Aflatoxina M1 no leite tipo "B" comercializado no Município de São Paulo, SP (Brasil)

Aflatoxin M1 in B-type milk sold in S.Paulo city, Brazil

ARTIGO ORIGINAL

Aflatoxina M₁ no leite tipo "B" comercializado no Município de São Paulo, SP (Brasil)

Aflatoxin M₁ in B-type milk sold in S.Paulo city, Brazil

Jorge Luiz Seferin Martins^I; Ignez Salas Martins^II

^IDo Departamento de Farmácia da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade de São Paulo - Caixa Postal 30786 - 01000 - São Paulo, SP - Brasil

^IIDo Departamento de Nutrição da Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo - Av. Dr. Arnaldo, 715 - 01255 - São Paulo, SP - Brasil

RESUMO

No leite tipo "B", comercializado no Município de São Paulo, SP (Brasil), foi pesquisada a presença de aflatoxina M₁. As amostras de leite analisadas foram provenientes das quatro marcas de maior consumo pela população, coletadas no período de julho a outubro de 1982. A aflatoxina M₁, embora em baixos níveis e em pequena proporção (1,8%), fez-se presente nas quatro marcas.

Unitermos: Leite, contaminação. Aflatoxinas. Alimentos, microbiologia.

ABSTRACT

B-type milk sold in the city of S.Paulo, Brazil, was examined for Aflatoxina M₁. Samples were taken from the four brands of greatest consumption in the period from June 14^th through October 31^th, 1982. Aflatoxin M₁, although in small proportion (1.8%) and at low levels, was present in the brands studied.

Uniterms: Milk contamination. Aflatoxins. Food microbiology.

INTRODUÇÃO

A presença de fungos nos alimentos além de ocasionar alterações indesejáveis no sabor e na qualidade, limitando sua aceitação, apresenta a possibilidade de produzir toxinas.

É o caso, por exemplo, das aflatoxinas que têm se mostrado carcinogênicas, sendo produzidas por várias espécies de fungos do gênero Aspergillus^26,48. Estes fungos são encontrados naturalmente em um grande número de produtos agrícolas na grande maioria das zonas do mundo^{12,21,22,30,33}. Além disso, muitos desses produtos são utilizados como ingredientes de rações^1,8.

As aflatoxinas também já foram detectadas em ovos, leite, produtos lácteos, carne e derivados e alimentos industrializados^{4,13,22,25,32,35,41,47}.

A contaminação desses alimentos por aflatoxina pode ser causada diretamente através do crescimento de fungos toxicogênicos em produtos agrícolas ou indiretamente através de resíduos derivados do metabolismo^5,11,27.

O primeiro resíduo de aflatoxina observado no tecido de vacas e o mais intensamente estudado foi a aflatoxina M₁ no leite^7,31,36. A aflatoxina M₁, o mais tóxico entre os seis metabólicos da aflatoxina B₁, é encontrado invariavelmente no tecido animal, excretas, no leite e derivados. A conversão em aflatoxina M₁ ocorre no fígado, produzida pela hidroxilação do quarto carbono da molécula de aflatoxina B₁^6,14.

Muitos estudos foram realizados com a finalidade de determinar a relação entre a ingestão e a excreção desta aflatoxina. Nesses estudos concluiu-se que o teor de aflatoxina M₁, excretada no leite, é diretamente proporcional a quantidade de aflatoxina B₁ ingerida. Também ficou evidenciado que a aflatoxina aparece quando o conteúdo de aflatoxina B₁ na ração for superior a 46 ppb^2,3,34,37,39.

Na fabricação de derivados de leite, o desnatamento tem mostrado afetar a distribuição de aflatoxina M₁ no produto final. Como ela fica associada à caseína, durante o desnatamento do leite integral, 84% do total do conteúdo de aflatoxina M₁ fica retido no produto desnatado^24,51.

No processo de pasteurização, foi estudado, o efeito do aquecimento na estabilidade da aflatoxina M₁, mas os resultados foram conflitantes. Vários autores admitem que a pasteurização não afeta a sua estabilidade^55,58,59. Entretanto, outros consideram que cerca de 80% da aflatoxina é destruída durante a pasteurização^28,38,43.

Na maioria dos países a legislação sobre alimentos e rações proíbe a venda de produtos contaminados por substâncias venenosas ou nocivas. Entretanto, poucos dispõem de regulamentos estabelecendo os limites admissíveis de aflatoxinas nos alimentos, e quando os possuem são incompletos. As legislações que abrangem o controle dessa micotoxina limitamse, na maioria das vezes, a certos produtos facilmente contamináveis, como óleos de sementes e derivados²⁹.

A Food and Drug Administration (FDA)^19,20,50 elaborou várias especificações a respeito. Os níveis permissíveis constam da Tabela 1.

A legislação brasileira¹⁶ (Res. 34/76 da antiga CNNPA) estabeleceu para alimentos o limite de 30 µg/kg para as aflatoxinas calculadas pelas somas dos conteúdos das aflatoxinas B₁ e G₁, não existindo legislação específica para o leite.

O presente trabalho tem como objetivo a análise das condições do leite tipo "B" comercializado no Município de São Paulo, em relação à aflatoxina M₁.

MATERIAL E MÉTODOS

As amostras de leite tipo "B" analisadas foram provenientes das quatro marcas de maior consumo pela população do Município de São Paulo, coletadas no período de 14 de julho a 31 de outubro de 1982.

Neste período de 140 dias, cada dia da semana foi repetido 20 vezes (Tabela 2), tendo havido 20 segundas-feiras, 20 terças-feiras e assim por diante.

A unidade amostral foi o conglomerado constituído pela totalidade dos sacos de leite produzido em um dia, em cada usina. Cada saco de leite foi representativo da produção diária por ser o leite homogeneizado antes de seu envasamento. Assim, cada usina apresentou 140 conglomerados no período; as 4 usinas formaram 560 conglomerados que corresponderam ao universo da pesquisa.

Pretendeu-se que todas as usinas ficassem representadas nos 7 dias da semana. Para tanto adotou-se, além do critério "usina", o "dia da semana". Desta forma, os 560 conglomerados foram estratificados de acordo com estes dois critérios, em 28 estratos.

Utilizou-se amostragem sistemática com intervalo de 2,5 obtendo-se alíquotas de tamanho 8, para cada dia da semana (Tabela 3).

Das 5 possíveis amostras que se pode obter, (Tabela 2) do estrato correspondente às segundas-feiras, sortearam-se 4, aplicando-se o intervalo de 2,5; cada uma delas correspondeu por sorteio a uma das 4 usinas.

Desta forma, para cada usina selecionou-se uma amostra de 8 segundas-feiras sem que houvesse coincidência com as demais amostras e permitindo, também, que no máximo duas usinas fossem sorteadas para cada segunda-feira.

Procedeu-se analogamente em relação aos demais dias da semana.

Esta forma de sorteio permitiu que todos os dias da semana ficassem representados para as 4 usinas (8 para cada uma delas) bem espaçadas ao longo dos 140 dias, compreendendo 56 amostras para cada usina totalizando 224 ao todo.

Na determinação de aflatoxina seguiu-se o método desenvolvido por Della Rosa e Moraes¹⁷. Somente na quantificação empregou-se a técnica proposta por Tuinstra e Bronsgeest⁵³.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

A aflatoxina embora em baixos níveis e em pequena proporção (1,8%), fez-se presente nas quatro marcas, como indica a Tabela 4.

As análises de aflatoxina M₁ no leite, foram efetuadas no período de 14 de junho a 31 de outubro de 1982, meses onde predominam temperaturas mais baixas.

O teor de aflatoxina M₁ no leite tem mostrado sofrer uma influência sazonal^49,54,56. Análises efetuadas no leite durante o inverno apresentaram uma proporção mais elevada de aflatoxina M₁ e, conseqüentemente, mais mensurável do que no verão, em virtude do maior consumo de ração^23,56.

Também, por ser período de entressafra, geralmente o consumo de ração pelas vacas é bem mais elevado e, como há uma relação direta entre a ingestão de aflatoxina B₁ e a incidência de aflatoxina M₁ no leite, haveria maior probabilidade de ser encontrada^6,18.

Nas quatro amostras as concentrações foram inferiores aos limites fixado pela FDA, ou seja, 0,5 µg/kg. Entretanto, convém ressaltar que, especificamente, no ano de 1982, o inverno foi ameno não prejudicando as pastagens, ocorrendo conseqüentemente menor consumo de ração. Por outro lado, o fato de se ter encontrado amostras positivas constituiu-se alerta à saúde pública, quanto à necessidade de se estabelecer uma legislação específica sobre a presença deste contaminante no leite, paralelamente com uma ação educativa ao produtor.

No Brasil, os estudos de Pozzobon e col.⁴⁰ e Sabino⁴⁵ também mostraram pequena incidência de aflatoxina nas amostras de leite analisadas.

Entretanto, os resultados obtidos diferem dos encontradas em diversos países, onde a incidência e os níveis de aflatoxina foram sempre mais elevados.^{9,10,15,42,52,57}. Esta diferença foi atribuída à alimentação e às condições de armazenamento.

A qualidade e a procedência da ração é fator importante na contaminação dos produtos leiteiros. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS)⁵¹, para combater as micotoxinas há necessidade de se prevenir e de se reduzir a níveis inócuos a contaminação dos alimentos e das rações. Para tanto, o fundamental é estabelecer métodos adequados de colheita, tratamento, armazenamento, transporte e distribuição, a fim de impedir a formação desses contaminantes. Torna-se necessário manter uma vigilância contínua dos produtos de elevado risco, destinados à alimentação humana e animal.

No Brasil, as condições de fabricação e armazenamento de rações parecem não favorecer a formação e proliferação de micotoxinas. Além disso, em virtude das condições climáticas não apresentarem temperaturas muito baixas, torna desnecessário o armazenamento de grandes quantidades de rações.

Nos países onde foram realizadas pesquisas sobre a presença de aflatoxina no leite e derivados, as condições de armazenamento e fabricação são totalmente diversas às do Brasil. Nesses países, muitas vezes os ingredientes destinados à produção de rações são importados aumentando o risco de contaminação, em virtude das condições de armazenamento e de transporte.

A baixa incidência e a baixa concentração de aflatoxina M₁ poderia ter ocorrido na hipótese de que o leite tipo "B" tenha sido homogeneizado, misturando-se com o de várias procedências. Desta maneira, a mistura do produto com e sem aflatoxina levaria a diluição destas e a conseqüente dificuldade de detecção⁴⁵.

Entretanto, a constatação de aflatoxina no leite, embora em baixos teores, indica que está havendo ingestão de ração contaminada com Aspergillus. A magnitude pode ter sido pequena no momento da pesquisa, o que não dá segurança sobre o que possa ocorrer futuramente. Além disso, Sabino^44,46 constatou que alimentos e rações do Estado de São Paulo e de outras regiões do Brasil, no período de 1971 a 1979, estavam contaminadas com aflatoxina B₁, em limites que variaram de 50 a 7.800 µg/kg, superiores aos valores tolerados pela legislação brasileira (30 µg/kg). Por isso, não será exagero enfatizar a necessidade de uma vigilância constante pelas autoridades sanitárias, quanto à presença de aflatoxina B₁ em alimentos e rações animais comercializadas.

CONCLUSÕES

De acordo com os resultados obtidos, podemos concluir que a incidência de aflatoxina M₁ no leite tipo "B", comercializado na cidade de São Paulo e representado pelas quatro marcas de maior consumo, foi pequena e os níveis encontrados foram baixos. Ficou evidenciado o problema da necessidade do estabelecimento de limites de tolerância deste contaminante no leite, ausentes na legislação brasileira.

Recebido para publicação em 11/03/1986

Aprovado para publicação em 23/06/1986

Parte da tese de Doutorado, de autoria de Jorge Luiz Seferin Martins, apresentada à Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo, em 1984, sob o título "Aflatoxina e inibidores bacterianos no leite tipo "B" comercializado em São Paulo: Levantamento das quatro marcas de maior consumo".

• 1. AFZAL, M. et al. Incidence of aflatoxins and aflatoxin producing fungi in animal feedstuffs. Mycopathologia, 69: 149-51, 1979.
• 2. ALLCROFT, R. & LEWIS, G. Groundnut toxicity in cattle: experimental poisoning of calves and a report on clinical effects in older cattle. Vet. Rec., 75: 487-93, 1963.
• 3. ALLCROFT, R. et al. Metabolism of aflatoxin in sheep: excretion of the "milk toxin". Nature, 209: 154-5, 1966.
• 4. APPLEBAUM, R.S. & MARTH, E.H. Fate of aflatoxin M₁ in cottage cheese. J.Food Protec. 45: 903-4, 1982.
• 5. APPLEBAUM, R. S. et al. Aflatoxin: toxicity to dairy cattle and occurrence in milk and milk products - A review. J. Food Protec. 45: 752-7, 1982.
• 6. APPLEBAUM, R.S. et al. Responses of dairy cows to dietary aflatoxin: feed intake and yield, toxin content and quality of milk of cows treated with pure and impure aflatoxin. J. Dairy Sci., 65: 1503-8, 1982.
• 7. ASPLIN, F.D. & CARNAGHAN, R.B.A. The toxicity certain groundnut meals for poultry with special reference to their effect on ducklings and chickens. Vet. Rec., 73: 1215-9, 1961.
• 8. BAINTON, J. & JONES, B.D. Mycotoxins of foods and feeds their occurrence and significance. Ann. Nutr., 31: 415-24, 1977.
• 9. BARTOS, J. & MATYÁS, Z. Výber metod pro Zjistování pritomnosti aflatoxinü v tekutém mléce. Vet.Med., Praha, 23: 559-67, 1978.
• 10. BARTOS, J. & MATYÁS, Z. Pruzkum pritomnosti aflatoxinü M₁ v mléce z prvovýroby. Vet.Med., Praha, 26: 419-23, 1981.
• 11. BREWINGTON, C.R. et al. Survey of commercial milk samples for aflatoxin M₁ J. Dairy Sci., 53: 1509-10,1970.
• 12. BRYDEN, W.L. et al. Survey of Australian feedstuffs for toxigenic strains of Aspergillus flavus and for aflatoxin factor. Aust. vet. J., 51: 491-3, 1975.
• 13. BURDASPAL, P.A. Aflatoxinas em alimentos. Alimentaria, 14: 21-7, 1978.
• 14. CAMPBELL, T.C. & HAYES, J.R. The role of aflatoxin metabolism in its toxic lesion. Toxicol. appl. Pharmacol., 35: 199-221, 1976.
• 15. COBB, W.Y. Aflatoxin in the Southeastern. United States: was 1977 exceptional? Ass. Food Drug Off. Quart. Bull., 43: 99-107, 1979.
• 16. COMISSÃO NACIONAL DE NORMAS E PADRÕES PARA ALIMENTOS. Resolução 34, de outubro de 1976. Diário Oficial União, Brasília, 19 jan. 1977. p. 710.
• 17. DELLA ROSA, H.V. & MORAES, E.C.F. Determinação de resíduos de aflatoxina M₁ em leite, por fluordensitometria. Rev. Farm. Bioquím. Univ. S.Paulo, 17: 270-80, 1981.
• 18. EDDS, G.T. et al. Aflatoxin incidence in feeds toxicology and possible residue hazards in foods. Proc. Annu. Meet. US. Anim. Hlth Ass., 84: 301-9, 1980.
• 19. FOOD AND DRUG ADMINISTRATION. Whole milk, lowfat milk, skim milk. Adulteration aflatoxin M. Guideline 7406-06, 1977. Apud STOLOFF, L. Aflatoxin M in perspective. J. Food Protec., 43: 226-30, 1980.
• 20. FOOD AND DRUG ADMINISTRATION. Aflatoxin contamination of milk. Establishment of action level. Federal Regist. 42-61630, 1970. Apud STOLOFF, L. Aflatoxin M in perspective. J. Food Protec., 43: 226-30, 1980.
• 21. FONSECA, H. Contribuição ao estudo da ocorrência de Aflatoxina em tortas, farelos e farinhas de Amendoim (Arachis Hypogaea L.) no Estado de São Paulo. An. Esc. sup. Agric. Luiz de Queiróz, 25: 47-9, 1968
• 22. FONSECA, H. & DEL NERY, H. Ocorrência de Aflatoxina em pastas de amendoim. An. Esc. sup. Agric. Luiz de Queiróz, 28: 181-90, 1970.
• 23. FREMY, J.M. et al. Evalutation de la contamination en Aflatoxine M₁ dans le lait en poudre par H.P.L.C. pour phase invérsée. Ann. Fals. exp. Chim., 74: 547-54, 1981.
• 24. GRANT, D.W. & CARLSON, W.E. Partitioning behavior of aflatoxin M in dairy products. Bull. environ. Contam. Toxicol., 6: 521-4, 1971.
• 25. HANSEN, E. & JUNG, M. Control of aflatoxins in the food industry. Pure appl. Chem., 33: 239-50, 1973.
• 26. KEPPLER, J.G. & IONGH, H. Aflatoxin: ocurrence and composition. Food Cosmet. Toxicol, 2: 675-7, 1964.
• 27. KIERMEIER, F. Aflatoxin residues in fluid milk. Pure appl. Chem.,35: 271-4, 1973.
• 28. KIERMEIER, F. & BUCHNER, M. Verhalten von Aflatoxin M₁, während der Reifung und Lagerung von Kase. Z. Lebensmitt. Untersuch. Forsch., 164: 87-91, 1977.
• 29. KROGH, P. Mycotoxin tolerances in foodstuffs. Ann. Nutr., 31: 411-4, 1977.
• 30. KROGH, P. & HALD, B. Forekomst of aflatoxin i importerede jordnødprodukter (Ocurrence of aflatoxin in imported groundnut products). Nord. Vet. Med., 21: 398-407, 1969.
• 31. LABUZA, T.P. Regulation of mycotoxins in foods. J. Food Protec., 46: 260-5, 1983.
• 32. LAFONT, P. Recherche et dosage d'aflatoxine dans les aliments pour enfants. Ann. Hyg. lang. franç., 11: 47-9, 1975.
• 33. LAFONT, P. & LAFONT, J. Contamination de produits céréaliers et d'aliments du bétail par l'aflatoxine. Food Cosmet. Toxicol., 8: 403-8, 1970.
• 34. LAFONT, P. et al. Etude de la contamination du lait de vache lors de 1'ingestion de faibles quantidies d'Aflatoxine. Ann. Nutr., 34: 699-708, 1980.
• 35. LÖTZSCH, R. & LEISTNER, L. Transmission of aflatoxins into eggs and egg products. Ann. Nutr., 31: 494-508, 1977.
• 36. MASRI, M.S. Crystaline aflatoxin M₁ from urine and milk. Nature, 215: 753-5, 1967.
• 37. MASRI, M.S. et al. Aflatoxin M content of milk from cows fed known amounts of aflatoxin. Vet. Rec., 84: 146-7, 1969.
• 38. McKINNEY, J.D. et al. Effects of ammoiation of aflatoxins in rations fed lacting cows. J. Amer. Oil Chem. Soc., 50: 79-84, 1973.
• 39. PATTERSON, D.S.P. & ANDERSON, P.H. Recent aflatoxin feeding experiments in cattle. Vet. Rec., 110: 60, 1982.
• 40. POZZOBON, E.D.T. et al. Determinação de aflatoxina M₁ em leite cru consumido na cidade de Santa Maria. Rev. Centro Ciênc. rurais, 6: 423-5, 1976.
• 41. PURCHASE, I.F.H. Aflatoxin residues in food of animal origin. Food Cosmet. Toxicol., 10: 531-44, 1972.
• 42. PURCHASE, I.F.H. & VORSTER, L.J. Aflatoxin in commercial milk samples. S. Afr. med. J., 42: 219, 1968.
• 43. PURCHASE, I.F.H. et al. Reduction of the aflatoxin M content of milk by processing. Food Cosmet. Toxicol., 10: 383-7, 1972.
• 44. SABINO, M. Variações de níveis de aflatoxina B₁ em alimentos e rações animais no período de 1971 a 1979. Rev. Inst. Adolfo Lutz, 40: 153-8, 1980.
• 45. SABINO, M. Inquérito sobre aflatoxina "M" no leite de vaca comercializado no Estado de São Paulo. Padronização de métodos analítico por cromatografia líquida de alta resolução. São Paulo, 1983. [Dissertação de Mestrado - Faculdade de Ciências Farmacêuticas da USP ] .
• 46. SABINO, M. & CORRÊA, M.J.S. Aflatoxin B₁ em feijão. Rev. Inst. Adolfo Lutz, 41: 83-7, 1981.
• 47. SABINO, M. et al. Variação dos níveis de aflatoxina B₁ em pasta de amendoim e paçoca consumidos no Estado de São Paulo. Rev. Inst. Adolfo Lutz, 42: 39-44, 1982.
• 48. SCHULTZ, J. & MOTZ, R. Toxinbildende Aspergillus flavus. Stäme in Futtermitteln. Arch exp. vet. Med., 21: 129-40, 1967.
• 49. SMITH, J.W. et al. Survey of aflatoxicosis in farm animals. Appl Environ.Microbiol., 31: 385-8, 1976.
• 50. STOLOFF, L. Aflatoxin M in perspective. J. Food Protec.,43: 226-30, 1980.
• 51. STUBBLEFIELD, R.D. & SHANNON, G.M. Aflatoxin M₁: analysis in dairy products and distribition in dairy foods a made from artificially contaminated milk. J. Ass. Off. anal. Chem., 57: 847-51, 1974.
• 52. SUZANGAR, M. et al. Aflatoxin contamination of village milk in. Isfahan, Iran. Trop. Sci., 18: 155-9, 1976.
• 53. TUINSTRA, L.G.M. Th & BRONSGEEST, J.M. Determination of aflatoxin M₁ in milk at the parts per trillion level. J. Chromatogr., 111: 448-51, 1975.
• 54. TUNG, H.T. & HAMILTON, P.B. Decreased plasma carotenoids during aflatoxicosis. Poult. Sci., 52: 80-3, 1973.
• 55. VAN EGMOND, H.P. et al. The effect of processing on the aflatoxin M₁ content of milk and milk products. Arch Inst. Pasteur Tunis, 54: 381-90, 1977.
• 56. VAN PEE, W. et al. La detection et le dosage de l'aflatoxine M₁ dans le lait et le lait en poudre. Rev. Agr., 30: 403-14, 1977.
• 57. WESSEL, J.K. & STOLOFF, L. Regulatory surveillance for aflatoxin and other mycotoxins in feed, meat and milk. J. Amér. vet.med.Ass., 163: 1284-7, 1973.
• 58. WISEMAN, D.W. & MATH, E.H. Stability of aflatoxin M₁ during manufacture and storage of a butter-like spread, non-fat dried milk and dried buttermilk. J. Food Protec., 46: 633-6, 1983.
• 59. WISEMAN, D.W. et al. Distribution and resistence to pasteurization of aflatoxin M₁ in naturally contaminated whole milk, cream and skim milk. J Food Protec., 46: 530-2, 1983.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  20 Jun 2005
• Data do Fascículo
  Ago 1986

Histórico

• Recebido
  11 Mar 1986
• Aceito
  23 Jun 1986