Dot-ELISA-IgM in saliva for the diagnosis of human leptospirosis using polyester fabric-resin as support (Preliminary Report)

Dot-ELISA-IgM em saliva para diagnóstico da leptospirose humana, empregando como suporte tecido de poliéster-resina (Nota Prévia)

Abstracts

In order to improve the diagnosis of human leptospirosis, we standardized the dot-ELISA for the search of specific IgM antibodies in saliva. Saliva and serum samples were collected simultaneously from 20 patients with the icterohemorrhagic form of the disease, from 10 patients with other pathologies and from 5 negative controls. Leptospires of serovars icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis and cynopteri grown in EMJH medium and mixed together in equal volumes, were used as antigen at individual protein concentration of 0.2 µg/µl. In the solid phase of the test we used polyester fabric impregnated with N-methylolacrylamide resin. The antigen volume for each test was 1µl, the saliva volume was 8 µl, and the volume of peroxidase-labelled anti-human IgM conjugate was 30 µl. A visual reading was taken after development in freshly prepared chromogen solution. In contrast to the classic nitrocellulose membrane support, the fabric support is easy to obtain and to handle. Saliva can be collected directly onto the support, a fact that facilitates the method and reduces the expenses and risks related to blood processing.

Leptospirosis; Dot-ELISA; Polyester-resin; Solid-phase; Saliva


Com a finalidade de melhorar o diagnóstico da leptospirose humana, padronizou-se o teste dot-ELISA para a pesquisa de anticorpos específicos da classe IgM na saliva. Empregaram-se amostras de saliva e soro coletadas simultaneamente de 20 pacientes com a forma ictero-hemorrágica da doença, de 10 pacientes com outras patologias e 5 controles negativos. Culturas de Leptos-pira em meio EMJH, dos sorovares: icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis e cynopteri, foram utilizadas como antígeno, na concentração proteica individual de 0,2 µg/µl, misturadas em volumes iguais. Na fase sólida do teste empregou-se tecido de po-liéster impregnado com resina de N-metilol-acrilamida. O volume do antígeno para cada teste foi de 1µl, o de saliva 8µl, o de conjugado anti-IgM humana marcada com peroxidase, de 30µl. A leitura foi visual, após revelação em solução cromógena de preparo recente. O suporte de tecido é de fácil obtenção e manuseio, diferente do clássico de membrana de nitrocelulose. A saliva pode ser coletada diretamente sobre o suporte, o que facilita o método e diminui gastos e riscos inerentes à coleta e processamento do sangue.

Leptospirosis; Dot-ELISA; Polyester-resin; Solid-phase; Saliva


PRELIMINARY REPORT

Dot-ELISA-IgM in saliva for the diagnosis of human leptospirosis using polyester fabric-resin as support (Preliminary Report)

Dot-ELISA-IgM em saliva para diagnóstico da leptospirose humana, empregando como suporte tecido de poliéster-resina (Nota Prévia)

Marcos Vinicius da SilvaI,II; Paulo Mutuko NakamuraI; Eide Dias CamargoI; Luíza BatistaII; Adelaide José VazI; Angela Pires BrandãoI,IV; Antonio Walter FerreiraIII

IInstituto Adolfo Lutz, Sao Paulo, Brasil

IIInstituto de Infectologia Emílio Ribas, São Paulo, Brasil

IIIInstituto de Medicina Tropical de São Paulo, Brasil

IVFundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil

Correspondence to

SUMMARY

In order to improve the diagnosis of human leptospirosis, we standardized the dot-ELISA for the search of specific IgM antibodies in saliva.

Saliva and serum samples were collected simultaneously from 20 patients with the icterohemorrhagic form of the disease, from 10 patients with other pathologies and from 5 negative controls. Leptospires of serovars icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis and cynopteri grown in EMJH medium and mixed together in equal volumes, were used as antigen at individual protein concentration of 0.2 µg/µl.

In the solid phase of the test we used polyester fabric impregnated with N-methylolacrylamide resin. The antigen volume for each test was 1µl, the saliva volume was 8 µl, and the volume of peroxidase-labelled anti-human IgM conjugate was 30 µl. A visual reading was taken after development in freshly prepared chromogen solution.

In contrast to the classic nitrocellulose membrane support, the fabric support is easy to obtain and to handle. Saliva can be collected directly onto the support, a fact that facilitates the method and reduces the expenses and risks related to blood processing.

Keywords: Leptospirosis; Dot-ELISA; Polyester-resin; Solid-phase; Saliva.

RESUMO

Com a finalidade de melhorar o diagnóstico da leptospirose humana, padronizou-se o teste dot-ELISA para a pesquisa de anticorpos específicos da classe IgM na saliva.

Empregaram-se amostras de saliva e soro coletadas simultaneamente de 20 pacientes com a forma ictero-hemorrágica da doença, de 10 pacientes com outras patologias e 5 controles negativos. Culturas de Leptos-pira em meio EMJH, dos sorovares: icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis e cynopteri, foram utilizadas como antígeno, na concentração proteica individual de 0,2 µg/µl, misturadas em volumes iguais.

Na fase sólida do teste empregou-se tecido de po-liéster impregnado com resina de N-metilol-acrilamida. O volume do antígeno para cada teste foi de 1µl, o de saliva 8µl, o de conjugado anti-IgM humana marcada com peroxidase, de 30µl. A leitura foi visual, após revelação em solução cromógena de preparo recente.

O suporte de tecido é de fácil obtenção e manuseio, diferente do clássico de membrana de nitrocelulose. A saliva pode ser coletada diretamente sobre o suporte, o que facilita o método e diminui gastos e riscos inerentes à coleta e processamento do sangue.

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Recebido para publicação 09/12/1993.

Aceito para publicação em 01/06/1994.

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  • Correspondence to:
    Dr. Marcos Vinicius da Silva
    Av. Dr. Arnaldo, 351/10º andar
    01246-902 São Paulo, SP, Brasil

Publication Dates

  • Publication in this collection
    21 Sept 2006
  • Date of issue
    Oct 1994

History

  • Accepted
    01 June 1994
  • Received
    09 Dec 1993
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