregando anticorpos anti-receptores de estrógeno, progesterona, Ki67, p53 e Her2. RESULTADOS: O custo total do equipamento foi apenas US$180,00. Cortes histológicos do array apresentaram boa preservação tecidual, sendo adequados para avaliação morfológica e suficientes para confirmação diagnóstica. A qualidade das reações IIQ foi semelhante à obtida nos blocos doadores. CONCLUSÃO: Esse equipamento e a técnica representam uma alternativa econômica aos equipamentos comerciais.

    Abstract in English:

    BACKGROUND: Tissue microarrays (TMA) are blocks containing numerous cylinders of paraffinized tissue organized in lines and columns allowing analysis of numerous samples in one slide. Commercially available equipment is imported and have high cost (US$ 11,000.00 to 24,000.00). AIM: we describe a low cost breast-tumor TMA and our experience in its use for immunohistochemistry (IHC). MATERIAL AND METHODS: A model that consists of a work station (Dremel) to which a liver biopsy needle of 2mm of diameter was connected. A receptor block was prepared perforating it until the desired number of rows (55) was reached. Then, the cylinders of tissue were obtained using the same equipment and included in the holes of the receptor block. Two samples were obtained from different tumor areas of each donor block. Cylinders of previously tested positive control tumors for each antibody and one marker (liver sample) that indicated the beginning of slide reading were also included. IHC was performed in sequential 4µm sections from the same array using antibodies against estrogen and progesterone receptors, Ki67, p53 and Her2. The first and the last slides were stained by hematoxylin and eosin to evaluate: number of tissue discs, tissue preservation, and adequacy of the tissue sample. RESULTS: The equipment total cost was US$ 180,00. The slides showed fine tissue preservation, adequate for morphologic evaluation, and sufficient to confirm diagnosis. The IHC quality was similar to the donor blocks. CONCLUSION: This equipment and technique represent an economical alternative when compared to commercial equipments.
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