Pesquisa Veterinária Brasileira, Volume: 33, Issue: 12, Published: 2013
  • Anthelmintic resistance in gastrointestinal nematodes of small ruminants: advances and limitations for diagnosis Animais De Produção

    Fortes, Fernanda S.; Molento, Marcelo B.

    Abstract in Portuguese:

    A seleção e a crescente disseminação de nematoides resistentes aos anti-helmínticos mais comumente utilizados, benzimidazóis (BZs), imidazotiazóis e lactonas macrocíclicas (LMs), constituem um sério entrave na produção de pequenos ruminantes em todo o mundo. O uso de métodos eficientes e sensíveis para a detecção e o monitoramento da resistência anti-helmíntica no campo torna-se urgente, especialmente para os grupos de BZs e LMs, devido aos constantes relatos de resistência. A obtenção de um diagnóstico preciso e precoce da resistência é extremamente importante para auxiliar a tomada de decisão em programas de controle parasitário, com o objetivo de preservar a vida útil dos produtos e limitar o desenvolvimento da resistência nas populações de nematoides. Os testes in vivo e, mais recentemente, os testes in vitro têm sido desenvolvidos para a detecção de nematoides resistentes aos principais grupos de anti-helmínticos. No entanto, a disponibilidade de testes in vitro validados e o seu uso prático ainda são muito limitados. Embora o teste de redução na contagem de ovos nas fezes (TRCOF, in vivo - indireto) seja o principal método de escolha para a detecção de resistência no campo, vem recebendo críticas quanto à validade dos resultados, e passa por significativas modificações. Além disso, o desenvolvimento de técnicas moleculares a partir de alterações genômicas gerou avanços consideráveis nessa área de investigação, com o uso de mutações nos códons 167, 198 e 200 do gene da β-tubulina como principais SNPs (polimorfismos de nucleotídeo único; do inglês Single Nucleotide Polymorphisms) associados à resistência aos BZs. A presente revisão tem o objetivo de discutir os métodos de diagnóstico disponíveis para a detecção de resistência anti-helmíntica em nematoides de pequenos ruminantes, destacando progressos e obstáculos para seu uso na rotina laboratorial e no campo.

    Abstract in English:

    The selection and growing spread of resistant nematodes to the most commonly used anthelmintics, benzimidazoles (BZs), imidazoles and macrocyclic lactones (MLs), constitutes a serious obstacle of small ruminants production worldwide. The use of efficient and sensitive methods for detection and monitoring of anthelmintic resistance in the field becomes urgent, especially for the BZs and MLs groups due to its frequent resistant reports. Obtaining an early and accurate diagnosis of resistance is extremely important to aid decision-making regarding parasite control programs, with the objective to preserve the lifespan of existing products, and to limit the development of resistance in nematode populations. The in vivo tests and the more recent in vitro tests have been developed for the detection of nematode resistant to the major anthelmintic groups. However, the availability of validated in vitro tests and its practical use is still very limited. Although the faecal egg-count reduction test (FECRT, in vivo - indirect) is the primary method of choice for the detection of resistance in the field it has being criticized for its results and is receiving significant modifications. Moreover, the development of molecular techniques from genomic changes have generated considerable advances in this research area, with the use of mutations at codons 167, 198 and 200 of β-tubulin gene as the main SNPs (single nucleotide polymorphisms) associated with BZs resistance. This review aims to discuss the available diagnostic methods for the detection of anthelmintic resistance in nematodes of small ruminants, highlighting key developments and obstacles to its use in the laboratory and in the field.
  • Cellular immune response of Curraleiro Pé-duro and Nellore calves following Mycobacterium bovis-BCG vaccination Livestock Diseases

    Maggioli, Mayara Fernanda; Lobo, Joyce Rodrigues; Fioravanti, Maria Clorinda Soares; Kipnis, André; Junqueira-Kipnis, Ana Paula

    Abstract in Portuguese:

    O presente estudo teve como objetivo avaliar níveis sanguíneos de células CD4, CD8 e γδ no sangue periférico de bezerros Curraleiro Pé-Duro, bem como a produção específica de IFN-γ por essas células em resposta à vacinação com BCG, através de citometria de fluxo. A resposta imune específica contra BCG também foi avaliada por teste tuberculínico, realizado antes e 45 dias após a vacinação. Para fins de comparação, os mesmos parâmetros foram investigados em bezerros da raça Nelore, uma raça bovina exótica com resistência demonstrado anteriormente. Naturalmente, animais da raça Curraleiro Pé-Duro apresentaram maiores níveis de CD4, CD8 e linfócitos γδ. Em resposta a vacina, Curraleiro Pé-duro mostrou maior capacidade de responder especificamente ao BCG, gerando perfil de resistência (Th1), evidenciado pelo maior número de células CD4+ específicas produtoras de IFN-γ e maior reação cutânea a por tuberculina. Os maiores níveis basais de linfócitos, maior produção de IFN-γ e reação cutânea à prova tuberculínica provavelmente desempenham um papel positivo na proteção/resistência ao Mycobacterium tuberculosis.

    Abstract in English:

    The present study aimed to assess the CD4, CD8 and γδ blood levels for Curraleiro Pé-duro, as well as the specific IFN-γ response after BCG vaccination using flow cytometry. The specific immune response against BCG was also evaluated by tuberculin skin test, performed before and 45 days after the vaccination. For comparison purposes, the same parameters were investigated on Nellore calves, an exotic bovine with resistance previously demonstrated. Naturally, Curraleiro Pé-duro animals had greater levels of CD4, CD8 and γδ lymphocytes (p<0.05). In response to vaccine, Curraleiro Pé-duro showed greater ability to respond specifically to BCG, generating resistance profile (Th1), evidenced by greater number of antigen specific CD4+ cells producing IFN-γ (p<0.05) and also higher tuberculin skin test reaction (p<0.05). Additionally, vaccinated Curraleiro Pé-duro calves had higher CD4 cells numbers than both Nellore control (p<0.05) and vaccinated groups (p<0.05). Curraleiro Pé-duro calves' higher basal lymphocytes blood level and stronger response in both IFN-γ and tuberculin skin test parameters probably play a positive role on protection/resistance to Mycobacterium bovis.
  • Mapping the sites of latency and reactivation by bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) and a thymidine kinase-deleted BoHV-5 in lambs Livestock Diseases

    Cadore, Gustavo C.; Marcon, Gian; Brum, Mario Celso Sperotto; Weiblen, Rudi; Flores, Eduardo F.

    Abstract in Portuguese:

    Um recombinante do herpesvírus bovino tipo 5 com deleção no gene da timidina quinase (BoHV-5tkΔ) foi capaz de estabelecer latência e reativar - embora ineficientemente - em modelo experimental em ovinos (Cadore et al. 2013). Como a reativação de alfaherpesvírus defectivos na TK em tecido neural é improvável, o presente estudo investigou os sítios de latência e reativação por esse recombinante em ovinos. Para isso, grupos de ovinos foram inoculados com a cepa de BoHV-5 parental (SV-507/99) ou com o recombinante BoHV-5tkΔ. Durante a infecção latente (dia 40 pós-infecção, pi) a distribuição do DNA do vírus recombinante no encéfalo de ovinos infectados experimentalmente foi similar ao do vírus parental (SV-507/99). O DNA de ambos os vírus foi detectado consistentemente por PCR nos gânglios trigêmeos (TGs), frequentemente nas tonsilas faríngeas e palatinas e, com menos frequência, nos linfonodos retrofaríngeos. Após administração de dexametasona (Dx), o vírus recombinante foi raramente detectado nas secreções nasais, contrastando com excreção abundante do vírus parental. RT-PCR para mRNA de um gene tardio (glicoproteína D) realizado em tecidos de animais eutanasiados 3 dias pós-Dx demonstrou reativação do vírus parental em tecido neural (TGs) e não-neural (tonsilas, linfonodo). Em contraste, a reativação do vírus recombinante ficou restrita ao tecido linfoide. Esses resultados demonstram que tanto o BoHV-5 parental quanto o recombinante estabelecem latência em sítios neurais e não-neurais. No entanto, o recombinante BoHV-5tkΔ parece reativar apenas nos tecidos não-neurais (linfoide). De qualquer forma, a capacidade do recombinante reativar a infecção latente deve ser considerada no contexto de segurança vacinal.

    Abstract in English:

    A thymidine kinase (tk)-deleted bovine herpesvirus 5 (BoHV-5tkΔ) was previously shown to establish latent infection and reactivate - even poorly - in a sheep model (Cadore et al. 2013). As TK-negative alphaherpesviruses are unlike to reactivate in neural tissue, this study investigated the sites of latency and reactivation by this recombinant in lambs. For this, groups of lambs were inoculated intranasally with the parental BoHV-5 strain (SV-507/99) or with the recombinant BoHV-5tkΔ. During latent infection (40 days post-inoculation, pi), the distribution of recombinant virus DNA in neural and non-neural tissues was similar to that of the parental virus. Parental and recombinant virus DNA was consistently detected by PCR in trigeminal ganglia (TGs); frequently in palatine and pharyngeal tonsils and, less frequently in the retropharyngeal lymph nodes. In addition, latent DNA of both viruses was detected in several areas of the brain. After dexamethasone (Dx) administration (day 40pi), the recombinant virus was barely detected in nasal secretions contrasting with marked shedding of the parental virus. In tissues of lambs euthanized at day 3 post-Dx treatment (pDx), reverse-transcription-PCR (RT-PCR) for a late viral mRNA (glycoprotein D gene) demonstrated reactivation of parental virus in neural (TGs) and lymphoid tissues (tonsils, lymph node). In contrast, recombinant virus mRNA was detected only in lymphoid tissues. These results demonstrate that BoHV-5 and the recombinant BoHV-5tkΔ do establish latent infection in neural and non-neural sites. Reactivation of the recombinant BoHV-5tkΔ, however, appeared to occur only in non-neural sites. In anyway, the ability of a tk-deleted strain to reactivate latent infection deserves attention in the context of vaccine safety.
  • Detection of virulence-associated genes in Salmonella Enteritidis isolates from chicken in South of Brazil Livestock Diseases

    Borges, Karen A.; Furian, Thales Q.; Borsoi, Anderlise; Moraes, Hamilton L.S.; Salle, Carlos T.P.; Nascimento, Vladimir P.

    Abstract in Portuguese:

    Salmonella spp. estão entre os principais agentes causadores de doenças transmitidas por alimentos, e o sorovar Salmonella Enteritidis é o mais frequentemente isolado no mundo. A virulência de Salmonella spp. e a sua interação com o hospedeiro são processos complexos que envolvem fatores de virulência para sobreviver às defesas do hospedeiro. O objetivo deste estudo foi detectar genes de virulência em cepas de S. Enteritidis isoladas a partir de fontes avícolas no sul do Brasil. Ensaios de PCR foram desenvolvidos para a detecção de nove genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH e spvC) associados à virulência em oitenta e quatro amostras de S. Enteritidis. Os genes invA, hilA, sivH, sefA e avrA estavam presentes em 100% dos isolados; lpfA e sopE estavam presentes em 99%; agfA em 96%; e o gene spvC estava presente em 92%. Foi possível caracterizar os isolados em quatro perfis genéticos distintos (P1, P2, P3 e P4), sendo P1 positivo para todos os genes; P2 negativo apenas para spvC; P3 negativo para agfA e P4 negativo para lpfA, spvC e sopE. O perfil de maior frequência foi P1, presente em 88% dos isolados. Apesar de todos os isolados pertencerem ao mesmo sorovar, foi possível observar variações na presença de genes associados à virulência entre os mesmos. A caracterização dos mecanismos de virulência circulantes na população de Salmonella Enteritidis é importante para um maior entendimento da sua biologia e patogenicidade. A frequência destes genes e o estabelecimento de perfis genéticos podem ser utilizados para determinar os padrões de virulência dos isolados. Estes padrões, associados a estudos in vivo, podem auxiliar na elaboração de ferramentas que permitam predizer a capacidade de virulência das diferentes cepas.

    Abstract in English:

    Salmonella spp. are considered the main agents of foodborne disease and Salmonella Enteritidis is one of the most frequently isolated serovars worldwide. The virulence of Salmonella spp. and their interaction with the host are complex processes involving virulence factors to overcome host defenses. The purpose of this study was to detect virulence genes in S. Enteritidis isolates from poultry in the South of Brazil. PCR-based assays were developed in order to detect nine genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH and spvC) associated with the virulence in eighty-four isolates of S. Enteritidis isolated from poultry. The invA, hilA, sivH, sefA and avrA genes were present in 100% of the isolates; lpfA and sopE were present in 99%; agfA was present in 96%; and the spvC gene was present in 92%. It was possible to characterize the isolates with four different genetic profiles (P1, P2, P3 and P4), as it follows: P1, positive for all genes; P2, negative only for spvC; P3, negative for agfA; and P4, negative for lpfA, spvC and sopE. The most prevalent profile was P1, which was present in 88% of the isolates. Although all isolates belong to the same serovar, it was possible to observe variations in the presence of these virulence-associated genes between different isolates. The characterization of the mechanisms of virulence circulating in the population of Salmonella Enteritidis is important for a better understanding of its biology and pathogenicity. The frequency of these genes and the establishment of genetic profiles can be used to determine patterns of virulence. These patterns, associated with in vivo studies, may help develop tools to predict the ability of virulence of different strains.
  • Detection of IgG antibodies against Trypanosoma vivax in cattle by indirect immunofluorescence test Animais De Produção

    Guerra, Neurisvan R.; Monteiro, Maria F.M.; Sandes, Hévila M.M.; Cruz, Nadine Louise Nicolau da; Ramos, Carlos A.N.; Santana, Vania Lúcia de Assis; Souza, Marcilia Maria Alves de; Alves, Leucio Câmara

    Abstract in Portuguese:

    Trypanosoma vivax infecta uma grande variedade de animais ungulados selvagens e domésticos, podendo causar grande impacto na produção de ruminantes. Este trabalho teve como objetivo avaliar a detecção de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em bovinos provenientes do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, foram analisadas 2,053 amostras de soro sanguíneo de bovinos provenientes de rebanhos de municípios do estado de Pernambuco, os quais foram analisados através da Reação de Imunofluorescência Indireta. Das amostras testadas 13,93% (286/2.053) foram reagentes para anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax. As freqüências, por mesorregião, variaram de 11,90% a 15,99%. Assim, os dados obtidos permitiram a caracterização do estado de Pernambuco como uma área de instabilidade enzoótica e sugere que o estado Pernambuco é área endêmica para Trypanosoma vivax e este parasito está distribuído por todo o estado.

    Abstract in English:

    Trypanosoma vivax infects a wide range of wild and domestic ungulates, causing important losses for the livestock industry. The aim of the present study was to assess the detection of IgG antibodies against T. vivax in cattle from the state of Pernambuco, Brazil. Therefore, we analyzed 2.053 blood serum samples from cattle herds of municipalities in Pernambuco, what was made by Immunofluorescence Assay. The overall seroprevalence of IgG antibodies against T. vivax in cattle was 13.93% (286/2053). The frequencies, by region, varied from 11.90% to 15.99%. Thus, the data obtained allowed to characterize the state of Pernambuco as an area of enzootic instability for T. vivax. The frequency herein reported (i.e., 13.93%) indicates that Pernambuco is an endemic area for T. vivax, this parasite being spread throughout the state.
  • Imuno-histopatologic diagnosis of subclinic bovine paratuberculosis in the state of Rio de Janeiro Animais De Produção

    Yamasaki, Elise M.; Brito, Marilene de Farias; McIntosh, Douglas; Galvão, Alexandre; Peixoto, Tiago C.; Tokarnia, Carlos Hubinger

    Abstract in Portuguese:

    O diagnóstico precoce e específico da paratuberculose ainda é um desafio. Isto pode estar associado à baixa sensibilidade dos testes laboratoriais e ou à variação da resposta imunológica frente à infecção por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Mundialmente, é uma enfermidade que causa importantes prejuízos econômicos, em especial, à bovinocultura leiteira, devido ao caráter crônico da infecção. No Brasil, a paratuberculose já foi descrita em diversas espécies de ruminantes domésticos e em vários estados, o que demonstra que a enfermidade está presente em território nacional e há a necessidade de elaboração de técnicas de diagnóstico para a confirmação da infecção. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os achados anátomo-histopatológicos e imuno-histoquímicos em intestino e linfonodos mesentéricos de bovinos assintomáticos, provenientes de rebanhos positivos para paratuberculose localizados no estado do Rio de Janeiro, Brasil. O estudo macroscópico revelou alterações inespecíficas tais como áreas avermelhadas na mucosa do intestino, aumento do volume das placas de Peyer e dos linfonodos mesentéricos, além disso, observou-se que vasos linfáticos mesentéricos estavam dilatados e esbranquiçados. Do total de 52 vacas leiteiras avaliadas, a histopatologia revelou infiltração granulomatosa, por vezes com formação de células gigantes multinucleadas, em mucosa e ou submucosa de jejuno, íleo e em linfonodos mesentéricos, principalmente na região cortical, em 32 animais. Estes bovinos foram submetidos à coloração de Ziehl-Neelsen cujo teste não demonstrou reação positiva, no entanto, quando analisados pelo teste imunohistoquímico para Mycobacterium spp. observou-se imunorreação em 6 animais. Desta forma, a histopatologia e imunohistoquímica pode ser uma importante ferramenta para diagnóstico da paratuberculose subclínica.

    Abstract in English:

    The early and specific diagnosis of paratuberculosis remains a challenge due to the low sensitivity of the currently available laboratory tests and also because of variations in the immune response towards infection with Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Globally this disease causes significant economic losses, primarily in dairy cattle, owing to the chronic nature of the infection. Paratuberculosis has been described in a number of Brazilian states and from a diversity of domestic ruminant species clearly demonstrating that the disease is present in the country and highlighting the requirement for the development of diagnostic techniques for confirmation of infection and for epidemiological analyses. The aim of this study was to characterize the anatomo-histopathological and immunohistochemical findings in the bowel and mesenteric lymph nodes of assymptomatic cattle, derived from paratuberculosis positive herds located in state of Rio de Janeiro, Brazil. Macroscopic examination during necropsy revealed nonspecific changes including reddening of the gut mucosa, increased volumes for the Peyer's patches and mesenteric lymph nodes and in some case dilation and whitening of the mesenteric lymphatic vessel. Histopathology revealed granulomatous infiltration, occasionally with the formation of giant cells in the jejunal and ileal mucosa or sub-mucosa, and/or in the cortical region of the mesenteric lymph nodes, in 32 of the 52 cattle examined. Tissue sections from these animals were subjected to Ziehl-Neelsen staining, but the presence of acid-fast bacilli was not observed. Subsequent analysis, employing genus specific immunohistochemisty for Mycobacterium, revealed areas of immunoreactivity in sections prepared from a total of six animals. The results of this investigation highlighted the value of histopathology and particularly immunohistochemistry as tools for the diagnosis of subclinical paratuberculosis.
  • Virulence and biofilm formation by Enterococcus faecalis isolates from cloacal swabs of broilers infected with Eimeria spp Animais De Produção

    Cassenego, Ana Paula V.; Ellwanger, Juliana; d'Azevedo, Pedro A.; Ribeiro, Andreia M.L.; Frazzon, Jeverson; Frazzon, Ana Paula G.

    Abstract in Portuguese:

    A dinâmica da microbiota no trato gastrointestinal (TG) de animais pode ser afetada por patógenos, tais como Eimeria spp. Os enterococos são bactérias saprófitas que colonizam o TG de mamíferos e aves. A influência sobre a microbiota intestinal está relacionada com a capacidade de adaptação das bactérias em se aderir às células hospedeiras e de colonizar as células das mucosas. O objetivo deste estudo foi analisar a frequência de genes de virulência ace, agg e operon do bopABCD em Enterococcus faecalis isolados de swabs cloacais de frangos de corte desafiados com Eimeria spp e alimentados com dietas padrões suplementadas ou não com anticoccidiano (monesina) e também avaliar a capacidade dessas cepas em formar biofilmes sob condições in vitro. Um total de 70 E. faecalis foram selecionadas e o gene agg foi mais freqüente em cepas isoladas de frangos de corte alimentados com anticoccidiano (92,3%) quando comparado ao grupo que não recebeu anticoccidiano (70,5%). Por outro lado, os genes ace e do operon bopABCD não demostraram nenhuma diferença significativa entre os dois grupos de frangos (P>0,005). Os E. faecalis isolados de frangos de corte alimentados com anticoccidiano demostraram uma maior frequência de fortes aderentes quando crescendo em meio suplementado com glicose (92,3-88,5%) e urina (77%), quando comparado com enterococos isolados de frangos que não receberam anticoccidiano. Observou-se que E. faecalis isolados de frangos tratados com anticoccidiano mostraram uma maior frequêencia dos genes dos fatores de virulência e de perfil de fortes formadores de biofilme, o que indica uma melhor adaptação dos isolados em ambiente intestinal saudável.

    Abstract in English:

    The microbiota dynamics in the gastrointestinal tract (GT) of animals can be disrupted by pathogens, such as Eimeria spp. Enterococci are saprophytic bacteria that colonize the GT of mammals and birds. The influence on the intestinal microbiota is related to the adaptive capacity of bacteria to adhere to host cells and colonize the mucosal cells. The aim of this study was to analyze the frequency of virulence genes ace, agg and bopABCD operon in Enterococcus faecalis isolated from cloacal swabs of broilers challenged with Eimeria spp. and fed with a standard diet supplemented or not with anticoccidial (monensin), and, also to evaluate for the ability of these strains to form biofilms under in vitro conditions. A total of 70 E. faecalis were selected and the agg gene was more frequent in strains isolated from the broilers treated with anticoccidial (92.3%) when compared to the group that not received anticoccidial (70.5%). On the other hand, the ace and bopABCD operon genes showed no significant difference between the two groups of broilers (P>0.005). The E. faecalis isolated from the broilers treated with anticoccidial showed a higher frequency of strong biofilm formation when growing in medium supplemented with glucose (92.3-88.5%) and urine (77%) when compared with enterococci isolated from broilers that not received anticoccidial. It was observed that E. faecalis isolated from broilers treated with anticoccidial showed a higher frequency of virulence factors genes and stronger biofilms formation, indicating better adaptation of the isolates in healthy intestinal environment.
  • Eimeria spp. from Japanese quails (Coturnix japonica): new characteristic features and diagnostic tools Livestock Diseases

    Berto, Bruno P.; Borba, Helcio R.; Lima, Viviane M.; Flausino, Walter; Teixeira-Filho, Walter L.; Lopes, Carlos Wilson G.

    Abstract in Portuguese:

    A codorna japonesa Coturnix japonica originária do norte da África, Europa e Ásia, é utilizada mundialmente como um animal experimental e modelo para avicultura. O presente trabalho caracteriza Eimeria bateri, Eimeria tsunodai e Eimeria uzura recuperadas de C. japonica. Baseado no fato de que as codornas têm uma distribuição global, como são os seus coccídios, os resultados deste estudo devem propiciar o diagnóstico destas Eimeria spp. em outras regiões e continentes. Eimeria bateri demonstrou a maior intensidade de infecção e eliminaram oocistos a partir do quarto dia após infecção, em contraste E. tsunodai e E. uzura eliminaram oocistos a partir do quinto dia após infecção. As três espécies foram morfometricamente semelhantes e polimórficas. No entanto, a aplicação da regressão linear, histogramas e ANOVA proveram meios para a identificação destas espécies. Finalmente, o algoritmo foi totalmente eficiente uma vez que valores resultantes não foram sobrepostos.

    Abstract in English:

    The Japanese quail Coturnix japonica originated from North Africa, Europe and Asia, is used worldwide as an experimental animal and model for aviculture. The current paper characterizes Eimeria bateri, Eimeria tsunodai and Eimeria uzura recovered from C. japonica. Based on the fact that quails have a global distribution, as are their coccidia, the findings of this study should provide the means for diagnosis of those Eimeria spp. in other regions and continents. Eimeria bateri showed the greatest intensity of infection and shed oocysts from the fourth day after infection; in contrast, E. tsunodai and E. uzura shed oocysts from the fifth day after infection. The three species shared a high degree of similarity and were all polymorphic. Yet, the application of line regressions, histograms and ANOVA provided means for the identification of these species. Finally, the algorithm was very efficient since verified that resultant values were not superimposed.
  • Development and application of polymerase chain reaction test for detection of Conidiobolus lamprauges Livestock Diseases

    Silveira, Marcelo M.; Paula, Daphine A.J.; Silva, Maria C.; Pitchenin, Leticia C.; Cruz, Raquel A.S.; Colodel, Edson M.; Dutra, Valéria; Nakazato, Luciano

    Abstract in Portuguese:

    A conidiobolomicose é uma doença granulomatosa causada pelo fungo Conidiobolus spp., observada em humanos e animais. As técnicas tradicionais de diagnóstico da doença são o isolamento do agente associado à presença de sinais clínicos típicos e condições patológicas. O objetivo deste trabalho é descrever o desenvolvimento de um teste da reação em cadeia da polimerase (PCR) específico para Conidiobolus lamprauges em amostras clínicas. As amostras de animais suspeitos foram coletadas e submetidas ao isolamento, análise histopatológica e amplificação pela PCR. O DNA de tecidos foi submetido a PCR com os iniciadores universais de fungos baseados no gene 18S rDNA e iniciadores específicos foram concebidos com base no mesmo gene em C. lamprauges que gerou produtos de aproximadamente 540 pb e 222 pb, respectivamente. A cultura foi positiva em 26,6% das amostras clínicas. A técnica de PCR para C. lamprauges mostrou a amplificação de DNA a partir de tecidos frescos (80%) e secções de parafina (44,4%). Em conclusão, a técnica de PCR aqui descrita demonstrou elevada sensibilidade e especificidade na detecção de DNA de fungos em amostras de tecido, proporcionando uma ferramenta rápida para o diagnóstico de C. lamprauges.

    Abstract in English:

    Conidiobolomycosis is a granulomatous disease caused by the fungus Conidiobolus spp. in humans and animals. Traditional technique for diagnosis of the disease is isolation of the agent associated with the presence of typical clinical signs and pathological conditions. The aim of this study was to describe the development of a specific polymerase chain reaction (PCR) test for Conidiobolus lamprauges to detect the fungus in clinical samples. Samples from suspected animals were collected and submitted to isolation, histopathological analysis and amplification by PCR. DNA from tissues was subjected to PCR with fungi universal primers 18S rDNA gene, and specific primers were designed based on the same gene in C. lamprauges that generated products of about 540 bp and 222 bp respectively. The culture was positive in 26.6% of clinical samples. The PCR technique for C. lamprauges showed amplification of DNA from fresh tissues (80%) and paraffin sections (44.4%). In conclusion, the PCR technique described here demonstrated a high sensitivity and specificity for detection of fungal DNA in tissue samples, providing a tool for the rapid diagnosis of C. lamprauges.
  • Sheep industry in the State of Rio Grande do Sul, Brazil: description of the production system and the main health and reproductive aspects Animais De Produção

    Silva, Ana Paula S. Poeta; Santos, Diego V.; Kohek Jr, Ivo; Machado, Gustavo; Hein, Héber E.; Vidor, Ana Carla M.; Corbellini, Luis Gustavo

    Abstract in Portuguese:

    A ovinocultura sempre foi uma atividade de grande importância econômica e de tradição para o Estado do Rio Grande do Sul (RS), mesmo com as crises da lã ocorridas nas décadas de 80 e 90, o rebanho ovino Gaúcho continua sendo o maior a nível nacional. Com a escassez de dados sobre essa atividade, o presente estudo possui como objetivo caracterizar a ovinocultura do RS. Para isso, foi utilizada uma amostragem planejada, caracterizada pela aleatoriedade e estratificação da amostra pelas sete Mesorregiões do Estado. Foram analisadas 705 propriedades rurais através de um questionário epidemiológico, aplicado por 25 veterinários do Departamento de Defesa Animal, da Secretaria da Agricultura, Pecuária e Agronegócio do Estado do Rio Grande do Sul. Conforme os resultados obtidos, a ovinocultura gaúcha é explorada extensivamente e baseada na produção conjunta de carne e lã, cuja principal finalidade é a subsistência. Assim, demonstrando que essa atividade ainda mantém padrões de sua origem, com pouca tecnificação, tanto em aspectos sanitários quanto reprodutivos, revelando, portanto, que a ovinocultura gaúcha ainda é vista como uma produção secundária pelos produtores rurais gaúchos, o que pode ser explicado pelos baixos investimentos neste setor.

    Abstract in English:

    The sheep industry has always been an important economic and traditional activity in the State of Rio Grande do Sul. In spite of the wool crises occurred in the 1980ies and 1990ies, the sheep flock remains the largest flock in Brazil. Due to scarcity of recent data on this activity, the present study aims to characterize the sheep industry of Rio Grande do Sul. For this reason, we performed a planned and probabilistic stratified cluster sampling with flocks selected propotionally by seven regions of the State. We analyzed 705 farms through an epidemiological questionnaire, applied by 25 veterinarians from the Department of Animal Health (DDA), of the Secretary of Agriculture, Livestock and Agribusiness of the state of Rio Grande do Sul (SEAPA/RS). According to the results, the sheep industry is essentially extensive and based on production of meat and wool, the main objective of which is subsistence. This indicates that the activity still maintains older standards, with almost no technical improvement regarding sanitary and reproduction aspects. This revels that sheep production in Rio Grande do Sul is still considered as a secondary exploitation of farms, which explains the low investment in this sector.
  • Epidemiological aspects of canine Chagas disease in the semi-arid region of Paraiba Pequenos Animais

    Mendes, Rodrigo S.; Santana, Vanessa L.; Jansen, Ana M.; Xavier, Samantha Cristina C.; Vidal, Ivana F.; Rotondano, Tereza E.F.; Souza, Almir P.

    Abstract in Portuguese:

    Com o objetivo de determinar os aspectos epidemiológicos que envolvem a doença de Chagas (DC) canina e identificar os principais fatores de risco da enfermidade no semiárido paraibano, foi conduzido um estudo na zona rural de Patos, onde a área foi dividida em três estratos amostrais (Norte, Sul e Oeste) e, em cada estrato foram amostradas aleatoriamente 294 casas, e dessas todos os cães domiciliados representaram as unidades elementares do estudo. Em cada unidade domiciliar foi aplicado um questionário epidemiológico para se obter informações sobre indicadores que favorecem a disseminação da doença no segmento peridomiciliar. O diagnóstico sorológico para DC em cães foi baseado em três métodos (RIFI, ELISA e HAI), sendo consideradas positivas aquelas amostras que apresentassem pelo menos dois testes reagentes e ausência de reatividade cruzada. Para zona rural do município, a prevalência de cães sororreagentes para T. cruzi por estrato amostral foram: Norte 6,05%, Sul 3,59% e Oeste 2,97%, correspondendo a uma prevalência em sua totalidade de 4,08%. Os fatores de riscos (odds ratio, OR) evidenciados em análise multifatorial foram: tipo de parede (OR=2,59 [1,24-5,4]), presença de armazém (OR=1,89 [1,31-3,0]), presença de galinheiros (OR=8,31 [1,29-61,7]), contato com animais (OR=9,11 [1,12-73,9]), contato com aves (OR=9,7 [1,81-52,83]), triatomíneos capturados (OR=16,58 [3,43-80,23]) e antropismo (OR=4,35 [1,36-14,0]. Diante dos resultados foi possível se obter informações inerentes à situação epidemiológica da Doença de Chagas ressaltando características biogeográficas da zona rural do semiárido paraibano, elevando a espécie canina e os fatores de risco evidenciados, em destaque ao contato com aves e ecótopos artificiais, operacionalizando indicadores a serem assistidos e considerados na cadeia de transmissão da doença na região.

    Abstract in English:

    In order to determine the epidemiological aspects involving canine Chagas disease (CD) and to identify major risk factors for the disease in the semi-arid region of Paraiba, a study was conducted in the rural area of Patos/Paraíba, Brazil, where the area was divided into three sampling strata (North, South and West) and, in each stratum we randomly sampled about 294 houses, and all the pet dogs represented the elementary units of study. In each household an epidemiological questionnaire was administered to obtain information on indicators that favor the spread of the disease in peridomestic segment. Serological diagnosis for CD in dogs was based on three methods (IFA, ELISA and HAI), considering positive samples that had at least two tests reagents and absence of cross-reaction. For the rural area, the prevalence of seropositive dogs for Trypanosoma cruzi by sampling stratum was: North 6.05%, South 3.59% and West 2.97%, corresponding to a total prevalence of 4.08%. The risk factors (odds ratio, OR) were evidenced in multifactorial analysis: wall type (OR=2.59 [1.24-5.4]), presence at warehouse (OR=1.89 [1.31-3.0]), present at chicken stall (OR=8.31 [1.29-61.7]), contact with animals (OR = 9.11 [1.12-73.9]), contact with birds (OR=9.7 [1.81-52.83]), captured triatomines (OR=16.58 [3.43-80.23]) and anthropogenic (OR=4.35 [1.36-14.0]. From the results it was possible to obtain information pertaining to the epidemiological situation of Chagas Disease highlighting biogeographical characteristics of rural semi-arid region of Paraiba, raising dogs and the risk factors disclosed in the highlighted contact with birds and ecotopes operationalizing indicators to be watched and considered in the chain of transmission of the disease in the region.
  • Cerebrospinal fluid analysis of the howler monkey (Alouatta guariba) Morfofisiologia

    Tranquilim, Marcos V.; Cardoso, Guilherme S.; Heckler, Marta C.T.; Teixeira, Carlos R.; Lopes, Raimundo S.; Takahira, Regina K.; Resende, Luiz A.L.; Amorim, Rogério M.

    Abstract in Portuguese:

    A presente pesquisa foi realizada com o objetivo de desenvolver e adaptar técnicas diagnósticas em neurologia para primatas não humanos, da espécie Alouatta guariba Geoffroy Saint-Hilaire, 1812 (bugio-ruivo) saudáveis e mantidos em cativeiro. Foram realizadas análises físico-químicas e citológicas do líquido cefalorraquidiano obtido na cisterna magna de oito bugios-ruivos. Para realização dos exames, todos os animais foram contidos quimicamente com associação de cetamina, xilazina e midazolam e anestesia inalatória com isoflurano. Os resultados das análises do líquido cefalorraquidiano demonstraram valores médios de proteína: 16,92mg/dL±9,84; glicose: 131,25mg/dL±106,7; pH: 8,37±0,69; células nucleadas: 0,5/mm³±0,75; hemácias: 49,37/mm³±111,76 e pressão: 7,37cm H2O±1,77. O trabalho demonstrou a segurança e a eficácia da colheita do líquido cefalorraquidiano na cisterna magna de Alouatta guariba e os valores de referência para a espécie.

    Abstract in English:

    This survey was conducted with the objective of developing and adapting diagnostic techniques in neurology for non-human primates, of the species Alouatta guariba Geoffroy Saint-Hilaire, 1812 (howler monkey) healthy and kept in captivity. Physical-chemical analyses were carried out in cerebrospinal fluid and its pressure measurement in the cisterna magna. Eight animals were used for the analysis of cerebrospinal fluid. In all procedures, were used chemical restraint and anesthesia with ketamine, xylazine and association of midazolam and inhalational anesthesia with isoflurane for carrying out the spinal tap. The cerebrospinal fluid analysis showed average values: protein: 16.92±9.84; glucose: 131.25mg/dL±106.7; pH: 8.37±0.69; nucleated cells: 0.5/mm³±0.75; red blood cells: 49.37/mm³±111.76 and CSF cisternal pressure: 7.37cm H2O±1.77. This study demonstrated the safety and efficacy of cerebrospinal fluid collection in the cisterna magna of Alouatta guariba, and the reference values for the specie.
  • Metabolic evaluation of Crioulo horses participating in competitions of 750 km Animal Morphophysiology

    Amaral, Lorena Alvariza; Marchiori, Millie; Martins, Charles Ferreira; Correa, Marcio Nunes; Nogueira, Carlos Eduardo Wayne

    Abstract in Portuguese:

    O cavalo Crioulo realiza uma das provas de maior exigência física nas modalidades equestres. A Marcha de Resistência é uma competição na qual os animais percorrem 750km durante 15 dias. O objetivo desse estudo foi caracterizar as respostas metabólicas ocorridas nesse período. Foram avaliados 11 equinos da raça Crioula inscritos na competição, sendo dois machos e nove fêmeas. Foram efetuadas coletas de sangue 24h antes da prova e no 4º, 9º, 11º, 14º e 15º dia de competição. Foram avaliados a concentração sanguínea de creatininoquinase, aspartato aminotransferase, lactato desidrogenase, glicose, lactato, uréia, creatinina, sódio, potássio, cloreto, magnésio, cálcio total, cálcio iônico, proteínas totais, hematócrito e o leucograma. Ao final da competição os valores médios de AST sérica foram de 1151±358 UI/L, os valores de médios de LDH foram de 7418±1695 UI/L e de CK foi de 13867±3998UI/L. Houve aumento significativo nos valores de uréia, creatinina e lactato (p<0,0001). Foi observada diminuição nos valores médios de cloreto, sódio, potássio, cálcio total e iônico (p≤0,0002). Na avaliação hematológica foi constatada elevação nos valores de leucócitos totais e segmentados (p≤0,0002) e diminuição nos valores de hematócrito, proteína plasmática total e linfócitos (p≤0,0003). Os valores de glicose, em média mantiveram-se constantes. Com base nesses dados conclui-se que a competição Marcha de Resistência determinou elevada exigência muscular, com depleção energética e eletrolítica, além de sugerir um processo inflamatório nos animais avaliados.

    Abstract in English:

    The Crioulo breed of horses performs in one of the most physically demanding equestrian competitions, the Marcha de Resistência, which is a contest in which the horses run 750 km in 15 days. The study's aim was to characterize the metabolic responses during this period. We evaluated eleven Crioulo horses in the competition, specifically, two males and nine females. Blood samples were collected 24 hours before the contest and on the 4th, 9th, 11th, 14th and 15th days of competition. We evaluated CK, AST, LDH, glucose, lactate, urea, creatinine, sodium, potassium, chloride, magnesium, total calcium, ionized calcium, total protein, hematocrit and the white blood cell count. At the end of the competition, the mean values of serum AST were 1151±358 IU/ L the mean LDH values were 7418±1695 IU/L and CK was 13,867±3998UI /L. There was a significant increase in urea, creatinine and lactate (p<0.0001). A decrease in the mean values of chloride, sodium, potassium, and total and ionized calcium was observed (p≤0.0002). An evaluation of the total leukocytes and segmented neutrophils (p≤0.0002) revealed their increased values, and decreased values were observed for hematocrit, plasma protein and total lymphocytes (p≤0.0003). The values of glucose, on average, remained constant. Based on these data, we conclude that the Marcha de Resistência competition necessitated a high muscular demand and the depletion of energy and electrolytes, suggesting an inflammatory process in the animals evaluated.
  • The normal electrocardiogram in the clinically healthy Saanen goats Animal Morphophysiology

    Pogliani, Fabio C.; Birgel Junior, Eduardo H.; Monteiro, Bruno M.; Grisi Filho, José H.H.; Raimondo, Raquel F.S.

    Abstract in Portuguese:

    O objetivo deste estudo foi de estabelecer os valores de referência para o eletrocardiograma normal de derivação II de cabras Saanen sadias. As durações totais (segundos) das amplitudes de P, Q, R, S e T foram 0.03±0.01, 0.02±0.005, 0.03±0.014, 0.03±0.011, 0.06±0.014, respectivamente, e os valores de referência foram 0.01-0.04, 0.01-0.02, 0.01-0.06, 0.02-0.04 e 0.04-0.08, respectivamente. As amplitudes (milivolts) dessas formas de onda foram 0.1±0.031, 0.06±0.023, 0.44±0.312, 0.39±0.434, 0.26±0.164 (T negativo) e 0.15±0.071 (T positivo), respectivamente. Os valores de referência foram 0.05-0.15, 0.05-0.1, 0.05-1.2, 0.05-1.1 e -0.2-0.7, respectivamente. As durações (segundos) dos intervalos PR e QT, do complexo QRS e do segmento ST foram 0.08±0.018, 0.26±0.03, 0.05±0.008, 0.15±0.041, respectivamente. Os valores de referência foram 0.06-0.12, 0.2-0.32, 0.04-0.07, e 0.11-0.26, respectivamente. Foi possível observar diferenças em relação à duração e amplitude dos constituintes do ECG quando comparados com os resultados de outras raças. Portanto, torna-se necessário a realização de mais estudos para se permitir comparações, detectar e diagnosticar arritmias cardíacas bem como auxiliar no desenvolvimento de terapias.

    Abstract in English:

    The purpose of this study was to establish normal reference electrocardiographic (ECG) values for standard limb lead II in Saanen goats. For this, were used 19 healthy adult female Saanen goats. And for reference values for the ECG parameters, were used 95% confidence level. The overall P, Q, R, S and T durations (seconds) were 0.03±0.01, 0.02±0.005, 0.03±0.014, 0.03±0.011, 0.06±0.014 respectively, and the reference values were 0.01-0.04, 0.01-0.02, 0.01-0.06, 0.02-0.04 and 0.04-0.08 respectively. The amplitudes (milivolts) of these waveforms were 0.1±0.031, 0.06±0.023, 0.44±0.312, 0.39±0.434, 0.26±0.164 (T negative) and 0.15±0.071 (T positive), respectively. The reference values were 0.05-0.15, 0.05-0.1, 0.05-1.2, 0.05-1.1 and -0.2-0.7 respectively. The PR and QT interval, the QRS complex and the ST segment durations (seconds) were 0.08±0.018, 0.26±0.03, 0.05±0.008, 0.15±0.041 respectively. The reference values were 0.06-0.12, 0.2-0.32, 0.04-0.07 and 0.11-0.26, respectively. It was possible to observe differences in ECG of Saanen goats regarding the amplitude and duration of the constituents when compared to the results of other breeds. Therefore it is necessary to conduct further studies to allow comparisons, detect and diagnose cardiac arrhythmias and help the development of therapies.
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