VARIAÇÃO DAS ATIVIDADES DA FOSFATASE ÁCIDA E DA DESIDROGENASE LÁCTICA: PARÂMETRO PARA A COMPARAÇÃO DA CITOTOXICIDADE DO pp'DDT E pp'DDE

Rodrigues, Maria Amélia La R.; Campello, Magali D'Angelo; Puga, F.R.

doi:10.1590/1808-1657v53n1-4p0371986

RESUMO

O pp'DDT e o pp'DDE determinam um aumento da liberação da fosfatase ácida e da desidrogenase líquida no meio de cultivo de células IB-RS-2 tratadas com 20,0μg/ml dos produtos, por períodos de 3 a 24 horas. O aumento induzido pelo pp'DDT é mais acentuado do que o induzido pelo pp'DDE; os dois produtos determinam maior liberação de fosfatase ácida do que de desidrogenase láctica.

PALAVAS-CHAVE:
pp'DDT; pp'DDE; fosfatases; citotoxicidade; desidrogenase

SUMMARY

pp'DDT and pp'DDE increase the leakage of acid phosphatase and lactate dehydrogenase into the culture medium of IB-RS-2 cells treated with 20.0μg/ml of each of the products for durations from 3 to 24 hr. The increase of enzymes leakage caused by pp'DDT is higher than that induced by pp'DDE; both products cause more acid phosphatase than lactic dehydrogenase leakage.

KEY-WORDS:
pp'DDT; pp'DDE; phosphatases; citotoxicity; dehydrogenase.

INTRODUÇÃO

Em células de rim suíno cultivadas in vitro, o DDT origina o metabólito pp'DDE, que aparentemente não é liberado no meio de cultivo, sendo detectado apenas no interior das células. A avaliação comparativa da atividade biológica dos dois produtos mostrou que ambos induzem alterações semelhantes no consumo de glicose e na morfologia celular, mas que o efeito inibidor do pp'DDE sobre a cinética de crescimento é menos acentuado do que o do pp'DDT (⁴).

No presente trabalho, o índice de citotoxicidade do pp'DDE e do pp'DDT foi avaliado comparativamente pela determinação dos seus efeitos sobre a atividade da fosfatase ácida e da desidrogenase láctica.

MATERIAL E MÉTODOS

Células - Clone C-26-3 da linhagem IB-RS-2 mantido segundo método descrito por CASTRO (³).

Inseticidas - pp'DDT (1 , 1 , 1 - tricloro - 2,2 - bis (p-clorofenil) etano) e pp' DDE (1,1 - (2,2 - dicloroetilideno) - bis (4-clorobenzeno), gentilmente cedidos pela Environmental Protection Agency (EPA), USA. As soluções estoque continham 10mg/ml de inseticida em etanol.

Tratamentos - Culturas na densidade de 6 x 10⁶ células por frasco foram expostas aos inseticidas na concentração de 20,0yg/ml por 3, 6, 18 e 24 horas e mantidas a 37-38°C. Após estes períodos, foram retiradas alíquotas do meio sobrenadante para a determinação das atividades das enzimas. Todos os experimentos foram realizados em triplicata.

Determinação das atividades enzimáticas - A atividade da fosfatase ácida foi determinada pelo método descrito por ROUX et alii (¹⁵) e a da desidrogenase láctica pelo método de DOLES (⁵).

RESULTADOS

A citotoxicidade dos inseticidas foi avaliada pela medida do nível de liberação das enzimas no meio quando comparado com o das células não tratadas, usadas como controle.

Efeitos dos inseticidas sobre a ativida de da fosfatase ácida - O pp'DDT e o pp'DDE induzem a liberação da fosfatase ácida em níveis semelhantes nas primeiras 3 horas de tratamento. Após 6 horas, a li beração nas culturas tratadas com pp'DDE é menor do que nas tratadas com pp'DDT, diferença que se acentua ao longo das 24 horas de· tratamento. Este efeito é dependente do tempo (Fig. 1).

FIGURA 1
Liberação de fosfatase ácida no meio de cultivo de células IB-RS-2 incubadas com 20μg/ml de pp' DDT ou pp'DDE. pp' DDT p < 0,05. pp'DDE (¹, ², ⁶, ¹¹); pp'DDE (¹⁰).

Efeitos dos inseticidas sobre a atividade da desidrogenase láctica - O pp'DDT provoca maior liberação de desidrogenase láctica do que o pp'DDE, diferença registrada a partir de 3 horas de tratamento e que se acentua após 18 horas (Fig. 2). A semelhança do que ocorre com a fosfatase ácida, a liberação da desidrogenase láctica é também dependente do tempo.

As figuras 1 e 2 mostram que tanto o pp'DDT como o pp'DDE induzem maior liberação de fosfatase ácida do que de desidrogenase láctica.

FIGURA 2
Liberação de desidrogenase láctica no meio de cultivo de células IBRS-2 incubadas com 20μg/ml de pp'DDT ou pp'DDE. p < 0,05. pp'DDT (²) pp'DDE(⁹)

DISCUSSÃO

Alterações de atividade de enzimas têm sido utilizadas como um índice da citotoxicidade de xenobióticos, por ser um método sensível que permite detectar a ocorrência de modificações precoces das funções celulares. A fosfatase ácida é uma enzima lisossômica que hidrolisa a ligação éster de esteres fosfato e participa dos processos de autólise celular; o aumento da sua atividade, assim como o da desidrogenase láctica, têm sido utilizados como indicadores de danos celulares (¹⁵). Nossos resultados evidenciam que tanto o pp'DDT como o pp'DDE induzem o aumento da atividade da fosfatase ácida. Estes dados confirmam resultados anteriores obtidos ao comparar a sensibilidade de células de rim suíno e de ovário de hamster à ação do DDT (⁷). AGARWAL et alli (¹³) também detectaram um aumento do nível desta enzima em tecidos de macacos Rhesus tratados com DDT e consideraram este efeito como um indício de alterações severas no metabolismo intermediário dos animais. Ao estudar o efeito de outro clorado orgânico de atividade biológica semelhante à do DDT, o dieldrin, KOHLI et alii (⁶) consideraram que o aumento da atividade da fosfatase ácida observado resultaria de uma ação do produto sobre a membrana lisossômica, ocasionando a sua ruptura e a liberação da enzima no citoplasma, o que parece se refletir em alterações na morfologia das mitocôndrias. ROVX et alii (²), ao avaliarem as alterações bioquímicas e ultraestruturais do clorado orgânico lindano sobre o sistema lisossômico em culturas de hepatócitos, verificaram, após 40 horas de permanência no meio de cultura, que o pesticida exerce um efeito bifásico: em concentração que variavam de 1 a 25µm, não era observado qualquer efeito sobre o crescimento celular, embora houvesse uma diminuição na atividade da fosfatase ácida, o que possivelmente indicaria uma dimnuição na síntese da enzima. Uma diminuição do crescimento celular e um aumento da atividade da fosfatase ácida eram notados quando as culturas eram tratadas com concentrações superiores a 25.µ,m, o que foi atribuído ao desenvolvimento de um processo autofagocítico.

Os resultados do presente trabalho demonstram ainda que o pp'DDT e o pp'DDE também induzem um aumento da atividade da desidrogenase láctica, embora em níveis menos acentuados que os observados em relação à fosfatase ácida.

HENDRICSON et alii (⁵), ao avaliarem a ação do clorado orgânico mirex sobre a atividade da desidrogenase láctica, em músculo de cristalino de coelho in vitro, observaram que o composto inibe competitivamente tanto o piruvato quanto o NADH, formando uma associação complexa com o NAPH, que implica numa diminuição da atividade da enzima. As variações nos níveis de enzimas ligadas aos processos de produção de energia poderiam indicar que a toxicidade e a resistência de insetos a clorados orgânicos estaria relacionada a enzimas associadas com a produção e utilização de ATP (¹).

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Datas de Publicação

Publicação nesta coleção
14 Fev 2025
Data do Fascículo
Jan-Dec 1986

Histórico

Recebido
15 Jul 1986

Este é um artigo publicado em acesso aberto sob uma licença Creative Commons.

[1] ¹ ACOSTA, D.; ANUFORO, D.C.; SMITH, R.V. Citotoxicity of acetaminophen and papaverin in primary cultures of rat hepatocytes. Toxicol. Appl. Pharmacol., 53: 306-14, 1980.

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