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Simultaneous identification of Trypanosoma cruzi surface and internal antigens reactive to different immunoglobulin classes (radio-immunoblotting)

Identificação simultânea de antígenos internos e de superfície de Trypanosoma cruzi reativos para diferentes classes de imunoglobulinas (radio-immunoblotting)

Abstracts

A radioactive Western-blotting technique was developed by which the reactivity of Immunoglobulins (Igs) from different classes to both membrane radiolabelled and internal parasite antigens is simultaneously identified. The method includes radioiodination of parasites, polypeptide fractionation by SDS-PAGE, Western-blot transfer and autoradiography of the immunoblots developed with anti-Igs conjugates labelled with enzymes. The analysis is then performed by the comparison of common bands on the autoradiograms and the respective substrate stained nitrocellulose blots. This technique was used to analyse T. cruzi trypomastigote surface labelled antigens reactive to IgM, IgA and IgG specific antibodies. A different pattern of reactivity with acute Chagas' disease patients sera was thus obtained.

Trypanosoma cruzi; Chagas' disease; Surface antigens; Western-blot; Immunoblotting; IgG classes


Classes e subclasses de anticorpos apresentam diferentes funções, influenciando a resposta imune humoral de um hospedeiro, frente a um agente infeccioso. Na maioria dos sistemas, o alvo principal é representado pelos antígenos de membrana do parasita. Entretanto, a identificação de antígenos de superfície de parasitas, reativos para classe (e subclasse) de imunoglobulinas que não se ligam a proteína-A implica em imunoprecipitações sucessivas, que levam a perda de antígenos e/ou reações inespecíficas. Visando esse estudo, foi desenvolvida uma técnica denominada "radio-immunoblotting", através da qual a reatividade de imunoglobulinas de diferentes classes para antígenos de membrana (e/ou internos) foi analisada simultaneamente. O método constitui na marcação prévia da superfície dos parasitas por radioiodação, fracionamento dos polipeptídeos por SDS/PA-GE, transferência das frações para nitrocelulose, reação com soros e conjugados anti-Igs - peroxidase e autoradiografia dos mesmos, a análise é feita comparando-se os antígenos comuns evidenciados na autoradiografia e nas tiras de nitrocelulose coradas com o substrato da peroxidase. Essa técnica foi utilizada para analisar antígenos de superfície de formas tripomastigotas de T. cruzi reativas para IgG, IgM e IgA provenientes de soros de pacientes com doença de Chagas na fase aguda. Obtiveram-se distintos padrões de reatividade para as diferentes classes de anticorpos provenientes de um mesmo soro humano.


BRIEF REPPORT

Simultaneous identification of Trypanosoma cruzi surface and internal antigens reactive to different immunoglobulin classes (radio-immunoblotting)

Identificação simultânea de antígenos internos e de superfície de Trypanosoma cruzi reativos para diferentes classes de imunoglobulinas (radio-immunoblotting)

Anna Maria Simonsen StolfI; Eufrosina Setsu UmezawaII; Bianca ZingalesIII

IDepartamento de Parasitologia, Instituto de Ciências Biomédicas. Universidade de São Paulo. São Paulo, SP, Brasil

IIInstituto de Medicina Tropical de São Paulo da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. São Paulo, SP, Brasil

IIIDepartamento de Bioquímica, Instituto de Química, Universidade de São Paulo. São Paulo, SP, Brasil

Address for correspondence Address for correspondence: Dra. Anna Maria S. Stolf Departamento de Parasitologia. Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo Caixa Postal 4365 01051 São Paulo. SP. Brasil

SUMMARY

A radioactive Western-blotting technique was developed by which the reactivity of Immunoglobulins (Igs) from different classes to both membrane radiolabelled and internal parasite antigens is simultaneously identified. The method includes radioiodination of parasites, polypeptide fractionation by SDS-PAGE, Western-blot transfer and autoradiography of the immunoblots developed with anti-Igs conjugates labelled with enzymes. The analysis is then performed by the comparison of common bands on the autoradiograms and the respective substrate stained nitrocellulose blots. This technique was used to analyse T. cruzi trypomastigote surface labelled antigens reactive to IgM, IgA and IgG specific antibodies. A different pattern of reactivity with acute Chagas' disease patients sera was thus obtained.

Key words: Trypanosoma cruzi; Chagas' disease; Surface antigens; Western-blot; Immunoblotting; IgG classes

RESUMO

Classes e subclasses de anticorpos apresentam diferentes funções, influenciando a resposta imune humoral de um hospedeiro, frente a um agente infeccioso. Na maioria dos sistemas, o alvo principal é representado pelos antígenos de membrana do parasita. Entretanto, a identificação de antígenos de superfície de parasitas, reativos para classe (e subclasse) de imunoglobulinas que não se ligam a proteína-A implica em imunoprecipitações sucessivas, que levam a perda de antígenos e/ou reações inespecíficas.

Visando esse estudo, foi desenvolvida uma técnica denominada "radio-immunoblotting", através da qual a reatividade de imunoglobulinas de diferentes classes para antígenos de membrana (e/ou internos) foi analisada simultaneamente. O método constitui na marcação prévia da superfície dos parasitas por radioiodação, fracionamento dos polipeptídeos por SDS/PA-GE, transferência das frações para nitrocelulose, reação com soros e conjugados anti-Igs — peroxidase e autoradiografia dos mesmos, a análise é feita comparando-se os antígenos comuns evidenciados na autoradiografia e nas tiras de nitrocelulose coradas com o substrato da peroxidase.

Essa técnica foi utilizada para analisar antígenos de superfície de formas tripomastigotas de T. cruzi reativas para IgG, IgM e IgA provenientes de soros de pacientes com doença de Chagas na fase aguda. Obtiveram-se distintos padrões de reatividade para as diferentes classes de anticorpos provenientes de um mesmo soro humano.

Full text available only in PDF format.

Texto completo disponível apenas em PDF.

ACKNOWLEDGMENTS

This investigation was supported by grants from the Financiadora de Estudos e Projetos (PI-NEP) and Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) to A.M.S.S. and to B.Z.; the Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) to A.M.S.S., B.Z. and E.S.U. and the U.N.D.P./World Bank/World Health Organization Special Programme for Research and Trainning in Tropical Diseases to B.Z.

Recebido para publicação em 19/12/1989.

Abbreviations

M.W. — Molecular Weight; Igs — Immunoglobulins, SDS — Sodium Dodecyl Sulfate; TBS- 50 mM Tris — HCl, pH 8,0, 150 mM NaCl; TCT — Tissue Culture Trypomastigotes.

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  • Address for correspondence:

    Dra. Anna Maria S. Stolf
    Departamento de Parasitologia. Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo
    Caixa Postal 4365
    01051 São Paulo. SP. Brasil
  • Publication Dates

    • Publication in this collection
      12 Sept 2006
    • Date of issue
      Oct 1990

    History

    • Received
      19 Dec 1989
    Instituto de Medicina Tropical de São Paulo Av. Dr. Enéas de Carvalho Aguiar, 470, 05403-000 - São Paulo - SP - Brazil, Tel. +55 11 3061-7005 - São Paulo - SP - Brazil
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