RESUMO A doxorrubicina (dox) é um medicamento antineoplásico que induz cardiotoxicidade por estresse oxidativo. Os flavonoides são antioxidantes extraídos de plantas como Camellia sinensis e Arrabidaea chica (Fridericia chica). Esta pesquisa objetivou avaliar efeitos protetores do extrato de A. chica (AC), comparado ao de C. sinensis (CS), frente ao estresse oxidativo induzido pela dox, no coração. Cardiomiócitos e células neoplásicas MDA-MB 231 foram incubados com AC e CS. Depois, adicionou-se dox e avaliaram-se taxas de viabilidade e morte celular. A citometria de fluxo para o ensaio de iodeto de propídeo (IP) em cardiomiócitos mostrou as seguintes taxas de morte celular: controle 53%; dox 78% (maior que controle, P=0,015); AC_12,5μg/mL + dox 65% (menor que dox, P=0,031); AC_25μg/mL + dox 62% (menor que dox, P=0,028); AC_50μg/mL + dox 63% (menor que dox, P=0,030); CS_12,5μg/mL + dox 71% (menor que dox, P=0,040); CS_25μg/ml + dox 69% (menor que dox, P=0,037); CS_50μg/mL + dox 74% (menor que dox, P=0,044). Resultados das células MDA-MB 231 mostraram que nenhum extrato interferiu na atividade antitumoral da dox. Os dados de IP foram corroborados pelos de MTT. Este estudo reporta promissora utilização de A. chica na prevenção da cardiotoxicidade induzida pela dox.

RESUMO Objetivou-se avaliar características de virulência, perfil de resistência antimicrobiana e padrão de similaridade genética de 71 cepas de Salmonella Minnesota isoladas na cadeia produtiva de frangos de corte, entre 2009 e 2010, em duas unidades de uma empresa (A e B). Os isolados foram sorotipificados e submetidos ao teste de susceptibilidade antimicrobiana pelo teste de difusão em disco. Utilizando-se PCR, foi avaliada a presença dos genes invA, lpfA, agfA e sefA e os genes de resistência aos betalactâmicos (bla TEM , bla SHV e bla CTX-M ). A relação filogenética foi determinada por RAPD-PCR. Os maiores percentuais de resistência foram para tetraciclina e sulfonamida. Foram reconhecidos oito perfis de resistência aos antimicrobianos entre as cepas isoladas na indústria A, e 11 perfis de resistência na indústria B. Do total de cepas, 100% foram positivas para o gene invA, 98,6% para o gene agfA, 49,3% para o gene lpfA e nenhuma para o gene sefA. Três cepas foram positivas para o gene bla TEM (4,2%) e 11 (15,5%) para o gene bla CTX-M . A avaliação filogenética demonstrou a presença de sete clusters com similaridade superior a 80% e três perfis distintos. Com base no dendrograma, observou-se a disseminação de um mesmo perfil em ambas as empresas.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance profile and the pattern of genetic similarity of 71 strains of Salmonella Minnesota isolated in the production chain of broilers between 2009 and 2010, into two units of a company (A and B). Isolates were serotyped and submitted to antimicrobial susceptibility by disk diffusion test. Using PCR, the presence of genes invA, lpfA, agfA and sefA and the genes conferring resistance to beta-lactam (blaTEM, blaSHV and blaCTX-M) were evaluated. The phylogenetic relationship was determined by the RAPD-PCR method. The highest percentages of resistance were to tetracycline and sulfonamide. Eight antimicrobial resistance profiles were recognized among strains isolated in industry A, and 11 resistance profiles in industry B. Of all strains of both industries, 100% were positive for the invA gene, 98.6% to agfA gene, 49.3% for lpfA gene, and no strain showed the sefA gene. Three strains were positive for the gene blaTEM (4.2%), 11 (15.5%) for the blaCTX-M gene. Phylogenetic evaluation showed the presence of seven clusters with similarity greater than 80% and three distinct profiles. Based on the dendrogram we observed the spread with similar profiles in both companies.

RESUMO Este estudo teve como objetivo identificar isolados de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) isolados de mastite bovina, por meio de métodos fenotípicos e PCR-RFLP (reação em cadeia de polimerase - polimorfismo nos fragmentos de restrição), e compará-los com a técnica de tempo de voo de ionização/desorção por laser assistida por matriz de espectrofotometria de massa (MALDI-TOF MS). O método de PCR-RFLP, que utiliza uma parte conservada da sequência do gene groEL, é uma alternativa promissora, por ser reprodutível e confiável. Por outro lado, a técnica proteômica MALDI-TOF MS permite uma acurácia e um diagnóstico muito mais rápidos e tem sido cada vez mais empregada na identificação microbiológica. Os perfis fenogenotípicos de resistência aos beta-lactâmicos também foram investigados. Essa caracterização é importante, considerando-se que os antimicrobianos são os elementos-chave para o controle da mastite na produção leiteira. A concordância entre os testes fenotípicos, PCR-RFLP E MALDI-TOF MS na identificação foi de 77,5% (31/40). S. chromogenes foi a espécie mais frequentemente isolada. A resistência antimicrobiana foi relativamente baixa, apresentando valores de 25,5% para penicilina, 9,6% para oxacilina e 6,2% para cefoxitina. Resistência ao imipenem, à cefalotina e à amoxacilina + ácido clavulâncico não foi observada. O gene mecA e sua variante foram detectados em 7,6% e 4,1% dos isolados, respectivamente. O gene blaZ foi encontrado em 43,2% dos isolados resistentes à penicilina.

ABSTRACT This study aimed to identify Coagulase-Negative Staphylococci (CoNS) species isolated from bovine mastitis, through phenotypic and PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction) methods and to compare both techniques to matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technique. Among them, the PCR-RFLP method, using a partially conserved sequence of the groEL gene, is a promising alternative, because of its reproducibility and reliability. On the other hand, the proteomic technique MALDI-TOF MS provides an accurate and much faster diagnosis and has been increasingly employed in microbiological identification. The pheno-genotypic profiles of beta-lactam resistance were also investigated, this characterization is important, considering that the use of antimicrobials is a key element for mastitis control in dairy farms. The concordance of the phenotypic, PCR-RFLP and MALDI-TOF MS assays to identify CoNS species was 77,5% (31/40). S. chromogenes was the species most frequently isolated. Antibiotic resistance rate was relatively low, registering values of 25.5% to penicillin, 9.6% to oxacillin and 6.2% to cefoxitin. Resistance to imipenem, cephalotin and amoxicillin+clavulanate was not observed. The mecA gene and its variant were detected in 7.6% and 4,1% of the isolates respectively. The blaZ gene was found in 43.2% of the strains resistant to penicillin.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Tritrichomonas foetus em gatos na região do município de Araçatuba, SP, Brasil. Foram coletadas amostras fecais de 129 gatos através da técnica de lavado retal. Dois métodos diagnósticos foram comparados, o exame direto das fezes e a PCR. A presença de DNA de T. foetus foi verificada por meio da PCR através da amplificação de 347 pares de bases a partir dos iniciadores específicos TFR3 e TFR4. Posteriormente, os resultados amplificados das amostras positivas foram sequenciadas. Também foi feita análise estatística a fim de investigar a correlação entre infecção por T. foetus e sexo, idade, raça, presença e/ou histórico de diarreia, tratamento prévio, coinfecção, estilo de vida, origem e tipo de ambiente. O protozoário pôde ser observado em uma amostra através do exame direto das fezes e à PCR foram detectadas cinco amostras positivas (3.9%). Foram detectadas coinfecções por Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Não foram observadas correlações entre infecção por T. foetus e todos os fatores listados anteriormente, embora a maioria dos felinos positivos fossem assintomáticos e vivessem em ambientes multigatos. O resultado do sequenciamento genético dos isolados das amostras positivas mostrou 100% de similaridade com outros isolados de felinos no mundo. Assim, a ocorrência de T. foetus foi confirmada em gatos em Araçatuba, São Paulo, Brasil. Sendo assim, o parasito deve considerado como diagnóstico diferencial em gatos com diarreia assim como em portadores assintomáticos como fontes de infecção em ambientes multigatos.

ABSTRACT: The aim of this study was to investigate the occurrence of Tritrichomonas foetus in cats in the area surrounding the city of Araçatuba municipality, State of São Paulo, Brazil. Fecal samples from 129 cats were collected by rectal flush technique. It was compared two diagnosis methods, direct examination of feces and PCR. The presence of T. foetus DNA was verified using PCR by amplification of 347-bp fragment from the primers TFR3 and TFR4 and amplicons of positive cases were sequenced. Statistical analyses were performed investigating the associations between T. foetus infection with gender, age, breed, presence of diarrhea and/or history of diarrhea, previous treatment, lifestyle, origin, environment, and co-infection. T. foetus was observed in one sample (n=129) by direct microscopic examination of feces while PCR was positive in five samples (3.9%). Giardia species and Cryptosporidium species co-infection was also observed. Statistical analyses showed no significant associations between T. foetus infection and all listed factors, although most positive cats were asymptomatic and lived in multi-cat household. The isolates of T. foetus showed 100% identical sequences with other T. foetus isolates from cats around the world. So, the occurrence of T. foetus was confirmed in cats in Araçatuba city (Brazil). This parasite must be considered as a differential diagnosis in cats with diarrhea and also in asymptomatic carriers as source of infection in multi-cat environments.

RESUMO O presente estudo teve como objetivo detectar os principais genes de virulência e resistência antimicrobiana em Staphylococcus aureus oriundos de leite bovino mastítico e classificá-los de acordo com a tipagem do gene agr. Foram selecionados 55 isolados de seis unidades produtores no estado do Rio de Janeiro. Destas, o gene fbnA foi encontrado em 27,3% das cepas e 78,2% possuíam o gene fbnB. Em nenhuma cepa foi encontrado o gene cap5 e 3,6% possuíam o gene cap8. O gene hlA foi encontrado em 94,5% das cepas e 89,1% possuíam o gene hlB. O gene icaA foi encontrado em 67,3% das cepas e 87,3% possuíam o gene icaD. Com base nesses resultados, foi possível estabelecer 12 diferentes perfis de virulência. Prevalência do agr tipo II foi detectada em 81,8% dos isolados. Considerando-se a avaliação da resistência antimicrobiana, as cepas estudadas foram suscetíveis a todos os antibióticos exceto penicilina, sendo detectado um percentual de 83,6% de cepas resistentes. Nenhuma das cepas apresentou o gene mecA, contudo 40% das cepas apresentaram o gene blaZ. Vinte e três perfis diferentes foram estabelecidos por associação de dados de virulência e resistência. Essa grande diversidade de cepas mostra a ampla gama de estratégias bacterianas e o desafio da prevenção à mastite no gado bovino, considerando-se que, a despeito da suscetibilidade antimicrobiana, essas cepas apresentam genes que permitem sua persistência no rebanho.

ABSTRACT This study aims to detect the main virulence and antimicrobial resistance genes in Stapylococcus aureus from bovine mastitic milk as well as classifying them according to agr typing. A total of 55 strains from six dairy unities in the state of Rio de Janeiro were selected, of these 27.3% presented fbnA and 78,2% for fbnB genes, respectively. None of the strains tested were positive for cap5 gene, 3.6% were positive for cap8 gene. Additionally, 94.5% of strains had hlA gene and 89.1% had hlB gene while 67.3% of the strains had icaA gene and 87.3% had icaD gene. From these results it was possible to establish 12 different virulence profiles. Prevalence of agrII type was detected in 81.8% of the isolates. Concerning antimicrobial resistance evaluation, the studied strains were susceptible to all antibiotics tested except penicillin, 83.6% being resistant strains. None of the strains had mecA gene, however, 40% of the strains had blaZ gene. Associating virulence and resistance data made it possible to obtain 23 different profiles. This great diversity of strains shows wide array of bacterial strategies and the challenge of mastitis prevention in cattle. Despite antimicrobial susceptibility, these strains presented certain genes that allow its persistence in the herd.

RESUMO Psidium cattleyanum Sabine, conhecida como “araçá”, é espécie nativa do Bioma Cerrado brasileiro comumente utilizado, segundo levantamento etnobotânico, como planta medicinal para tratar várias doenças tais como: patologias hepáticas, gástricas, lesões teciduais incluindo processos dolorosos. O objetivo deste trabalho foi realizar a triagem fitoquímica com propósito exploratório, investigar a atividade analgésica e antimicrobiana do extrato hidroalcoólico da casca do caule de Psidium cattleyanum Sabine (ECPCS) para apoiar o uso dessa espécie como planta medicinal. Para isso, foram obtidos extratos e frações com solventes orgânicos de polaridade crescente (hexano, diclorometano, acetato de etila e isobutanol) avaliando-se o perfil fitoquímico para determinar as principais classes de metabólitos secundários presentes na espécie. Investigou-se a atividade analgésica pelo teste de contorções abdominais em camundongos induzidas pelo ácido acético (0,6%). A Concentração Inibitória Mínina (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) foram avaliadas através da técnica de microdiluição em caldo contra micro-organismos da microbiota oral. A triagem fitoquímica identificou a presença de taninos, saponinas, flavonoides e terpenos e/ou esteroides. O ECPCS exibiu atividade analgésica periférica nas doses de 200 e 400 mg/kg. O EAC (extrato acetato de casca) o EDC (extrato diclorometânico de casca) desempenharam melhor ação inibitória sobre o crescimento bacteriano de Estafilococos oralis com CIM 100 e 150 respectivamente. O ECPCS desempenhou ação inibitória sobre o crescimento bacteriano. Os resultados dos estudos experimentais comprovaram a presença de compostos secundários tais como, taninos e flavonoides, o que, provavelmente, pode ser associado à atividade analgésica e ao efeito inibitório sobre os micro-organismos testados com o ECPCS, o que justifica o uso medicinal planta.

ABSTRACT The Psidium cattleyanum Sabine, known as “araçá”, is a native species from the Brazilian Cerrado biome, commonly used, according to ethnobotanical surveis, as a medicinal plant to treat several sicknesses such as liver and , gastric diseases and tissue lesions with painful treatments. The aim of this study was to perform an exploratory screening, investigating the analgesic and antimicrobial activity of the hydroalcoholic extract of the Psidium cattleyanum Sabine (BEPCS) stem bark, in order to support the use of this species as a medicinal plant. For that, the BEPCS and its parts were obtained from the extraction with organic solvents of increasing polarity (hexane, dichloromethane, ethyl acetate and isobutanol), evaluating its phytochemical profile in order to determine the main types of secondary metabolites present in the species. The analgesic activity, through the twisting test in mice, was investigated and induced by acetic acid (0.6%). The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were evaluated using the microdilution technique in liquid against microorganisms of the oral microbiota. The phytochemical screening identified the presence of tannins, saponins, flavonoids and terpenes and/or steroids. The BEPCS exhibited peripheral analgesic activity at the doses of 200 and 400 mg / kg. The AEB (acetate extract bark) and the DEB (dicloromethane extract bark) had better inhibitory effect on bacterial growth of Staphylococcus oraliswith MIC 100 and 150 respectively. The BEPCS demonstrated an inhibitory effect on bacterial growth. The results of experimental studies have indicated the presence of secondary compounds as tannins and flavonoids, which probably can be associated with the analgesic activity and inhibitory effect on the microorganisms tested with BEPCS, fact that justifies the its application.

A diversificação da produção industrial de alimentos de origem suína e o intercâmbio comercial de animais e seus derivados destinados ao consumo humano podem ser importantes disseminadores de sorovares de Salmonella spp. na cadeia alimentar. Objetivou-se avaliar em 86 cepas de Salmonella spp., isoladas em granja de terminação e no abate de suínos, a ocorrência de três genes de virulência (invA, agfA e lpfA), bem como a similaridade genética entre elas. A ocorrência do gene invA foi verificada em 100% das amostras. O gene lpfA foi detectado em 80,23% (69/86) das cepas, não foi detectado em S. Panama e estava presente em todas as cepas de S. Infantis. O gene agfA foi detectado em 63,95% (55/86) das amostras. S. Agona apresentou positividade para todos os genes de virulência estudados. A análise de homologia entre as cepas agrupou os diferentes sorovares em clusters. A similaridade foi independente do local de isolamento, o que demonstra a presença de clones ao longo da cadeia de produção e a existência de multiplicidade de fontes para a infecção dos animais, como a ração, e a contaminação cruzada das carcaças. A pesquisa de genes de virulência e a avaliação da proximidade gênica permitem a caracterização e um maior entendimento sobre cepas de Salmonella circulantes na cadeia produtiva de suínos e, assim, podem subsidiar medidas de controle durante o processo produtivo com o objetivo de garantir a saúde do consumidor.

The diversification of industrial food production of swine origin and trade of animals and their derivatives for human consumption may be important disseminators of serovars of Salmonella spp. in the food chain. This study aimed to evaluate 86 strains of Salmonella spp. isolated form in the finishing and slaughter of pigs, the occurrence of three virulence genes (invA, agfa and lpfA), as well as the genetic similarity between them. The occurrence of gene invA was observed in 100% of the samples. The gene lpfA was detected in 80.23% (69/86) strains and is not detected in S. Panama, but present in all strains of S. Infantis. The gene agfA was detected in 63.95% (55/86). S. Agona was positive for all virulence genes studied. The analysis of homology between the different serovars grouped the isolates in clusters. The similarity was regardless of the location of isolation, demonstrating the presence of clones along the production chain and that there are multiple sources for the infection of animals, such as feed, and cross-contamination of carcasses. A survey of virulence genes and evaluation of gene proximity allow characterization and better understanding of Salmonella strains circulating in the pig production chain, thus being able to support control measures during the production process in order to ensure consumer health.

O objetivo desse trabalho foi contribuir com o estudo anatômico, morfométrico, ultraestrutural e propriedades físicas dos dentes permanentes do primata Sapajus apella. Para tal, foram utilizados 10 animais adultos e machos. Os dentes foram avaliados quanto ao seu comprimento e quanto à anatomia radicular externa e interna considerando número de raízes e canais, forma e direção radicular e forma do canal, assim como análise da densidade e diâmetro tubular do canal radicular, composição e microdureza dentinária. A anatomia radicular desse primata apresentou especificidades, como o número de raízes do segundo pré-molar superior e a presença do terceiro pré-molar. Quanto à densidade e o diâmetro dos túbulos dentinários, observou-se uma diminuição do número e diâmetro de túbulos ao longo do canal radicular, havendo diferença estatisticamente significante ao se comparar o terço apical com as regiões cervical e média, padrão de densidade e tamanho semelhantes a dentes humanos. Semelhanças também foram encontradas com dentes humanos quando comparados os valores de microdureza e proporção de elementos químicos encontrados na dentina radicular.

This paper aimed the anatomical study including morphometric, ultrastructural and physical properties of permanent teeth of Sapajus apella primate. Ten adult male monkeys were studied. The teeth were evaluated for their length, root anatomy (external and internal considering the number of roots and canals), direction and shape of the root canal, density and diameter of the tubular root canal, dentin microhardness, and composition. The root anatomy showed specificity regarding the number of roots of the second premolar and the presence of the third premolar. We observed a decrease in the number and diameter of dentinal tubules along the root canal, a statistically significant difference when compared with the apical and cervical regions. Similarities with human teeth were found in regard to microhardness values and proportion of chemical elements in the root dentin.

Devido às poucas informações sobre as práticas de cultivo do capim-limão (Cymbopogon citratus, DC.) objetivou-se avaliar o efeito de lâminas de irrigação sobre: a produção de biomassa, o rendimento e composição do óleo essencial. O experimento foi instalado em ambiente protegido para possibilitar o controle das lâminas de irrigação e avaliar a viabilidade para situações em que as condições climáticas normais sejam inadequadas. O delineamento experimental foi em blocos inteiramente casualizados com cinco tratamentos e três repetições. Os dados foram submetidos à análise de variância pelo tese F e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Na etapa um, os tratamentos consistiram da aplicação de lâminas referentes a 50%, 75%, 100%, 125% da evapotranspiração da cultura (ETc), irrigando duas vezes por semana e de 100% da evapotranspiração da cultura (ETc), irrigando uma vez por semana, sendo denominados de T1, T2, T3, T4 e T5, respectivamente. Na etapa dois, os tratamentos consistiram da aplicação de lâminas referentes a 50%, 75%, 100%, 125% da ETc irrigando uma vez por semana e de 100% da ETc, irrigando a cada 14 dias, sendo denominados de T6, T7, T8, T9 e T10 respectivamente. O corte do capim-limão foi realizado após 60 dias do início dos tratamentos. Avaliou-se a altura de plantas, o número de perfilhos por touceira, a massa seca da parte aérea, o rendimento e a composição do óleo essencial. O T5, caracterizado por estresse hídrico e intervalo de irrigação moderado, foi o que apresentou a maior produção de matéria seca, maior produtividade do capim-limão e maior estimativa da produtividade de óleo essencial e maior concentração de citral, na primeira etapa. Na etapa dois, o T6, correspondente ao estresse hídrico crescente e acentuado, foi o que apresentou maior estimativa da produtividade de óleo essencial. De acordo com os resultados observados, não foi possível definir a melhor lâmina, porém, concluiu-se que uma única irrigação semanal, para as condições estudadas neste experimento promoveu o melhor resultado.

The aim of this work was to evaluate the effect of different irrigation depths on biomass production, yield and composition of lemongrass (Cymbopogon citratus)essential oil, because of poor information on cultivation practices. The experiment was set up in a protected environment to control irrigation and also to evaluate situations in which the normal climatic conditions are inadequate. A complete randomized block design was incorporated with five treatments and three replications, and averages were compared using the Tukey's test at 5% probability. In phase one, the treatments consisted of irrigation depths relating to 50%, 75%, 100%, 125% of crop evapotranspiration (ETc), irrigating twice a week, and irrigating only once a week for a sample supplied with 100% of the crop evapotranspiration (ETc); these were labeled T1, T2, T3, T4 and T5, respectively. In phase two, the treatments consisted of depths of 50%, 75%, 100%, 125% of the ETc, irrigating once a week, and another with 100% of the ETc, irrigating every 14 days, which were denominated T6, T7, T8, T9 and T10, respectively. Harvest of the lemon grass was done after 60 days of treatment. Plant height, number of tillers per plant, dry mass of the shoots, yield and composition of essential oil were evaluated. Treatment T5, characterized by water stress and a moderate irrigation interval, presented the highest dry matter production, lemongrass productivity, estimate of essential oil productivity and concentration of citral in the first phase. In phase two of this work, T6,characterized by a sharp increaseof water stress, presented the greatest estimate of essential oil productivity. According to the results observed, we could not define an optimal irrigation depth; however, we concluded that a single irrigation per week for the conditions of this experiment provided the best result.

The objective of this study was to characterize the C. jejuni IAL2383 strain isolated from humans in Brazil. Transcripts for the racR, dnaJ and ciaB genes were found and flaA, plda and cadF genes were present in the genome and bacteria was sensitive to most of the important antimicrobials used to treat humans. C. jejuni IAL2383 is a good experimental model to analyze the interactions with cells.

O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência de Mycoplasma agalactiae, com o uso da reação em cadeia da polimerase (PCR), em 30 rebanhos caprinos leiteiros nas microrregiões do Cariri Ocidental e Oriental do estado da Paraíba. Das 120 amostras de leite testadas, nove (7,5%) apresentaram amplificação de apenas um fragmento com 360pb. As amostras que amplificaram este fragmento estavam presentes em 6/30 (20%) fazendas localizadas nos municípios de Amparo, Santo André e Gurjão.

This work was performed in 60 goat farms located in 15 counties of the micro regions of Western and Eastern Cariri, in Paraiba, to describe and analyze the sanitary profile of the flocks. Visits were done and the answers, obtained from questionnaires that were applied to the farmers, were used. It was observed a mortality of 20% in young animals in 80% of the farms. The presence of technical assistance in 93.3% in the studied farms, adoption of prophylactic calendar in 85% and parasitic control in 83.3% of the flocks were also observed.

The aim of the present study was to evaluate the impact of a multiple dose regimen of a liposomal formulation of meglumine antimoniate (LMA) on the pharmacokinetics of antimony in the bone marrow of dogs with visceral leishmaniasis and on the ability of LMA to eliminate parasites from this tissue. Dogs naturally infected with Leishmania chagasi received 4 intravenous doses of either LMA (6.5 mg antimony/kg body weight, N = 9), or empty liposomes (at the same lipid dose as LMA, N = 9) at 4-day intervals. A third group of animals was untreated (N = 8). Before each administration and at different times after treatment, bone marrow was obtained and analyzed for antimony level (LMA group) by electrothermal atomic absorption spectrometry, and for the presence of Leishmania parasites (all groups). There was a significant increase of antimony concentration from 0.76 µg/kg wet organ (4 days after the first dose) to 2.07 µg/kg (4 days after the fourth dose) and a half-life of 4 days for antimony elimination from the bone marrow. Treatment with LMA significantly reduced the number of dogs positive for parasites (with at least one amastigote per 1000 host cells) compared to controls (positive dogs 30 days after treatment: 0 of 9 in the LMA group, 3 of 9 in the group treated with empty liposomes and 3 of 8 in the untreated group). However, complete elimination of parasites was not achieved. In conclusion, the present study showed that multiple dose treatment with LMA was effective in improving antimony levels in the bone marrow of dogs with visceral leishmaniasis and in reducing the number of positive animals, even though it was not sufficient to achieve complete elimination of parasites.

The achievement of complete cure in dogs with visceral leishmaniasis is currently a great challenge, since dogs are the main reservoir for the transmission of visceral leishmaniasis to humans and they respond poorly to conventional treatment with pentavalent antimonials. In order to improve the efficacy of treatment, we developed a novel formulation for meglumine antimoniate based on the encapsulation of this drug in freeze-dried liposomes (LMA). The aim of the present study was to evaluate the biodistribution of antimony (Sb) in dogs following a single intravenous bolus injection of LMA. Four healthy male mongrel dogs received LMA at 3.8 mg Sb/kg body weight and were sacrificed 3, 48 and 96 h and 7 days later. Antimony was determined in the blood, liver, spleen and bone marrow. In the bone marrow, the highest Sb concentration was observed at 3 h (2.8 µg/g wet weight) whereas in the liver and spleen it was demonstrated at 48 h (43.6 and 102.4 µg/g, respectively). In these organs, Sb concentrations decreased gradually and reached levels of 19.1 µg/g (liver), 28.1 µg/g (spleen) and 0.2 µg/g (bone marrow) after 7 days. Our data suggest that the critical organ for the treatment with LMA could be the bone marrow, since it has low Sb levels and, presumably, high rates of Sb elimination. A multiple dose treatment with LMA seems to be necessary for complete elimination of parasites from bone marrow in dogs with visceral leishmaniasis.

O perfil antigênico de 45 herpesvírus (44 de bovinos, sendo seis amostras de referência de BHV-1 e 15 prováveis BHV-1; três amostras de referência de BHV-5 e 20 prováveis BHV-5) e uma amostra de herpesvírus bubalino (BuHV) foi examinado com um painel de anticorpos monoclonais (Acms) produzidos contra antígenos de herpesvírus bovinos. Para os exames, foi utilizada a prova de imunoperoxidase (IPX) sobre cultivos de células infectadas, tendo os Acms como anticorpos primários. A determinação dos padrões de reatividade das amostras de vírus frente aos Acms permitiu a diferenciação entre os tipos 1 e 5. Todas as amostras isoladas de casos de encefalite apresentaram perfil de BHV-5. Quatro amostras de BHV-5 isoladas de áreas geograficamente distintas apresentaram perfís de reatividade diferenciados em relação às demais amostras do tipo 5. Duas amostras de vírus com perfil antigênico de BHV-5 foram isoladas de sêmen de animais infectados. Estes resultados comprovam a utilidade da caracterização antigênica com este painel de Acms na tipagem de amostras de BHV-1 e BHV-5.

The antigenic profile of 45 herpesviruses (44 viruses from cattle, including six reference BHV-1 strains and 15 putative BHV-1; three reference BHV-5 strains and 20 putative BHV-5) and one buffalo isolate (BuHV) were examined with a panel of monoclonal antibodies (Mabs) prepared against bovine herpesvirus antigens. Tests were performed by immunoperoxidase (IPX) on infected cell cultures, with the Mabs as primary antibodies. Immunostaining allowed the differentiation between types 1 and 5 viruses. All isolates from cases of encephalitis displayed BHV-5 profiles. Four BHV-5 isolates obtained from geographically distinct areas displayed different and highly variable IPX patterns of reactivity. Two viruses with BHV-5 antigenic profile were isolated from semen of asymptomatic bulls. The results showed that the antigenic characterization with the Mab panel employed here is useful for typing BHV-1 and BHV-5 isolates.