Avaliação de antígenos do Trypanosoma Cruzi para a reação de hem aglutinação indireta: I. diferentes extratos antigênicos

Vítor, Ricardo Wagner de Almeida; Chiari, Egler

doi:10.1590/S0036-46651987000300011

Resumos

Alguns procedimentos descritos na literatura (ultrasom, água destilada, NaOH, TRITON x 100 e congelamento-descongelamenao) foram avaliados determinando o melhor extrato antigênico para a reação de hemaglutinação indireta (RHI) no diagnóstico sorológico da doença de Chagas. Para isso, foram ensaiados 30 soros de indivíduos chagásicos e 30 soros de indivíduos não chagásicos. A reação de imuno-fluorescência indireta foi considerada como reação de referência no cálculo dos indices de co-positividade (i.c.p.) e co-negatividade (i.cn.). O valor do i.c.p, para a RHI com antígeno obtido por NaOH foi mais elevado do que para os outros antígenos. Os cinco antígenos apresentaram valores máximos para o i.cn., indicando boa especificdade. Os títulos apresentados pelos soros chagásicos com antígeno obtido por NaOH foram, significativamente, superiores aos demais antígenos. A avaliação de cinco partidas de antígeno extraídas por NaOH em épocas diversas indicam boa sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade de resultados, traduzidas pelos valores elevados para os i.c.p. e i.cn., além de títulos próximos entre si.

Doença de Chagas; Diagnóstico; Sorologia; Hemaglutinação indireta

To improve the sensitivity and specificity of the indirect hemagglutination test (IHA) for the serodiagnosis of Chagas' disease some previously described procedures (sonication, destil-led water, NaOH, TRITON x 100, freezing and thawing) were tested to determine the most useful antigenic extract. Sera of 30 individuals with chronic Chagas' disease, demonstrated by immunofluorescence test, and sera of 30 non •chagasic individuals were assayed. The immunofluorescence test (IFT) was the reference test to evaluate the co-positivity index and co-negativity index. Co-positivity results were better when the NaOH antigen was used. All antigens gave maximum values for co-negativity in relation to IFT. Titers presented by sera from cha-gasics tested by IHA with NaOH antigen were higher than those of the other four antigens. Moreover, reliability of IHA with NaOH antigen was indicated by the sensitivity, specificity and reproducibility observed with five different reagent batches prepared with antigens extracted on different days.

IMUNOLOGIA

Ricardo Wagner de Almeida Vítor; Egler Chiari

RESUMO

Alguns procedimentos descritos na literatura (ultrasom, água destilada, NaOH, TRITON x 100 e congelamento-descongelamenao) foram avaliados determinando o melhor extrato antigênico para a reação de hemaglutinação indireta (RHI) no diagnóstico sorológico da doença de Chagas. Para isso, foram ensaiados 30 soros de indivíduos chagásicos e 30 soros de indivíduos não chagásicos. A reação de imuno-fluorescência indireta foi considerada como reação de referência no cálculo dos indices de co-positividade (i.c.p.) e co-negatividade (i.cn.). O valor do i.c.p, para a RHI com antígeno obtido por NaOH foi mais elevado do que para os outros antígenos. Os cinco antígenos apresentaram valores máximos para o i.cn., indicando boa especificdade. Os títulos apresentados pelos soros chagásicos com antígeno obtido por NaOH foram, significativamente, superiores aos demais antígenos.

A avaliação de cinco partidas de antígeno extraídas por NaOH em épocas diversas indicam boa sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade de resultados, traduzidas pelos valores elevados para os i.c.p. e i.cn., além de títulos próximos entre si.

Unitermos: Doença de Chagas; Diagnóstico; Sorologia; Hemaglutinação indireta

SUMMARY

To improve the sensitivity and specificity of the indirect hemagglutination test (IHA) for the serodiagnosis of Chagas' disease some previously described procedures (sonication, destil-led water, NaOH, TRITON x 100, freezing and thawing) were tested to determine the most useful antigenic extract. Sera of 30 individuals with chronic Chagas' disease, demonstrated by immunofluorescence test, and sera of 30 non •chagasic individuals were assayed. The immunofluorescence test (IFT) was the reference test to evaluate the co-positivity index and co-negativity index. Co-positivity results were better when the NaOH antigen was used. All antigens gave maximum values for co-negativity in relation to IFT. Titers presented by sera from cha-gasics tested by IHA with NaOH antigen were higher than those of the other four antigens.

Moreover, reliability of IHA with NaOH antigen was indicated by the sensitivity, specificity and reproducibility observed with five different reagent batches prepared with antigens extracted on different days.

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AGRADECIMENTOS

A Cléa de Andrade Chiari, pela ajuda na realização do presente trabalho; ao Evaldo Nascimento, pela dosagem de proteínas; ao Paul Williams pela revisão do resumo em inglês e aos laboratoristas Orlando Carlos Magno e Afonso da Costa Viana, pela ajuda técnica.

Recebido para publicação em 27/11/86

1. ARMITAGE, P. - Statistical methods in medical research. 4th ed. IiOndon, Blackwell Scientific Publications, 1977. p. 217-232.
2. BATISTA, S. M. - Teste de hemaglutinação com diferentes antigenos no diagnóstico da doença de Chagas. Belo Horizonte, 1973. (Tese - Universidade Federal de Minas Gerais).
S. BUCK, A. A. & GART, J. J. - Comparison of a screening test and a reference test in epidemiologic studies. I. Indices of agreement and their relation to prevalence. Amer. J. Epldem., 833: 586-592, 1966.
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5. CAMARGO, M. E. HOSHINO, S. CORRÊA, N. S. & PERES, B. A. - Hemagglutination test for Chagas' disease with chromium chloride, formalin-treated erythrocytes, sensitized with Trypanosoma cruzi extracts. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 13: 45-50, 1971.
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7. CERISOLA, J. A. CHABEN, M. F. & LAZZARI, J. O. - Test de hemaglutinacion para el diagnostico de la enfermedad de Chagas. Pren. med. argent., 49: 1761-1767, 1962.
8. HOSHINO-SHIMIZU, S. CAMARGO, M. E. & NA-GASSE, T. K. - A stable polysaccharide-hemagglutination reagent for the diagnosis of acute or recent Trypanosoma cruzi infections. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 20: 208-212, 1978.
9. KNIERIM, F. & SAAVEDRA, P. - Técnica de la. reacción de hemaglutinacion aplicada al diagnostico serológico de las parasitosis. Bol. chil. Parasit., 21: 39-44, 1966.
10. LO WRY, O. H. ROSEBROUGH, N. J. FARR, A. L. & RANDALL, R. J. - Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. biol. Chem., 193: 265-275, 1951.
11. PIRAS, M. M. RODRIGUEZ, O. O. & PIRAS, R. - Trypanosoma cruzi: Antigenic composition of axone-mes and flagellar membranes of epimastigotes cultured in vitro. Exp. Parasit., 51: 59-73. 1981.
12. ROMANA, C. - Técnica de la reacción de hemaglutinacion aplicada al diagnostico de la enfermedad de Chagas y de la toxoplasmosis. Orientación Med., 10: 560-564, 1961.
13. TAKEI, K.: HOSHINO-SHIMIZU, S. NAGASSE-SU-GAHARA, T. K. & CAMARGO, M. E. - Evaluation of alkaline - solubüized T. cruzi epimastigotes antigens used in the hemagglutination test for the diagnosis of Chagas' disease. In: REUNIÃO ANUAL SOBRE PESQUISA BÁSICA EM DOENÇA DE CHAGAS, 12a., Ca-xambú, Minas Gerais, Brasil, 1985. Resumos, p. IM 20:
14. VON BRAND, T. McMAHON, P. TOBLE, E. J. THOM PSON, M. J. & MOSETTIG, E. - Chemical composition of the culture form of Trypanosoma cruzi. Exp Parasit., 8: 171-181, 1959.

**Avaliação de antígenos do Trypanosoma Cruzi para a reação de hem aglutinação indireta. I. diferentes extratos antigênicos**

Evaluation of Trypanosoma cruzi antigens for the indirect hemagglutination test. I. Different antigenic extracts

Datas de Publicação

Publicação nesta coleção
17 Fev 2011
Data do Fascículo
Jun 1987

Histórico

Recebido
27 Nov 1986

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

[1] 1. ARMITAGE, P. - Statistical methods in medical research. 4th ed. IiOndon, Blackwell Scientific Publications, 1977. p. 217-232.

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[8] 8. HOSHINO-SHIMIZU, S. CAMARGO, M. E. & NA-GASSE, T. K. - A stable polysaccharide-hemagglutination reagent for the diagnosis of acute or recent Trypanosoma cruzi infections. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 20: 208-212, 1978.

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[10] 10. LO WRY, O. H. ROSEBROUGH, N. J. FARR, A. L. & RANDALL, R. J. - Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. biol. Chem., 193: 265-275, 1951.

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[13] 13. TAKEI, K.: HOSHINO-SHIMIZU, S. NAGASSE-SU-GAHARA, T. K. & CAMARGO, M. E. - Evaluation of alkaline - solubüized T. cruzi epimastigotes antigens used in the hemagglutination test for the diagnosis of Chagas' disease. In: REUNIÃO ANUAL SOBRE PESQUISA BÁSICA EM DOENÇA DE CHAGAS, 12a., Ca-xambú, Minas Gerais, Brasil, 1985. Resumos, p. IM 20:

[14] 14. VON BRAND, T. McMAHON, P. TOBLE, E. J. THOM PSON, M. J. & MOSETTIG, E. - Chemical composition of the culture form of Trypanosoma cruzi. Exp Parasit., 8: 171-181, 1959.

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