• Dot-ELISA for the detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies in cerebrospinal fluid using a new solid phase (resin-treated polyester fabric) and Cysticercus longicollis antigens Immunology

    Vaz, Adelaide José; Nakamura, Paulo Mutuko; Camargo, Mario E.; Camargo, Eide Dias; Ferreira, A. Walter

    Abstract in Portuguese:

    Foi desenvolvido o teste dot-ELISA para detecção de anticorpos em líquido cefalorraquiano (LCR) no diagnóstico imunológico da neurocisticercose humana, utilizando antígenos de membrana e escólex de Cysticercus cellulosae (M+E-Cc) e, alternativamente, membrana (M) e líquido vesicular (LV) de Cysticercus longicollis (Cl) covalentemente ligados a um novo suporte constituído de tecido de poliéster-resina de N-metilol-acrilamida (dot-TR). O teste foi realizado à temperatura ambiente, com tempos de incubação reduzidos e sem necessidade de cuidados na manipulação do suporte. A sensibilidade obtida foi de 95,1% para o antígeno Cc e 97,6% para o Cl. A especificidade foi de 90,6% quando o antígeno Cc foi usado, e 96,9% e 100% para M-Cl e LV-Cl, respectivamente. Não foi observada diferença significativa entre os antígenos homólogo e heterólogo. O baixo custo e a fácil execução do teste dot-TR empregando extratos antigênicos de Cysticercus longicollis indicam que pode ser empregado como alternativa no imunodiagnóstico da neurocisticercose humana.

    Abstract in English:

    A dot-ELISA was developed for the detection of antibodies in CSF in the immunologic diagnosis of human neurocysticercosis, using antigen extracts of the membrane and scolex of Cysticercus cellulosae (M+S-Cc) and, alternately, membrane (M) and vesicular fluid (VF) of Cysticercus longicollis (Cl) covalently bound to a new solid phase consisting of polyester fabric treated with N-methylol-acrylamide resin (dot-RT). The test was performed at room temperature, with reduced incubation times and with no need for special care in the manipulation of the support. The sensitivity rates obtained were 95.1% for antigen Cc and 97.6% for antigen Cl. Specificity was 90.6% when Cc was used, and 96.9% and 100% when M-Cl and VF-Cl were used, respectively. No significant differences in titer were observed between tests carried out with homologous and heterologous antigens. The low cost and easy execution of the dot-RT test using antigen extracts of Cysticercus longicollis indicate the test for use in the immunodiagnosis of human neurocysticercosis.
  • Candidin: comparison of two antigens for cutaneous delayed hypersensitivity testing Immunology

    Fava-Netto, Celeste; Gambale, Walderez; Croce, Júlio; Paula, Claudete R.; Fava, Sérgio de C.

    Abstract in Portuguese:

    Candidina, constituída de suspensão de células leveduriformes mortas, é comumente usada em provas intradérmicas de hipersensibilidade retardada, principalmente na avaliação da competência imunológica do paciente, quando usada conjuntamente com outras provas intradérmicas do mesmo tipo. Considerando-se o estudo histopatológico de reação positiva com este tipo de antígeno, é possível obter uma reação positiva não específica na leitura da prova intradérmica. Esta pesquisa apresenta os resultados obtidos a partir da comparação entre o antígeno de suspensão celular e o antígeno polissacarídico, ambos obtidos a partir das mesmas amostras de Candida albicans. As diferenças observadas no estudo histopatológico de reações positivas com antígeno polissacarídico e com antígeno de suspensão celular podem explicar as diferenças observadas nas porcentagens entre reações intradérmicas positivas com o antígeno de suspensão celular (69,0%) e com o antígeno polissacarídico (61,0%), nas provas intradérmicas realizadas em 100 indivíduos. A coincidência de resultados positivos e negativos nesta pesquisa foi obtida em 82,0% dos indivíduos. A conclusão da pesquisa: é possível utilizar antígeno polissacarídico como candidina em provas de hipersensibilidade tipo tardio

    Abstract in English:

    A candidin, which is a suspension of killed yeast cells, is commonly used for intradermal tests of delayed hypersensitivity, to evaluate the immunological cellular competence of the patient, when the test is applied along with other similar tests. When working with a cellular antigen, the histopathology of positive skin tests reveals a cellular infiltrate which not only presents a characteristic hypersensitivity reaction but also a neutrophilic abscess in the central part. This research presents the results of a comparison between the yeast cell suspension and the polysaccharide antigens, both obtained from the same strains of Candida albicans. The results obtained by skin tests in one hundred individuals were 61.0% with the polysaccharide antigen and 69.0% with the yeast cell suspension antigen. Concordant results concerning the two antigens were observed in 82.0% of the individuals. The discussion section presents an assumption to explain the differences of positivity obtained with the two antigens. We conclude that the polysaccharide antigen can be utilized in the intradermal test of delayed hypersensitivity to Candida albicans.
  • Purification and parcial characterization of a hemagglutinating factor (HAF): a possible adhesive factor of the diffuse adherent of Escherichia coli (DAEC) Microbiology

    Tomomasa, Yano; Catani, Cleide Ferreira; Arita, Michiko; Honda, Takeshi; Miwatani, Toshio

    Abstract in Portuguese:

    O fator hemaglutinante (HAF) foi extraído e purificado a partir de amostra de Escherichia coli de aderência difusa (DAEC), pertencente ao sorogrupo 0128 de E. coli enteropatogênica clássica (EPEC). O peso molecular do HAF foi estimado cm 18.000 Da usando SDS-PAGE e 66.000 Da empregando Sephadex G 100, o que sugere a estrutura do HAF consistir de 3 a 4 subunidades. O emprego da técnica "gold immunolabeling" com antissoro específico anti-HAF revelou que este fator não é uma estrutura do tipo fímbria na superfície da bactéria. O resultado do teste de imunofluorescência usando HAF purificado em células HeLa, além do fato deste fator estar presente entre os sorotipos de EPEC, sugerem que o HAF seja um possível fator de aderência das amostras de DAEC.

    Abstract in English:

    The mannose-resistant hemagglutinating factor (HAF) was extracted and purified from a diffuse adherent Escherichia coli (DAEC) strain belonging to the classic enteropathogenic E. coli (EPEC) serotype (0128). The molecular weight of HAF was estimated to be 18 KDa by SDS-PAGE and 66 KDa by Sephadex G100, suggesting that the native form of HAF consists of 3-4 monomeric HAF. Gold immunolabeling with specific HAF antiserum revealed that the HAF is not a rigid structure like fimbriae on the bacterial surface. The immunofluorescence test using purified HAF on HeLa cells, in addition to the fact that the HAF is distributed among serotypes of EPEC, suggests that HAF is a possible adhesive factor of DAEC strains
  • Isoenzyme profile as parameter to differentiate pathogenic strains of Entamoeba histolytica in Brazil Parasitology

    Martinez, Ana Maria Barral de; Gomes, Maria Aparecida; Viana, João da Costa; Romanha, Alvaro José; Silva, Edward Felix

    Abstract in Portuguese:

    O perfil isoenzimático (PI) de 33 cepas de E. histolytica, isoladas das regiões Amazônica e Sudeste do Brasil foi determinado. Foram consideradas as enzimas fosfoglicomutase, glicose fosfato isomerase, hexoquinase e enzima málica. O perfil obtido para cada cepa foi correlacionado com o meio e o tempo de manutenção em cultivo e com a história clínica do paciente. As cepas foram mantidas sob condições de cultivo axênico, monoxênico e polixênico: 27 polixênico, 1 polixênico e monoxênico, 1 polixênico, monoxênico e axênico e 4 somente em cultivo axênico. Os pacientes apresentaram sintomas ou não. Os pacientes sintomáticos apresentaram colite disentérica (CD) ou colite não disentérica (CND), associada ou não com abscesso hepático (AH). Um paciente apresentou ameboma anal (AM). A análise do PI das diferentes cepas mantidas em cultivo polixênico mostrou um PI não patogênico (I) para as cepas isoladas de portadores e pacientes com CND, enquanto as cepas isoladas de pacientes apresentando CD, AH ou AM resultou em isolados com PI patogênico (II e XIX). Analisando o PI das cepas mantidas em cultura axênica ou monoxênica, verificamos a inabilidade deste parâmetro para diferenciar cepas isoladas de portadores daquelas isoladas de pacientes sintomáticos. Todas estas cepas apresentaram PI patogênico, demonstrando a inabilidade deste parâmetro para classificar quanto à virulência.

    Abstract in English:

    The isoenzyme profiles (IP) of 33 strains of Entamoeba histolytica isolated from patients and carriers of two regions in Brazil (Amazonia and Southeast) were determined. The enzymes phosphoglucomutase, glucose-phosphate isomerase, hexokinase and malic enzyme were considered. IP of the strains was correlated with culture conditions, time of maintenance in laboratory and clinical history of patients. The strains were maintained under polyxenic, monoxenic and axenic culture conditions: 27 polyxenic, 1 polyxenic and monoxenic, 1 polyxenic, monoxenic and axenic and 4 axenic only. The patients were symptomatic and asymptomatic. The symptomatic patients presented either non dysenteric (NDC) or dysenteric colitis (DC), associated or not with hepatic abscess (HA). One patient presented anal amoeboma (AM). The analysis of IP for isolates maintained in polyxenic culture showed non pathogenic IP (I) for strains from carriers and patients with NDC, while the strains isolated from patients presenting DC, HA and AM resulted in isolates II or XIX pathogenic IP. This parameter was not able to differentiate strains from carriers from symptomatic patients when these strains were found in axenic or monoxenic culture. All these strains displayed pathogenic IP (II), demonstrating the inability of this parameter to classifying for virulence since it showed identical IP for strains isolated from carriers or symptomatic patients.
  • Human cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania (Viannia) braziliensis in Santiago del Estero, Argentina: identification of parasites by monoclonal antibodies and isoenzymes Leishmaniasis

    Cuba Cuba, C.A.; Torno, C.O.; Ledesma, O.; Visciarelli, E.; Garcia, S.; Prat, M.I.; Costamagna, R.; Barbieri, L.; Evans, D.A.

    Abstract in Portuguese:

    Estudos de diagnóstico, caracterização parasitária e identificação foram conduzidos em pacientes humanos com lesões cutâneas de leishmaniose na Província de Santiago del Estero, no Norte da Argentina. Os procedimentos de diagnóstico foram: biópsias de lesões para utilização em esfregaços e inoculação em hamster; aspiração (com agulha) de úlceras, para cultura "in vitro". As técnicas imunodiagnósticas empregadas foram a IFAT-IgG e o teste intradérmico de Montenegro. Oito cepas de parasitas foram isoladas, sendo estas obtidas de pacientes com lesões ativas. Todas as cepas foram inicialmente caracterizadas biologicamente por seu comportamento na infecção experimental do hamster, mensuração dos amastigotas e promastigotas e crescimento "in vitro". As mesmas oito cepas foram logo identificadas e caracterizadas a nível de espécie, devido a sua reatividade frente a um painel de anticorpos monoclonais subgênero e espécie-específicos. Isso foi realizado utilizando o teste de Imunofluorescência Indireta (IFAT/MAbs) e de um procedimento de Dot-ELISA. Nós concluímos a partir da análise de serodema dos isolados argentinos que: MHOM/AR/92/SE-1; SE-2; SE-4; SE-8; SE-8-I; SE-30; SE-34 e SE-36 são Leishmania (Viannia) braziliensis. Entretanto, três dos isolados de Leishmania (SE-1; SE-2 e SE-30) não foram reconhecidos quando testados com um anticorpo monoclonal de reconhecida alta espécie-especificidade (clone B-18, marcador consagrado de Leishmania (Viannia) braziliensis), revelando a existência de dois tipos de serodemas entre as cepas estudadas. Cinco dos oito extratos solúveis de Leishmania foram submetidos à eletroforese em gel de amido de camada fina e subseqüentemente examinadas a fim de constatar a atividade das enzimas MPI, MDH, 6PGD, NH, NH-D, SOD, GPI e ES. Fundamentados nos estudos dos corridos eletroforéticos obtidos nos ensaios isoenzimáticos chegamos à conclusão que as cepas MHOM/AR/92 SE-1; SE-2; SE-4; SE-8 e SE-8-I são Leishmania (Viannia) braziliensis. É necessário analisar mais enzimas antes de enquadrá-los nos zymodema braziliensis

    Abstract in English:

    Diagnostic and parasite characterization and identification studies were carried out in human patients with cutaneous leishmaniasis lesions in Santiago del Estero, Northern Province of Argentina. Diagnostic procedures were biopsies of lesions for smears and inoculations in hamster, needle aspirations of material from ulcers for "in vitro" cultures. Immunodiagnostic techniques applied were IFAT-IgG and Montenegro skin test. Primary isolation of eight stocks of leishmanial parasites was achieved from patients with active lesions. All stocks were biologically characterized by their behaviour in hamster, measurements of amastigote and promastigotes and growth "in vitro". Eight stocks were characterized and identified at species level by their reactivity to a cross-panel of sub-genus and specie-specific Monoclonal Antibodies through an Indirect Immunofluorescence technique and a Dot-ELISA. We conclude from the serodeme analysis of Argentina stocks that: stocks MHOM/AR/92/SE-1; SE-2; SE-4; SE-8; SE-8-I; SE-30; SE-34 and SE-36 are Leishmania (Viannia) braziliensis. Three Leishmania stocks (SE-1; SE-2 and SE-30) did not react with one highly specie-specific Monoclonal Antibody (Clone: B-18, Leishmania (Viannia) braziliensis marker) disclosing two serodeme group patterns. Five out of eight soluble extracts of leishmanial promastigotes were electrophoresed on thin-layer starch gels and examined for the enzyme MPI, Mannose Phosphate Isomerase; MDH, Malate Dehydrogenase; 6PGD, 6 Phosphogluconate Dehydrogenase; NH, Nucleoside Hydrolase, 2-deoxyinosinc as substrate; SOD, Superoxide Dismutase; GPI, Glucose Phosphate Isomerase and ES, Esterase. From the isoenzyme studies we concluded that stocks: MHOM/AR/92/SE-1; SE-2; SE-4; SE-8 and SE-8-I are isoenzymatically Leishmania (Viannia) braziliensis. We need to analyze more enzymes before assigning them to a braziliensis zymodeme.
  • Oviposition by Schistosoma mansoni during in vitro cultivation Schistosomiasis

    Barth, Leo Roberto; Fernandes, Ana Paula Morais; Rodrigues, Vanderlei

    Abstract in Portuguese:

    A ovoposição in vitro do Schistosoma mansoni durante o cultivo de vermes adultos, durante um período de 10 dias mostrou que a cinética da ovoposição apresenta caracteristicamente 3 fases bem distintas. Uma fase inicial com baixa produção de ovos, um período de máxima ovoposição e finalmente uma progressiva queda no número de ovos nas fases tardias do cultivo. A cinética da ovoposição, bem como o número de ovos depositados pelos parasitas são influenciados pelo número de casais por quantidade de meio RPMI 1640, como também pelo tempo de desenvolvimento do parasita no interior do hospedeiro vertebrado e finalmente pelo tipo de soro utilizado no meio de cultivo.

    Abstract in English:

    Observation of Schistosoma mansoni oviposition during in vitro culture of adult worms for a maximum period of 10 days showed three well distinct phases in the kinetics of oviposition: an initial phase with low egg production, a period of maximum oviposition and finally a progressive reduction in the number of eggs during the late phases of culture. The kinetics of oviposition and the number of eggs laid by the parasites are influenced by the number of worm pairs per amount of RPMI 1640 medium, time of parasite development in the vertebrate host and type of serum utilized in the culture medium.
  • Epidemiological aspects of the Brazilian spotted fever: serological survey of dogs and horses in an endemic area in the State of São Paulo, Brazil Epidemiology

    Lemos, Elba R.S. de; Machado, Raimundo D.; Coura, José R.; Guimarães, Maria A.A.M.; Chagas, Nelson

    Abstract in Portuguese:

    Com o objetivo de obter informações sobre a febre maculosa brasileira, um estudo em animais domésticos foi conduzido no município de Pedreira, São Paulo, Brasil, onde 17 casos humanos foram notificados. Amostras de soro obtidas de animais foram testadas pelo teste de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos para rickettsia do grupo da febre maculosa. Soro reatividade foi observada em 12 (36,4%) dos 33 cães e sete (77,8%) dos nove eqüinos procedentes da área endêmica. Para comparação, amostras de sangue de cães e de eqüinos procedentes de área não endêmica foram testadas e quatro (12,9%) dos 31 cães e três dos 10 eqüinos foram positivos. Somente três cães e seis eqüinos procedentes da área endêmica tinham títulos de anticorpos imunofluorescentes elevados (> 1:1024). Os resultados obtidos sugerem que além dos cães, os eqüinos poderiam servir também como animal sentinela na febre maculosa brasileira

    Abstract in English:

    In order to obtain information on Brazilian spotted fever, a study in domestic animals was performed in the County of Pedreira, State of São Paulo, Brazil, where 17 human cases had been notified. Serum samples obtained from animals were tested by indirect immunofluorescence for detectable antibodies to spotted fever-group rickettsiae. Seropositivity was revealed in 12 (36.4%) of 33 dogs and seven (77.8%) of nine horses from the endemic area. For comparison, blood samples from dogs and horses from non endemic area were tested and four (12.9%) of 31 dogs and three (27.3%) of 11 horses were positive. The highest titers of antibodies by IFA (IgG > 1:1024) were found only in three dogs and six horses from endemic area. The results suggest that dogs as horses may serve as environmental sentinels for estabilishing the prevalence of foci of spotted fever in Brazil.
  • Seroepidemiology of human toxoplasmosis in Chile Seroepidemiology

    Contreras, Maria del C.; Schenone, Hugo; Salinas, Patricia; Sandoval, Lea; Rojas, Antonio; Villarroel, Fernando; Solis, Fresia

    Abstract in Spanish:

    En este trabajo se revisa, se amplía y se analiza en conjunto una serie de encuestas seroepidemiológicas sobre toxoplasmosis efectuadas en Chile entre 1982 y 1994, utilizando la reacción de hemaglutinación indirecta (RHAI). El estudio incluyó 76.317 personas aparentemente sanas de diferentes edades (0,57% de la problación total del país), procedentes de 309 localidades urbanas y rural-periurbanas. Los grupos urbanos estuvieron constituídos por donantes de sangre, parturientas y escolares del nivel medio de la enseñanza básica, mientras que los habitantes rural-periurbanos correspondieron a grupos familiares no seleccionados. Las muestras de sangre fueron recolectadas en papel filtro, y fueron consideradas positivas las RHAI con títulos > 16. La RHAI resultó positiva en un total de 28.124 (36,9%) de las personas encuestadas, encontrándose títulos > 1000 en 206 (0,3%) individuos, los que probablemente correspondieron a infecciones agudas o reactivadas. Hubo un progresivo incremento de las RHAI positivas desde las regiones del extremo norte hacia las regiones del extremo sur del país, lo que podría relacionarse con una mayor humedad ambiental y con una mayor producción y consumo de diferentes tipos de carne en estas últimas. Los resultados presentados destacan la importancia de la toxoplasmosis en el hombre y alertan sobre eventuales implicancias en pacientes inmunocomprometidos, en la transmisión transplacentaria, transplantes de órganos y transfusiones.

    Abstract in English:

    A series of already published and unpublished seroepidemiological surveys for toxoplasmosis, carried out in Chile in 1982-1994, is reviewed, expanded and analyzed. The surveys included 76,317 apparently healthy individuals of different ages (0.57% of the country's total population), from 309 urban and rural-periurban localities. Urban groups were integrated by blood donors, delivering mothers and middle grade schoolchildren, while rural-periurban individuals corresponded to unselected family groups. Blood samples were collected in filter paper. The presence of antibodies to Toxoplasma gondii was determined by the indirect hemagglutination test (IHAT), titers > 16 were considered positive. The test resulted positive in 28,124 (36.9%) of the surveyed people. Two hundred and six (0.3%) individuals presented IHAT titers > 1000, probably corresponding to acute or reactivated infections. A progressive increase of positive IHAT from northern to southern regions of the country was noted, phenomenom probably related to geographical conditions and to a higher production and consumption of different types of meat in the latter regions. It is postulated that ingestion of T. gondii cysts by humans is epidemiologically as important as ingestion of oocysts. The results presented stress the epidemiological importance of toxoplasmosis in humans, and warn about eventual implications in immunocompromised patients and in transplacental transmission, organ transplants and transfusions.
  • Parinaud syndrome caused by Bartonella henselae: case report Case report

    Yamashita, Carlos Alberto; Mielle, Adriana; Slhessarenko, Natasha; Nascimento, Sérgio; Gilio, Alfredo; Pahl, Márcia; Ejzenberg, Bernardo; Baldacci, Evandro; Okay, Yassuhiko

    Abstract in Portuguese:

    Os autores relatam um caso do Síndrome de Parinaud (conjuntivite com adenite satélite pré-auricular) causada por Bartonella henselae, o agente etiológico da Doença da Arranhadura do Gato. O esclarecimento etiológico deste caso foi feito através da reação de imunofluorescência indireta o que permitiu um adequado enfoque terapêutico e acompanhamento do paciente, evitando o uso de antibióticos inadequados e intervenções cirúrgicas.

    Abstract in English:

    The authors report a case of Parinaud syndrome (conjunctivitis with pre-auricular satellite adenitis) caused by Bartonella henselae, the etiologic agent of Cat Scratch Disease. The etiologic assessment of this case was performed by serum indirect immunofluorescence reaction and allowed for a better therapeutics and follow up, avoiding ineffective antibiotics and surgical interventions.
  • GB virus C/Hepatitis G virus and other putative hepatitis non A-E viruses Invited review

    Pinho, João Renato Rebello; Silva, Luiz Caetano da

    Abstract in Portuguese:

    A identificação dos virus responsáveis pela vasta maioria dos casos de hepatite (Vírus das Hepatites A, B, C, D e E) foi realizada durante os últimos 30 anos. Entretanto, existem ainda alguns casos epidemiologicamente relacionados com agentes infecciosos, nos quais não se encontra nenhuma evidência de infecção por nenhum vírus conhecido. Estes casos foram designados de Hepatites não A-E e são atualmente relacionados com pelo menos três diferentes vírus: 1 - Mutantes do Vírus da Hepatite B, que expressam o antígeno de superfície (AgHBs) com epitopos alterados ou em baixas concentrações. 2 - Um outro vírus, denominado Vírus da Hepatite F, foi associado com as hepatites não A-E de transmissão entérica. Entretanto, maiores estudos são ainda necessários para sua melhor caracterização. 3 - O Vírus da Hepatite G ou Vírus GB-C foi recentemente identificado em diferentes regiões do mundo (incluindo o Brasil) como um Flavi-vírus responsável por cerca de 10% dos casos de hepatites não A-E de transmissão parenteral. Provavelmente, ainda outros vírus responsáveis pelas hepatites humanas serão encontrados em casos de hepatites sem marcadores de infecção por nenhum destes vírus.

    Abstract in English:

    The identification of the major agents causing human hepatitis (Hepatitis A, B, C, D and E Viruses) was achieved during the last 30 years. These viruses are responsible for the vast majority of human viral hepatitis cases, but there are still some cases epidemiologically related to infectious agents without any evidence of infection with known virus, designated as hepatitis non A - E. Those cases are considered to be associated with at least three different viruses: 1 - Hepatitis B Virus mutants expressing its surface antigen (HBsAg) with altered epitopes or in low quantities; 2 - Another virus probably associated with enteral transmitted non A-E hepatitis, called Hepatitis F Virus. Still more studies are necessary to better characterize this agent; 3 - Hepatitis G Virus or GB virus C, recently identified throughout the world (including Brazil) as a Flavivirus responsible for about 10% of parenteral transmitted hepatitis non A-E. Probably still other unknown viruses are responsible for human hepatitis cases without evidence of infection by any of these viruses, that could be called as non A-G hepatitis.
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