Seleção de isolados de Verticillium lecanii para o controle de Cinara atlantica

Screening of Verticillium lecanii isolates for controlling of Cinara atlantica

NOTAS CIENTÍFICAS

Seleção de isolados de Verticillium lecanii para o controle de Cinara atlantica

Screening of Verticillium lecanii isolates for controlling of Cinara atlantica

Maria Silvia Pereira Leite^I; Susete do Rocio Chiarello Penteado^I; Scheila Ribeiro Messa Zaleski^I; Joelma Melissa Malherbe Camargo^II; Rodrigo Daniel Ribeiro^II

^IEmbrapa Florestas, Caixa Postal 319, CEP 83411-000 Colombo, PR. E-mail: [e-mail], [e-mail], [e-mail]

^IIFaculdades Integradas Espírita, Rua Tobias de Macedo Jr., nº 333, CEP 82010-340 Curitiba, PR

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi avaliar a patogenicidade de isolados de Verticillium lecanii, sobre Cinara atlantica, e estimar a CL₅₀ do melhor isolado. No teste de seleção, utilizaram-se mudas de pinus com ninfas do pulgão, 20 isolados do fungo e um controle, num total de 21 tratamentos e dez repetições. Na CL₅₀ do isolado CG 904, utilizaram-se seis concentrações, com dez repetições. VL 6, CG 902 e VL 2 apresentaram os mais altos índices de mortalidade, 72,22%, 67,34% e 67,31%, respectivamente. A testemunha apresentou mortalidade de 15,6%. Nos bioensaios de CL₅₀, a concentração de 10⁸ conídios mL^-1 , do isolado CG 904, causou mortalidade de 100%, CL₅₀ de 2x10⁵ conídios mL^-1 e TL₅₀ de 4,4 dias.

Termos para indexação:Pinus, fungo entomopatogênico, controle microbiano.

ABSTRACT

The aim of this study was to evaluate the pathogenicity of Verticillium lecanii isolates against Cinara atlantica, and the LC₅₀ of the best strain. For selection tests, nymphs of C. atlantica were placed on individual pine seedling with 20 isolates and one control, in a total of 21 treatments and ten replicates. For the LC₅₀ estimation it was used the CG 904 strain with six concentrations and ten replicates. VL 6, CG 902 and VL 2 produced the highest mortality, of 72.22%, 67.34% and 67.31%, respectively. The control plot showed mortality of 15.6%. The LC₅₀ of the CG 904 strain indicated mortality of 100% at the concentration of 10⁸ conidia mL^-1; LC₅₀, 2x10⁵ conidia mL^-1; and LT₅₀, 4.4 days.

Index terms:Pinus, entomopathogenic fungus, microbial control.

O pulgão-gigante-do-pinus, Cinara atlantica (Wilson, 1919) (Hemiptera: Aphididae), foi registrado no Brasil em 1998, em plantios de Pinus taeda e Pinus elliottii, tendo causado prejuízos em viveiros e plantios jovens de pinus (Penteado et al., 2000). O fungo Verticillium lecanii (Zimm.) Viégas causa epizootias naturais no pulgão-gigante-do-pinus e demonstra um grande potencial de controle. A patogenicidade de V. lecanii tem sido testada contra várias pragas, como os hemípteros Trialeurodes vaporariorum e Aphis gossypii (Hall, 1982); nos pulgões Myzus persicae, Brachycaudus helichrysi e Macrosiphoniella sanborni (Hall & Burges, 1979); sobre alguns afídeos de cereais, Diuraphis noxia, Acyrthosiphon pisum, Schizaphis graminum, Sitobium avenae, Metapolophium dirhodum e Rhopalosiphum maidis (Feng et al., 1990); sobre Bemisia argentifolii Bellows & Perring, em infestações em plantas de algodão (Gindin et al., 2000) e sobre Macrosiphum euphorbiae Thomas, em plantas de pepino (Askary et al., 1998).

O objetivo deste trabalho foi avaliar a patogenicidade de 20 isolados de Verticillium lecanii, para o controle do pulgão-gigante-do-pinus, e estimar a concentração média letal (CL₅₀) do melhor isolado.

Os pulgões foram coletados em árvores de pinus e transportados para a criação em laboratório, que foi realizada em gaiolas de PVC, com 10x37 cm e três aberturas laterais cobertas por material de plástico transparente. Após a segunda geração, transferiram-se cinco adultos de C. atlantica para gaiolas com uma muda de pinus. Três dias depois, retiraram-se os adultos, deixando-se cinco ninfas por muda. Quando as ninfas atingiram o terceiro ínstar, foram iniciados os bioensaios.

Foram coletados vinte isolados de V. lecanii, de diferentes regiões do Sul e Sudeste do Brasil e do Uruguai (Tabela 1). Os isolados foram cultivados em meio de cultura de arroz, tendo-se aplicado 1,5 mL de suspensão fúngica, na concentração de 1,5x10⁷ conídios mL ^-1, em cada muda de pinus acondicionada em gaiola. Para a testemunha, pulverizou-se água esterilizada e Tween (70%). Foram realizadas observações, durante 15 dias, registrando-se o número de insetos mortos, com observações dos sintomas apresentados pelas ninfas. Os insetos mortos foram imersos em álcool (70%) e água destilada e mantidos em câmara úmida, para a confirmação do agente causal.

Os isolados de V. lecanii foram avaliados, quanto à sua patogenicidade, em delineamento experimental inteiramente casualizado, com 21 tratamentos e 10 repetições, com cada unidade experimental constituída de uma muda de pinus, com cinco ninfas de terceiro ínstar de C. atlantica. O experimento foi conduzido em salas climatizadas, com fotófase de 12 horas e temperatura e umidade relativa interna das gaiolas de 20,8±2ºC e 89,1±10%, respectivamente. A eficiência dos isolados foi avaliada mediante a porcentagem de mortalidade e tempo letal médio (TL₅₀). Os dados referentes à mortalidade foram submetidos à análise de variância, e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.

Para a estimativa da concentração letal média (CL₅₀), foi selecionado o isolado CG 904, por ter apresentado um dos menores valores de TL₅₀ (6,99 dias) e por não diferir, estatisticamente, quanto à mortalidade (64,10%) dos isolados que causaram os maiores índices: VL 6, CG 902 e VL 2 (Tabela 1). Além disso, em testes que vêm sendo conduzidos em laboratório, o CG 904 tem apresentado produtividade superior aos demais isolados. As concentrações das suspensões fúngicas foram de 5x10⁴, 5x10⁵, 5x10⁶, 1x10⁷ e 1x10⁸ conídios mL^-1 . O experimento foi conduzido em sala climatizada, com temperatura interna das gaiolas de 21±2ºC, UR de 88±10% e fotófase de 12 horas. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com seis tratamentos e 10 repetições. Na preparação, na aplicação das suspensões e na avaliação, utilizou-se a mesma metodologia empregada no teste anterior. A estimativa da CL₅₀ foi efetuada mediante a utilização do programa computacional Micro Probit (versão 3.0). Os dados referentes à mortalidade foram submetidos à análise de variância, e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.

Os sintomas de infecção foram observados pelo escurecimento e pelo intumescimento da massa corporal. A extrusão do fungo ocorreu, inicialmente, pelas inserções do corpo, que produziram conídios de coloração branca. Segundo Alves (1998), a presença dos insetos doentes é determinada pelo aparecimento de um halo branco, associado à estrutura característica do conidióforo e dos conídios do fungo. A Tabela 1 contém os valores referentes às porcentagens de mortalidade de ninfas de C. atlantica e TL₅₀, causados por diferentes isolados de V. lecanii. Os isolados que apresentaram alta infecciosidade foram: VL 6, CG 902, VL 2, VL 5, VL 4, CG 904, CG 903, VL 3, CG 899 e VL 7, que não diferiram estatisticamente entre si, com variação de infecciosidade de 55,4% a 72,2%. Os isolados que apresentaram infecciosidade moderada foram: VL 1, CG 896, CG 898, CG 897 e CG 901, com variação de mortalidade de 37,2% a 53,1%, não tendo diferido estatisticamente entre si. Os isolados CG 893, CG 892, CG 894, CG 900 e CG 895 não diferiram estatisticamente da testemunha e mostraram baixa infecciosidade.

O TL₅₀ variou entre os diferentes isolados, de 6,95 a 12,62 dias, e os isolados CG 895 e CG 904 apresentaram os menores valores, com 6,95 e 6,99 dias, respectivamente, porém o isolado CG 895 causou baixa mortalidade (22,92%). Na testemunha, não foi verificada a ocorrência de V. lecanii em nenhuma das repetições, entretanto a mortalidade foi de 15,6%, em virtude do extenso período de avaliação (15 dias), o que ocasionou, ao final do experimento, sintomas de estresse nas plantas, como clorose e seca dos ponteiros, em conseqüência da alimentação dos pulgões. Alguns isolados de V. lecanii, utilizados na concentração de 10⁷ conídios mL^-1 , causaram mortalidade próxima a 72% em ninfas de C. atlantica (Tabela 1).

A suscetibilidade dos afídeos dos cereais ao fungo V. lecanii foi avaliada por Feng et al. (1990), que embora não citem a concentração de conídios utilizada, demonstraram que D. noxia, M. dirhodum, R. maidis, S. graminum, S. avenae e Rhopalosiphum padi apresentaram índices de mortalidade de 85%, 80%, 86%, 62%, 100% e 70%, respectivamente. Dos isolados selecionados, o CG 904 foi o que apresentou um dos menores TL₅₀ (6,9 dias), na concentração de 1,5x10⁷ conídios mL ^-1. Kim et al. (2003), ao avaliar a patogenicidade dos fungos V. lecanii, Beauveria bassiana e Paecilomyces spp., demonstraram que V. lecanii foi o mais virulento contra Aphis gossypii, tendo apresentado 100% de mortalidade e TL₅₀ de 2,7 dias. Askary et al. (1998) avaliaram a infecciosidade de dois isolados de V. lecanii e o produto comercial Vertalec, no pulgão M. euphorbiae; o TL₅₀ foi de 5 dias para o produto Vertalec e para o isolado 198499, e de 9 dias para o isolado 216596, o que indica que o produto Vertalec e o isolado 198499 foram mais eficientes, com mortalidade de 76% e 94%, respectivamente. Hall & Burgues (1979) obtiveram sucesso no controle de M. persicae, em casa de vegetação, com o fungo V.lecanii, cujo TL₅₀ foi de 3,3 dias.

A CL₅₀ para o isolado CG 904 foi de 2x10⁵ conídios mL^-1 , com variação de 1,3x10⁵ a 2,7x10⁵ conídios mL ^-1. A concentração de 10⁸ conídios mL^-1 causou 100% de mortalidade e o TL₅₀ foi de 4,4 dias (Tabela 2), dados semelhantes aos obtidos por Kim et al. (2003), quando utilizaram a concentração 10⁸ conídios mL^-1 para o afídeo A. gossypii e para a mosca-branca (T. vaporariorum). Segundo esse autor, as concentrações de 10⁴ a 10⁷ conídios mL^-1 resultaram em baixa mortalidade, e para ambas as pragas, a concentração ideal foi de 10⁸ conídios mL^-1 . A CL₅₀ para C. atlantica apresentou valores semelhantes aos obtidos por Feng et al. (1990), que estudaram a suscetibilidade dos afídeos de cereais a V. lecanii e determinaram CL₅₀ de 10⁵ conídios mL^-1 para D. noxia, M. dirhodum, R. maidis e S. graminum.

Recebido em 25 de agosto de 2004 e aprovado em 6 de maio de 2005

• ALVES, S.B. Microorganismos associados a insetos. In: ALVES, S.B. Controle microbiano de insetos Piracicaba: Fealq, 1998. p.75-96.
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• HALL, R.A. Control of whitefly Trialeurodes vaporariorum and cotton aphid Aphis gossypii in glasshouses by two isolates of the fungus Verticillium lecanii Annals of Applied Biology, v.101, p.1-11, 1982.
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• KIM, J.J.; LEE, M.H.; YOON, C.; KIM, H.; YOO, J.E.; KIM, K. Control of cotton aphid and greenhouse whitefly with a fungal pathogen Disponível em: <http://www.fftc.agnet.org/library/abstract/eb502b.html>. Acesso em: out. 2003.
• PENTEADO, S.R.C.; TRENTINI, R.F.; IEDE, E.T.; REIS FILHO, W. Ocorrência, distribuição, danos e controle de pulgões do gênero Cinara em Pinus spp. no Brasil. Revista Floresta, v.30, p.55-64, 2000.
• WILSON, H.F. Some new Lachnids of the genus Lachniella (Homoptera: Hemiptera). The Canadian Entomologist, v.51, p.18-47, 1919.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  27 Jan 2006
• Data do Fascículo
  Nov 2005

Histórico

• Aceito
  06 Maio 2005
• Recebido
  25 Ago 2004