ACÃO CLASTOGÊNICA DO AMITRAZ EM CÉLULAS DE MAMÍFEROSRESUMO
Células IB-RS-2 expostas por 48 horas ao acaricida amitraz, nas concentrações de 20 e 30μg/ml, não apresentaram diferenças significativas entre as freqüências de células com aberrações cromossómicas em relação às culturas-controle, com exceção apenas da ocorrência de pulverizações nas culturas tratadas com 20μg/ml. Entretanto, as freqüências de "gaps" e "isogaps", quebras, rearranjos e pulverizações, diferem significantemente nas culturas tratadas com 50μg/ml do produto. Em células de medula óssea de camundongos tratados com uma única dose de amitraz (42mg/kg), por 48 horas, não foram observadas diferenças significativas entre as freqüências de células com alterações cromossômicas nas culturas expostas e controles.
PALAVRAS-CHAVE:
Amitraz; cromossomas; células in vitro.
SUMMARY
IB-RS-2 cells exposed to 20 and 30μg/ml amitraz for 48 hours showed no significantly altered frequency of chromosomal aberrations, except for the number of pulverizations in the cells exposed to 20μg/ml. IB-RS-2 cells treated with 50μg/ml of amitraz showed gaps and isogaps, breaks, rearrangements and pulverizations. No significant chromosomal anomalies were observed in bone marrow cells of mice treated for 48 hours ith a single dose of amitraz (42mgk/kg).
KEY-WORDS:
Amitraz; chromosomes; cells in vitro,
INTRODUÇÃO
A propriedade acaricida das formamidinas é atribuída por alguns autores a alterações nos processos de produção de energia, decorrentes de uma ação dos produtos ao nível das mitocôndrias (1) ou ainda a sua atuação como agentes bloqueadores do sistema neuromuscular (19, 20). Segundo KNOWLES & ROULSTON (9), ela também pode estar relacionada com a propriedade de as amidinas inibirem a monoaminoxidase. Considera-se, além disso, que a sua eficiência estaria basicamente relacionada a sua lenta metabolização pelos insetos (8).
A toxicidade do amitraz para mamíferos é relativamente baixa; a intoxicação aguda caracteriza-se pela depressão do sistema nervoso central e a sintomatologia inclui sedação, ataxia, hipotermia, falta de coordenação, convulsões, depressão respiratória e distúrbios cardiovasculares (5, 10, 14). São poucos os dados encontrados na literatura sobre alterações do metabolismo de mamíferos causados pelo amitraz. Sabese, no entanto, que é facilmente absorvido pelo trato gastrointestinal e rapidamente metabolizado, formando subprodutos mais tóxicos que o produto original. Sua biotransformação em metabólitos é similar nas várias espécies de mamíferos estudadas, resultando principalmente na formação do ácido 4-amino-3-metilbenzóico, que é excretado através da urina; seus resíduos são encontrados nos tecidos, especialmente no fígado. Contudo, como a persistência do amitraz in vivo é baixa, atribui-se sua toxicidade à formação do ácido N-(2-4-dimetilfenil) N'-metilformamidina, que é considerado o mais tóxico de seus metabólitos (5).
Neste trabalho foi avaliado o potencial do amitraz em induzir alterações cromossômicas em células in vitro e em células de medula óssea de camundongos.
MATERIAL E MÉTODOS
Acaricida - Amitraz (1 ,5-di-2 (2,4-dimetilfenil)-3metil-l ,3,5-triazapenta-l ,4-dieno). Nos expeperimentos com células in vitro, as soluções-estoque continham 10mg em 0,2ml de acetona; nos experimentos in vivo, estas soluções continham 12mg em lml de gliceroformoL
Células Clone C-26-3 da linhagem IB-RS-2, mantido como já descrito anteriormente
Animais Ca:ntrnclongos da linhagem Swiss, pesando em média 30g,
Avaliação da ocorrência de alterações cromossómicas ent células IB-RS-2 - As células foram semeadas na densidade de de 3 X 105 células/ ml em tubos de Leighton com lamínulas e, após 24 horas de crescimento, tratadas com 20, 50 e 50μg/ml de amitraz. Depois de 48 horas de exposição, as preparações cromossómicas foram feitas segundo método já descrito por CASTRO & PISANI (3).
Avaliação cla ocorrência cle alterações cromossônticas em células de medula óssea de camundongos Os anirnais receberam 42mg kg de amitraz por via intraperitonial. Depois de 48 horas de tratamento e duas horas antes de serem sacrificados por deslocamento da cervical, os animais receberam solução de colcl' icina A avaliação das alterações cromossómicas nas células de medula óssea foi feita segundo técnica já descrita por HSU & PATTON (6) e LEE (11).
Análise citogenética - As células foram classificadas, em primeiro lugar, em normais e anormais, isto é, com algum tipo de aberração cromossómica estrutural. Dentre as anormais, foram consideradas as que apresentaram "gaps" ou falhas, definidos como toda descontinuidade menor que a largura da própria cromátide, quebras, como toda descontinuidade maior que a largura da própria cromátide e rearranjos, como anéis, dicêntricos e rearranjos resultantes de quebra e reunião, As células cujos cromossomos estavam todos fragmentados foram classificadas como pulverizadas.
Indice mitótico - O índice mitótico foi analisado nas mesmas lâminas usadas para a avaliação das aberrações cromossômicas em células IB-RS-2 e células de medula óssea de camundongos. Sob objetiva de aumento médio (40 X) foram analisadas 3.000 células IB-RS-2 e 1.500 células de medula óssea para cada concentração do produto. Foram computados somente aqueles núcleos em metáfase em relação aos núcleos em outras fases da divisão celular.
Análise estatística - A análise dos dados sobre aberrações cromossómicas nas células in vitro e em células de medula óssea de camundongos tratadas com amitraz foi avaliada em relação ao das culturas controle através do teste qui-quadrado. O nível de significância estabelecido foi de 1%
RESULTADOS
As tabelas 1, 2, 3 e 4 sumarizam os resultados da ação do amitraz sobre as células IB-RS-2 e medula óssea de camundongo.
Alterações cromossômicas induzidas peIo amitraz em células IB-RS-2 - Em células IB-RS-2 tratadas com 20 e 30p,g/ml de amitraz, as freqüências totais de células com aberrações estruturais, bem como as freqüências de células classificadas segundo o tipo de aberração apresentada, não diferem das freqüências observadas nas culturas-con• trole. Apenas a freqüência de células pulverizadas nas culturas expostas a 20μg/ml difere significantemente do controle, Nas culturas tratadas com 50μg/ml, a freqüência total de células anómalas difere significantemente do controle e essa diferença é observada também para todas as freqüências parciais das células segundo o tipo de aberração (Tab. l).
Alterações cromossómicas induzidas peIo amitraz em células de medula óssea de camundongos - As freqüências de células com aberrações cromossómicas associadas aos tratamentos com amitraz não diferem significativamente das freqüências observadas nas culturas controle Tabe 2),
Índice mitótico de células IB-RS-2 - Os dados relativos ao índice mitótico estão apresentados na tabela 3. Há uma diminuição de índice mitótico nas culturas tratadas com 20 e 30yg/ml, a qual, entretanto, não é significantemente diferente do valor apresentado pelo controle. Há uma diminuição significante de índice mitótico decorrente da administração do amitraz às culturas na concentração de 50vg/ml.
Índice mitótico de células de medula óssea de camundongos Os resultados apresentados na tabela 4 mostram que há uma diminuição significante do índice mitótico nos animais tratados com amitraz.
DISCUSSÃO
Os efeitos citogenéticos de pesticidas têm sido estudados em vários sistemas biológicos. As referências sobre a genotoxicidade do amitraz e outras formamidinas são, entretanto, escassas. Estudos sobre reprodução e teratogênese mostraram que o amitraz, em doses consideradas tóxicas, tem uma ação embriotóxica, mas não possui atividade teratogênica (5). A mutagenicidade do amitraz e vários de seus metabólitos foi avaliada em sistemas bacterianos com ou sem sistemas de ativação metabólica; apenas alguns destes metabólitos mostraram uma atividade mutagênica fraca na cepa TA 100 de Salmonella thyphymurium (5).
Nossos resultados mostram uma diminuição significante do índice mitótico tanto in vitro como in vivo, bem como uma ação clastogênica do amitraz na concentração de 50μg/m1. De acordo com KIHLMAN (7) agentes que inibem a mitose podem afetar o DNA ou o seu metabolismo, acarretando como efeito final, em ambos os casos, a inibição da síntese de DNA, ou podem, ainda, inibir a energia necessária para a mitose. As aberrações cromossômicas produzidas por um determinado agente dependem, em última análise, do seu modo de ação ao nível celular e dos mecanismos de reparo do DNA (12, 13). Estudos realizados em nosso laboratório evidenciaram que o amitraz inibe a síntese de RNA e DNA em células IB-RS-2 (dados não publicados). Entretanto, PETZHOLD et alii (5) não obtiveram qualquer evidência de que o amitraz e seus metabólitos induzem dano no DNA de células de pulmão de hamster in vitro.
A ocorrência de aberrações cromossômicas semelhantes às induzidas pelo amitraz foi verificada também em células expostas a outros pesticidas (15, 18); alguns autores (2) alertaram para a possibilidade de que estas aberrações possam induzir mutantes viáveis.
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