Método imunocitoquímico para a identificação de amastigotas do Trypanosoma cruzi em cortes histológicos de rotina

Immunocytochemical method of identification of Trypanosoma cruzi amastigotes in routinely prepared histological sections

Resumos

A técnica da peroxidase antiperoxidase foi aplicada para a identificação de amastigotas do T. cruzi em cortes histológicos de rotina. Os tecidos foram obtidos de pacientes chagásicos crônicos e de animais na fase aguda da infecção chagásica. Anti-soros específicos produzidos em coelho contra as cepas CL, Y e Emane do T. cruzi foram utilizados como reagentes primários na técnica imunocitoquímica. Soro de coelho normal foi utilizado como controle negativo e culturas de macrófagos peritoniais de camundongos infectados com tripomastigotas e apresentando abundantes amastigotas intracelulares foram utilizadas como controles positivos. Coloração positiva ocorreu especificamente nos amastigotas intra e extra-celulares em todos os tecidos testados com os anti-soros contra as três diferentes cepas do T. cruzi. Os amastigotas isolados ou formando ninhos intracelulares tornaram-se facilmente identificáveis nas preparações histológicas utilizando-se o pequeno ou médio aumento do microscópio. O presente método aumenta a probabilidade do diagnóstico do parasitismo na doença de Chagas, e evita confundir-se amastigotas com outros microrganismos morfologicamente semelhantes.


The peroxidase-antiperoxidase (PAP) method was applied for identification of amastigotes of Trypanosoma cruzi in routinely prepared histological sections. The tissue specimens were obtained from patients with chronic Chagas' disease and from mice and dog with acute Chagas' disease. Specific rabbit antisera were produced against CL, Y and Ernane strains of T. cruzi and were used as primary reagents. Normal rabbit serum and phosphate buffered saline were used as negative controls and amastigotes within macrophages cultured from mice peritonium were used as positive controls. Positive staining was localized specifically in amastigotes in all the tissues treated with the antisera against the different strains of T. cruzi. The isolated or intracellular nests of amastigotes were easily identified in histological sections using the small or medium size magnifications of the microscope. The present method increases the probability of microscopic diagnosis of parasites in Chagas' disease and helps to prevent confusion of amastigotes with other morphologically similar infective agents.


ARTIGOS ORIGINAIS

Método imunocitoquímico para a identificação de amastigotas do Trypanosoma cruzi em cortes histológicos de rotina (* (* ) Trabalho realizado no Departamento de Anatomia Patológica, Faculdade de Medicina da UFMG. 30.000 Belo Horizonte — Brasil, com auxílio financeiro da FINEP (Proc. n.º 43/83/0119/00) e CNPq (Proc. n.° 30.1851/76) )

Immunocytochemical method of identification of Trypanosoma cruzi amastigotes in routinely prepared histological sections

Alfredo José Afonso Barbosa

Professor Adjunto. Departamento de Anatomia Patológica, Faculdade de Medicina da UFMG. 30.000 Belo Horizonte — Brasil

RESUMO

A técnica da peroxidase antiperoxidase foi aplicada para a identificação de amastigotas do T. cruzi em cortes histológicos de rotina. Os tecidos foram obtidos de pacientes chagásicos crônicos e de animais na fase aguda da infecção chagásica. Anti-soros específicos produzidos em coelho contra as cepas CL, Y e Emane do T. cruzi foram utilizados como reagentes primários na técnica imunocitoquímica. Soro de coelho normal foi utilizado como controle negativo e culturas de macrófagos peritoniais de camundongos infectados com tripomastigotas e apresentando abundantes amastigotas intracelulares foram utilizadas como controles positivos. Coloração positiva ocorreu especificamente nos amastigotas intra e extra-celulares em todos os tecidos testados com os anti-soros contra as três diferentes cepas do T. cruzi. Os amastigotas isolados ou formando ninhos intracelulares tornaram-se facilmente identificáveis nas preparações histológicas utilizando-se o pequeno ou médio aumento do microscópio. O presente método aumenta a probabilidade do diagnóstico do parasitismo na doença de Chagas, e evita confundir-se amastigotas com outros microrganismos morfologicamente semelhantes.

SUMMARY

The peroxidase-antiperoxidase (PAP) method was applied for identification of amastigotes of Trypanosoma cruzi in routinely prepared histological sections. The tissue specimens were obtained from patients with chronic Chagas' disease and from mice and dog with acute Chagas' disease. Specific rabbit antisera were produced against CL, Y and Ernane strains of T. cruzi and were used as primary reagents. Normal rabbit serum and phosphate buffered saline were used as negative controls and amastigotes within macrophages cultured from mice peritonium were used as positive controls.

Positive staining was localized specifically in amastigotes in all the tissues treated with the antisera against the different strains of T. cruzi. The isolated or intracellular nests of amastigotes were easily identified in histological sections using the small or medium size magnifications of the microscope. The present method increases the probability of microscopic diagnosis of parasites in Chagas' disease and helps to prevent confusion of amastigotes with other morphologically similar infective agents.

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AGRADECIMENTOS

O autor deseja expressar seus agradecimentos aos Profs. Zigman Brenner e Eliane Lages, Instituto de Pesquisas René Rachou, Belo Horizonte; Luiz E. Ramirez, Departamento de Parasitologia, Universidad de Antioquia, Medellin, Colombia; W.L. Tafuri, UFOP, Ouro Preto; Fausto E.L. Pereira, UFES, Vitória; Ana Maria A. Lana, UPMG, Belo Horizonte e Hipólito O. Almeida, FMTM, Uberaba, pelas facilidades permitidas na obtenção de parte do material utilizado neste trabalho; à Maria de Lourdes P, Orsini e Nízia F.L. de Paula pela assistência técnica.

Recebido para publicação em 6/11/1984.

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  • (*
    ) Trabalho realizado no Departamento de Anatomia Patológica, Faculdade de Medicina da UFMG. 30.000 Belo Horizonte — Brasil, com auxílio financeiro da FINEP (Proc. n.º 43/83/0119/00) e CNPq (Proc. n.° 30.1851/76)

Datas de Publicação

  • Publicação nesta coleção
    25 Out 2012
  • Data do Fascículo
    Dez 1985

Histórico

  • Recebido
    06 Nov 1984
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