Diversidade molecular de <i>Sarcocystis</i> spp. em gambás (<i>Didelphis</i> spp.) do Sudeste e Centro-oeste do Brasil

De Santi, Mariele; André, Marcos Rogério; Werther, Karin; Gonçalves, Luiz Ricardo; Soares, Rodrigo Martins; Herrera, Heitor Miraglia; Santos, Filipe Martins; Sano, Nayara Yoshie; Assis, William Oliveira de; Rucco, Andreza Castro; Machado, Rosangela Zacarias

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Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária

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Sumário

Original Article • Rev. Bras. Parasitol. Vet. 32 (1) • 2023 • https://doi.org/10.1590/S1984-29612023008 copiar

Diversidade molecular de Sarcocystis spp. em gambás (Didelphis spp.) do Sudeste e Centro-oeste do Brasil

Autoria SCIMAGO INSTITUTIONS RANKINGS

Resumo

Gambás sul-americanos (Didelphis spp.) são hospedeiros definitivos de Sarcocystis neurona, Sarcocystis speeri, Sarcocystis lindsayi e Sarcocystis falcatula. No Brasil, diversos estudos têm demonstrado alta frequência de Sarcocystis falcatula-like em esporocistos derivados de gambás, com grande diversidade nos genes que codificam antígenos de superfície (SAGs). Neste estudo, a diversidade genética de Sarcocystis spp., oriundos de Didelphis albiventris e Didelphis aurita, dos municípios de Campo Grande e São Paulo, foi acessada por meio do sequenciamento de SAG2, SAG3 e SAG4, da primeira região espaçadora interna transcrita (ITS-1) e citocromo c oxidase subunidade I (cox1). Identificação molecular foi realizada em 16 amostras de DNA, obtidas de esporocistos ou merozoítos derivados de cultivo. Os fragmentos de ITS-1, cox1 e SAG3 foram clonados, enquanto SAG2 e SAG4 foram sequenciados diretamente dos produtos de PCR. Quatro alelos foram observados em SAG2, 13 em SAG3 e sete em SAG4, sendo novos quatro, 13 e quatro, respectivamente. Em ITS-1, 27 alelos foram observados, todos filogeneticamente relacionados à S. falcatula-like, previamente detectados no Brasil. Sarcocystis sp. filogeneticamente relacionado à Sarcocystis rileyi foi evidenciado por cox1 em três gambás. Mais estudos são necessários para entender o papel de Didelphis spp. como hospedeiro definitivo de Sarcocystis spp. diferentes daqueles previamente descritos.

Palavras-chave:
Sarcocystis spp.; gambás; caracterização molecular; ITS-1; cox1; SAGs

Molecular marker	Size of the fragment analyzed ^* * The number of nucleotides in all the sequences was standardized based on the length of the shorter sequence.	Number of sequences analyzed	Number of variable sites (VS)	Number of Alleles (a)	GC content (%)	Allele Diversity (mean ± SD)	Nucleotide Diversity per site = π (mean ± SD)	Average Number of Nucleotide Differences between All Sequences (K)
ITS-1	1075	29	54	27	46.3	0.99 ± 0.01	0.006 ± 0.00	7.32
cox1	972	39	53	14	37.2	0.81 ± 0.04	0.013 ± 0.00	13.01
SAG2	676	9	5	4	54.9	0.80 ± 0.08	0.003 ± 0.00	2.27
SAG3	1106	13	159	13	51.8	1.00 ± 0.03	0.055 ± 0.00	55.4
SAG4	280	15	22	7	58.9	0.87 ± 0.05	0.034 ± 0.00	9.71

Samples		Species of opossum	Molecular Markers
ID	Origin of DNA	Species of opossum	ITS-1	*cox1*	SAG2	SAG3	SAG4
Dal1-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	N	N	N	NS	NS
Dal3-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	NS	N	NS	1	1
Dal5-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	N	N	NS	NS	2
Dal6-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	1^a, 2^b	1^a, 2^b, 3^c	2	2	3
Dal9-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	3^a, 4^b, 5^c	2^a,b	1	NS	4
Dal11-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	6^a, 7^b, 8^c	2^a,c, 4^b	2	3	1
Dal12-CG	Merozoite	Didelphis albiventris	9^a, 10^b, 11^c	5^a,b,c	2	4	2
Dal13-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	N	NS	NS	N	N
Dal16-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	NS	2^a, 6^b, 7^c	N	N	N
Dal18-CG	Merozoite	Didelphis albiventris	12^a, 13^b	5^a,b,c	2	5	2
Dal23-CG	Merozoite	Didelphis albiventris	12^a	2^a,b,c	3	6	1
Dal26-CG	Sporocyst	Didelphis albiventris	N	8^a 9^b,c	N	7	5
Dal27-CG	Merozoite	Didelphis albiventris	14^a, 15^b, 16^c	2^a,b,c	3	8	1
Dau28-SP	Sporocyst	Didelphis aurita	17^a, 18^b	10^b, 2^c, 5^a	N	9	4
Dau29-SP	Sporocyst	Didelphis aurita	19^a, 20^b	2^b, 11^a,	1	10	4
Dau30-SP	Sporocyst	Didelphis aurita	17^b, 21^a	12^a, 13^b	NS	11	6
Dau36-SP	Merozoite	Didelphis aurita	22^a, 23^b, 24^c	9^a,b,c	NS	12	7
Dau37-SP	Merozoite	Didelphis aurita	25^a, 26^b, 27^c	14^a, 5^b,c	4	13	6

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[1] *Corresponding author: Rosangela Zacarias Machado. E-mail: rzacariasmachado@gmail.com