O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de anticorpos IgG e IgM anti-Toxoplasma gondii e os fatores associados à infecção em gestantes atendidas nas Unidades Básicas de Saúde de Rolândia, Paraná, Brasil. A amostra foi dividida em dois grupos: grupo I (320 gestantes, analisadas entre julho de 2007 e fevereiro de 2008) e grupo II (287 gestantes, analisadas de março a outubro de 2008). No grupo I, foram encontrados 53,1% de gestantes IgG reagente e IgM não reagente, 1,9% de IgG e IgM reagentes, 0,3% de IgG não reagente e IgM reagente e 44,7% de IgG e IgM não reagentes. No grupo II foram 55,1% de IgG reagente e IgM não reagente e 44,9% de IgG e IgM não reagentes. As variáveis associadas à infecção foram: residência em área rural, gestantes entre 35-40 anos de idade, baixa escolaridade, baixa renda familiar, mais de uma gravidez, consumo de água não proveniente do sistema de abastecimento público de água e hábito de manipular terra ou areia. As orientações sobre medidas de prevenção primária e o acompanhamento sorológico trimestral das gestantes no grupo de risco são medidas importantes para prevenir a toxoplasmose congênita.