• Jürgen Döbereiner: a life dedicated to science LIVESTOCK DISEASES

    Dutra, Iveraldo S.; Colling, Axel; Driemeier, David; Brito, Marilene F.; Ubiali, Daniel G.; Schild, Ana Lucia; Riet-Correa, Franklin; Barros, Claudio S.L.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Dr. Jürgen Döbereiner nasceu na Alemanha em 1 de novembro de 1923, durante 68 anos viveu no Brasil e desenvolveu trabalhos científicos no campo da patologia veterinária latu sensu. Sua contribuição científica de destaque foi em temas como plantas tóxicas de interesse pecuário, deficiências minerais em animais de produção, cara inchada (doença periodontal) dos ruminantes, botulismo e diagnóstico de doenças infecciosas. Estas pesquisas resultaram na melhoria da saúde e de centenas de milhares de animais, principalmente bovinos e, consequentemente, foram de enorme valor econômico para o país. Esta contribuição ainda permanece em grande parte subestimada. De grande destaque para a ciência brasileira foi ainda a sua atuação profissional na documentação científica de resultados de pesquisa. No início de sua carreira na década de 1950, Dr. Döbereiner e outros pesquisadores do Instituto de Biologia Animal (IBA) detectaram a necessidade de um periódico científico nacional para publicar resultados de pesquisas com aplicação pratica à realidade brasileira. Dessa iniciativa surgiram os Arquivos do Instituto de Biologia Animal, que publicou três fascículos (1959-1961), em seguida o Dr. Jürgen Döbereiner participou na fundação da revista Pesquisa Agropecuária Brasileira que publicou a Série Veterinária (1966-1976) e finalmente em 1978, houve a fundação do Colégio Brasileiro de Patologia Animal (CBPA) que publica desde 1981 a revista Pesquisa Veterinária Brasileira. Este periódico científico foi criado para apresentar à comunidade, principalmente veterinários de campo e professores, os principais problemas de saúde em animais de produção no Brasil, ou seja, patologia em seu sentido amplo, envolvendo as áreas de epidemiologia, clínica e diagnóstico laboratorial. Dr. Jürgen Döbereiner, que foi presidente do CBPA (1978-2018) e Editor-Chefe da revista Pesquisa Veterinária Brasileira (1981-2018), faleceu em casa, em 16 de outubro de 2018, aos 94 anos, no município de Seropédica/RJ.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: Dr. Jürgen Döbereiner was born in Germany, on the 1st of November 1923, and lived in Brazil for 68 years during which time he developed a range of scientific projects in veterinary pathology and related disciplines. His main interests were the identification of new poisonous plants and mineral deficiencies and the causes of “cara inchada” (“swollen face” a periodontal disease) and botulism in livestock. This research has resulted in the improved health and saving of hundreds of thousands of animals, mainly cattle, annually, and is consequently of enormous economic value to the country. This contribution remains largely under appreciated. He was also involved in organizing diagnostic methods for identifying infectious diseases such as African swine fever and glanders in horses. One of his other major achievements has been the foundation and editing of specialized scientific journals for the documentation of veterinary science research results. At the beginning of his career in the 1950s, he and colleagues from the Institute for Animal Biology (IBA) were struggling to find a national scientific journal where research results from veterinary medicine could be published with practical application to the Brazilian reality. In consequence, the team founded “Arquivos do Instituto de Biologia Animal” and published three volumes (1959-1961). He then founded and edited “Pesquisa Agropecuária Brasileira” (The Brazilian Journal of Agricultural Research”) that included a veterinary section. A series of veterinary volumes were published (1966-1976). Finally, in 1978 he helped create the Brazilian College of Veterinary Pathology (CBPA) that published “Pesquisa Veterinária Brasileira” (The Brazilian Journal of Veterinary Research) from 1981. The main goal was to communicate the most relevant disease problems of Brazilian livestock, in particular pathology and related subjects such as epidemiology, clinical study series and laboratory diagnosis to field veterinarians and academics. Dr. Jürgen Döbereiner was president of CBPA (1978-2018) and chief editor of “Pesquisa Veterinária Brasileira” (1981-2018). He passed away on the 16th of October, 2018, at the age of 94 at his home in Seropédica/RJ, Brazil.
  • Current trends in bovine abortion in Argentina LIVESTOCK DISEASES

    Morrell, Eleonora L.; Campero, Carlos M.; Cantón, Germán J.; Odeón, Anselmo C.; Moore, Dadín P.; Odriozola, Ernesto; Paolicchi, Fernando; Fiorentino, María A.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: O aborto bovino é uma causa importante de perdas econômicas significativas em rebanhos bovinos e leiteiros. Esta síndrome é geralmente difícil de diagnosticar. O objetivo deste estudo foi caracterizar o aborto bovino na Argentina por procedimentos diagnósticos de rotina (histologia, isolamento viral e bacteriana) e outros testes diagnósticos como ensaio directo de anticorpos fluorescentes (DFAT), sorologia fetal, imuno-histoquica (IHC), e PCR; mostrando suas vantagens e limitações específicas. As necropsias foram realizadas em 150 fetos bovinos abortados submetidos aos laboratórios de diagnóstico do Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuária (INTA) de Balcarce, na Argentina. O diagnóstico etiológico foi confirmado em 78 fetos (52% dos casos). A maioria das causas de aborto foram de origem infecciosa, sendo Neospora caninum (14,67%), Campylobacter fetus sp. (9,33%), Leptospira spp. (7,33%) e Brucella abortus (6,65%) os principais microrganismos identificados. O vírus da diarréia viral bovina (BVDV) e o herpesvírus bovino (BHV) foram diagnosticados em 2 (1,33%) e 3 (2%) casos, respectivamente. Este estudo mostrou uma melhor caracterização do aborto bovino em comparação com pesquisas anteriores feita sobre este tema.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: Bovine abortion is an important cause of significant economic losses in beef and dairy herds. This syndrome is usually difficult to diagnose. The aim of this study was to characterize bovine abortion causes in Argentina by standard diagnosis procedures (histology, bacterial and viral isolation) and other diagnostic tests like direct fluorescent antibody test (DFAT), fetal serology, immunohistochemistry (IHC), and PCR, showing their specific advantages and limitations. Necropsies were performed in 150 aborted bovine fetuses submitted to the diagnostic laboratories of Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) Balcarce, Argentina. Etiological diagnosis was confirmed in 78 fetuses (52% of the cases). Most causes of abortion were of infectious origin, being Neospora caninum (14.67%), Campylobacter fetus sp. (9.33%), Leptospira spp. (7.33%) and Brucella abortus (6.65%) the main microorganisms identified. Bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpes virus (BHV) were diagnosed in 2 (1.33%) and 3 (2%) cases, respectively. This study showed a better characterization of bovine abortion compared with previous researches done on this topic.
  • Cyanogenic poisoning by spontaneous ingestion of star grass (Cynodon nlemfuensis var. nlemfuensis cv. ‘Florico’) in cattle LIVESTOCK DISEASES

    Molossi, Franciéli A.; Ogliari, Daiane; Morais, Raissa M.; Wicpolt, Nathalia S.; Gheller, Edgar; Weber, Luciano; Gava, Aldo

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Descrevem-se os dados epidemiológicos e quadro clínico-patológico de cinco surtos de intoxicação cianogênica em bovinos que ingeriram espontaneamente grama estrela (Cynodon nlemfuensis Vanderyst var. nlemfuensis cv. ‘Florico’). Em todos os surtos, as áreas onde a planta se encontrava haviam sido previamente adubadas com altas concentrações de nitrogênio e as propriedades adotavam o sistema silvipastoril com Eucaliptus sp. Os primeiros sinais clínicos surgiram entre 10 e 15 minutos após a primeira introdução dos bovinos e caracterizou-se por tremores musculares, dispneia, timpanismo moderado, andar cambaleante, respiração forçada com a boca aberta, decúbito esternal seguido de morte após 15 a 30 minutos e/ou, recuperação em poucas horas após início dos sinais. No total, adoeceram 43 vacas e destas 18 morreram. Duas necropsias foram realizadas e não foram encontradas alterações significativas, exceto a presença da planta próxima a região do esfíncter esofágico. Através da microscopia não foram visualizadas lesões histológicas. Folhas verdes da grama estrela foram coletadas de todas as propriedades onde os surtos ocorreram e realizadas o teste do papel picro-sódico, o qual revelou coloração vermelho-tijolo em 20 minutos após maceração das folhas.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: This study reports the epidemiological data and the clinical-pathological condition of five outbreaks of cyanogenic poisoning in cattle spontaneously ingesting star grass (Cynodon nlemfuensis Vanderyst var. nlemfuensis cv. ‘Florico’). In all outbreaks, the areas where the plant was previously fertilized with high concentrations of nitrogen and the properties adopted the silvipastoral system. The first clinical signs appeared between 10 and 15 minutes after the first introduction of cattle and were characterized by muscular tremors, dyspnea, moderate tympanism, staggering gait, forced breathing with open mouth, sternal recumbency followed by death after 15 to 30 minutes and/or recovery in a few hours after the signs started. In total, 43 cows have become ill and 18 died. Two necropsies were performed and no significant changes were found except for the presence of the plant near the esophageal sphincter region. No histological lesions were seen through microscopy. Green leaves of the star grass were collected from all properties where the outbreaks occurred and the test of the picro-sodium paper was performed, revealing red-brick coloration in 20 minutes after maceration of the leaves.
  • Serological response to Neospora caninum infection in goats and agreement between three diagnostic techniques to detect caprine neosporosis LIVESTOCK DISEASES

    Kim, Pomy C.P.; Melo, Renata P.B.; Almeida, Jonatas C.; Silva, José G.; Ribeiro-Andrade, Muller; Porto, Wagnner J.N.; Pinheiro, José W.; Mota, Rinaldo A.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Objetivou-se avaliar a resposta sorológica de caprinos infectados com Neospora caninum mediante o estudo da performance e concordância de três técnicas sorológicas (RIFI, NAT e ELISA). O painel de soros testes foi composto por 500 amostras de caprinos e ainda 60 soros classificados como de referência. Todos os soros de referência e de campo foram testados por ELISA, NAT e RIFI. Nos soros de campo, as soroprevalências de anticorpos anti-N. caninum foram de 3,2% no NAT, 4,6% na RIFI e 6,4% no ELISA. Utilizando a RIFI como técnica de referência, a concordância de NAT e ELISA foi considerada fraca (k=0,28) e substancial (k=0,75), respectivamente. Ainda utilizando a RIFI como comparação, foram obtidos valores de sensibilidade de 91,3% e 97,7% de especificidade no ELISA, e valores preditivos positivo de 65,2% e negativo de 99,6%; NAT apresentou resultados de sensibilidade de 26,1% e de especificidade de 97,9% com valores preditivos positivo de 37,5% e negativo de 96,5%. Com base nos resultados deste trabalho, sugerimos que a RIFI permaneça como técnica de escolha no estudo da neosporose caprina em amostras individuais, resguardando as recomendações e pontos de corte adotados neste estudo. Indicamos a associação de técnicas sorológicas de alta sensibilidade e especificidade.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: The present study aimed to measure the serological response of goats infected with Neospora caninum by assessing the diagnostic performance and agreement between three techniques (indirect immunofluorescent antibody test, IFAT; Neospora agglutitation test, NAT; enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). The panel of sera were comprised of 500 samples of goats, and 60 reference serum samples. These reference and field serum samples were tested by ELISA, NAT, and IFAT. In the field serum samples tested, the seroprevalences of anti-N. caninum antibodies were 3.2%, 4.6%, and 6.4% in the NAT, IFAT and ELISA, respectively. Using the IFAT as the gold standard, the NAT and the ELISA agreement was considered weak (k=0.28) and strong (k=0.75), respectively. When the IFAT performance was used for comparison purposes, the ELISA showed 91.3% sensitivity and 97.7%, specificity with a PPV of 65.2% and a NPV of 99.6%; The NAT presented sensitivity of 26.1% and specificity of 97.9% with a PPV of 37.5% and a NPV of 96.5%. Accordingly, the IFAT should remain the assay of choice for studies about N. caninum infection in goats in individual serum samples. A combination of serological assays with high sensitivity and specificity is recommended in serosurveys of caprine neosporosis.
  • Clinical and pathological aspects of bovine lymphoma affecting the spinal cord LIVESTOCK DISEASES

    Mello, Lauren S.; Panziera, Welden; Bandinelli, Marcele B.; Sonne, Luciana; Driemeier, David; Pavarini, Saulo P.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Os aspectos clínicos e patológicos do linfoma bovino afetando a medula espinhal foram avaliados através de um estudo retrospectivo dos protocolos de necropsia durante o período de 2005-2017. De um total de 34 bovinos com linfoma, 24 apresentaram afecção do sistema nervoso central (SNC) restrito a medula espinhal. Todos os bovinos afetados eram fêmeas, da raça Holandesa, com 2,5 a 12 anos de idade (idade mediana de seis anos). Clinicamente, os casos tiveram uma evolução de sete a 21 dias, com a principal alteração neurológica caracterizada por paresia de membros pélvicos, a qual foi observada em 81,8% dos casos. O linfoma afetou frequentemente a medula espinhal de maneira multifocal. Os segmentos lombares foram os mais envolvidos (23/24), seguidos pelos sacrais e cauda equina (20/24), cervicais (5/24) e torácicos (5/24). Os tumores estavam localizados no espaço epidural, periférica à paquimeninge (extradural) e associada ao tecido adiposo. Em dois casos foi também observada mielomalacia hemorrágica progressiva. Os órgãos acometidos com maior frequência, concomitantemente ao espaço epidural, foram os linfonodos (100%), abomaso (79,2%), coração (75%) e rins (45,8%). Microscopicamente, todos os linfomas exibiam um padrão difuso, sem infiltração em meninges e medula espinhal (extradural). De acordo com a classificação da REAL/WHO, todos esses neoplasmas foram incluídos como linfomas de células B maduras. O linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) foi observado em 95,8% (23/24) dos casos. Os subtipos classificados dentro do grupo dos LDGCB’s foram em ordem decrescente: imunoblástico (60,9%; 14/23), centroblástico (26,1%; 6/23), anaplásico (8,7%; 2/23), e rico em células T (4,3%; 1/23).

    Abstract in English:

    ABSTRACT: Clinical and pathological features of bovine lymphoma involving the spinal cord were evaluated through a retrospective study of the necropsy database from 2005 to 2017. Thirty-four cases of bovine lymphoma were found, 24 of which had central nervous system involvement restricted to the spinal cord. All cattle were Holstein cows 2.5-12 years-old (median age, six years-old). The clinical course was 7-21 days, and the main neurological sign was pelvic limb paresis (81.8%). The lymphoma often affected the spinal cord in a multifocal manner. Lumbar segments were the mostly affected sites (23/24), followed by the sacral segments and cauda equina (20/24), cervical (5/24) and thoracic (5/24) segments. Tumors were in the epidural space, peripheral to the pachymeninges (extradural) and between layers of adipose tissue. In addition, two cases had progressive hemorrhagic myelomalacia. Further organs affected included the lymph nodes (100%), abomasum (79.2%), heart (75%) and kidneys (45.8%). Microscopically, all lymphomas had a diffuse pattern, with no meningeal or medullar infiltration. According to the REAL/WHO classification, all these neoplasms were mature B-cell lymphomas. Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) was observed in 95.8% (23/24) of the cases. The following subtypes were observed in the DLBCL group in descending order: immunoblastic (60.9%, 14/23), centroblastic (26.1%, 6/23), anaplastic (8.7%, 2/23) and T-cell rich (4.3%, 1/23).
  • Association between decreased expression of estrogen receptor alpha, androgen receptor and phosphatase and tensin homolog immunoexpression in the canine prostate SMALL ANIMALS DISEASES

    Kobayashi, Priscila E.; Rodrigues, Marcela M.P.; Gartner, Fatima; Rema, Alexandra; Fonseca-Alves, Carlos E.; Laufer-Amorim, Renée

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: A glândula prostática canina é um órgão dependente de hormônio, e o desequilíbrio na expressão dos receptores de estrógeno e andrógeno estão diretamente associados com o desenvolvimento de diferentes doenças. Devido à falta de informação sobre o comportamento desses receptores no câncer prostático canino (PC), este estudo tem por objetivo identificar a expressão proteica através da técnica de imuno-histoquímica do receptor de estrógeno alfa (REα), receptor de andrógeno (RA), Ki67 e fosfatase e tensina homóloga (PTEN). Foi encontrado nas células epiteliais prostáticas normais caninas a expressão nuclear de REα e RA, e perda de expressão proteica nas amostras de PC. As amostras normais apresentaram expressão de Ki67 em poucas células basais e as amostras de PC apresentaram a maior média de células positivas (253,1). O câncer de próstata canino apresentou uma taxa alta de proliferação, o qual foi associado com a atuação independente de hormônio. As amostras de próstatas caninas normais revelaram marcação nuclear e citoplasmática da proteína PTEN e perda nas amostras de PC. A perda de REα, RA e PTEN indicam que as amostras de PC exibem o mesmo fenótipo imuno-histoquímico de pacientes humanos com câncer prostático resistente a terapia hormonal. Sendo assim, o PC canino deve ser considerado um modelo para estudos de câncer prostático humano resistente a terapia hormonal.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: Canine prostate gland is a hormonal dependent organ and its imbalance of estrogen and androgen receptor expressions are directly associated with the development of different diseases. Due to the lack of information regarding the behavior of the aforementioned receptors in canine prostate cancer (PC), this study aimed to identify estrogen receptor alpha (ERα), androgen receptor (AR), Ki67 and phosphatase and tensin homolog (PTEN) protein expressions in canine PC by immunohistochemistry. We found nuclear expression of ERα and AR in the epithelial cells of normal canine samples and a loss of protein expression in PC samples. Normal samples showed Ki67 expression in a few basal cells and the PC samples showed the highest mean of positive cells (253.1). Canine prostate cancer showed a high proliferative index, which was associated with independence of hormonal actuation. PTEN showed positive nuclear and cytoplasmic expression in normal canine samples and a loss in PC. Loss of ERα, AR and PTEN indicated that canine PC exhibits the same immunohistochemical phenotype as in human patients with PC resistant to hormonal therapy. Therefore, canine PC should be considered as a model to study human PC resistant to hormonal therapy.
  • Neuron-specific enolase as biomarker for possible neuronal damage in dogs with distemper vírus SMALL ANIMALS DISEASES

    Elias, Bruno Cesar; Alfieri, Alice F.; Navarro, Italmar T.; Gomes, Lucas A.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Enolase neuronal específica (NSE) é um biomarcador de lise de neurônios, que demonstra estabilidade em fluidos extracelulares como sangue e líquido cerebrospinal. Para o conhecimento dos autores, não há informações de pesquisa que comparem o uso de NSE em cães com e sem encefalite, evidenciando a importância desse biomarcador para detectar danos neuronais em cães. O objetivo foi comparar os níveis séricos de NSE em cães com e sem encefalites, e determinar os níveis séricos de NSE em cães saudáveis. Trinta e oito cães foram avaliados, 19 cães com encefalites (Grupo EG) e 19 cães sem encefalite (Grupo CG). O critério para inclusão no Grupo EG foi presença de sinais neurológicos em mais de uma estrutura do SNC (síndrome multifocal) e positividade no diagnóstico molecular para o vírus da cinomose canina; para o Grupo CG foi idade entre 1 e 7 anos e ser clinicamente normal; NSE foram mensuradas em amostras séricas usando o método de ELISA, e os resultados comparados. No Grupo EG os valores de NSE foram altos com diferença significativa (P=0.0053) quando comparado com o Grupo CG. NSE é um biomarcador que pode ser mensurado em amostras séricas de cães para monitorar lesões neuronais em encefalites.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: Neuron-specific enolase (NSE) is a biomarker of neuronal cell lysis, which demonstrates stability in extracellular fluids such as blood and cerebrospinal fluid. To the authors knowledge there is no research information comparing the use of NSE in dogs with and without encephalitis, putting in evidence the importance of that biomarker to detect neuronal damage in dogs. The objective was to compare the serum NSE levels in dogs with and without encephalitis, and to determine the serum NSE levels in normal dogs. Thirty eight dogs were evaluated, 19 dogs with encephalitis (EG Group) and 19 dogs without encephalitis (CG Group). The criteria for inclusion in the EG Group were presence of neurological signs in more than one part of the CNS (multifocal syndrome) and positive molecular diagnosis for canine distemper virus; for the CG Group were an age between 1 to 7 years and be clinically normal; NSE were measured in serum using an ELISA assay, and the results were compared. In the EG Group the NSE values were higher with significant difference (P=0.0053) when compared with the CG Group. NSE is a biomarker that can be measured in serum samples of dogs to monitor neuronal lesions in encephalitis.
  • Use of different fixation times and application of two immunohistochemical methods for detection of KIT and Ki67 proteins in canine cutaneous mast cell tumors SMALL ANIMALS DISEASES

    Santos, Alex dos; Nascimento, Harlan H.L.; Flores, Mariana M.; Kommers, Glaucia D.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Devido a alta prevalência dos mastocitomas cutâneos caninos (MCCs) na rotina diagnóstica, vários fatores, especialmente fatores prognósticos, têm sido buscados para auxiliar na determinação do comportamento biológico desse neoplasma. A imuno-histoquímica é uma das principais ferramentas empregadas para diferenciar tumores biologicamente mais agressivos de tumores menos agressivos. Entretanto, algumas imunomarcações sofrem influência pela fixação em formol, interferindo nos resultados. Este estudo compreendeu avaliar através de uma etapa retrospectiva e uma etapa prospectiva casos de MCCs diagnosticados na rotina laboratorial. Um total de 25 amostras, sem conhecimento do tempo de fixação, foi analisado no estudo retrospectivo e 12 amostras, com tempos de fixação conhecidos, no estudo prospectivo. Foram aplicados nos dois estudos, dois sistemas de graduação histológica (Patnaik e Kiupel), a coloração especial de azul de toluidina e a imuno-histoquímica para as proteínas KIT e Ki67. Adicionalmente, no estudo prospectivo, foram testados dois sistemas de amplificação (biotinilado e não biotinilado) para a proteína Ki67 e a técnica de AgNOR (contagem das regiões organizadoras nucleolares argirofílicas). Na etapa retrospectiva, observou-se uma maior concordância entre os patologistas avaliadores quando o sistema Kiupel foi utilizado. A imunomarcação para KIT se manteve eficaz em ambos os estudos, independentemente do tempo de fixação. A imunomarcação para o Ki67 mostrou-se altamente sensível ao tempo de fixação em formol, sendo observada falha na imunomarcação em 56% dos casos do estudo retrospectivo. No estudo prospectivo, constatou-se que amostras fixadas por mais de 24 horas em formol apresentaram redução na quantidade de células imunomarcadas (alterando a determinação da fração de crescimento celular) ou apresentaram ausência de imunomarcação em ambos os sistemas de amplificação. A utilização do método AgNOR, para avaliar a taxa de proliferação celular, pode ser uma alternativa quando o tempo de fixação do neoplasma for desconhecido ou superior a 24 horas.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: Due to the high prevalence of mast cell tumors (MCTs) in the diagnostic routine, several factors, especially prognostic, have been sought to determine the biological behavior of these neoplasms. Immunohistochemistry (IHC) is one of the main tools utilized to biologically differentiate more aggressive tumors from less aggressive ones. However, some immunostainings are influenced by formalin fixation, interfering with the results. This is both a retrospective and prospective study of MCTs diagnosed in laboratory routine. A total of 25 samples, without knowledge about fixation time, were analyzed in the retrospective study, whereas 12 samples, with known fixation times, were assessed in the prospective study. Two histologic grading systems (Patnaik and Kiupel), special staining of toluidine blue, and IHC for KIT and Ki67 proteins were applied in both studies. Additionally, two amplification systems (biotinylated and non-biotinylated) for Ki67 protein and counting of the argyrophilic nucleolar organizing regions (AgNOR method) were tested in the prospective study. In the retrospective study, greater agreement between the evaluating pathologists was observed when the Kiupel system was used. IHC staining for KIT protein was effective in both studies, regardless of fixation time. IHC staining for Ki67 protein was highly sensitive to formaldehyde, and staining failure was observed in 56% of the cases in the retrospective study. In the prospective study, samples fixed for longer than 24 hours showed a reduction in the number of stained cells (altering the determination of the cell growth fraction) or showed absence of IHC staining in both amplification systems. The use of the AgNOR method to evaluate the rate of cell proliferation may be an alternative when the fixation time of the neoplasm is unknown or longer than 24 hours.
  • Evaluation of tear production in juvenile opossum using three different methods WILDLIFE MEDICINE

    Oria, Arianne P.; Raposo, Ana C.; Araujo, Nayone L.L.C.; Romano, João V.; Martins-Filho, Emanoel F.; Gomes, Deusdete; Galera, Paula D.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: O estabelecimento do parâmetro de produção lacrimal nas diferentes espécies é importante para o entendimento da saúde do olho e é um dos componentes da semiotécnica oftálmica. Particularidades derivadas da anatomofisiologia das espécies não domésticas induzem a busca de metodologias que sejam mais fidedignas aos parâmetros. Objetivou-se com este estudo avaliar e comparar a produção lacrimal de gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) e gambás-de-orelha-preta (Didelphis aurita) por três diferentes métodos. Quinze indivíduos de cada espécie, juvenis, hígidos, de ambos os sexos, com 60 a 90 dias de vida, foram contidos fisicamente para realização do teste lacrimal do vermelho de fenol (TLVF), da ponta de papel absorvente estéril e do teste lacrimal de Schirmer modificado (TLSm). O TLVF foi o mais difícil de ser executado devido à maleabilidade do fio, enquanto a TEPA se mostrou mais exequível para ambas as espécies. A mediana ± intervalo semi-interquartil para o TLVF foi de 19,79±2,61mm/15” e 5,22±2,92mm/15”, para a TEPA foram de 16,25±1,82mm/min e 10,93±3,04mm/min, e para o TLSm foram de 0±1,63mm/min e 0±1,63mm/min, para gambás-de-orelha-branca e gambás-de-orelha-preta, respectivamente. Não houve diferença entre o olho direito e esquerdo e nem quanto ao sexo. Obteve-se diferença significativa para um mesmo teste entre as espécies. Não foi encontrada correlação significativa entre os testes para ambas as espécies. A quantificação da porção aquosa da lágrima poderá auxiliar no diagnóstico precoce de doenças oculares nas espécies estudadas.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: The establishment of parameters for tear production in different species is important for better understanding eye´s health and is one of the components of the ophthalmic semiological technique. Particularities derived from the anatomophysiology of non-domestic species induce the search for more reliable methodologies. The aim was to evaluate and compare tear production of white-eared opossum (Didelphis albiventris) and Brazilian common opossum (Didelphis aurita) by three different methods. Fifteen individuals of each species, juveniles, healthy, of both sexes, with 60 to 90 days of life, were physically restrained. Phenol red thread test (PRTT), endodontic absorbent paper point tear test (EAPPTT) and modified -Schirmer tear test (mSTT) were performed. PRTT was the most difficult to perform because of the wire malleability, while EAPPTT was more feasible for both species. The median ± semi-quartile range for PRTT were 19.79±2.61mm/15 “and 5.22±2.92mm/15”, for EAPPTT were 16.25±1.82mm/min and 10.9±3.04mm/min, and for STTm were 0±1.63mm/min and 0±1.63mm/min for white-eared opossum and Brazilian common opossum respectively. There was no difference between the right and left eye neither sex. A significant difference was obtained for the same test to different species. No significant correlation was found between the tests for both species. The description of tear production parameters for juvenile white-eared opossum and Brazilian common opossum may be used as a tool, which will allow the early diagnosis of ocular diseases.
  • The urban and rural capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) as reservoir of Salmonella in the western Amazon, Brazil WILDLIFE MEDICINE

    Farikoski, Itacir O.; Medeiros, Luciana S.; Carvalho, Yuri K.; Ashford, David A.; Figueiredo, Eduardo E. S.; Fernandes, Dandara V.G.S.; Silva, Paula J.B.; Ribeiro, Vânia M.F.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: A capivara (Hydrochoerus hydrochaeris) é o maior roedor do mundo. No estado do Acre, Brasil, as populações de capivaras têm aumentado significativamente. O papel das capivaras na transmissão de certas infecções zoonóticas bacterianas não é bem compreendido, incluindo as bactérias do gênero Salmonella. Salmonella spp. geralmente causam enterite ou septicemia em mamíferos, porém muitas espécies de mamíferos podem carregar a bactéria de forma assintomática e eliminá-la em suas fezes. Para entender melhor o possível papel das capivaras como reservatórios de Salmonellaspp., realizamos um estudo para identificação de Salmonella spp. em amostras fecais de capivaras no Acre. Em uma amostra de conveniência, 54 capivaras de duas áreas urbanas e duas áreas rurais do Acre foram capturadas e mantidas por três a quatro dias para amostragem. Nenhum dos animais era sintomático de qualquer doença intestinal. Três amostras fecais foram coletadas de cada animal, durante sua permanência em cativeiro. Cada amostra foi cultivada para a presença de Salmonella spp. no Laboratório de Bacteriologia Veterinária da Universidade Federal do Acre. As amostras foram semeadas em caldo de pré-enriquecimento tetrationato e em peptona de caldo de pré-enriquecimento. Após 24 horas de incubação, todas as amostras foram semeadas em ágar MacConkey (MC) e ágar Salmonella-Shigella (SS). Colônias sugestivas foram submetidas a análises bioquímicas. Colônias compatíveis com Salmonella de acordo com o perfil bioquímico foram submetidas à sorotipagem (Sorokit para Salmonella - Probac do Brasil). Além disso, a primeira amostra de cada uma das 54 capivaras foi testada para Salmonella spp. usando PCR, visando gene hilA. Oito (5%) das 162 amostras examinadas por cultura bacteriana foram positivas para Salmonella spp. Enquanto quatro (7%) das 54 examinadas pela PCR foram positivas. Dos oito animais positivos em cultura, cinco eram de área urbana e três de área rural. Na PCR, apenas um animal positivo era de área urbana e quatro de área rural. Considerando o diagnóstico conjunto por ambos os testes, PCR e cultura, um animal foi considerado positivo. Todas as amostras foram coletadas em animais livres, sem sinais clínicos aparentes de salmonelose, indicando o potencial da capivara como reservatório nesse ecossistema.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: The capybara (Hydrochoerus hydrochaeris) is the largest rodent in the world. In the state of Acre, Brazil, populations of capybaras have been increasing significantly. The role of capybaras in the transmission of certain bacterial zoonotic infections is not well understood, including bacteria of the genus Salmonella. Salmonella spp. generally cause enteritis or septicemia in mammals, however many mammalian species can carry the bacteria asymptomatically and shed it in their feces. To better understand the possible role of capybaras as reservoirs of Salmonella spp., we conducted a study of Salmonella within fecal samples from capybara in Acre. In a convenience sample, 54 capybaras from two urban and two rural areas of Acre were captured and kept for three to four days for sampling. None of the animals were symptomatic of any intestinal illness. Three separate fecal samples were collected from each animal, during their stays in captivity. Each sample was cultured for the presence of Salmonella spp. at the bacteriology laboratory of the Veterinary College of the Federal University of Acre. Samples were seeded in tetrationate pre-enrichment broth and in pre-enrichment broth peptone. After a 24 hour of incubation all samples were streaked on MacConkey Agar (MC) and Salmonella-Shigella Agar (SS). Suggestive colonies were submitted to biochemical analysis. Salmonella compatible colonies according to biochemical profile were submitted to serotyping (Sorokit for Salmonella - Probac do Brasil). In addition, the first sample from each of the 54 capybara was tested for Salmonella spp. using PCR targeting gene hilA. Eight (5%) of the 162 samples examined by bacterial culture were positive for Salmonella spp., while four (7%) of the 54 examined by PCR were positive. From the eight positive animals on culture, five were from urban area and three from rural area. On PCR, only one positive animal was from urban area and four were from rural area. Overall, by either test, one of the 54 animals was positive. All samples were collected in free - living animals with no apparent clinical signs of salmonellosis, indicating the potential of capybara as reservoir on this ecosystem.
  • Effects of atracurium besylate on corneal endothelium of chickens: in vitro study MORPHOPHYSIOLOGY

    Guimarães, Celeste B.; Albuquerque, Luciane; Torikachvili, Marcela; Vargas, Eduarda V.; Dall’Agnol, Cecilia C.; Silva, Tanise C.; Pigatto, João A.T.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Objetivou-se avaliar os efeitos agudos do besilato de atracúrio sobre o endotélio corneano de galinhas. Vinte olhos saudáveis de galinhas foram aleatoriamente separados em dois grupos com 10 olhos cada, sendo G1 o grupo controle e G2 o grupo tratamento. Imediatamente após a excisão dos botões corneoesclerais estes foram colocados em lâminas de microscopia de vidro com o lado endotelial voltado para cima. No Grupo 1, o endotélio corneano foi recoberto com 0,2ml de besilato de atracúrio (10mg/ml) durante 3 minutos e depois lavado com solução salina balanceada. No Grupo 2, o endotélio corneano foi recoberto apenas com solução salina balanceada durante 3 min. As córneas de ambos os grupos foram coradas com vermelho de alizarina e azul de tripano e visualizadas com microscópio óptico. Foram obtidas dez fotografias aleatórias de cada amostra. As imagens foram analisadas e com auxílio de um software as áreas com ausência de células endoteliais calculadas. A perda celular endotelial foi significativamente maior no grupo tratamento comparativamente ao grupo controle. Com base nos resultados apresentados foi possível concluir que o besilato de atracúrio induziu dano agudo nas células do endotélio da córnea de galinhas.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: The aim of this study was to investigate the acute effects of atracurium besylate on cellular damage in corneal endothelium of chickens. Twenty healthy chicken eyes were assigned to the following groups: Group 1 (G1), experimental group (n=10); and Group 2 (G2), control (n=10). Excised corneoscleral buttons were immediately placed on glass microscopy slides with endothelial region faced up. Corneal endothelium of eyes in G1 were covered with AB (0.2mL, 10mg/mL) for 3 min and then rinsed with balanced salt solution (BSS), while the corneal endothelium of eyes in G2 were covered with BBS for 3 min. Corneas from both groups were stained with alizarin red/trypan blue and visualized by light microscopy. Ten random photographs were taken from each cornea. The area of cellular damage was measured by software in all samples and cell loss of each group was averaged and compared. Endothelial area of denudation and Descemet’s membrane exposure were higher in G1 than G2. In conclusion, atracurium besylate induced an acute damage on corneal endothelium of chickens.
  • B-mode and Doppler ultrasonography in the assessment of the common carotid arteries of equines and mules and the relation with body mass, age and neck circumference MORPHOPHYSIOLOGY

    Fogaça, Jéssica L.; Castiglioni, Maria C.R.; Vettorato, Michel C.; Andrade, Danilo G.A.; Puoli-Filho, José N.P.; Fernandes, Marco A.R.; Machado, Vânia M.V.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Com o aumento da idade ocorrem alterações na anatomia e fisiologia cardiovascular, mesmo na ausência de doenças. Assim, os estudos da hemodinâmica dos vasos são considerados primordiais para detectar quaisquer alterações cardiovasculares. Esse trabalho tem como objetivo descrever as variáveis de ultrassonografia modo-B e Doppler espectral na avaliação das artérias carótidas comuns de 11 fêmeas equinas e 11 muares, e correlacionar com idade, massa corpórea e circunferências dos pescoços. Para tais procedimentos foram avaliados os diâmetros, espessura da camada íntima média (EIM), índice de resistividade (IR), índice de pulsatilidade (IP), velocidade sistólica (VS), velocidade diastólica (VD), velocidade máxima (VM), índice de vascularização de fluxo (IVF), massa corpórea, idade, circunferências e comprimentos dos pescoços. As variáveis ultrassonográficas foram avaliadas em três regiões diferentes denominados de crania médio e caudal. As fêmeas equinas apresentaram valores maiores referente ao massa corpórea, idade e comprimento dos pescoços, já em relação às circunferências dos pescoços dos animais, as dos muares foram superiores. A idade dos muares possuiu correlação positiva com a massa corpórea, diâmetro e com as circunferências dos pescoços, com as fêmeas equinas, possui correlação negativa entre idade e os diâmetros dos vasos. A massa corpórea dos muares teve correlação positiva com idade e diâmetros dos vasos, já às fêmeas equinas com diâmetros dos vasos e as circunferências dos pescoços. As variáveis IR e IP tiveram correlação positiva com a massa corpórea para os muares, e com idade para fêmeas equinas. O VD teve correlação negativa com a massa corpórea tanto para as fêmeas equinas quanto nos muares. Já as variáveis VM e IVF, a idade correlacionou negativamente para os muares, enquanto não foi significativo para as fêmeas equinas. Averiguou diferença entre fêmeas equinas e muares nas correlações realizadas, com a massa corpórea, idade, circunferências dos pescoços e entre as variáveis da ultrassonografia modo-B e Doppler.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: As age increases, changes in cardiovascular anatomy and physiology occur, even in the absence of disease. Thus, studies of vessel hemodynamics are considered primordial to detect any cardiovascular changes. The objective of this study has been to describe the parameters of B-mode and spectral Doppler ultrasonography in the evaluation of the common carotid arteries of 11 equine and 11 mules, and correlate with age, body mass and neck circumferences. The diameters, intima - media thickness (IMT), resistivity index (RI), pulsatility index (PI), systolic velocity (SV), diastolic velocity (DV), maximum velocity (MV), vascular flow index (VFI), body mass, age, circumference and neck length. Ultrasonographic variables were evaluated in three different region called cranial, middle and caudal. Equine females presented higher values regarding the body mass, age and neck length, as compared to the neck circumferences of the animals, those of the mules were superior. The age of the mules had a positive correlation with the body mass, diameter and neck circumferences, it has a negative correlation between age and vessel diameters. The body mass of the mules had a positive correlation with age and vessel diameters, and with vessel diameters and neck circumferences in equine females. The RI and PI variables had a positive correlation with body mass for mules, and with age for equine females. The DV had a negative correlation with body mass for both equine and mule females. Regarding the variables MV and VFI, age correlated negatively for mules, while it was not significant for equine females. It found a difference between equine females and mules in the correlations performed, with body mass, age, neck circumferences and between B-mode and Doppler ultrasonography variables.
  • DNA damage and primordial follicle activation after in vitro culture of sheep ovarian cortex in Morus nigra leaf extract ANIMAL MORPHOPHYSIOLOGY

    Gouveia, Bruna B.; Barberino, Ricássio S.; Menezes, Vanúzia G.; Macedo, Taís J.S.; Cavalcante, Agnes Y.P.; Gonçalves, Rodrigo J.S.; Almeida, Jackson R.G.S.; Matos, Maria Helena T.

    Abstract in Portuguese:

    RESUMO: Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.

    Abstract in English:

    ABSTRACT: This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.
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