ESTUDO DA SENSIBILIDADE IN VITRO DOS PRINCIPAIS AGENTES BACTERIANOS ISOLADOS DE MASTITES SUBCLÍNICAS NA BACIA LEITEIRA DE RIBEIRÃO PRETO, ESTADO DE SÃO PAULORESUMO
Foram realizados antibiogramas com 954 cepas bacterianas, provenientes de 926 amostras de leite, oriundas de animais portadores de mastites subclínicas evidenciadas pela prova do C.M.T. Os antibióticos testados fazem parte do arsenal terapêutico presente no mercado e os maiores índices de sensibilidade detectados foram para os Staphylococcus à gentamicina, cloxacilina, espiramicina, kanamicina e novobiocina; para os Streptococcus, à cloxacilina, penicilina, espiramicina, cloranfenicol e lincomicina; para Corynebacterium, à gentamicina, cloranfenicol, espiramicina, neomicina, novobiocina, penicilina, cloxacilina, lincomicina, kanamicina, estreptomicina e polimixina B; para Enterobactérias, à gentamicina, kanamicina e polimixina B; para Pseudomonas, a somente polimixina B; para os demais bastonetes Gram-negativos não fermentadores, à gentamicina; para os Micrococcus, à gentamicina, penicilina e polimixina B e, finalmente, para a Pasteurella, ao cloranfenicol e neomicina. A realização do antibiograma mostrou-se de grande importância prática, visto que, para cada grupo bacteriano, a sensibilidade às drogas testadas foi variável. Entre estas, destacaram-se seis: cloxacilina, gentamicina, polimixina B, cloranfenicol, espiramicina e penicilina. Associando-se o fato de que a prevalência dos agentes foi para bactérias Gram-positivas, verificou-se que a cloxacilina e a espiramicina foram os antibióticos que, in vitro, apresentaram os melhores resultados.
PALAVRAS-CHAVE:
Mastites bovinas; mastites subclínicas; antibiograma.
SUMMARY
From 954 samples of milk with sub-clinical mastitis, diagnosed by C.M.T., 926 antibiograms were performed. The antimicrobial agents tested are those included in the products found comercially. Staphylococcus were mainly susceptible to gentamycin, cloxacilin, spiramycin, kanamycin and novobiocin; Streptococcus were sensible to cloxacilin, penicillin, spiramycin, chloranphenicol and lincomycin; Corynebacterium were susceptible to gentamycin, chloranphenicol, spiramycin, neomycin, novobiocin, penicillin, cloxacillin, lincomycin, kanamycin, streptomycin and polymixin B; Enterobacteriaceae were sensible to gentamycin, kanamycin and polymixin B; Gram-negative rods "non-fermentative" were susceptible just to gentamycin, except for Pseudomonas that were resistent to most of the antibiotics tested and sensible just to polymixin B; Micrococcus were sensible to gentamycin, penicillin and polymixin B and Pasteurella were sensible to chloranphenicol and neomycin. The antibiogram revealed to be of great importance to know the patterns of susceptibility for each bacterial group, as the sensibility against the drugs tested was variable. We could ellect Six drugs: cJoxacillin, gentamycin, polymixin B, chloranphenicol, spiramycin and penicillin that showed good sensibility. As the Gram-positive bacteria have the biggest prevalence we realized that cloxacillin and spyramicin are the antibiotics that in vitro presented better results.
KEY-WORDS:
Bovine mastitis; sub-clinical mastitis; antibiotic sensibility.
INTRODUÇÃO
A mastite bovina constitui um sério obstáculo à produção de leite, não só em relação à queda da produtividade, mas, principalmente, à perda da qualidade. Acarreta graves danos à economia leiteira, pela diminuição da produção; refugagem do leite; custos dos tratamentos; alteração da rotina do manejo; distúrbios causados à glândula mamária; perda da higidez animal; acréscimo na mão-de-obra; descarte precoce e morte de animais (26). Acrescente-se a estes fatos a predisposição dos animais a outras enfermidades, além da indesejável veiculação dos agentes etiológicos através do leite (20) a outros animais e ao público consumidor deste produto (32).
A medicação de escolha deverá revelar-se eficaz e ser empregada prontamente. A utilização de produtos não adequados poderá induzir resistência bacteriana (24) e/ou o agravamento do quadro, evoluindo para uma mastite clínica, além de acarretar prejuízos econômicos, que podem ser elevados e deixar resíduos de antibióticos no leite (28).
Assim, o teste de suscetibilidade às drogas antimicrobianas é um procedimento importante, sendo recomendado devido ao alto custo da medicação (40), e é, também, indicado nas infecções por estafilococos ou enterobactérias, devido a grande variação da resistência destas (18). Embora alguns autores demonstrem que a resistência do Staphylococcus aureus à penicilina declinou de 35% para 7%, em aproximadamente 4 anos (14), outro afirma que esta aumentou de 40% para 68%, em 2 anos (41).
O antibiograma reveste-se de importância visto que possibilita determinar os mais efetivos antibióticos para o estabelecimento da terapia, embora afirmem alguns autores que exista pequena concordância entre o que se observa in vitro e a resposta clínica (23, 44). Outrossim, o antibiograma poderá prevenir o uso indiscriminado de antibióticos, que pode levar a mudanças nos padrões de sensibilidade bacteriana (15) e à ocorrência de resistência de diversos agentes aos antibióticos (13),
Estudo sobre a freqüência da necessidade de antibiogramas para tratamento correto de mastites conclui que estes devem ser realizados com intervalo de 12 a 18 meses (36).
O presente estudo teve como objetivo o controle desta patologia, através de um melhor conhecimento da prevalência dos agentes bacterianos e os padrões de suscetibilidade a diversos antibióticos, para a adoção de esquemas profiláticos eficientes e da instituição de uma antibioticoterapia adequada.
MATERIAL E MÉTODOS
1. Propriedades - Foram selecionadas 7 propriedades, todas dotadas de ordenhadeira mecânica, localizadas nos municípios que compõem a Região da Delegacia Regional Agrícola de Ribeirão Preto e que, pelo menos numa oportunidade, tiveram, no histórico, problemas de patologia envolvendo casos de mastite clínica.
2. Teste para evidenciação de mastite no campo - Foi adotado o "California Mastitis Test" (C.M.T.). Utilizou-se o reagente "CMT"* e/ou "Lactoteste.
3. Amostragem - Dos tetos que revelaram a presença de mastite subclínica eram coletadas amostras de leite e o número destas por propriedade, foi no mínimo, de 10% do total dos casos positivos ao teste anteriormente citado. As amostras de leite eram coletadas em frascos esterilizados, com a máxima higiene possível, dentro das condições ambientais de cada propriedade. A quantidade coletada por amostra foi de 25ml. Antes da coleta, era feita a higienização externa do úbere e dos tetos com solução de álcool iodado e das mãos do ordenhador com água e sabão. Foram realizadas 13 coletas, perfazendo um total de 926 amostras.
4. Exame bacteriológico - Era feito através da semeadura de amostras de leite em caldo, simples; ágar sangue e ágar MacConkey. Havendo proliferação bacteriana nestes meios, realizava-se a bacterioscopia, corando-se, pelo método de Gram, esfregaços das diferentes colônias. A seguir, estas eram repicadas em caldo simples, de onde eram feitas as provas de identificação através do bioquimismo bacteriano.
5. Provas de sensibilidade aos antibióticos - Eram feitas pelo método de difusão em ágar, segundo BAUER et alii (1), usando-se discos individuais para cada droga testada. Os meios de cultura usados nestas provas foram ágar Mueller-Hinton e ágar sangue. As leituras eram realizadas após 18 e 24 horas de incubação a 37°C. Os diâmetros dos halos de inibição do crescimento bacteriano eram medidos no reverso da placa com régua calibrada e os resultados comparados com tabelas padronizadas.
6. Drogas empregadas - Foram testadas 12 drogras anti-bacteriananas: cloranfenicol, cloxacilina, colistina, espiramicina, estreptomicina, gentamicina, kanamicina, lincomicina, neomicina, novobiocina, penicilina e polimixina B. Estas drogas foram escolhidas por fazerem parte de produtos presentes no mercado e os discos empregados foram "Sensifar"* e "Sensibiodisc.
RESULTADOS
Os resultados dos testes de sensibilidade, encontrados "in vitro" para as amostras isoladas e identificadas, estão sumariados nas tabelas 1 e 2 e nos quadros 1 e 2.
Na tabela 1, dispuseram-se os resultados das porcentagens de sensibilidade e número de cepas testadas em ordem decrescente de suas prevalências.
A tabela 2 registra de modo simplificado a média das porcentagens da sensibilidade aos diversos antibióticos, segundo o gênero ou família bacteriana.
No quadro 1, os antibióticos estão agrupados conforme a média das provas de sensibilidade para cada grupo bacteriano.
O quadro 2 mostra a sensibilidade qualitativa dos agentes bacterianos de menor prevalência.
DISCUSSÃO E CONCLUSÕES
A forma subclínica da mastite usualmente precede a forma clínica, ocorrendo 3 a 40 vezes mais que a anterior, dependendo da técnica de diagnóstico usada e dos microrganismos envolvidos (4). Pode ser identificada pela contagem de leucócitos, através da prova de "Whiteside" ou pelo "California Mastitis Test" (C.M . T. - SCHALM & NOORLANDER (35)), entre outros.
Após o estabelecimento da infecção na glândula mamária, o menor tempo decorrido entre a identificação do agente etiológico e o tratamento com produtos de eficácia comprovada frente aos microrganismos nele presente é de extrema importância para o controle da doença (19). Outro aspecto fundamental para o sucesso no tratamento é o uso de antibióticos adequados a cada caso. Tais fatos reforçam a importância de que se reveste não apenas a imediata intervenção terapêutica como também a adequada escolha do fármaco a ser utilizado.
Assim, o conhecimento da prevalência de determinados agentes bacterianos, bem como seus padrões de sensibilidade aos medicamentos de escolha, assume características relevantes.
Neste trabalho, procurou-se estabelecer esses parâmetros, tendo sido considerada ideal uma sensibilidade maior do que 75% e, a partir desse nível mínimo, foram discutidos os presentes resultados em confronto com aqueles que a literatura oferece.
Com relação aos Staphylococcus, este limite mínimo foi observado para as seguintes drogas: gentamicina, cloxacilina, espiramicina, kanamicina e novobiocina. Os resultados encontrados com relação à gentamicina, cloxacilina e novobiocina, coincidem com os de vários autores (5, 8, 9, 11, 16, 21, 25, 27, 53, 37, 39). Com relação à espiramicina, não foram comparados dados, pois esta é de lançamento recente. Há ainda coincidência para a kanamicina (10, 12) e para a novobiocina (3), entre os dados deste trabalho e de outros autores. Para a penicilina, droga amplamente utilizada em nosso meio como antimastítico, o padrão de susceptibilidade encontrado, em torno de 50%, coincide com o de outras publicações (12, 17, 37, 41) e está em desacordo com os dados de outros autores que apresentaram alta sensibilidade (5, 6, 22, 25, 29, 39) e baixa sensibilidade (3, 42) do gênero para esta droga.
Porcentagem de sensibilidade frente aos antibióticos, com o número de cepas sensíveis sobre o total testado segundo o agente bacteriano em ordem decrescente de prevalência, Região de Ribeirão Preto, São Paulo, 1982-1985.
7 Padrões médios de sensibilidade a antibióticos expressos em porcentagem, segundo o grupo bacteriano, Região de Ribeirão Preto, 1982-1985.
O gênero Streptococcus atingiu o limite estabelecido frente à cloxacilina, penicilina, espiramicina, cloranfenicol e lincomicina. Para a penicilina, que é considerada o antibiótico de eleição para este gênero, há coincidência de resultados com vários trabalhos (2, 6, 7, 21, 31, 33, 37, 38, 39). Para o cloranfenicol, lincomicina e cloxacilina, também se equiparam os resultados (2, 6, 15, 31, 37, 39), o mesmo ocorrendo com a espiramicina (33).
Em relação às bactérias do grupo Corynebacterium, 93% foram altamente sensíveis a todos antibióticos, o que está de acordo com outras observações (3, 37), exceção feita ao achado de alta resistência deste gênero a todos antibióticos testados (5). Estes agentes podem ter resistência a vários antibióticos (39), ou sensibilidade somente à neomicina (31).
Nos presentes resultados de sensibilidade, para as Enterobacteriaceae, o limite foi para a gentamicina, kanamicina e polimixina B, o que coincide com outros trabalhos (5, 6 16, 33, 34, 39).
Para as Pseudomonas, a sensibilidade "in vitro" demonstrou que 57% dos isolamentos eram sensíveis a polimixina B, enquanto que há descrição de 100% de sensibilidade intermediária para a mesma droga (5). Este agente se mostrou extremamente resistente à penicilina, o que coincide com resultados de outros autores (16, 39).
Levando-se em conta que a maior ocorrência de mastite se deveu ao Staphylococcus, seguido do Streptococcus e do Corynebacterium (Tab. 1) e comparando estes achados com o quadro 1, conclui-se que a cloxacilina e a espiramicina têm maior abrangência sobre os agentes acima citados. A prevalência de bactérias Gram-negativas, que é menor, mas presente, pode ser diminuída pelo uso de gentamicina, kanamicina e polimixina B. Assim, a associação de dois ou mais antibióticos (comuns no mercado) deve ser baseada na escolha de um dos que apresenta sensibilidade maior para as bactérias Grampositivas e outro do grupo de eleição para bactérias Gram-negativas.
É importante ter-se conhecimento da prevalência bacteriana nos casos de mastite, pois o que se encontra no mercado é, em geral, a associação de penicilina com outros antibióticos. Verifica-se, pelos dados obtidos, que a penicilina foi eficaz para os gêneros Streptococcus e Corynebacterium, apresentando, para os Staphylococcus (predominantes), somente 52%; para os Gram-negativos, apenas 2%. Portanto, seu uso individual deve se restringir à presença dos dois agentes anteriores, não devendo ser utilizada nos demais casos. Nas associações desta com outros antibióticos, estes devem preferencialmente, ter ação sobre os gêneros restantes, visto que os antibióticos que se apresentam eficazes contra as bactérias Grampositivas são parcialmente ou completamente ineficazes contra as Gram-negativas, sendo o inverso também real.
Agrupamento dos antibióticos conforme a média das porcentagens nas provas de sensibilidade, segundo grupo bacteriano, Região de Ribeirão Preto, 1982-1985.
Agente bacterianos de menor ocorrência e suas sensibilidades frente aos antibióticos, Região de Ribeirão Preto, 1982-1985.
Os dados obtidos exibem pouca variação em relação aos de trabalhos publicados em diversos países, o que nos leva a crer que esta variação se deve às diferentes técnicas empregadas, às diferentes marcas de discos de antibióticos, aos meios de cultura empregados etc. (43).
Na hipótese do aparecimento de cepas resistentes (12, 26, 30), a alteração do esquema terapêutico adotado se impõe. A escolha de um novo antibiótico deve ser seriamente considerada, através da execução de provas de sensibilidade que devem ser repetidas a intervalos de 12 a 18 meses (36), associando-se a isto a necessidade do conhecimento da prevalência dos agentes bacterianos nas diversas regiões leiteiras.
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Trabalho apresentado no XIX Congresso Brasileiro de Medicina Veterinária, Belém/ PA, 1984 - Projeto subvencionado pelo Convênio EMBRAPA/SAA-SP/Instituto Biológico.
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FATEC Química Industrial, S.A. - São Paulo, SP.
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Instituto Veterinário Rhodia Mérieux - São Paulo, SP.
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CEFAR Fármaco Diagnóstico Ltda. - São Paulo, SP.
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CECON Centro Controle Prod. Diagnósticos Ltda. - São Paulo, SP.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem a colaboração das seguintes firmas: CECON Centro de Controle e Produtos para Diagnóstico Ltda.; CEFAR Fármaco Diagnóstico Ltda.; FATEC Química Industrial S.A.; FONTOURA-WYETH Indústrias Farmacêuticas; Instituto Veterinário RHODIA MÉRIEUX Ltda.; JOHNSON & JOHNSON S.A. Indústria e Comércio; Laboratórios ANDROMACO S.A.; Laboratório I.S.A. S.A.; PFIZER S.A.; SHERING PROCAMPO Produtos Veterinários Ltda.; SQUIBB Indústria Química S.A.; UPJOHN Produtos Farmacêuticos Ltda., Divisão TUCO, pelo fornecimento de reativos, discos de antibióticos e produtos farmacêuticos.
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