ANÁLISE SIMULTÂNEA DE CITRATO DE COLINA, NICOTINAMIDA, ACETILMETIONINA E PANTENOL EM MULTIVITAMÍNICOS FARMACÊUTICOSRESUMO
Citrato de colina, nicotinamida, acetilmetioninae pantenol em preparados farmacêuticos foram quantificados simultaneamente por cromatografia líquida de alta resolução (HPLC). Usando-se as seguintes condições cromatográficas desenvolvidas: coluna Shim-pack CLC-ODS 250 x4 mm (5µm) detector 210 nm fluxo lmL min-1 , temperatura da coluna de 35 ºC, fase móvel 80% tampão fosfato pH 5,8 e:20% metanol grau HPLC, foi possível separar e quantificar os componentes do preparado em 8 min confirmando que a cromatografia líquida de alta resolução é uni método bastante rápido, sensível e eficiente para análise de vitaminas.
PALAVRAS CHAVES:
HPLC; vitaminas; aminoácidos; multivitamínicos; preparados farmacêuticos.
ABSTRACT
Fast separation and quantitative determination of coline citrate, nicotinarnide, acetylmethionine and pantothenyl alcohol multivitamin preparation was investigated by areverse-phasehigh-performace liquid chromatographic method with ultraviolet spectrometrical detection at 210 nm. A column Shim-pack CLC-ODS, 5µm particle size, was used as stationary phase, and mixture . of pH 5.8 phÕsphate buffer-methanol (80:20 v/v) as mobile phase and flow rate lmL min-1 , ternperature 35 ºC. The separation of the five investigated vitamins was achieved in less than 8 minutes.
KEY WORDS:
HPLC; multivitamin; vitamins; aminoacid.
INTRODUÇÃO
As vitaminas do complexo B; classificadas como hidrossolúveis, são armazenadas em quantidades limitadas nos organismos e o consumo constante se faz necessário para manter a saturação dos tecidos celulares. Quando a dieta é insuficiente, o uso de preparados farmacêuticos em doses terapêuticas é recomendado, pois estas substâncias juntamente com, os aminoácidos são essenciais para diferentes reações do metabolismo celular.
O complexo B compreende um grande número de compostos cujas estruturas químicas e ação biológica diferem muito, entretanto todas vitaminas deste complexo atuam no metabolismo intermediário, participando como cofatores de enzimas específicas (GOODMAN et al. 1987).
O número de preparados multivitamínicos tem aumentado constantemente, bem como as diferentes concentrações das misturas de vitaminas nestes compostos. Desta forma, a procura de métodos analíticos eficientes para análise de vitaminas, estão sempre em desenvolvimento.
A cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) é um método muito usado, sendo classificado co$o rápido, sensível e efioi.0.ll.ili8 para este tipo de análise (FISTER & DRAZIN, 1973; KWORK et al., 1981; WALKER et al., 1981; AMIN & REUSCH, 1987a/b; LAM et al., 1984; AKIYAMA et al.,1990; EL-GIZAWAYetal.,1991). Entretanto a análise é dificultada pela presença de excesso de aditivos e pelas diferenças de concentrações das vitaminas nos medicamentos.
O estabelecimento de condições cromatográficas que permitam análises eficazes é de interesse, uma vez que há uma grande preocupação por parte do Ministério da Agricultura em relação a composição de multivitanúnicos.
O objetivo do presente trabalho foi desenvolver condições cromatográficas para separação e quantificação simultânea de citrato de colina, nicotinamida, acetilmetionina e pantenol em preparados farmacêuticos de uso veterinário por cromatografia líquida de alta resolução (HPLC).
MATERIAL E MÉTODOS
Equipamento: cromatógrafo líquido de alta resolução, marca Shimadzu modelo LC 6AD, equipado com detector ultravioleta Shimadzu modelo SPD-10AV com comprimento de onda variável e integrador Shimadzu modelo C-R7A.
Condições cromatográficas: coluna medindo 250 x 4 mm RP-18 (5µm), detector 210 nm, fluxo lmL m·1 ; temperatura do forno 35 ºC.
Fase móvel: a fase móvel utilizada foi 80% tampão fosfato pH=5,8 e 20% metanol grau HPLC.
Soluções padrões: 1mg dos padrões de citrato de colina, nicotinamida, acetilmetionina e pantenol foram colocados em diferentes balões volumétricos de 100 mL e solubilizando-as com a fase móvel, fornecendo soluções de concentrações igual a 10µg m 1 , que foram diluídas para as concentrações 5µg m·1 ; 2,5 µg m·1 ; 1,25 µg m·1 • Cada solução foi injetada separadamente para determinar os tempos de retenção individuais.
A solução padrão de multivitamínicos foi preparada solubilizando-se 1 mg de cada padrão em um único balão volumétrico de 100 mL; a partir desta foram realizadas diluições paraaobtenção das mesmas concentrações das soluções padrões anteriores. Para a confecção da curva de calibração pelo C-R7A as soluções padrões de multivitamínicosforam injetadas no HPLC na ordem decrescente de concentração.
Preparação da amostra: 0,02 mL da amostra foram solubilizados em um balão volumétrico de lO0mL. As amostras em triplicatas foram injetadas três vezes no HPLC.
RESULTADOS
Tempo de retenção, composição da formulação e composição encontrada na análise dos componentes do preparado.
DISCUSSÃO
A tabela 1 e as figuras 1 e 2 mostram que os componentes do preparado farmacêutico podem ser separados e quantificados por HPLC nas condições cromatográficas desenvolvidas , a qual apresenta-se bastante eficiente e rápida, com duração de 8 minutos para detecção e quantificação dos mesmos.
A ausência de pantenol no preparado multivitamínico comercial (fig. 2) sugere que o pantenol não participou da composição inicial do medicamento ou se decompôs com o passar do tempo, por ser uma substância instável e higroscópica. Este fato parece ser o mais provável visto que as condições de transporte e armazenamento dos medicamentos muitas vezes não são ideais.
A tabela 1 mostra que a concentração encontrada para citrato de colina e nicotinamida são, respectivamente, 19,6%e 11,5%maiorqueaesperada, isto ocorre pois nas preparações de multivitanúnicos, muitas vezes os compostos são adicionados em excesso, garantindo assim, sua presença nas concentrações relatadas na formulação. O único composto dentro das especificações da formulação é a acetilmetionina.
Análise simultânea de citrato de colina, nicotinamida, acetilmetionina e pantenol em multivitamínicos farmacêuticos. 39
CONCLUSÃO
A condição cromatográfica estabelecida mostrou-se bastante eficaz para o doseamento de multivitamínicos compostos de citrato de colina, nicotinaminda, acetilmetionina e pantenol. A análise realizou-se em um tempo menor que 8 min e possibilitou a quantificação de todos componentes, podendo ser utilizada para o controle de qualidade destes.
Cromatograma da mistura padrão de citrato de colina (Tr=2,907), nicotinamida (Tr=4,890), acetimetionina (Tr=5,544) e pantenol (Tr=7,149). Condições cromatográficas utilizadas coluna Shimpack CLC-ODS, 5 µm, 250 x 4 mm, fase móvel tampão fosfato pH 5,8 e metanol (80:20), fluxo lmL min-1 e detector UV 210 nm.
Cromatograma da amostra de multivitamínico comercial: citrato de colina (Tr=2,93 l ), nicotinamida (Tr=4,890), acetilmetionina (Tr=5,156) e pantenol (ausente). Condições cromatográficas utilizadas coluna Shim-pack CLC-ODS, 5 µm, 250 x 4 mm, fase móvel tampão fosfato pH 5,8 e metanol (80:20), fluxo lmL min-1 e detector UV 210nm.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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