Evaluation of the double diffusion, enzyme immunoassay and immunoblotting techniques, for the diagnosis of human hydatid disease in tropical areas

Evaluación de las técnicas de Doble Difusión, Ensayo Inmunoenzimático e Inmunoblotting en el diagnóstico de la hidatidosis humana en áreas tropicales

Sandra Planchart Carlos Botto Belkis Alarcon de Noya Rosario Bonifacino Livia Vivas Lilian Spencer Sarai Vivas About the authors

Abstracts

Hydatid disease in tropical areas poses a serious diagnostic problem due to the high frequence of cross-reactivity with other endemic helminthic infections. The enzyme-linked-immunosorbent assay (ELISA) and the double diffusion arc 5 showed respectively a sensitivity of 73% and 57% and a specificity of 84-95% and 100%. However, the specificity of ELISA was greatly increased by using ovine serum and phosphorylcholine in the diluent buffer. The hydatic antigen obtained from ovine cyst fluid showed three main protein bands of 64,58 and 30 KDa using SDS PAGE and immunoblotting. Sera from patients with onchocerciasis, cysticercosis, toxocariasis and Strongyloides infection cross-reacted with the 64 and 58 KDa bands by immunoblotting. However, none of the analyzed sera recognized the 30 KDa band, that seems to be specific in this assay. The immunoblotting showed a sensitivity of 80% and a specificity of 100% when used to recognize the 30 KDa band.

Hydatid Disease; Cross Reactivity; Double Diffusion; ELISA; Immunoblotting


La Hidatidosis en áreas tropicales representa un serio problema diagnóstico por la alta frecuencia de reactividad cruzada con otras infecciones helmínticas. Las técnicas de inmunoensayo enzimático (ELISA) y doble difusión arco 5 (DD5) mostraron una sensibilidad de 73 y 57 % y una especificidad de 84-95% y 100%, respectivamente. La especificidad en la técnica de ELISA, fue mejorada sustancialmente al emplear como diluyente de los sueros una solución buffer conteniendo suero ovino normal y fosforilcolina. En líquido obtenido de hidátides de Echinococcus granulosus de origen ovino, se demostraron tres bandas de origen proteico de 64, 58 y 30 KDa de peso molecular, empleando SDS e inmunoblotting. Sueros de pacientes con estrongiloidiasis, oncocer-cosis, toxocariasis y cisticercosis reaccionaron con las bandas de 64 y 58 KDa en inmunoblotting. Sin embargo ninguno de los sueros reconoció la banda de 30 KD, la cual parece ser específica para este ensayo. La técnica de inmunobloting empleada para poner en evidencia la banda de 30 KDa con fines diagnósticos, exhibió una sensibilidad de 80% y una especificidad de 100%.


SEROLOGY

Evaluation of the double diffusion, enzyme immunoassay and immunoblotting techniques, for the diagnosis of human hydatid disease in tropical areas

Evaluación de las técnicas de Doble Difusión, Ensayo Inmunoenzimático e Inmunoblotting en el diagnóstico de la hidatidosis humana en áreas tropicales

Sandra PlanchartI; Carlos BottoI; Belkis Alarcon de NoyaI; Rosario BonifacinoII; Livia VivasI; Lilian SpencerI; Sarai VivasI

IInstituto de Medicina Tropical/UCV/Caracas

IIDepartamento de Parasitología/Instituto de Higiene/Montevideo

Correspondence

SUMMARY

Hydatid disease in tropical areas poses a serious diagnostic problem due to the high frequence of cross-reactivity with other endemic helminthic infections.

The enzyme-linked-immunosorbent assay (ELISA) and the double diffusion arc 5 showed respectively a sensitivity of 73% and 57% and a specificity of 84-95% and 100%. However, the specificity of ELISA was greatly increased by using ovine serum and phosphorylcholine in the diluent buffer.

The hydatic antigen obtained from ovine cyst fluid showed three main protein bands of 64,58 and 30 KDa using SDS PAGE and immunoblotting.

Sera from patients with onchocerciasis, cysticercosis, toxocariasis and Strongyloides infection cross-reacted with the 64 and 58 KDa bands by immunoblotting. However, none of the analyzed sera recognized the 30 KDa band, that seems to be specific in this assay. The immunoblotting showed a sensitivity of 80% and a specificity of 100% when used to recognize the 30 KDa band.

Keywords: Hydatid Disease; Cross Reactivity; Double Diffusion; ELISA; Immunoblotting.

RESUMEN

La Hidatidosis en áreas tropicales representa un serio problema diagnóstico por la alta frecuencia de reactividad cruzada con otras infecciones helmínticas. Las técnicas de inmunoensayo enzimático (ELISA) y doble difusión arco 5 (DD5) mostraron una sensibilidad de 73 y 57 % y una especificidad de 84-95% y 100%, respectivamente. La especificidad en la técnica de ELISA, fue mejorada sustancialmente al emplear como diluyente de los sueros una solución buffer conteniendo suero ovino normal y fosforilcolina.

En líquido obtenido de hidátides de Echinococcus granulosus de origen ovino, se demostraron tres bandas de origen proteico de 64, 58 y 30 KDa de peso molecular, empleando SDS e inmunoblotting.

Sueros de pacientes con estrongiloidiasis, oncocer-cosis, toxocariasis y cisticercosis reaccionaron con las bandas de 64 y 58 KDa en inmunoblotting. Sin embargo ninguno de los sueros reconoció la banda de 30 KD, la cual parece ser específica para este ensayo. La técnica de inmunobloting empleada para poner en evidencia la banda de 30 KDa con fines diagnósticos, exhibió una sensibilidad de 80% y una especificidad de 100%.

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ACKNOWLEDGEMENTS

We would like to thank Alena Panze for translating assistance and to CDCH (Consejo de Desarrollo Científico y Humanístico/UCV/Caracas. Proyecto CDCH 10.34.245390) for finantial support.

  • Correspondence:
    Dr. Carlos Botto
    Sección de Ecología Parasitaria, Instituto de Medicina Tropical
    Apartado postal 47.881
    Caracas 1041-A, UCV, Venezuela
  • Recebido para publicação em 13/07/1993.

    Aceito para publicação em 17/03/1994.

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    Correspondence: Dr. Carlos Botto Sección de Ecología Parasitaria, Instituto de Medicina Tropical Apartado postal 47.881 Caracas 1041-A, UCV, Venezuela

    Publication Dates

    • Publication in this collection
      21 Sept 2006
    • Date of issue
      June 1994

    History

    • Accepted
      17 Mar 1994
    • Received
      13 July 1993
    Instituto de Medicina Tropical de São Paulo Av. Dr. Enéas de Carvalho Aguiar, 470, 05403-000 - São Paulo - SP - Brazil, Tel. +55 11 3061-7005 - São Paulo - SP - Brazil
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