Validação da metodologia de quantificação espectrofotométrica das saponinas de Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen - Amaranthaceae

Resumos

Realizou-se validação analítica espectrofotométrica das saponinas totais das raízes de Pfaffia glomerata. Em testes iniciais utilizou-se saponina Merck em cinco concentrações (0,08-0,28 mg/ml) para obtenção da curva de calibração e verificação da linearidade, repetibilidade e reprodutibilidade. As raízes foram avaliadas em extratos hidroalcoólicos purificados com n-butanol. O reagente cromogênico escolhido foi Cloreto de Cobalto 0,2% em pico experimental em 284nm. O tempo de leitura ideal foi de 10-20 minutos após o início da reação. O método mostrou linearidade para a faixa de concentrações utilizadas (R²= 0,9963). A precisão (coeficientes de variação) situou-se entre 7-12%, indicando boa reprodutibilidade. O limite de quantificação situou-se em 0,08 mg/ml e o limite de detecção em 0,02 mg/ml. A exatidão do procedimento forneceu erro relativo de 6,3; 3,4; 3,5; 1,8 e 0,3% para as concentrações utilizadas. Os dados da curva-padrão foram aplicados em várias amostras de raízes levando ao valor média de 13,5±2,0%. Os dados obtidos permitem a quantificação espectrofotométrica das saponinas totais das raízes de P. glomerata.

Was made standardization for the spectrophotometric quantification method of Pfaffia glomerata roots saponins. The initial tests made use of Merck saponin, prepared in five different concentrations (0.08-0.28 mg/ml) for obtaining the calibration curve and linearity; the tests with the roots were carried out with hydroalcoholic extracts purified with n-butanol. The chromogenic reagent was Cobalt chloride in the concentration of 0.2% and the scanning of 200 through 400 nm of wavelength leaded to a maximum absorption peak in 284 nm. The method showed linearity for the concentrations range used (R²= 0.9963). The precision (variance coefficients) was between 7 and 12% and the quantification limit was 0.08 mg/ml, and the detection limit 0.02 mg/ml. The accuracy of the proposed procedure presented relative error of 6.3; 3.4; 3.5; 1.8 and 0.3% for the concentrations used. The data from the standard curve were applied in some roots samples, leading to the values of total saponins average 13,5±2,0%. The data obtained allow the spectrophotometric quantification of Merck saponin and the saponins from the P. glomerata roots.

Validação da metodologia de quantificação espectrofotométrica das saponinas de Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen - Amaranthaceae

Vigo, C.L.S.^II; Narita, E.^II; Marques, L.C.^{I, *}

^IDepartamento de Farmácia e Farmacologia, Universidade Estadual de Maringá

^IIBolsistas de iniciação científica

RESUMO

Realizou-se validação analítica espectrofotométrica das saponinas totais das raízes de Pfaffia glomerata. Em testes iniciais utilizou-se saponina Merck em cinco concentrações (0,08-0,28 mg/ml) para obtenção da curva de calibração e verificação da linearidade, repetibilidade e reprodutibilidade. As raízes foram avaliadas em extratos hidroalcoólicos purificados com n-butanol. O reagente cromogênico escolhido foi Cloreto de Cobalto 0,2% em pico experimental em 284nm. O tempo de leitura ideal foi de 10-20 minutos após o início da reação. O método mostrou linearidade para a faixa de concentrações utilizadas (R²= 0,9963). A precisão (coeficientes de variação) situou-se entre 7-12%, indicando boa reprodutibilidade. O limite de quantificação situou-se em 0,08 mg/ml e o limite de detecção em 0,02 mg/ml. A exatidão do procedimento forneceu erro relativo de 6,3; 3,4; 3,5; 1,8 e 0,3% para as concentrações utilizadas. Os dados da curva-padrão foram aplicados em várias amostras de raízes levando ao valor média de 13,5±2,0%. Os dados obtidos permitem a quantificação espectrofotométrica das saponinas totais das raízes de P. glomerata.

ABSTRACT

Was made standardization for the spectrophotometric quantification method of Pfaffia glomerata roots saponins. The initial tests made use of Merck saponin, prepared in five different concentrations (0.08-0.28 mg/ml) for obtaining the calibration curve and linearity; the tests with the roots were carried out with hydroalcoholic extracts purified with n-butanol. The chromogenic reagent was Cobalt chloride in the concentration of 0.2% and the scanning of 200 through 400 nm of wavelength leaded to a maximum absorption peak in 284 nm. The method showed linearity for the concentrations range used (R²= 0.9963). The precision (variance coefficients) was between 7 and 12% and the quantification limit was 0.08 mg/ml, and the detection limit 0.02 mg/ml. The accuracy of the proposed procedure presented relative error of 6.3; 3.4; 3.5; 1.8 and 0.3% for the concentrations used. The data from the standard curve were applied in some roots samples, leading to the values of total saponins average 13,5±2,0%. The data obtained allow the spectrophotometric quantification of Merck saponin and the saponins from the P. glomerata roots.

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Apoio: CNPQ e Universidade Estadual de Maringá - Programa de Iniciação Científica (PIBIC).

• ¹
  Brasil. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução RE n° 899 de 29.05.2003. Determina a publicação do "Guia para validação de métodos analíticos e bioanalíticos". Diário Oficial da União, 02.06.2003.
• 2 Carlini, E.A Efeito adaptógeno ou resistógeno de algumas plantas. Medicamentos, drogas e saúde Săo Paulo: Hucitec/Sobravime, 1995.
• 3 Carriconde, C. Acônito: Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen. De volta ŕs raízes, v. 9, n. 46, p. 1-3, 1994.
• 4 Clark, B.J.; Frost, T.; Russel, M.A. Techniques in visible and ultraviolet spectrometry London, Chapman and Hall, 1993.
• 5 Grebnyova, N.Y.; Kharitonova, N.P.; Blinova, M.P. Quality assessment of rhizomes and roots of Polemonium caeruleum L. in relation to total saponin content. Rastit. Resur., v. 31, n. 3, p. 111-115, 1995.
• 6 Hiai, S.; Oura, H.; Nakajima, T. Color reaction of some sapogenins and saponins with vanillin and sulfuric acid. Planta Medica, v. 29, p. 116-122, 1976.
• 7 Magalhăes, P.M. Agrotecnologia para o cultivo da Pfaffia Campinas: CPQBA-UNICAMP, 1998.
• 8 Marques, L.C. Avaliaçăo da açăo adaptógena das raízes de Pfaffia glomerata (Sprengel) Pedersen - Amaranthaceae Săo Paulo, Escola Paulista de Medicina, 1998. Tese de doutorado em Psicobiologia
• 9 Oliveira, F.; Akisue, G.; Akisue, M.K. Contribuiçăo para o estudo farmacognóstico do "ginseng brasileiro" Pfaffia paniculata"(Martius) Kuntze. An.Farm.Quim.S.Paulo, v. 20, n. ½, p. 261-277, 1980.
• 10 Watson, D.G. Pharmaceutical analysis London: Churchil Livingstone, 1999.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  25 Set 2009
• Data do Fascículo
  2003