RESUMO DE TESE / THESIS
Análise quantitativa e molecular de hemoglobina fetal em doadores de sangue
Quantitative and molecular analysis of fetal hemoglobin in blood donors
Paula J. A. Zamaro
Orientadora: Claudia R. Bonini-Domingos
Dissertação apresentada para obtenção do grau de Mestre, Universidade Estadual Paulista
Resumo
A hemoglobina fetal - Hb F, é formada por duas cadeias gama e duas cadeias alfa, característica do período fetal do desenvolvimento, tendo sua síntese diminuída no período pós-natal. Em algumas alterações hereditárias, a Hb F permanece aumentada, como nas delta-beta talassemia, beta talassemia e persistência hereditária de hemoglobina fetal. A síntese da globina gama, também pode ser estimulada por fatores externos como leucemias, transplantes de medula óssea, induções químicas, dentre outros.
Através da observação de Hb F aumentada em doadores de sangue por procedimentos eletroforéticos objetivou-se avaliar a quantidade de hemoglobina fetal em amostras de candidatos à doação, visando estabelecer os limites de normalidade na população de São José do Rio Preto e região, por meio de desnaturação alcalina e HPLC; nos indivíduos com hemoglobina fetal aumentada realizar identificação das cadeias globínicas gama glicina e alanina e realizar estudos moleculares para identificar as mutações que alteram a expressão dos genes gama.
Foram analisadas 208 amostras de sangue, sendo 119 de candidatos à doação e 89 de indivíduos sem sintomas de anemia ou achados hematológicos e com Hb F aumentada como grupo comparativo. Das 119 amostras de candidatos à doação, 110 foram utilizadas para traçar o perfil de normalidade de Hb F, comparando as metodologias de desnaturação alcalina e HPLC, onde obteve-se a média de 1,48% e de 0,6%, respectivamente. A análise estatística por regressão linear, mostrou diferença significativa na comparação entre as duas metodologias aplicadas, sendo a HPLC a metodologia mais precisa para a quantificação de Hb F.
Foram observados também 16,4% de alfa talassemia, 0,9% com Hb F aumentada, com beta talassemia e hemoglobina variante de cadeia delta.
Nos nove candidatos à doação com Hb F acima de 10% em eletroforese observou-se média de 32,28% para desnaturação alcalina e de 26,4% para HPLC.
As análises moleculares por PCR-ASO, foram realizadas na tentativa de identificar um defeito genético que pudesse explicar o aumento de Hb F, pelo rastreamento de 16 mutações que originam talassemias do tipo beta e duas mutações que determinam hemocromatose hereditária. Encontrou-se 5,3% de heterozigotos CD6-A e 1,75% para as mutações CD 39, IVS1:6, -87 e IVS2:654, todas em heterozigose. Para hemocromatose hereditária observou-se heterozigose para 27,7% para H63D e 1,9% para C282Y. A interação entre mutantes foi observada entre um -87/H63D e IVS2:654/H63D na freqüência de 3%.
Os resultados em conjunto refletem os aspectos miscigenatórios da população brasileira e evidenciam a necessidade de amplos estudos moleculares para as hemoglobinopatias.
Abstract
The fetal hemoglobin - Hb F, is formed by two gamma and two alpha globin chain, characteristic of the fetal period of the development, and with its synthesis decreased in the pós-natal period. In some hereditary disease, Hb F remains increased, as in the delta-beta thalassemia, beta thalassemia and hereditary persistence of fetal hemoglobin. The synthesis of gamma globin chain can also be stimulated by external factors such as leukemia, bone marrow transplants, and chemical induction.
Through the observation of increased Hb F in blood donors by electrophoretic procedures it was aimed to evaluate the amount of fetal hemoglobin in blood samples from blood donors, to establish the normal limits for the São José do Rio Preto and area population, by alkaline denaturation and HPLC. In the individuals with increased Hb F identification of the gamma glycine globin chains and gamma alanine was envisaged and to perform molecular studies to identify mutations that alter the expression of gamma genes.
A total of 208 blood samples were analyzed, 119 from blood donors and 89 from individuals without anemic symptoms or hematologic data but with increased Hb F as a comparative group. Of the 119 blood samples from blood donors, 110 were used to make a normal curve for Hb F values, comparing the methodologies used, alkaline denaturation and HPLC, where averages of 1.48% and of 0.6% respectively were obtained. Linear regression analysis, showed significant difference in the comparison between the two methodologies applied and, HPLC was more precise for Hb F quantification.
Were also observed 16.4% of alpha thalassemia and 0.9% with increased Hb F, beta thalassemia, and a delta chain variant hemoglobin.
In nine blood donors with Hb F higher than 10% in electrophoretic procedures, an average of 32.28% was observed by alkaline denaturation and 26.4% by HPLC.
Molecular analysis by PCR-ASO, was accomplished in the attempt to identify a genetic alteration that could explain the increased Hb F, by screening 16 mutations that originate beta thalassemias for two mutations that determine hereditary hemochromatosis. 5.3% of heterozygous for CD6-A was found and 1.75% for the mutations: CD 39, IVS1:6, -87 and IVS2:654 of beta thalassemia. Hereditary hemochromatosis was observed in 27.7% for H63D and 1.9% for C282Y. The mutant interaction was observed between -87/H63D and IVS2:654/H63D with a frequency of 3%.
All results reflect the mixture of Brazilian population making the need of extensive molecular studies for hemoglobinopathies evident.
Recebido: 05/11/2002
Aceito: 15/11/2002
Datas de Publicação
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Publicação nesta coleção
21 Nov 2003 -
Data do Fascículo
Dez 2002
