Pesquisa Veterinária Brasileira, Volume: 29, Issue: 1, Published: 2009
  • Experimental neuropathogenesis of bovine herpesvirus 5 infection in rabbits

    Flores, Eduardo Furtado; Weiblen, Rudi; Vogel, Fernanda Silveira Flores; Dezengrini, Renata; Almeida, Sabrina Ribeiro de; Spilki, Fernando Rosado; Roehe, Paulo Michel

    Abstract in Portuguese:

    Vários aspectos da biologia do herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) têm sido estudados em coelhos, que desenvolvem infecção aguda e doença neurológica após inoculação experimental. A infecção aguda é seguida pelo estabelecimento de infecção latente, que pode ser reativada natural ou artificialmente. Os primeiros experimentos nesta espécie estabeleceram um protocolo de inoculação e monitoramento da infecção, e caracterizaram os principais aspectos virológicos, clínicos e patológicos da infecção aguda. A patogenia da infecção aguda, desde a replicação viral nos sítios de inoculação, vias e cinética de transporte viral até o encéfalo, distribuição e replicação viral no sistema nervoso central (SNC), tropismo celular e tecidual, manifestações clínicas e patologia no SNC foram detalhadamente estudados nestes animais. Posteriormente, vários aspectos biológicos e moleculares da infecção latente também foram elucidados a partir de inoculações de coelhos. Os coelhos também têm sido utilizados para estudar o fenótipo (neuroinvasividade, neurovirulência) de isolados de campo e de cepas vacinais recombinantes, proteção por imunidade passiva, proteção vacinal, eficácia de drogas anti-virais e terapêuticas de suporte da infecção neurológica. Este modelo experimental também foi utilizado para o estudo da origem e distribuição dos estímulos elétricos produzidos durante as convulsões - uma característica da infecção neurológica pelo BoHV-5 -, e para testes de medicamentos anti-convulsivantes. Ressalvadas as diferenças que certamente existem entre bovinos - os hospedeiros naturais - e coelhos, as observações oriundas deste modelo experimental tem contribuído sobremaneira para o conhecimento da biologia do BoHV-5. O presente trabalho apresenta uma coletânea de resultados e observações, publicadas ou não pelo grupo, ao longo de mais de uma década, envolvendo inoculações de coelhos para estudar diversos aspectos da infecção pelo BoHV-5.

    Abstract in English:

    Several aspects of the biology of bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) have been studied in rabbits, which develop acute infection and neurological disease upon experimental inoculation. The acute infection is followed by the establishment of latent infection, which can be naturally or artificially reactivated. The first experiments in rabbits established a protocol for virus inoculation and monitoring the infection, and characterized the main virological, clinical and pathological aspects of the acute infection. The pathogenesis of acute infection, from the initial viral replication at site of inoculation, pathways and kinetics of viral transport to the brain, distribution and virus replication in the central nervous system (CNS), cellular and tissue tropism, clinical signs and CNS pathology have been extensively studied using this animal model. Subsequently, several biological and molecular aspects of latent BoHV-5 infection have also been elucidated upon inoculation of rabbits. Rabbits have also been used to investigate the phenotype (neuroinvasiveness, neurogrowth) of field isolates and recombinant vaccine candidates, protection by passive immunity, vaccine protection, the efficacy of anti-viral drugs and support therapies for neurological disease. This animal model was also used to investigate the origin and distribution of electric impulses involved in seizures - a hallmark of BoHV-5 induced neurological infection - and also to test the efficacy of anti-convulsivants. In spite of the possible differences between rabbits and cattle - the natural host of the virus - the observations taken from this experimental model have greatly contributed to the knowledge of the biology of BoHV-5 infection. The present article presents a review of the main published and unpublished results and observations by our group, comprising more than a decade of studies on the pathogenesis of BoHV-5 infection in the rabbit model.
  • Hematology and blood biochemistry in sheep with conidiobolomycosis in northeastern Brazil

    Batista, Maria do Carmo de S.; Castro, Roberto S. de; Rego, Eneida W.; Carvalho, Fernando Aécio de A.; Silva, Silvana Maria M. S.; Carvalho, Cleyton C. D.; Riet-Correa, Franklin

    Abstract in Portuguese:

    Foram realizados eritrogramas, leucogramas, dosagens séricas de proteínas totais, albumina, globulinas, cálcio, fósforo, magnésio, cloretos, uréia, creatinina, bilirrubina total, direta e indireta e atividade sérica de aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcalina (FA) e gama-glutamiltransferase (GGT) de 56 ovinos afetados por conidiobolomicose e de 371 ovinos sadios provenientes dos mesmos rebanhos dos casos da doença. Os resultados revelaram que os ovinos com conidiobolomicose apresentam anemia arregenerativa normocítica normocrômica, leucocitose com neutrofilia e discreto desvio à esquerda regenerativo, com elevação da relação neutrófilo:linfócito, monocitose moderada, trombocitose, hipoproteinemia (hipoglobulinemia), hipomagnesemia, hipocalcemia e elevação dos teores de fósforo. As atividades séricas de AST e GGT estavam aumentadas e as de FA diminuídas. Não houve alteração nos níveis de uréia e creatinina, mas ocorreu hipoglicemia e hiperbilirrubinemia. Estes resultados podem ser utilizados para estudos experimentais da doença, em ensaios com tratamentos e para identificar casos precoces da enfermidade que não apresentem sinais clínicos. Além disso, os valores encontrados em 371 ovinos deslanados hígidos podem ser utilizados como valores referenciais para este tipo de ovinos na região semi-árida do Brasil.

    Abstract in English:

    Hematologic values, serum levels of albumin, globulins, total proteins, calcium, phosphorus, magnesium, chloride, urea nitrogen, creatinine, total, direct and indirect bilirrubin, and serum activities of aspartate aminotransferase (AST), alkalin phosphatase (AF) and gama-glutamyltransferase (GGT) were determined in 56 hair sheep with conidiobolomycosis and 371 healthy hair sheep from the same flocks. Sheep with conidiobolomycosis had nonregenerative, normocytic and normochromic anemia, leucocytosis with neutrophilia and increased nutrophil:lymphocyte rate, moderate monocytosis, moderate thrombocytosis, hypoproteinemia (hypoglobulinemia), hypomagnesemia, hypocalcemia and increased values of phosphorus. Serum activities of AST and GGT were increased and serum activity of FA decreased. Serum values of urea and creatinine were within normal values. Hypoglycemia and hyperbilirrubinemia were also observed. These results can be used for experimental studies with the disease, for treatments trials, and to detect early cases of the disease without clinical signs. Otherwise the hematologic and blood biochemistry values of healthy sheep can be used as reference values for hair sheep in the semi-arid region of Brazil.
  • Identification of the recently described new type of bovine papillomavirus (BPV-8) in a Brazilian beef cattle herd

    Claus, Marlise P.; Lunardi, Michele; Alfieri, Alice F.; Sartori, Daniele; Fungaro, Maria Helena P.; Alfieri, Amauri A.

    Abstract in Portuguese:

    A primeira descrição do papilomavírus bovino tipo 8 (BPV-8) foi realizada em amostras de papilomas de teto e de pele saudável de tetos de bovinos no Japão. Em 2007, a seqüência genômica completa do BPV-8 foi determinada. Ainda em 2007, uma variante do BPV-8 (BPV-8-EB) foi identificada em lesões papilomatosas de um bisão europeu na Eslováquia. No Brasil, apesar da infecção pelo BPV ser comumente observada em bovinos, a determinação dos tipos virais associados com a infecção ainda é esporádica. Este estudo tem o objetivo de relatar a ocorrência do BPV-8 no país. A amostra clínica foi obtida em um rebanho de corte do estado do Paraná, região sul do Brasil. O papiloma cutâneo, de aspecto macular e não-verrucoso, estava localizado na região dorsal torácica do animal. A identificação do vírus foi realizada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando primers genéricos para a amplificação parcial do gene L1. O produto amplificado, com aproximadamente 480 pb, foi clonado e os fragmentos presentes em dois clones foram seqüenciados. A comparação da seqüência de nucleotídeos com a de outros papilomavírus demonstrou 100% de identidade com o BPV-8. Assim, esta é a primeira descrição da ocorrência do BPV-8 no Brasil, o que sugere a sua presença nos rebanhos bovinos brasileiros.

    Abstract in English:

    Bovine papillomavirus type 8 (BPV-8) was first detected and described in teat warts as well as in healthy teat skin from cattle raised in Japan. The entire viral genome was sequenced in 2007. Additionally, a variant of BPV-8, BPV-8-EB, was also identified from papillomatous lesions of a European bison in Slovakia. In Brazil, despite the relatively common occurrence of BPV infections, the identification and determination of viral types present in cattle is still sporadic. The aim of this study is to report the occurrence of the recently described BPV-8 in Brazil. The virus was identified in a skin warts obtained from a beef cattle herd located in Parana state, southern Brazil. The papilloma had a macular, non-verrucous gross aspect and was located on the dorsal thorax of a cow. Polymerase chain reaction (PCR) was performed using generic primers for partial amplification of L1 gene. The obtained amplicon (480bp) was cloned and two selected clones were sequenced. The nucleotide sequence was compared to existing papillomaviral genomic sequences, identifying the virus as BPV type 8. This study represents the first report of BPV-8 occurrence in Brazil, what suggests its presence among Brazilian cattle.
  • Neospora caninum seropositivity in cattle breeds in the South Fluminense Paraíba Valley, state of Rio de Janeiro

    Munhoz, Alexandre D.; Pereira, Maria Júlia S.; Flausino, Walter; Lopes, Carlos Wilson G.

    Abstract in Portuguese:

    A realização deste estudo teve como objetivo verificar a ocorrência diferenças na distribuição da infecção por Neospora caninum em bovinos leiteiros da raça Holandesa Preta e Branca e mestiços na Mesorregião Fluminense a maior bacia leiteira do Rio de Janeiro. De um total de 2.491 vacas foram coletadas amostras de sangue de 563 de forma não randomizada, pertencentes a 57 propriedades localizadas nos municípios de Resende e Rio Claro. O tamanho da amostra por propriedade foi proporcional ao número de animais alvo da mesma. O abortamento ou distúrbios reprodutivos não foram utilizados como critérios de seleção. Foi verificada associação altamente significativa entre a soropositividade e o padrão racial (p=0,006). Ao conduzir as análises entre apenas dois padrões verificou-se os seguintes resultados: HPB versus zebuínos (p=0,0028) com 2,65 mais chances de sorpositividade em bovinos HPB; HPB versus (zebuínos + Gir x Holandês) p=0,01, com 2,23 mais chances de sopositividade também na raça HPB. Não houve diferença significativa entre HPB versus Gir x Holandês (p=0,08) e entre os zebuínos e Gir x Holandês (p=0,11). Este estudo suporta a hipótese que existe uma estreita relação entre a presença da infecção e a raça européia Holandesa Preta e Branca, na região e condições em que foi desenvolvido o presente estudo.

    Abstract in English:

    The infection by Neospora caninum of different cattle breeds in dairy properties in two municipalities of the South Fluminense Paraíba Valley, state of Rio de Janeiro, was evaluated. Considering a sampling universe of 2,491 cows, blood samples were collected from 563 dairy cows in 57 farms, which were randomically selected in proportion to the number of animals, using a random stratified sampling system. For each property the number of selected cows was proportional to the herd size. Abortion or other reproductive disorders were not considered as criteria for selecting the animals, and seropositivity was determined by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). A high association (p=0.006) between seropositivity and racial patterns was found. The analysis revealed that in comparison of pure black-and-white Holstein cows versus Zebu (p=0.0028), Holstein cows showed 2.65 times greater odds for seropositivity. In the same way, by comparing black-and-white Holstein versus Zebu + crossbreed Zebu/Holstein (p=0.01), it was noted that there is 2.23 times more chance for seropositivity in Holstein cattle. There were no significant differences concerning the comparison of Holstein cattle versus crossbreed Zebu/Holstein (p=0.08) or Zebu versus crossbreed Zebu/Holstein (p=0.11). This study supports the hypothesis that there is a close association between cattle breeds and the frequency of infection by N. caninum.
  • Occurrence and risk factors for Chlamydophilaabortus infection in sheep and goats in Pernambuco

    Pereira, Márcia de Figueiredo; Peixoto, Rodolfo de Moraes; Piatti, Rosa Maria; Medeiros, Elizabeth Sampaio de; Mota, Iagmar Oliveira da; Azevedo, Sérgio Santos de; Mota, Rinaldo Aparecido

    Abstract in Portuguese:

    Objetivou-se com este estudo identificar os fatores de risco associados à infecção por Chlamydophila abortus em caprinos e ovinos nas regiões do Litoral/ Zona da Mata e Agreste do Estado de Pernambuco. Foram colhidas 290 amostras de soros para pesquisa de anticorpos contra clamídia em 12 propriedades. Para identificar os fatores de risco foram aplicados questionários junto aos proprietários. A freqüência de animais soro-reagentes nos rebanhos estudados foi de 10,3%, sendo 12,0% para caprinos e 8,1% para ovinos, identificando-se 11/12 (91,6%) focos da infecção. Registra-se a primeira ocorrência de anticorpos anti-C. abortus em caprinos no estado de Pernambuco e em ovinos no Brasil. Os fatores de risco associados à infecção em caprinos foram a raça (OR=9,10) e o manejo intensivo (OR=6,41) e para ovinos não foram encontradas associações significativas para nenhum fator analisado. Concluiu-se que a infecção por Chlamydophila sp. encontra-se disseminada em criações de caprinos e ovinos da Zona da Mata e Agreste do Estado de Pernambuco. Medidas de controle devem ser implantadas nos criatórios estudados, enfocando principalmente os fatores de risco identificados neste estudo para reduzir a possibilidade de infecção por este agente.

    Abstract in English:

    The study aimed to identify risk factors associated with Chlamydophila abortus infection in sheep and goats from the Litoral/Zona da Mata and Agreste region of Pernambuco state, Brazil. Serum samples (n=290) were analyzed to detect Chlamydophila spp. antibodies in 12 farms. Questionnaires were applied to identify risk factors. Frequency of serum-reactive animals were 10.3% (12.0% in ewes and 8.1% in goats) and 1/12 (91.6%) infection focuses were identified. This is the first report on anti-Chlamydophhila abortus antibodies in goats and sheep in Pernambuco and Brazil, respectively. Risk factors associated with goat infection were breed (OR=9.10) and management (OR=6.41). No significant associations in any of the analyzed factors were found for sheep. In summary, Chlamydophila sp. infection is disseminated in sheep and goat herds in the region. Control measures should be established, focusing primarily risk factor identified in this study, to reduce the possibility of infection by the agent.
  • Genetic diversity of bovine viral diarrhoea virus (BVDV) from Peru and Chile

    Ståhl, Karl; Benito, Alfredo; Felmer, Ricardo; Zuñiga, Javier; Reinhardt, German; Rivera, Hermelinda; Baule, Claudia; Moreno-López, Jorge

    Abstract in Portuguese:

    Um total de 25 isolados do vírus da diarréia viral bovina (BVDV), sendo 15 originarias do Peru e 10 do Chile foram sujeitas a caracterização genética. A árvore filogenética baseada na análise da região proximal não-codificante (5'UTR) do genoma viral demonstrou que as 25 estirpes pertencem ao genótipo 1 do vírus BVD. Vinte e três destas estirpes puderam adicionalmente ser subdivididas no subtipo 1b, enquanto duas das 10 estirpes isolados provenientes do Chile foram identificadas como pertencentes ao subtipo 1a. Em conclusão, 23 de um total de 25 isolados analisados pertencem ao genótipo 1, subtipo 1b. Este é o subtipo de BVDV predominante em muitos países do mundo, incluindo os EUA. A elevada similaridade genética com isolados descritos anteriormente em outras regiões do mundo realça o papel do comércio internacional de gado no estabelecimento de diversidade genética do vírus BVD. Tanto o Peru como o Chile têm historia de importação de grandes quantidades de gado dos Estados Unidos e da Europa, no entanto sem suficiente documentação comprovativa do estado sanitário no que concerne a esta virose.

    Abstract in English:

    Twenty-five BVDV strains, detected in serum from persistently infected cattle from Peru (n=15) and Chile (n=10) were genetically characterized. The phylogenetic analysis based on the 5' UTR showed that all 25 strains belonged to genotype 1. Twenty-three of the strains could further be subdivided into subtype 1b, and two out of ten Chilean strains into subtype 1a. In conclusion, in total 23 out of 25 strains analyzed were of genotype 1, subtype 1b. This is the predominant BVDV subtype in many countries all over the world, including USA. The close homology with previously described strains reflects the influence of livestock trade on the diversity of BVDV circulating within and between countries and continents. Peru and Chile have imported large numbers of cattle from USA and Europe, mostly with insufficient or lacking health documentation.
  • Thrombectomy with Fogarty's catheter as a treatment of induced jugular thrombophlebitis in horses

    Hussni, Carlos A.; Dornbusch, Peterson T.; Yoshida, Winston B.; Alves, Ana L. G.; Nicoletti, José L. M.; Mamprim, Maria J.; Vulcano, Luiz C.

    Abstract in Portuguese:

    Trombose da veia jugular é problema freqüente na medicina eqüina, implicando muitas vezes em conseqüências fatais. O objetivo deste trabalho foi avaliar em eqüinos a aplicabilidade da trombectomia com cateter de Fogarty, técnica rotineiramente empregada pela medicina humana, no restabelecimento da perviedade vascular. Foram utilizados 10 eqüinos divididos em dois grupos de cinco animais, em que se induziu a trombose da veia jugular direita, através do acesso cirúrgico à veia e aplicação de sutura estenosante e injeção de glicose a 50%. No grupo controle avaliou-se a evolução da tromboflebite sem qualquer tipo de intervenção terapêutica. Os animais do grupo tratado foram submetidos à trombectomia com cateter de Fogarty. Foram avaliados os parâmetros clínicos gerais, regionais, ultra-sonográficos e angiográficos, nos momentos pré-indução (M-PRÉ), indução da trombose (MTI) e 10 dias de evolução da trombose (M10). A técnica empregada induziu a tromboflebite, que obstruiu completamente um segmento da veia jugular de todos os animais. Os animais do grupo controle mantiveram os trombos obstruindo totalmente o lume vascular até o final do período de avaliação, sendo que avaliações regionais mostraram principalmente o edema parotídeo e o ingurgitamento vascular, cranial à tromboflebite da veia jugular. O grupo tratado apresentou as veias jugulares pérvias ao final do experimento, confirmadas pelos exames ultra-sonográficos e angiográficos, com remissão total dos sinais clínicos. Concluiu-se que a técnica da trombectomia com cateter de Fogarty foi eficiente na desobstrução da veia jugular submetida à trombose experimental.

    Abstract in English:

    Thrombosis of jugular vein is a common problem in the equine medicine, implying frequently in fatal outcomes. The diagnosis is relatively simple, based on the clinical findings, angiographics images and ultrasonographycs. The therapeutic employed to a large extent of the cases is unsatisfactory. The purpose of this study was to evaluate the applicability of the thrombectomy with Fogarty's catheter in horses. This technique is routinely used in medicine, in the reestablishment of the vascular perviousness. Ten horses were allocated in two groups (five animals each) and induced to an unilateral thrombosis of right jugular vein, through the surgical access and an application of stenotic suture and glucose 50% injection. In the control group evolution of the thrombophlebitis without any therapeutical intervention was evaluated. The animals of the treatment group were submitted to the thrombectomy with Fogarty's catheter. General clinical parameters were analyzed at the moment of the preinduction (MPRE), induction of thrombosis (MTI), and at the 10th day of thrombosis evolution (M10). The procedure induced thrombophlebitis that completely obstructed a segment of the jugular vein in all animals. In the animals of the control group, the thrombus totally obstructed the vascular lumen until the end of the period of evaluation, and parotid edema and vascular dilated, cranial to the thrombophlebitis of jugular vein were observed. The treatment group presented all veins pervious in the end of the experiment, with total remission of the clinical signs, confirmed by angiographic and ultrasonographic examinations. So far, it was concluded that the technique of thrombectomy with Fogarty's catheter was effective in removal of the thrombosis obstruction experimentally induced in the jugular vein.
  • Pathogenic microorganisms, somatic cell count and drug residues evaluation in organic bovine milk

    Ribeiro, Márcio Garcia; Geraldo, Juliana Santos; Langoni, Hélio; Lara, Gustavo Henrique Batista; Siqueira, Amanda Keller; Salerno, Tatiana; Fernandes, Marta Catarina

    Abstract in Portuguese:

    Nos últimos anos cresce a preocupação dos consumidores quanto à qualidade do leite e às condições de produção e bem-estar dos animais. Simultaneamente, aumenta o interesse e o consumo de produtos e subprodutos de origem animal produzidos no sistema orgânico, com destaque para o leite e derivados. O presente estudo investigou a presença de microrganismos patogênicos, a sensibilidade e a multi-resistência dos isolados aos antimicrobianos, a celularidade e a presença de resíduos de drogas no leite de vacas, com e sem mastite, produzido no sistema orgânico. Foram amostradas 148 vacas no período médio de lactação, das quais duas com mastite clínica, 72 com mastite subclínica e 74 sem mastite (controles), provenientes de quatro pequenas propriedades do interior do Estado de São Paulo, certificadas como orgânicas. Staphylococcusaureus (25,7%), Streptococcus spp. (21,4%), Corynebacterium bovis (12,9%), Streptococcus agalactiae (4,3%) e Staphylococcus spp. (4,3%) foram os microrganismos mais frequentemente isolados nos animais com mastite. Aspergillus spp. foi isolado de um animal. Ceftiofur (95,2%), oxacilina (84,2%), gentamicina (76,3%) e cefoperazona (70,3%) foram os antimicrobianos mais efetivos frente aos isolados. As maiores taxas de resistência das linhagens foram constatadas para penicilina (53,5%), ampicilina (41,6%) e neomicina (38,6%). Multi-resistência a três ou mais fármacos foi encontrada em 40 (39,6%) linhagens. A média da contagem de células somáticas das propriedades para animais com mastite foi 175.742,67 céls/mL, enquanto que para os animais controles foi 58.227,6 céls/mL. A presença de resíduos de antimicrobianos foi observada no leite de quatro (2,7%) animais. Os resultados revelaram baixa celularidade média nos animais, indicativo de boa qualidade do leite. Entretanto, apontam para a necessidade da adoção de medidas de controle para microrganismos contagiosos e maior rigor na proibição do uso de antimicrobianos em fazendas de leite orgânico.

    Abstract in English:

    In last years increase the importance of milk quality and conditions of bovine milking. Simultaneously, increase the interest about organic milk and derivates. The aim of present study was investigate the milk pathogens, sensitivity and multiple drug resistance of isolates, somatic cell count and residues of drugs in milk, from cattle with and without mastitis, come from four little organic dairy farms in State of São Paulo, Brazil. Were used 148 cattle on the middle period of lactation. From these, two showed clinical mastitis, 72 subclinical mastitis and 74 without signs of mammary inflammation (controls). Staphylococcusaureus (25.7%), Streptococcus spp. (21.4%), Corynebacterium bovis (12.9%), Streptococcus agalactiae (4.3%) and Staphylococcus spp. (4.3%) were the more-frequent microorganisms isolated from animals with mastitis. Aspergillus spp. was isolated from one animal. Ceftiofur (95.2%), oxacillin (84.2%), gentamicin (76.3%) and cefoperazone (70.3%) were the more effective drugs. High resistance of isolates were found to penicillin (53.5%), ampicillin (41.6%) and neomycin (38.6%). Multiple drug resistance to three or more drugs was observed in 40 (39.6%) isolates. Media of somatic cell count encountered in animals with mastitis and controls were 175,742.67cs/mL and 58,227.6 cs/mL, respectively. Antimicrobials residues in milk were detected in four (2.7%) animals. The present findings showed the low somatic cell count of animals, indicative of good quality of milk. However, pointed the need of control measures for contagious pathogens of bovine mastitis and more attention for prohibition of antimicrobial use in organic dairy farms.
  • Toxoplasma gondii in experimentally infected Bos taurus and Bos indicus semen and tissues

    Scarpelli, Leslie; Lopes, Welber Daniel Zanetti; Migani, Matheus; Bresciani, Katia Denise Saraiva; Costa, Alvimar José da

    Abstract in Portuguese:

    Dezoito bovinos foram inoculados com Toxoplasma gondii e distribuídos aleatoriamente em três grupos de seis bovinos cada: GI (2,5x10(5) oocistos da cepa "P"), GII (5,0x10(6) taquizoítos da cepa "RH") e GIII (controle). Exames clínicos, sorológicos e parasitêmicos foram realizados. Pesquisas do parasito, por meio da bioprova e pela técnica de Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), foram realizadas no sêmen e em fragmentos de musculatura esquelética, linfonodos, cérebro, retina, baço, fígado, pulmão, testículo, epidídimo e vesícula seminal. Amostras de sangue e sêmen foram colhidas nos dias -2, -1, 1, 3, 5, 7, 14 e, semanalmente, até o 84º dia pós-infecção (DPI). Os bovinos inoculados (GI e GII) apresentaram hipertermia do 3º ao 16º DPI. Anticorpos contra T. gondii foram detectados (IFI) no 5º DPI (1:16), em ambos grupos inoculados (oocistos e taquizoítos), atingindo picos de 1:4096 no 7º DPI. Surtos parasitêmicos ocorreram em todos os bovinos infectados, principalmente do 7º ao 28º DPI, independente da cepa e inóculo utilizados. O bioensaio revelou a presença do parasito em amostras seminais dos bovinos infectados com oocistos (GI) e taquizoítos (GII), em diversas datas experimentais, entre o 7º e 84º DPI. Parasitismo tissular por T. gondii foi diagnosticado por meio da bioprova e pela técnica da PCR, em vários fragmentos de tecidos e/ou órgãos. Os achados sugerem a possibilidade da ocorrência da transmissão sexual do T. gondii na espécie bovina.

    Abstract in English:

    Eighteen young steers were inoculated with Toxoplasma gondii and randomly distributed into three groups of six animals each: GI, 2.5x10(5) "P" strain oocysts, GII, 5.0x10(6) "RH" strain tachyzoites, and GIII (Control). Clinical, serological and parasitemia exams were realized. Parasite investigation by bioassay and PCR was realized on semen and fragments of skeletal musculature, lymph nodes, brain, retina, spleen, liver, lung, testicle, epididymis and seminal vesicle. Blood and semen samples were collected on days -2, -1, 1, 3, 5, 7, 14 and weekly thereafter, up to postinfection day (PID) 84. The inoculated steers (GI and GII) presented hyperthermia from PID 3 to 16. Antibodies against T. gondii were detected through the indirect fluorescence antibody test (IFAT) on PID 5 (1:16) in both inoculated groups (oocysts and tachyzoites), reaching peaks of 1:4096 on PID 7. Parasitemia outbursts occurred in all infected bovines, principally from PID 7 to 28, independent of the strain and inoculate used. Bioassays revealed the presence of parasites in semen samples of animals infected with oocysts (GI) and tachyzoites (GII) on several experimental days between PID 7 and 84. Tissue parasitism by T. gondii was diagnosed by bioassay and the PCR technique in several organ and tissue fragments. These findings suggest the possibility of sexual transmission of T. gondii in the bovine species.
  • Studies of the management of the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus in southern Rio Grande do Sul, Brazil

    Santos, Tânia Regina B.; Farias, Nara Amélia R.; Cunha Filho, Nilton A.; Pappen, Felipe G.; Vaz Junior, Itabajara S.

    Abstract in Portuguese:

    Na região sul do Rio Grande do Sul a infestação dos bovinos por Rhipicephalus (Boophilus) microplus ocorre, principalmente, entre os meses de outubro e abril, devido às condições climáticas. Além do conhecimento do ciclo biológico desse parasito, também é fundamental conhecer a epidemiologia, para estabelecer estratégias de controle. No Rio Grande do Sul, e também no Brasil, existem poucos estudos epidemiológicos a respeito da resistência aos acaricidas. Além disso, a grande área geográfica e a deficiência estrutural quanto ao uso e acesso a bancos de dados dificultam a obtenção de dados confiáveis. O presente estudo teve como objetivo realizar um inquérito abordando a percepção dos produtores da região sul do Rio Grande do Sul, quanto à identificação de populações de R. (B.) microplus difíceis de controlar com acaricidas e os fatores de risco para a seleção de populações de carrapatos resistentes. Para execução do trabalho foram coletados dados sobre o controle do carrapato de bovinos de corte, em 85 propriedades de sete municípios, localizados na região sul do Estado. Os resultados revelaram a existência de associação positiva entre a dificuldade de controlar o carrapato com os acaricidas e o grau de instrução do proprietário (até o ensino fundamental com OR=3,67 e p=0,01) e o número de aplicação de carrapaticida por ano (superior a 4 com OR=4,05 e p=0,006). Esses resultados indicam também que propriedades com mais de 100 bovinos de corte em criação extensiva, na região sul do rio Grande do Sul apresentam características que podem contribuir para uma maior vida útil dos carrapaticidas do que as verificadas em outras regiões do País.

    Abstract in English:

    In the southern region of Rio Grande do Sul, cattle become infested with Rhipicephalus (B.) microplus mainly between October and April due to the climatic conditions. In addition to knowing its life cycle, knowledge of parasite's epidemiology is essential to establish management strategies. Epidemiological studies on resistance to acaricides in Rio Grande do Sul as well as in the rest of Brazil are scarce. Moreover, the large geographical area and the structural deficiency with respect to the use and access to databases make reliable data difficult to obtain. The present study surveyed the perception by cattle breeders in the southern region of Rio Grande do Sul in regards of identification of R. (B.) microplus populations that are difficult to manage using acaricides, as well as the risk factors for the selection of resistant tick populations. Tick management data on beef cattle in 85 properties of seven municipalities were collected. The results revealed that the difficulty in tick management correlated positively with levels of education of the farm owners (up to elementary school, OR = 3.67 and p = 0.01) and with the yearly number of acaricide applications (over four, with OR = 4.05 and p= 0.006). These results also suggest that properties with more than 100 beef cattle under extensive farming conditions in the southern region of Rio Grande do Sul show characteristics that may contribute to longer acaricide lifetimes as compared to other regions in the Country.
  • In vitro evaluation of the efficacy of commercial disinfectants used in pre and post-dipping against Staphylococcus spp. isolated from bovine mastitis

    Medeiros, Elizabeth Sampaio de; Santos, Marcos Veiga dos; Pinheiro Júnior, José Wilton; Faria, Eduardo Bento de; Wanderley, Guido Gomes; Teles, José Andreey Almeida; Mota, Rinaldo Aparecido

    Abstract in Portuguese:

    Objetivou-se com este estudo avaliar a sensibilidade in vitro de Staphylococcus spp.frente a alguns desinfetantes comerciais utilizados no pré e pós-dipping em vacas leiteiras. Foram testados um total de 60 isolados de Staphylococcus spp. identificados como S. aureus (50) e Staphylococcus coagulase positiva (10) recuperados de glândulas mamárias de vacas com mastite subclínica procedentes das regiões Metropolitana do Recife, Agreste e Zona da Mata do Estado de Pernambuco. O estudo da eficácia dos desinfetantes utilizados no pré e pós-dipping foi realizado utilizando-se os seguintes princípios ativos: cloro (2,5%), iodo (0,57%), clorexidine (2,0%), amônia quaternária (4,0%) e ácido lático (2,0%) em quatro tempos distintos (15", 30", 60" e 300"). Observou-se que 100% de S. aureus foram sensíveis ao iodo, 93,3% sensíveis a clorexidine, 80% sensíveis a amônia, 35,6% sensíveis ao ácido lático e 97,8% resistentes ao cloro no tempo de 60". Com relação a Staphylococcus coagulase positiva (SCP), 100% dos isolados foram sensíveis ao iodo, 81,8% sensíveis a amônia quaternária, 99,9% sensíveis ao ácido lático, 72,7% sensíveis a clorexidine e 100% resistentes ao cloro no tempo de 60". Conclui-se que a maior atividade desinfetante in vitro foi verificada para o iodo e clorexidine frente a S. aureus e do iodo e ácido lático frente aos SCP e que há necessidade de avaliação periódica dos desinfetantes utilizados nas propriedades leiteiras nas regiões estudadas, pois, existem variações no perfil de sensibilidade e resistência aos desinfetantes que podem comprometer os programas de controle da mastite bovina causada por Staphylococcus spp.

    Abstract in English:

    The objective of this investigation was to evaluate the in vitro sensibility of Staphylococcus spp. to several commercially available disinfectants used for pre and post dipping. A total of 60 isolates of Staphylococcus spp., identified as Staphylococcus aureus (50) and Positive coagulase Staphylococcus (10) were obtained from the mammary glands of dairy cows with subclinical mastitis in the regions of Metropolitan Recife, the Agreste and the Zona da Mata of the State of Pernambuco, Brazil. As active ingredients were used a chlorine base (25%), iodine (0.6%), chlorhexidine (2.0%), quaternary ammonium (4.0%), and lactic acid (2.0%) at four specific intervals (15", 30", 60", and 300"). One hundred percent of S. aureus was found to be sensitive to iodine, 93.3% to chlorhexidine, 80% to ammonia, 35.6% to lactic acid, and 97.8% were resistant to chlorine at a 60-minute interval. With respect to the Positive coagulase Staphylococcus (SCP), 100.0% of the isolates were sensitive to iodine, 81.8% to quaternary ammonium, 99.9% to lactic acid, 72.7% to chlorhexidine, and 100% was resistant to chlorine at an interval of 60 minutes. It can be concluded that the highest disinfectant activity in vitro was found to be with iodine and chlorhexidine for S. aureus, and with iodine and lactic acid for SCP. A further conclusion was that it is important to undertake a periodic evaluation of the disinfectants used on the dairy properties in the regions studied, given the variety of sensibilities and resistance to disinfectants used, which may prejudice the control of bovine mastitis caused by Staphylococcus spp.
  • Development and evaluation of a recombinant DNA vaccine candidate expressing porcine circovirus 2 structural protein

    Silva Júnior, Abelardo; Castro, Luiza A.; Chiarelli Neto, Orlando; Silva, Fernanda M.F.; Vidigal, Pedro M.P.; Moraes, Mauro P.; Almeida, Márcia R.

    Abstract in Portuguese:

    O circovírus suíno 2 (PCV2) é geralmente associado à síndrome da circovirose suína, que é considerada uma importante doença de suínos e possui um sério impacto econômico na suinocultura mundial. Este trabalho descreve a construção de um plasmídeo recombinante que expressa a proteína estrutural do PCV2 e a avaliação das respostas imune humoral e celular por meio de vacinação em camundongos BALB/c. O candidato vacinal foi submetido a análises in vivo, determinando a capacidade de induzir resposta imune específica em camundongos. O DNA de um isolado brasileiro de PCV2 foi extraído e o gene que codifica para a proteína do capsídeo foi amplificado por PCR e inserido num plasmídeo de expressão. Grupos de camundongos BALB/c foram inoculados por via intramuscular e intradérmica a cada 15 dias, com 100µg e 50µg da construção vacinal, respectivamente. Outro grupo foi inoculado com 100µg do plasmídeo original, correspondente ao grupo controle. A soroconversão e a resposta celular dos grupos de camundongos BALB/c vacinados foram comparados como parâmetros de avaliação vacinal. A soroconversão foi avaliada por um teste de ELISA. Após 3 imunizações, as células esplênicas dos animais imunizados foram utilizadas nos ensaios de linfoproliferação. A soroconversão para o PCV2 foi detectada por ELISA nos animais inoculados com a construção vacinal quando comparados com o grupo controle. Nos ensaios de linfoproliferação foi observada uma grande proliferação celular nos animais inoculados comparados ao grupo controle. Portanto, o candidato vacinal demonstrou ser capaz de induzir tanto uma resposta humoral e celular nos camundongos inoculados.

    Abstract in English:

    Porcine circovirus 2 (PCV2) is generally associated with the porcine circovirosis syndrome, which is considered an important disease of swine and has potentially serious economic impact on the swine industry worldwide. This article describes the construction of a recombinant plasmid expressing the PCV2 structural protein and the evaluation of cellular and humoral immune responses produced by this recombinant vaccine in BALB/c mice. The vaccine candidate was obtained and analyzed in vivo, in an effort to determine the ability to induce a specific immune response in mice. DNA was extracted from a Brazilian PCV2 isolate and the gene coding for Cap protein was amplified by PCR and inserted into an expression plasmid. Groups of BALB/c mice were inoculated intra-muscularly and intradermally in a 15-day interval, with 100 µg and 50 µg of the vaccine construct, respectively. Another group was inoculated intramuscularly with 100 µg of empty plasmid, corresponding to the control group. Seroconversion and cellular response in BALB/c mice were compared and used for vaccine evaluation. Seroconversion was analyzed by ELISA. After a series of 3 immunizations the spleen cells of the immunized animals were used to perform lymphocyte proliferation assays. Seroconversion to PCV2 was detected by ELISA in the animals inoculated with the vaccine construct when compared with control groups. Lymphocyte proliferation assays showed a stronger cell proliferation in the inoculated animals compared with the control group. Thus, the vaccine candidate construct demonstrated to be able to induce both humoral and cellular responses in inoculated mice.
  • Experimental pneumonic mannheimiosis in calves: nasal and nasopharingeal swabs for diagnostic

    Coutinho, Adriana de Souza; Oliveira Filho, José Paes de; Silva, Daniel Pessoa Gomes da; Oliveira, Andreza Pimenta de; Marcondes, Júlio Simões; Chiacchio, Simone Biagio; Paes, Antônio Carlos; Siqueira, Amanda Keller; Amorim, Rogério Martins; Gonçalves, Roberto Calderon

    Abstract in Portuguese:

    Um modelo experimental de mannheimiosepneumônica bovina (MPB) foi utilizado com o objetivo de avaliar as espécies bacterianas das cavidades nasais e nasofaringeanas em diferentes momentos do curso da doença, bem como verificar a eficiência diagnóstica do exame microbiológico dos swabs nasais (SN) e nasofaringeanos (SNF). Um total de 28 bezerros foi distribuído aleatoriamente em quatro grupos experimentais (G1 a G4). SN e SNF foram colhidos sete dias antes e 12 (G1), 24 (G2), 48 (G3) e 72 (G4) horas após a inoculação intrabronquial de Mannheimia haemolytica. Após a indução da MPB, a bactéria M. haemolytica biotipo A foi predominante nos SN e SNF, sendo isolada em todos os momentos avaliados, com exceção de um SN colhido 24 horas após a indução da infecção. Não houve diferença significativa nas taxas de isolamento de Pasteurella multocida nos SN ou SNF, colhidos antes e após a indução da MPB. Contudo, esta bactéria passou a ser isolada mais freqüentemente após a indução da MPB, principalmente no SNF. Portanto, pode-se concluir que o exame microbiológico de SN e SNF é um teste auxiliar no diagnóstico da MPB.

    Abstract in English:

    An experimental model of bovine pneumonic mannheimiosis (BPM) was used to evaluate the nasal and nasopharynx bacterial species of calves during the course of the disease and for checking the diagnostic efficiency of nasal swab (NS) and nasopharingeal swab (NPS) microbiological exams. A total of 28 calves were randomized into four experimental groups (G1-G4). NS and NPS were obtained 7 days before and 12 (G1), 24 (G2), 48 (G3) e 72 (G4) hours after intrabronchial inoculation of Mannheimia haemolytica. After the induction of BPM, M. haemolytica biotype A was the predominant isolated bacterium in NS and NPS in all evaluated sampling times, except for one NS (harvested 24 hours). There were no significant statistical differences for the rates of Pasteurella multocida isolation in NS and NPS, harvested before and after the induction of BPM. However, this bacterium was isolated more frequently after the induction of BPM, mainly in NPS. Therefore, the microbiological NS and NPS exams were important auxiliary tests for diagnosing BPM.
  • Poisoning by closantel in sheep and goats in the State of Santa Catarina, Brazil

    Furlan, Fernando Henrique; Lucioli, Joelma; Borelli, Vanessa; Fonteque, Joandes Henrique; Stolf, Luiz; Traverso, Sandra Davi; Gava, Aldo

    Abstract in Portuguese:

    Descrevem-se dois surtos de intoxicação por clo-santel, um em ovinos e outro em caprinos, no Estado de San-ta Catarina. No primeiro surto, de 12 ovinos que adoeceram 5 apresentaram cegueira, desses três morreram (Ovinos 1-3) e dois (Ovinos 4 e 5) foram eutanasiados, 6 meses após ficarem cegos. No segundo surto, de 26 caprinos que adoeceram, seis animais sobreviveram, porém ficaram cegos, e um deles foi eutanasiado. Clinicamente os animais apresentavam depressão, ataxia, incoordenação motora e reflexo pupilar diminuído a ausente. Em alguns animais esse quadro evoluiu para cegueira bilateral com ausência de reflexo de ameaça e midríase bilateral irresponsiva. Ao exame oftálmico verificou-se atrofia dos vasos da retina e hiperreflexia. Pelo exame histológico observou-se edema mielínico levando a status spongiosus no sistema nervoso central e neuropatia compressiva no nervo óptico, acompanhada de degeneração e/ou atrofia da retina. O objetivo deste trabalho é descrever os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos da intoxicação por closantel em ovinos e caprinos.

    Abstract in English:

    Two outbreaks of closantel overdosage in sheep and goat flocks are described. In the first outbreak 12 sheep were affected, 5 of them showed blindness, three sheep died (Sheep 1-3) and two were euthanized 6 months after the onset of clinical manifestation (Sheep 4 and 5). In the second outbreak 26 goats were affected, from which six survived despite blindness and one was euthanized. Clinically the animals showed depression, ataxia, motor incoordination, decreased or absent pupil reflexes. In some animals this clinical picture developed to bilateral blindness, with no reaction to threat and bilateral irresponsive midriasis. In the ophthalmic examination retinal vessel atrophy and hyperreflexia were observed. The histological examination showed myelin edema leading to status spongiosus in the central nervous system and compressive neuropathy of the optic nerve, associated with retinal degeneration and/or atrophy. This report aims to describe the epidemiologic, clinic and pathologic aspects of closantel overdosage in sheep and goats.
  • Sheep poisoning by Panicum dichotomiflorum in northeastern Brazil

    Riet-Correa, Franklin; Haraguchi, Mitsue; Dantas, Antônio F. M.; Burakovas, Rodrigo G.; Yokosuka, Akihito; Mimaki, Yoshihiro; Medeiros, Rosane M.T.; Matos, Polyanna F. de

    Abstract in Portuguese:

    Diferentes espécies de Panicum, incluindo P. dichotomiflorum,causam fotossensibilização em ovinos, eqüinos, bovinos e caprinos. Um surto de fotossensibilização hepatógena ocorreu em 3 rebanhos de ovinos no município de Casa Nova, Bahia. Oitenta e um de 365 ovinos adoeceram e 39 morreram. Cordeiros lactentes e ovinos de menos de um ano foram mais afetados. Jumentos, cabras e bovinos que permaneciam nas mesmas pastagens não foram afetados. Clinicamente observou-se edema da face, seguido por dermatite, principalmente da face, orelhas e garupa, corrimento ocular, opacidade da córnea com cegueira, e avermelhamento do rodete coronário e casco. Na necropsia de um cordeiro afetado o fígado estava amarelado. Na histologia observou-se necrose aleatória de hepatócitos no fígado e áreas focais de necrose de miócitos no miocárdio. Amostras de P. dicotomiflorum foram analisadas por cromatografia em camada delgada e aquelas contendo saponinas foram isoladas por HPLC utilizando uma coluna RP-C18 com mistura de metanol e água. Os compostos isolados foram submetidos a espectroscopia de ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN ¹H) e de carbono (RMN 13C). As reações foram positivas para saponinas furostanólicas com o mesmo Rf que os padrões de protodioscina (0,21) e metilprotodioscina (0,32). Este resultado e os dados espectroscópicos sugerem a presença, em P. dichotomiflorum, de metilprotodioscina e uma mistura de isômeros (25R)- e (25S)- de protodioscina em uma proporção de 3:1.

    Abstract in English:

    Different species of Panicum, including P. dichotomiflorum,have been reported as a cause of photosensitization in sheep, horses, cattle and goats. An outbreak of hepatogenous photosensitization occurred in 3 flocks of hair sheep in the Brazilian semiarid region. Eighty one out of 365 sheep were affected and 39 died. The main affected animals were nursing lambs and sheep younger than one year old. Donkeys, goats and cattle grazing in the same pasture were not affected. Clinical signs were edema of the head, followed by dermatitis, mainly in the face, ears, and croup, ocular discharge, corneal opacity with blindness, and redness of the coronary band and hoof. At necropsy of one affected lamb the liver was yellowish. Upon histologic examination scattered necrotic hepatocytes were observed in the liver and focal areas of necrosis of myocytes appeared in the heart. Samples of P. dicotomiflorum were analyzed by TLC and those containing saponins were isolated by HPLC using RP-C18 column and eluted with a mixture of MeOH and H2O. The isolated compounds were submitted to ¹H and 13C NMR spectroscopy. Reactions were positive to furostanol saponins with the same Rf of the standard protodioscin (0.21) and methylprotodioscin (0.32). The spectroscopic results indicated a mixture of (25R)- and (25S)-protodioscin isomers in a proportion of 3:1, and methylprotodioscin.
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