Resumo em Português:

O gene híbrido PML-RARalfa é o marcador molecular presente na maioria dos casos de leucemia aguda promielocítica (LAP), sendo útil ao diagnóstico e ao estudo da doença residual mínima. A técnica molecular empregada como rotina laboratorial é a reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa (RT-PCR) qualitativa, porém com o surgimento da PCR em tempo real (Q-PCR), foram descritas abordagens de detecção do gene PML-RARalfa possibilitando a quantificação de transcritos, com a vantagem metodológica da eliminação do processamento pós-PCR. No entanto, os protocolos relatam o uso de sondas fluorescentes de custo elevado para a rotina clínica, limitando sua aplicação. Este estudo teve como objetivo otimizar o método de detecção do gene PML-RARalfa para Q-PCR, utilizando como sistema de marcação fluorescente o intercalante SYBR® Green. A análise foi realizada com cDNA da linhagem celular NB4, tendo sido testados protocolos de termociclagem, síntese de cDNA com primer randômico ou específico e diferentes concentrações de MgCl2 e primers para amplificação. Os resultados mostraram amplificação mais eficiente nas seguintes condições: 2 mM MgCl2, 10 pmol de primers e cDNA sintetizado com primer específico. Não houve diferença na utilização de etapas para anelamento (58°C/30 s) seguido de extensão (72°C/30 s) ou etapa única de anelamento associado à extensão (60°C/45 s). Esses resultados demonstram a otimização da detecção do gene PML-RARalfa para Q-PCR através de um método considerado sensível e de baixo custo para a rotina laboratorial.

Resumo em Inglês:

Hybrid gene PML-RARalpha is the molecular target found in most cases of acute promyelocytic leukemia (APL) and has been used for diagnosis and minimal residual disease studies. The standard molecular technique employed is qualitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), but with the emergence of real time PCR (Q-PCR), PML-RARalpha gene detection approaches have been described allowing transcript detection, with the methodological advantage of eliminating post-PCR processing. However, current protocols report the use of expensive fluorescent labeled probes, limiting its routine application in the laboratory. The objective of this study was to optimize PML-RARalpha gene detection method for Q-PCR, using SYBR® Green fluorescent dye. The analysis was performed with NB4 cellular lineage cDNA. Thermal cycling protocols, cDNA synthesis with random or specific primer and different MgCl2 and amplification primers concentrations were tested. Results show that amplification improved in the following conditions: 2 mM MgCl2, 10 pmol primers and cDNA synthesized with specific primer. There were no significant differences using annealing temperature (58°C/30 s) followed by extension (72°C/30 s) or annealing associated with extension as a single step (60°C/45 s). This paper demonstrates the optimization of PML-RARalpha gene detection for Q-PCR studies using a technique considered sensitive and less expensive for routine use in the laboratory.

Resumo em Português:

A definição dos intervalos de referência é tarefa desafiadora para todos os laboratórios clínicos. Entre as possibilidades para estabelecimento desses intervalos destacam-se a definição dos próprios intervalos, a validação dos dados constantes das bulas reagentes e a utilização das informações disponíveis na literatura. A criação de intervalos próprios é a escolha mais desejável para a grande maioria dos testes, pois reflete a condição da população para a qual os eles serão aplicados no dia-a-dia, sendo, porém, a mais trabalhosa e onerosa. A validação dos intervalos fornecidos pelas bulas reagentes e a aplicação dos dados fornecidos pela literatura parecem ser as opções mais freqüentemente utilizadas em nosso meio. A escolha de intervalos adequados de referência é fundamental para que os laboratórios clínicos forneçam informações fidedignas e que os clínicos possam interpretar corretamente os resultados e optar pelas melhores condutas diante da população assistida.

Resumo em Inglês:

The definition of reference ranges is a challenging task to all clinical laboratories. It is particularly worth mentioning the definition of their own ranges, the validation of data on reagent directions and the use of information available in medical literature as possibilities for the establishment of these ranges. The creation of their own ranges is undoubtedly the most desirable choice in most tests, inasmuch as it reflects the condition of the population on whom they will be applied on a daily basis, yet it is the most laborious and onerous. The validation of ranges offered by the reagent directions and the use of data from medical literature seem to be the most commonly used options in our country. The choice of appropriate reference ranges is essential so that clinical laboratories offer reliable information and physicians interpret the results correctly and choose the best approach towards the assisted population.

Resumo em Português:

A incidência de câncer tem aumentado significativamente em todo o mundo, configurando-se como um dos mais importantes problemas de saúde pública. Como conseqüência o câncer de boca também tem aumentado, com 94% dos casos correspondendo ao carcinoma de células escamosas. O objetivo deste estudo foi atualizar o tema e documentar a experiência de cinco anos na utilização da citopatologia para avaliação de lesões orais suspeitas de malignidade. Realizou-se uma busca no arquivo do Serviço de Anatomia Patológica do Hospital Universitário Antônio Pedro da Universidade Federal Fluminense (HUAP/UFF), referente ao período de 2002 a 2007, de pacientes com lesões orais clinicamente suspeitas de carcinomas submetidos simultaneamente à biopsia incisional e a raspados da lesão para análise citopatológica. A amostra selecionada correspondeu a 50 casos, mas em 41 (82%) pacientes, o diagnóstico histopatológico foi de carcinoma de células escamosas. Desses, a citopatologia foi conclusiva em 30 (73%) e descreveu alterações suspeitas em 11 (27%) pacientes. Os resultados revelaram que a citopatologia apresentou concordância diagnóstica de 74% com a histopatologia (padrão-ouro) nos diagnósticos positivos para carcinoma de células escamosas, e negativos para malignidade. Os resultados obtidos indicam a necessidade de padronização da técnica e da avaliação de grandes casuísticas para definição da acurácia, pois, na casuística avaliada, a citopatologia apresentou-se como um método fidedigno, que poderá ser utilizado como recurso de diagnóstico suficiente para o imediato encaminhamento dos pacientes para o tratamento de carcinoma de células escamosas oral.

Resumo em Inglês:

Cancer is one of the most important problems in public health and its incidence has risen significantly worldwide. Accordingly, the incidence of oral cancer has also increased and 94% of the cases are caused by squamous cell carcinomas. The objective of the present study was to provide an update on the subject and report our five-year experience in the use of cytopathology analyzing suspected malignant oral lesions. We searched the slide archives of the anatomic pathology service of Hospital Universitário Antônio Pedro, Universidade Federal Fluminense (UFF), from 2002 to 2007. We selected patients with suspected carcinoma oral lesions who underwent incisional biopsy and were scraped for cytopathological analysis simultaneously. The sample consisted of 50 cases, of which 41 (82%) were diagnosed with squamous cell carcinoma. Among these, cytopathology was conclusive in 30 cases (73%) and suspected alterations were described in 11 (27%). Results indicated that cytopathology presented diagnostic concordance with histopathology in positive diagnosis for squamous cell carcinoma and in negative for malignancy in 74% of the cases (gold standard). Our findings demonstrate that the standardization of techniques and the evaluation of a larger number of patients are required to define the accuracy of the method. In the studied sample cytopathology was a reliable method that may be used as a sufficient diagnostic tool to refer patients for immediate treatment of oral squamous cell carcinoma.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: Quando comparada à técnica da citopatologia convencional (CC), a citologia em meio líquido (LBC) tem sido referida como método de desempenho superior em esfregaços cervicouterinos. OBJETIVO: Comparar (quantitativa e qualitativamente) esfregaços orais preparados por meio da citopatologia convencional e da LBC. Material e métodos: Foram realizados raspados em borda lateral da língua de seis indivíduos com mucosa oral de aspecto clínico normal, e testados três instrumentos de coleta: escova endocervical (cytobrush), espátula plástica e escova contida no kit da citologia em meio líquido utilizado no estudo, sendo os esfregaços submetidos à citopatologia convencional e à LBC. RESULTADOS: A escova endocervical mostrou-se mais adequada para coleta e quanto ao método, a LBC forneceu lâminas com distribuição celular mais regular e homogênea do que a citopatologia convencional. Notou-se ainda redução da quantidade de células inflamatórias e de colônias de bactérias. DISCUSSÃO: Mesmo em menor quantidade, a sobreposição celular não foi totalmente eliminada na LBC como a literatura relata, pois estava presente em algumas lâminas. Embora em amostras cervicouterinas a redução de células inflamatórias, de hemácias e de muco seja considerada uma vantagem da LBC, nos raspados orais muitas vezes esses elementos compõem aspectos significativos de determinada doença. CONCLUSÕES: A citologia em meio líquido pode ser uma nova técnica a ser somada aos exames auxiliares de diagnóstico oral, mas, apesar de apresentar alguns resultados favoráveis, ainda são necessárias adaptações ao utilizá-la no diagnóstico oral.

Resumo em Inglês:

INTRODUCTION: When compared to conventional cytopathology (CC), liquid-based cytology (LBC) has been referred to as a method of superior performance in cervical smears. OBJECTIVE: To quantitatively and qualitatively compare oral smears obtained through conventional cytopathology and liquid medium cytology. MATERIAL AND METHODS: Six individuals with normal oral mucosa had the lateral border of their tongues scraped. Three collecting instruments were tested in this process: endocervical brush (cytobrush), a plastic spatula, and the LBC kit brush. Both methods, CC and LBC, were applied. Results: The endocervical brush was the most appropriate collecting instrument; as far as method is concerned, liquid medium cytology provided slides with more regular and homogeneous cellular distribution in comparison to conventional cytopathology. There was also a reduction in the number of inflammatory cells and bacteria colonies. DISCUSSION: Cellular overlapping was not totally eliminated in the liquid medium cytology as reported in medical literature, inasmuch as it was present in some slides, though in a smaller amount. Although in cervical samples the reduction of inflammatory cells, erythrocytes and mucus is considered an advantage of LBC, in oral smears these elements may represent significant aspects of some oral diseases. CONCLUSIONS: Liquid-based cytology may be an additional technique to be used with complementary exams in oral diagnosis, but despite the fact it presents some favorable results some adaptations are still necessary for its use in oral diagnosis.

Resumo em Português:

O objetivo deste estudo foi investigar a existência de correlação entre os dados clínicos e histopatológicos do carcinoma espinocelular oral. Foram avaliados 90 casos de pacientes com diagnóstico de carcinoma espinocelular oral dos arquivos do Instituto Maranhense de Oncologia Aldenora Bello (IMOAB) (São Luís, MA). Aplicou-se o teste de correlação de Pearson, em nível de significância de 5%, não tendo sido revelada relação estatisticamente significante (r = 0,095, p = 0,375) entre a classificação clínica TNM (tumor, linfonodo, metástase) e a graduação histológica de malignidade (GHM) desenvolvida por Wahi (1971) e publicada pela Organização Mundial da Saúde (OMS). Mas houve relação significativa entre a referida graduação histológica de malignidade e o parâmetro clínico tamanho do tumor primário (T) (r = 0,229, p = 0,03).

Resumo em Inglês:

The aim of this study was to investigate the existence of correlation between the clinical and histopathological data of oral squamous cell carcinoma. A total of 90 cases of patients diagnosed with oral squamous cell carcinoma were selected from the slide archives of Instituto Maranhense de Oncologia Aldenora Bello (São Luís, MA, Brazil). Pearson’s correlation test was applied and did not reveal a statistically significant correlation (r = 0.095; p = 0.375) between TNM clinical classification and histologic malignancy grading, which was defined by Wahi (1971) and published by the World Health Organization (WHO). There was a significant correlation between the histologic malignancy grading and the size of the primary tumor as a clinical parameter (r = 0.229; p = 0.03).

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: A doença hepática gordurosa não-alcoólica compreende um espectro de lesões que variam da esteatose à cirrose, sendo a esteatoepatite não-alcoólica a forma progressiva da doença. Uso de álcool, hepatites virais e outras doenças hepáticas devem ser excluídos. A biópsia hepática é o padrão-ouro para o diagnóstico da doença, sendo o único método capaz de diferenciar a esteatoepatite da esteatose, graduar a inflamação e estadiar a fibrose. OBJETIVOS: Analisar os achados histopatológicos e avaliar a concordância interobservador em biópsias previamente diagnosticadas como esteatose ou esteatoepatite. MATERIAIS E MÉTODOS: Setenta biópsias por agulha foram analisadas segundo Brunt et al.(4), com modificações nos componentes determinantes da atividade e no estadiamento. Os informes clínicos dos pacientes foram coletados. A concordância interobservador foi calculada com base nos achados histopatológicos. RESULTADOS: Esteatoepatite não-alcoólica discreta (grau 1) foi a forma mais comum. Se havia fibrose, o estágio 1 foi o mais freqüente. Concordância interobservador foi muito boa para esteatose macrovacuolar (KW = 0,82) e boa para inflamação lobular (KW = 0,68) e fibrose (KW = 0,73). CONCLUSÕES: A classificação de Brunt et al., com modificações, pode ser usada para o diagnóstico não somente da esteatoepatite não-alcoólica, mas também da doença hepática gordurosa não-alcoólica, representando método confiável para uso na rotina diária dos patologistas.

Resumo em Inglês:

BACKGROUND: Nonalcoholic fatty liver disease comprises a spectrum of lesions ranging from steatosis to cirrhosis, with nonalcoholic steatohepatitis being the progressive form of the disease. Alcohol intake, viral hepatitis and other liver diseases must be excluded. Liver biopsy is the gold standard for diagnosis of the disease and is the only method able to differentiate nonalcoholic steatohepatitis from simple steatosis, to grade inflammation and to stage fibrosis. AIMS: To analyze the histopathological findings and evaluate interobserver agreement in biopsies previously diagnosed as steatosis or steatohepatitis. METHODS: Seventy needle biopsies were analyzed according to Brunt et al.(4), with modifications in the grading and staging components. Clinical data of patients were collected. Interobserver agreement was calculated based on histopathological findings. RESULTS: Mild nonalcoholic steatohepatitis (grade 1) was the most common form. If fibrosis was detected, stage 1 was the most frequent. Interobserver agreement was very good for macrovesicular steatosis (K W = 0,82) and good for lobular inflammation (K W = 0,68) and fibrosis (K W = 0,73). CONCLUSIONS: The classification of Brunt et al., with modifications, can be applied to diagnosis not only of nonalcoholic steatohepatitis but also of nonalcoholic fatty liver disease, representing a reliable method for use in the daily practice of pathologists.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: Estudos de vasos linfáticos eram limitados pela ausência de marcadores endoteliais linfáticos específicos. Recentemente, eles se tornaram possíveis após liberação comercial do novo anticorpo D2-40, marcador seletivo para endotélio linfático. O objetivo do nosso estudo foi comparar invasão neoplásica em vasos linfáticos e sanguíneos detectada em secções coradas pela hematoxilina e eosina (HE) e imuno-histoquímica (IIQ). MATERIAIS E MÉTODOS: Foram estudados 123 casos de carcinomas mamários invasores subdivididos em três subgrupos de acordo com o estadiamento axilar: macrometástases (Mac-Met), micrometástases (Mic-Met) e linfonodo negativo (LNN). Invasão de vasos linfáticos (IVL) e de vasos sangüíneos (IVS) foi inicialmente avaliada em secções histológicas coradas pela HE e através da IIQ realizada em cortes seqüenciais. A invasão de vasos linfáticos e sanguíneos foi avaliada pela imuno-histoquímica, empregando-se respectivamente os anticorpos D2-40, e CD31. IVL e IVS foram relacionadas com tamanho tumoral, tipo e grau histológico dos tumores primários e com a presença de metástases. RESULTADOS: IVL foi observada pela HE em 17/123 casos (13,8%) e pela IIQ em 35/123 casos (28,5%) (kappa = 0,433). IVS foi observada pela HE em 5/123 casos (4,1%) e pela IIQ em 19/123 casos (15,4%) (kappa = 0,198). IVL e IVS estavam positivamente relacionadas com maior grau histológico dos tumores primários (p < 0,05). IVL também estava positivamente relacionada com a presença de macrometástases. CONCLUSÃO: A detecção IIQ, respectivamente por D2-40 e CD31, de invasão de vasos linfáticos e sanguíneos foi maior que a detecção feita em cortes corados pela HE e relacionou-se com maior grau tumoral e metástases em linfonodos axilares.

Resumo em Inglês:

BACKGROUND: Studies of lymphatic vessels were limited by the lack of specific markers. Recently, they have become possible due to the release of new D2-40 antibody, a selective marker for lymphatic endothelium. The aim of our study was to compare neoplastic invasion in lymphatic and blood vessels detected in hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemistry-stained sections. METHODOLOGY: A total of 123 cases of invasive mammary carcinomas were studied and sorted out into three subgroups according to axillary staging (macrometastasis, micrometastasis and lymph node negative). Lymphatic vessel invasion (LVI) and blood vessel invasion (BVI) were initially evaluated in histological H&E and immunohistochemistry-stained sequential sections. Lymphatic and blood vessel invasions were assessed by immunohistochemistry, employing D2-40 and CD31 antibodies, respectively. LVI and BVI were related to size, type, histologic grade of primary tumors, and the presence of metastasis. RESULTS: LVI was detected through H&E staining procedure in 17/123 cases (13.8%), and through immunohistochemistry procedure in 35/123 cases (28.5%) (kappa = 0.433). BVI was detected through H&E in 5/123 cases (4.1%), and through immunohistochemistry in 19/123 cases (15.4%) (kappa = 0.198). LVI and BVI were positively related to higher histologic grade of primary tumors (p < 0.05). LVI was also positively related to the presence of macrometastasis. CONCLUSION: The detection of lymphatic and blood vessel invasions through immunohistochemistry employing D2-40 and CD31 was higher than the detection through H&E, and it was related to higher tumor grade and metastasis in axillary lymph nodes.

Resumo em Português:

A análise morfométrica de imagens é utilizada em patologia para se obter dados precisos de componentes celulares e teciduais, por meio da mensuração e contagem, que são importantes para o diagnóstico e prognóstico de vários tumores. Essa técnica, mesmo sendo ferramenta útil e de baixo custo, mantém-se restrita a poucos centros de diagnóstico ou pesquisa. O objetivo deste trabalho é apresentar e descrever o método de morfometria nuclear com a utilização complementar de softwares de edição de imagens, fazendo a análise detalhada das etapas críticas do processo. A correção de problemas encontrados durante a captura das imagens, como temperatura e matiz da cor erroneamente ajustados, e de imagens com iluminação desigual provenientes de microscópio mal regulado, é fundamental para a correta análise. Assim, utilizando o recurso máscara de cor disponível em vários softwares de editoração de imagens, é possível selecionar e separar objetos de cores semelhantes, resultando numa imagem final que apresenta somente os objetos de interesse para análise. A morfometria é realizada por meio de softwares específicos como o ImageTool (versão 3.0), que possibilitam a mensuração automática de um ou mais parâmetros, com precisão e em curto intervalo de tempo. A interface do ImageTool permite ainda trabalhar simultaneamente com a imagem original e a imagem processada em que se fez a seleção das cores semelhantes. Dessa forma, pode-se confrontar o objeto que está sendo selecionado com o mesmo objeto na sua imagem original, garantindo assim correta seleção. Esse sistema possibilita conferência interobservador de 100% dos objetos, o que permite desprezar aqueles que posteriormente constatou-se que não deveriam ter sido selecionados e mensurados.

Resumo em Inglês:

The morphometric analysis of images, which comprises measuring and counting, is used in pathology to obtain accurate data of cellular and tissue components that are important for diagnosis and prognosis of several tumors. Although it is a useful and low-cost tool, it is restricted to a few diagnosis and research centers. The objective of this study is to present and describe the method of nuclear morphometry with supplementary use of image-editing softwares, making detailed analysis of the critical stages of the process. The correction of problems found during the capture of the image, such as erroneously adjusted color temperature and color shade and unevenly illuminated images from an improperly adjusted microscope, is fundamental for the accurate analysis. Through the color mask resource present in countless image-editing softwares, it is possible to select and to separate objects of similar colors, resulting in a final image that shows only the objects of interest for analysis. Morphometry is accomplished through a specific software, such as ImageTool (version 3.00), that permits the accurate automatic measuring of one or more parameters in a short interval of time. The interface of ImageTool allows one to work simultaneously with the original and the processed images, in which the similar colors were selected. Therefore, it is possible to confront the selected object with the same object in its original image, what ensures its exact selection. This system allows interobserver comparison of 100% of the objects, enabling the rejection of those that should not have been selected and measured.

Resumo em Português:

INTRODUÇÃO: Exposição pré-natal ao etanol é freqüentemente associada a microcefalia e atraso na migração celular. O mecanismo pelo qual o etanol induz seus efeitos no desenvolvimento do sistema nervoso não é muito bem entendido. OBJETIVOS: Avaliar o efeito da exposição crônica ao etanol sobre o córtex visual de ratos durante seu desenvolvimento. MATERIAL E MÉTODO: Ratos Wistar provenientes do acasalamento de 30 fêmeas, divididos nos grupos etanol (n = 10) - 3 g/kg/dia - e controle (n = 10), foram utilizados nesse experimento. Os ratos foram perfundidos e o encéfalo, dividido em três partes: anterior, médio e posterior. Os cortes obtidos do fragmento posterior foram expostos à rotina histológica e submetidos a diferentes técnicas de coloração. Na análise estatística foi utilizado o teste t para comparar os pesos encefálicos e corporais. Considerou-se como nível de rejeição de hipótese nula um valor de p < 0,05. RESULTADO: Houve redução de peso cerebral em diferentes períodos analisados, além de ectopia e heterotopia neuronal. Não se observou deposição de fibras. DISCUSSÃO/CONCLUSÃO: O etanol atua de maneira negativa no desenvolvimento dos ratos, incluindo alterações na migração neuronal e microcefalia. Essas alterações podem ajudar a explicar as disfunções relatadas na síndrome do alcoolismo fetal (SAF).

Resumo em Inglês:

BACKGROUND: Prenatal exposure to ethanol is frequently associated with microencephaly and delayed cell migration. The mechanism by which ethanol affects the development of the nervous system is still not fully understood. OBJECTIVE: To evaluate the effect of chronic exposure to ethanol on the visual cortex of rats during their development. MATERIAL AND METHOD: Wistar rats, born from the mating of 30 females, were divided into two groups: those exposed to ethanol (n = 10) - 3 g/kg/day - and a control group (n = 10). The rats were perfused and brain was divided into three parts: anterior, middle and posterior. Slices taken from the posterior fragment were subjected to histological analysis routine and different staining techniques. A statistical analysis was carried out using t test to compare brain and body weight. A value < 0,05 was considered a rejection of null hypothesis. RESULTS: There was a reduction of brain weight in different analyzed periods. There were no fiber deposits. Ectopia and neuronal heterotopia were observed. DISCUSSION/CONCLUSION: Ethanol has a negative effect on the development of rats, including alterations in neuronal migration and microencephaly. These alterations may help to explain some of the dysfunctions reported in patients with fetal alcohol syndrome (FAS).