• Detection of Toxoplasma gondii soluble antigen, SAG-1(p30), antibody and immune complex in the cerebrospinal fluid of HIV positive or negative individuals Immunology

    CHAVES-BORGES, Flávia A.; SOUZA, Maria A.; SILVA, Deise A. O.; KASPER, Lloyd H.; MINEO, José R.

    Abstract in Portuguese:

    Foi investigada a presença de infecção ativa pelo T. gondii em pacientes hospitalizados apresentando acometimentos neurológicos diversos. Amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) foram analisadas em imunoensaios padronizados para a detecção de três marcadores moleculares: antígeno solúvel contendo epítopo imunodominante da superfície parasitária SAG-1 (p30), anticorpos específicos e imunocomplexos. Foram coletadas 263 amostras de LCR que foram inicialmente analisadas quanto a presença de anticorpos anti-HIV. Os pacientes foram divididos em dois grupos: HIV positivos (n = 96) ou HIV negativos (n =167). Os resultados dos ensaios demonstraram que 45% do total de amostras foram positivas para o antígeno SAG-1 (p30). Imunocomplexos foram detectados em 19% das amostras analisadas e 62% foram positivas para anticorpos IgG anti-T. gondii. A associação destes resultados com os achados clínicos consistentes com a presença de infecção ativa pelo Toxoplasma pode ser de importância no diagnóstico da encefalite toxoplásmica.

    Abstract in English:

    Active infection by T. gondii was evaluated by immunoassay for soluble SAG-1 (p30), the major surface antigen from T. gondii, specific antibodies and immune complexes in human cerebrospinal fluid (CSF) samples. A total of 263 samples of CSF were collected from hospitalized patients presenting neurological disorders and analyzed for antibodies to HIV. Patients were divided into two groups: HIV positive (n = 96) or HIV negative (n =167). The results of the assays showed that 45% of all samples were positive for soluble SAG-1. Toxoplasma Ag/Ab immune complexes were detected in 19% of the CSF samples and 62% were positive for T. gondii- specific IgG. A combination of these assays in the presence of clinical findings consistent with active Toxoplasma infection may predict the presence of toxoplasmic encephalitis. Moreover, detection of soluble SAG-1 in the CSF of these individuals appears consistent with active infection.
  • Diagnosis of plague and identification of virulence markers in Yersinia pestis by multiplex-PCR Microbiology

    LEAL, Nilma C.; ALMEIDA, Alzira M. P. de

    Abstract in Portuguese:

    Foi desenvolvido um procedimento para diagnóstico rápido da peste que ao mesmo tempo permite a identificação de marcadores de virulência de Y. pestis, com múltiplos iniciadores, em uma só reação de PCR. Foram usados quatro pares de iniciadores direcionados a genes presentes nos três plasmídeos de virulência e na ilha de patogenicidade dessa bactéria. A técnica permitiu a discriminação de cepas que perderam um ou mais genes conhecidos, usando como molde DNA total obtido de culturas de Y. pestis e também de hemoculturas simuladas contendo concentrações conhecidas de Y. pestis. Também se mostrou eficiente para a confirmação da Y. pestis na cultura de sangue de um paciente suspeito de peste. Como os resultados são obtidos em poucas horas, esta técnica poderá ser útil na metodologia do Programa de Controle da Peste.

    Abstract in English:

    We have developed a procedure for the rapid diagnosis of plague that also allows the identification of prominent virulence markers of Y. pestis strains. This procedure is based upon the use of a single polymerase chain reaction with multiple pairs of primers directed at genes present in the three virulence plasmids as well as in the chromosomal pathogenicity island of the bacterium. The technique allowed the discrimination of strains which lacked one or more of the known pathogenic loci, using as template total DNA obtained from bacterial cultures and from simulated blood cultures containing diluted concentration of bacteria. It also proved effective in confirming the disease in a blood culture from a plague suspected patient. As the results are obtained in a few hours this technique will be useful in the methodology of the Plague Control Program.
  • Partial chemical characterization of antigenic preparations of chromoblastomycosis agents Mycology

    BARROS, Tania Fraga; RESENDE, Maria Aparecida de

    Abstract in Portuguese:

    Preparações antigênicas (antígenos salinos, metílicos, metabólicos e exoantígenos) de quatro agentes da cromoblastomicose, Fonsecaea pedrosoi, Phialophora verrucosa, Cladophialophora (Cladosporium) carrionii e Rhinocladiella aquaspersa foram obtidos e foi determinada a caracterização química parcial dos mesmos. Os antígenos metílicos apresentaram os maiores teores de lípides enquanto os metabólicos os maiores teores em carboidratos. Lípides totais, proteína e carboidratos totais ocorreram na faixa de 2,33 a 2,00mg/ml, 0,04 a 0,02 mg/ml e 0,10 a 0,02 mg/ml respectivamente, nos antígenos metílicos e de 0,53 a 0,18mg/ml, 0,44 a 0,26mg/ml e 1,82 a 1,02mg/ml respectivamente, nos antígenos salinos. Lípides, proteínas e carboidratos totais ocorreram na faixa de 0,55 a 0,20mg/ml, 0,69 a 0,57mg/ml e 10,73 a 5,93mg/ml respectivamente, nos antígenos metabólicos, e na faixa de 0,55 a 0,15mg/ml, 0,62 a 0,20mg/ml e 3,55 a 0,42mg/ml respectivamente, nos exoantígenos. Fosfolípides não foram detectados em nenhum dos antígenos. Os antígenos salinos, metabólicos e os exoantígenos apresentam hexoses enquanto os antígenos metílicos apresentam adicionalmente unidades de pentose em sua composição. O espectro de absorção na luz UV dos esteróis revelou esqualeno e ergosterol em todos os antígenos. A obtenção e caracterização química parcial desses antígenos poderá vir a ser de utilidade em estudos de sorologia de pacientes da cromoblastomicose.

    Abstract in English:

    Antigenic preparations (saline, methylic, metabolic and exoantigens) of four agents of chromoblastomycosis, Fonsecaea pedrosoi, Phialophora verrucosa, Cladophialophora (Cladosporium) carrionii and Rhinocladiella aquaspersa were obtained. Partial chemical characterization of these antigenic preparations was obtained by determination of the levels of total lipids, protein, and carbohydrates, and identification of the main sterols and carbohydrates. Methylic antigens presented the highest lipid contents, whereas metabolic antigens showed the highest carbohydrate content. Total lipid, protein, and carbohydrate levels were in the range of 2.33 to 2.00mg/ml, 0.04 to 0.02 mg/ml and 0.10 to 0.02 mg/ml, respectively, in the methylic antigens and in the range of 0.53 to 0.18mg/ml, 0.44 to 0.26mg/ml, and 1.82 to 1.02 mg/ml, respectively, in saline antigens. Total lipid, protein, and carbohydrate contents were in the range of 0.55 to 0.20mg/ml, 0.69 to 0.57mg/ml and 10.73 to 5.93mg/ml, respectively, in the metabolic antigens, and in the range of 0.55 to 0.15mg/ml, 0.62 to 0.20mg/ml and 3.55 to 0.42mg/ml, respectively, in the exoantigens. Phospholipids were not detected in the preparations. Saline and metabolic antigens and exoantigens presented hexose and the methylic antigen revealed additional pentose units in their composition. The UV light absorption spectra of the sterols revealed squalene and an ergosterol fraction in the antigens. The characterization of these antigenic preparations may be useful for serological evaluation of patients of chromoblastomycosis.
  • PCR with Paracoccidioides brasiliensis specific primers: potential use in ecological studies Mycology

    DÍEZ, S.; GARCIA, E.A.; PINO, P.A.; BOTERO, S.; CORREDOR, G.G.; PERALTA, L.A.; CASTAÑO, J.H.; RESTREPO, A.; McEWEN, J.G.

    Abstract in Portuguese:

    O microambiente adequado do Paracoccidioides brasiliensis não foi ainda bem esclarecido, talvez porque os métodos utilizados não sejam suficientemente sensíveis. Aplicamos com este propósito, a reação em cadeia da polimerase (PCR) usando três jogos de primers específicos do P. brasiliensis, correspondendo a dois dos genes do P. brasiliensis. Este fungo, assim como outros fungos, foram cultivados e seus DNAs obtidos por ruptura mecânica e purificados com mistura de fenol-clorofórmio com álcool isoamílico. Os DNAs serviram para a reação de PCR utilizando-se primers específicos para dois dos genes do P. brasiliensis que codificam para as proteínas antigênicas, denominadas, 27 kDa e 43 kDa. O limite mínimo de detecção para o gene 27 kDa foi de 3 pg. A amplificação para os dois genes foi positiva só com o DNA do P. brasiliensis; além disso, o mRNA para o gene de 27kDa estava presente apenas no material do P. brasiliensis, como mostrado pela análise por Northern-blot. A padronização da técnica do PCR permitiu a amplificação do DNA do P. brasiliensis em solos contaminados artificialmente com o fungo e em tecidos de tatus infectados na natureza. Estes resultados indicam que a técnica do PCR podería ter um papel muito importante na pesquisa do habitat do P. brasiliensis e, além disso, podería ser utilizada em outros estudos ecológicos.

    Abstract in English:

    The precise microenvironment of Paracoccidioides brasiliensis has not yet been discovered perhaps because the methods used are not sensitive enough. We applied to this purpose the polymerase chain reaction (PCR) using three sets of specific primers corresponding to two P. brasiliensis genes. This fungus as well as several other fungi, were grown and their DNA obtained by mechanical disruption and a phenol chloroform isoamylalcohol-based purification method. The DNA served for a PCR reaction that employed specific primers from two P. brasiliensis genes that codify for antigenic proteins, namely, the 27 kDa and the 43 kDa. The lowest detection range for the 27 kDa gene was 3 pg. The amplification for both genes was positive only with DNA from P. brasiliensis; additionally, the mRNA for the 27 kDa gene was present only in P. brasiliensis, as indicated by the Northern analysis. The standardization of PCR technology permitted the amplification of P. brasiliensis DNA in artificially contaminated soils and in tissues of armadillos naturally infected with the fungus. These results indicate that PCR technology could play an important role in the search for P. brasiliensis’ habitat and could also be used in other ecological studies.
  • Jorge Lobo’s disease: experimental inoculation in Swiss mice Mycology

    OPROMOLLA, Diltor Vladimir Araújo; MADEIRA, Suzana; BELONE, Andréa de Faria Fernandes; VILANI-MORENO, Fátima Regina

    Abstract in Portuguese:

    Foram inoculados por via intradérmica, os coxins plantares traseiros de 64 camundongos Suíços, isogênicos. Os inóculos constituídos de uma suspensão fúngica, obtidos de biópsias de pacientes portadores de Doença de Jorge Lobo, foram submetidos a contagem do número total de fungos em câmara de Neubauer e a determinação da viabilidade segundo técnica do diacetato de fluoresceína-brometo de etídeo (DF-BE). Os animais foram sacrificados em períodos de tempo que variaram de 10 dias a 18 meses pós-inoculação. Um infiltrado celular constituído essencialmente por macrófagos com fungos no seu interior foi aumentando progressivamente até o final da experimentação, entretanto não houve alterações macroscópicas das patas inoculadas. Um pequeno número de células gigantes tipo Langhans começou a aparecer no infiltrado aos 9 meses. Um número considerável de fungos foi observado no período final do experimento, mas quando submetidos a coloração pelo DF-BE somente alguns deles estavam viáveis. Por esse motivo os autores sugerem que existe uma multiplicação de fungos, mas que são destruídos pelos macrófagos e permanecem no tecido um longo período de tempo talvez devido a dificuldade em sua eliminação. Estes achados levam a conclusão que apesar da manutenção da infecção nesses animais, os camundongos Suíços podem não ser considerados um modelo ideal para o estudo da Doença de Jorge Lobo. Entretanto, os autores chamam a atenção para a possibilidade de outras linhagens de camundongos serem mais susceptíveis ao P. loboi.

    Abstract in English:

    Sixty-four isogenic Swiss mice were intradermically inoculated in both hind foot pads. The inocula, consisting of fungal suspensions from biopsies obtained from Jorge Lobo’s Disease patients, had the total number of fungi and the viability index determined using a Neubauer chamber and the fluorescein diacetate-ethidium bromide technique (FD-EB), respectively. The animals were sacrificed at times ranging from ten days to eighteen months after inoculation. The cellular infiltrate, mainly consisting of macrophages containing fungi, increased progressively up to end of the study; however, no macroscopic alterations were observed in the inoculated feet. After nine months, small numbers of Langhans’ giant cells started to appear in the infiltrate. A considerable number of fungi was observed at the end of the experimental period, but only a few were viable when stained by the FD-EB technique. This fact suggests that there is a multiplication of fungal cells, which are destroyed by the macrophages but remain in the tissue for a long time due perhaps to the difficulties in their elimination. These findings led us to conclude that in spite of the maintenance of the infection in these animals, Swiss mice cannot be considered an ideal model to study Jorge Lobo’s Disease. However, the authors call attention to the possibility of other mouse strains being more susceptible to Paracoccidioides loboi.
  • Nosocomial infection in long-term care facilities. A survey in a Brazilian psychiatric hospital Nosocomial infections

    ALMEIDA, Regina Capanema de; PEDROSO, Roberto Pietra

    Abstract in Portuguese:

    Foi estudada a Infecção Hospitalar (IH) em pacientes masculinos internados em hospital psiquiátrico público e as definições sugeridas para uso em instituições de longa permanência (ILPs/Long-Term Care Facilities-LTCFs) foram utilizadas para diagnóstico das IH. A taxa global de IH foi de 6,7 por 1000 pacientes-dia, 55,6% das infecções foram identificadas no trato respiratório, sendo que 50% dessas eram viroses respiratórias; 38,9% das IH relacionavam-se aos olhos, ouvidos, nariz, garganta e boca e 5,6% a pele e partes moles. As características epidemiológicas e as principais alterações clínicas desses pacientes também foram identificadas.

    Abstract in English:

    Nosocomial infection among male patients in a public psychiatric hospital was studied and the definitions for use in long-term care facilities were employed for diagnosis. The overall nosocomial infection rate was 6.7 per 1,000 day inpatients; 55.6% of these infections were identified in the respiratory tract, 50% of them being respiratory viral diseases; 38.9% of the nosocomial infections involved the eyes, ears, nose, throat and mouth, and 5.6% involved the skin and soft tissues. The epidemiological characteristics and the main clinical alterations of these inpatients were also identified.
  • Gamma 60Co DL50/30 of Biomphalaria glabrata (Say, 1818) Schistosomiasis

    CARVALHO, Elaine Barros da Costa; MELO, Ana Maria Mendonça de Albuquerque; MOTTA, Mauricy Alves da

    Abstract in Portuguese:

    A variação da resistência entre indivíduos em autofecundação e fecundação cruzada de Biomphalaria glabrata foram estudadas. Uma população de 480 moluscos foi observada durante 29 dias, distribuída em 8 grupos de caramujos isolados e 8 grupos em colônias após a exposição (30 caramujos por grupo-dose) a doses crescentes de radiação gama. Foram usadas doses de 10, 20, 40, 60, 80, 160, 320 e 640 Gy de um irradiador Gamma-Cell 60Co. Dois grupos não irradiados - isolado e colônia - foram separados como controle e após a irradiação todos os caramujos voltaram para aquários onde viviam antes. A sobrevida foi estimada pela contagem diária dos animais vivos em cada grupo-dose, a partir do dia da irradiação. O resultado mostrou maior sobrevivência nos grupos isolados (DL50/30 = 218.2 Gy) que nos grupos colonizados (DL50/30 = 59 Gy). Estes dados apontam para uma baixa radio-resistência nos grupos colonizados - com forma de reprodução sexuada - que são mais comuns na natureza. A baixa resistência observada sugere a presença de fatores humorais e hormônios sexuais ligados ao fenômeno

    Abstract in English:

    The variation of resistance to 60Co gamma-rays of Biomphalaria glabrata was studied. A population of 480 mollusks was observed during 30 days - distributed in 8 groups of snails isolated and 8 groups of snails in colonies - after exposure (30 snails per group per dose) to increasing doses of gamma radiation. Doses of 10, 20, 40, 60, 80, 160, 320 and 640 Gy from a Gamma-cell 60Co irradiator, were applied to the test groups and two groups control (non-irradiated) of snails - isolated and colony - were kept apart. After have been exposed, the snails were drew back to the aquaria where they were maintained before. The survival was estimated on a daily score of the alive animals in each group-dose, starting after the irradiation exposure day. As a result, the survival self-fertilization forms (DL50/30 = 218.2 Gy) was found greater than in cross-fecundation forms. These data point to a low radio-resistance on the cross-fertilization forms - the sexual reproductive form - which is most found in nature. The lower radio-resistance of the cross-fertilization forms suggests the presence of some sex-linked hormonal factor related to this phenomenon.
  • Listeria monocytogenes in renal transplant recipients Brief communication

    HOFER, Cristina Barroso; MELLES, Carmo Elias Andrade; HOFER, Ernesto

    Abstract in Portuguese:

    No período de abril a dezembro de 1985, foram observados cinco casos de listeriose em transplantados renais num mesmo hospital de São Paulo, SP. Os pacientes eram adultos (média de 40,6 anos) tendo como queixa básica a febre. Laboratorialmente, em todos foram reconhecidos Listeria monocytogenes, caracterizada por dois sorovares 1/2a e 4b e três lisotipos distintos. As amostras do sorovar 4b apresentaram o mesmo antibiotipo: resistentes à cefoxitina, clindamicina, oxacilina e penicilina.

    Abstract in English:

    Five cases of Listeria monocytogenes bacteriemia were observed from April to December 1985, among renal transplant recipients from the same hospital in São Paulo, Brazil. The patients were adults (mean age: 40.6 years), and the basic complain was fever, with no report of meningeal syndrome. Laboratory tests revealed the presence of two serovars, 1/2a and 4b, which were classified into three lysotypes. The four strains of serovar 4b showed the same antibiotype, with resistance to cefoxitin, clindamycin, oxacillin and penicillin.
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