RESUMO Objetivo: Analisar a genotoxicidade e a citotoxicidade produzidas por raios X no epitélio da mucosa oral de crianças durante a obtenção da radiografia panorâmica. Métodos: A amostra foi constituída por 30 crianças saudáveis, sendo 19 do sexo feminino e 11 do masculino, com faixa etária de 4 a 10 anos (média de 7 anos de idade). As células epiteliais da mucosa oral foram coletadas por meio de citologia esfoliativa em base líquida imediatamente antes e após sete dias da obtenção da radiografia panorâmica. Os esfregaços foram processados e corados utilizando a técnica de Feulgen Rossenbeck modificada. Foram analisadas e quantificadas projeções nucleares dos tipos bud e broken egg, alterações genotóxicas na forma de micronúcleo e alterações citotóxicas dos tipos picnose, cariólise e cariorrexe. Resultados: A frequência de picnose, bud e broken egg foi significativamente maior após a exposição aos raios X (p<0,05), porém não houve diferença estatisticamente significante em relação ao sexo, bem como nas demais alterações estudadas. Conclusões: A exposição aos raios X emitidos durante a obtenção da radiografia panorâmica pode induzir à morte celular no epitélio da mucosa oral de crianças. Não foi encontrado indício significativo de efeito genotóxico.

ABSTRACT Objective: To assess the genotoxicity and cytotoxicity produced by X-rays in the epithelium of the oral mucosa of infants exposed to panoramic radiography. Methods: The sample consisted of 30 healthy children, 19 females and 11 males, ranging in age from 4 to 10 years (average of 7 years of age). Oral mucosa cells were collected by liquid-based cytology immediately before and after seven days following the exposure to panoramic radiography. Smears were processed and stained using the modified Feulgen Rossenbeck technique. Bud and broken egg nuclear projections, changes in the form of micronuclei, and genotoxic and cytotoxic changes of pyknosis, karyorrhexis and karyolysis were analyzed and quantified. Results: The frequency of pyknosis, buds and broken eggs was significantly higher after exposure to X-rays (p<0.05), but there was no statistically significant difference regarding gender, as well as in the other changes studied. Conclusions: Exposure to X-rays emitted during submission to panoramic radiography may induce cell death in the epithelium of children’s oral mucosa. No evidence was found for a significant genotoxic effect.

Resumo Objetivo Determinar parâmetros de estresse oxidativo em eritrócitos de crianças com doença falciforme e compará-los com os mesmos parâmetros em eritrócitos de crianças saudáveis, pois o estresse oxidativo desempenha um importante papel na fisiopatologia da doença falciforme, considerada um sério problema de saúde pública em muitos países. Métodos Foram obtidas amostras de sangue de 45 crianças com doença falciforme (21 meninos e 24 meninas com média de 9 anos, variação de 3 a 13) e 280 amostras de sangue de crianças sem hemoglobinopatias (137 meninos e 143 meninas com média de 10 anos, variação de 8 a 11), como grupo controle. Em todas as amostras foram determinados meta-hemoglobina, glutationa reduzida, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, porcentagem de hemólise, espécies reativas de oxigênio e atividade das enzimas glucose6-fosfato desidrogenase, superóxido dismutase e catalase. Os dados foram analisados com o teste t de Student e foram expressos como média ± desvio padrão. Um valor de p < 0,05 foi considerado significativo. Resultados Foram observadas diferenças significativas entre as crianças com doença falciforme e o grupo controle para os parâmetros meta-hemoglobina, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, porcentagem de hemólise, espécies reativas de oxigênio e atividade da enzima glucose6-fosfato desidrogenase, com níveis aumentados nos pacientes. Conclusões Foi possível determinar parâmetros de estresse oxidativo em eritrócitos de crianças, com técnicas laboratoriais simples e pequenos volumes de sangue. Esses biomarcadores podem ser úteis na avaliação da progressão e dos resultados de tratamentos da doença.

Abstract Objective To determine eight parameters of oxidative stress markers in erythrocytes from children with sickle cell disease and compare with the same parameters in erythrocytes from healthy children, since oxidative stress plays an important role in the pathophysiology of sickle cell disease and because this disease is a serious public health problem in many countries. Methods Blood samples were obtained from 45 children with sickle cell disease (21 males and 24 females with a mean age of 9 years; range: 3–13 years) and 280 blood samples were obtained from children without hemoglobinopathies (137 males and 143 females with a mean age of 10 years; range: 8–11 years), as a control group. All blood samples were analyzed for methemoglobin, reduced glutathione, thiobarbituric acid reactive substances, percentage of hemolysis, reactive oxygen species, and activity of the enzymes glucose 6-phosphate dehydrogenase, superoxide dismutase, and catalase. Data were analyzed using Student's t-test and were expressed as the mean ± standard deviation. A p-value of <0.05 was considered significant. Results Significant differences were observed between children with sickle cell disease and the control group for the parameters methemoglobin, thiobarbituric acid reactive substances, hemolysis, glucose 6-phosphate dehydrogenase activity, and reactive oxygen species, with higher levels in the patients than in the controls. Conclusions Oxidative stress parameters in children's erythrocytes were determined using simple laboratory methods with small volumes of blood; these biomarkers can be useful to evaluate disease progression and outcomes in patients.

OBJECTIVE: The aim of this study was to evaluate the protective effects of quercetin, rutin, hesperidin and myricetin against reactive oxygen species production with the oxidizing action of tert-butylhydroperoxide in erythrocytes from normal subjects and sickle cell anemia carriers treated with hydroxyurea. METHODS: Detection of intracellular reactive oxygen species was carried out using a liposoluble probe, 2',7'-dichlorfluorescein-diacetate (DCFH-DA). A 10% erythrocyte suspension was incubated with flavonoids (quercetin, rutin, hesperidin or myricetin; 30, 50, and 100 µmol/L), and then incubated withtert-butylhydroperoxide (75 µmol/L). Untreated samples were used as controls. RESULTS: Red blood cell exposure to tert-butylhydroperoxide resulted in significant increases in the generation of intracellular reactive oxygen species compared to basal levels. Reactive oxygen species production was significantly inhibited when red blood cells were pre-incubated with flavonoids, both in normal individuals and in patients with sickle cell anemia. Quercetin and rutin had the highest antioxidant activity, followed by myricetin and hesperidin. CONCLUSION: Flavonoids, in particular quercetin and rutin, showed better antioxidant effects against damage caused by excess reactive oxygen species characteristic of sickle cell anemia. Results obtained with patients under treatment with hydroxyurea suggest an additional protective effect when associated with the use of flavonoids.

A doença falciforme promove anemia hemolítica e oclusão dos pequenos vasos, causados pela presença de altas concentrações de hemoglobina S, cujas consequências incluem a produção aumentada de espécies reativas de oxigênio e diminuição da capacidade de defesa antioxidante. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação protetora de um extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb 761), selecionado devido ao seu alto conteúdo de flavonóides e terpenóides, em eritrócitos de pacientes com anemia falciforme (HbSS, eritrócitos SS) submetidos ao estresse oxidativo usando terc-butil-hidroperóxido e 2,2-azobis-(amidinopropano)-diidrocloreto, in vitro. Índices de hemólise, glutationa reduzida, concentração de metemoglobina, peroxidação lipídica e espécies reativas de oxigênio foram determinados. Eritrócitos de pacientes com anemia falciforme apresentaram taxas aumentadas de oxidação da hemoglobina e peroxidação lipídica e a concentração de EGb 761 necessária para atingir o mesmo efeito antioxidante foi pelo menos duas vezes maior em relação aos eritrócitos normais (HbAA, eritrócitos AA), inibindo a formação de espécies reativas de oxigênio (IC50 de 13.6 µg/mL), prevenindo parcialmente a peroxidação lipídica (IC50 de 242.5 µg/mL) e prevenindo a hemólise (IC50 de 10.5 µg/mL). Portanto, EGb 761 possui um efeito benéfico no estado oxidativo dos eritrócitos SS. Entretanto, o EGb 761 não preveniu a oxidação da hemoglobina e da glutationa reduzida, nas concentrações examinadas.

Sickle cell disease promotes hemolytic anemia and occlusion of small blood vessels due to the presence of high concentrations of hemoglobin S, resulting in increased production of reactive oxygen species and decreased antioxidant defense capacity. The aim of this study was to evaluate the protective action of a standardized extract of Ginkgo biloba (EGb 761), selected due to its high content of flavonoids and terpenoids, in erythrocytes of patients with sickle cell anemia (HbSS, SS erythrocytes) subjected to oxidative stress using tert-butylhydroperoxide or 2,2-azobis-(amidinepropane)-dihydrochloride, in vitro. Hemolysis indexes, reduced glutathione, methemoglobin concentrations, lipid peroxidation, and intracellular reactive oxygen species were determined. SS erythrocytes displayed increased rates of oxidation of hemoglobin and membrane lipid peroxidation compared to normal erythrocytes (HbAA, AA erythrocytes), and the concentration of EGb 761 necessary to achieve the same antioxidant effect in SS erythrocytes was at least two times higher than in normal ones, inhibiting the formation of intracellular reactive oxygen species (IC50 of 13.6 µg/mL), partially preventing lipid peroxidation (IC50 of 242.5 µg/mL) and preventing hemolysis (IC50 of 10.5 µg/mL). Thus, EGb 761 has a beneficial effect on the oxidative status of SS erythrocytes. Moreover, EGb 761 failed to prevent oxidation of hemoglobin and reduced glutathione at the concentrations examined.

INTRODUÇÃO: O tempo de protrombina (TP) é o teste de escolha para monitorar o nível de anticoagulação em pacientes que fazem uso de anticoagulantes orais. Nestes, atualmente, a anticoagulação é monitorada pelo valor da relação normatizada internacional (RNI). OBJETIVO: A finalidade deste trabalho foi determinar se um pool de plasma caseiro, com cinco (P5) e 20 (P20) amostras, pode ser usado como controle normal do TP e se o uso deste pool interfere no resultado da RNI. MATERIAL E MÉTODOS: Foram 32 dias de experimentos. Os dois pools de plasma caseiro foram analisados em relação a um controle normal de plasma comercial (PC). Para cada dia de experimento, fez-se o TP de P5, P20 e PC e também se determinou o valor de RNI para P5, P20 e PC em pacientes que fazem uso de anticoagulante oral. As ferramentas estatísticas utilizadas foram média (X), análise de variância e teste de Tukey. RESULTADOS: A análise estatística demonstrou que os valores do TP e da RNI não são significativamente diferentes para PC, P5 e P20. CONCLUSÃO: O pool de plasma caseiro pode ser utilizado como controle normal do TP e o seu uso não interfere no valor da RNI.

INTRODUCTION: The prothrombin time (PT) test is commonly used to monitor anticoagulant levels in patients undergoing oral anticoagulant therapy. Currently, anticoagulation levels have been assessed through the international normalized ratio (INR) value. OBJECTIVE: The objective of this study was to determine if in-house preparations of polled plasma, containing five (P5) and 20 (P20) samples, respectively, may be used as normal control of PT and to assess its interference in INR values. MATERIAL AND METHODS: The experiment was performed in 32 days. Both polled plasma preparations were analyzed in comparison with a commercial control (PC). PT was performed for PC, P5 and P20 daily and the INR value for PC, P5 and P20 was assessed in patients undergoing oral anticoagulant therapy. The applied statistical tools were mean value (X), analysis of variance and Tukey test. RESULTS: There were no statiscally significant differences in PT and INR for PC, P5 and P20. CONCLUSION: In-house polled plasma (P5 and P20) may be applied as normal control of PT and it does not interfere in the INR value.

A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo Toxoplasma gondii, um protozoário com vasta distribuição geográfica e pouca especificidade parasitária, que pode afetar muitas espécies de animais selvagens e domésticos. Em animais de produção, especialmente pequenos ruminantes, como caprinos, pode provocar abortos e nascimento de crias fracas, causando perdas econômicas para os criadores, além de ser uma importante fonte de infecção humana. Este é um estudo soroepidemiológico para toxoplasmose caprina no Estado do Paraná. Soros de 405 caprinos da mesorregião metropolitana de Curitiba, no leste paranaense foram avaliados pelas técnicas de imunoensaio enzimático (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI), além da avaliação de questionários com dados das propriedades e animais estudados. A prevalência encontrada foi de 39,41 e 35,96% para as técnicas ELISA e RIFI, respectivamente. A prevalência de anticorpos anti-T. gondii aumenta com a idade dos animais. Os fatores de risco para infecção por T. gondii em caprinos encontrados neste estudo são: idade acima de um ano, presença de gatos, tipo de manejo e propósito da criação. Outros fatores epidemiológicos e medidas de controle são discutidos no presente trabalho.

Toxoplasmosis is a zoonosis caused by Toxoplasma gondii, a protozoan with wide geographical distribution and minimal parasitic specificity that affects many species of wild and domestic animals. In livestock, especially in small ruminants like goats, toxoplasmosis can cause abortion and the birth of weak animals, leading to economic losses to farmers, and is a major source of human infection. This is a seroepidemiological study of toxoplasmosis in goats in the state of Paraná, Brazil. Sera from 405 goats from the metropolitan mesoregion of Curitiba, eastern state, were tested by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence antibody test (IFAT). Information on properties and goat characteristics was also collected using questionnaires. The prevalence of toxoplasmosis was 39.41 and 35.96% by ELISA and IFAT, respectively. T. gondii antibody prevalence increased with age. The risk factors for T. gondii infection in goats were: age over one year; exposure to cats, type of management and purpose of breeding. Other epidemiological factors and relevant control measures are discussed in the current study.

OBJECTIVE: The aim of this work was to establish reference values for methemoglobin levels in 6 to 10-year-old children. METHODS: Methemoglobin concentrations were studied in clinically healthy children. The method for methemoglobin measurement used, neither uses highly toxic chemical compounds nor expensive enzymatic methods, thus it is feasible in the laboratory routine. RESULTS: The results showed higher reference values for clinically healthy children (from 3.61 to 6.44%) than for adults (from 1.9 to 3.8%). CONCLUSIONS: The higher concentrations of methemoglobin in children may be explained by smaller amounts of soluble cofactor cytochrome b5 and reduced activity of the cytochrome b5 reductase enzyme in red blood cells which make children particularly susceptible to the development of methemoglobinemia. Methemoglobin concentrations in children are higher than in normal adult subjects thus, adult reference values cannot be used to interpret infant methemoglobinemia.

Os analisadores de hematologia oferecem vários parâmetros que podem ser obtidos de diversas maneiras, de conformidade com o modelo ou a marca dos mesmos. No presente trabalho são estudadas dois equipamentos automatizados, analisadores Coulter STKS e Sysmex XE-2100D, e são avaliados de maneira comparativa os parâmetros do eritrograma em 383 pessoas escolhidas ao acaso, no Hospital de Clínicas, da Universidade Federal do Paraná, Curitiba, Brasil. Todos os parâmetros estudados, exceto a CHCM, apresentaram um bom coeficiente de correlação entre os dois equipamentos. Os parâmetros hematócrito (HCT), volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) apresentaram menos de 4% de erro entre os valores médios, entretanto, com significação estatística (ANOVA). O VCM e o CHCM apresentaram alto grau de imprecisão (1-R²), que poderia ser explicado pelas diferentes formas em que HCT e VCM são obtidas pelos equipamentos. Os resultados obtidos neste trabalho destacam o fato de que é necessário o conhecimento das metodologias nos dispositivos automáticos para a obtenção dos parâmetros do eritrograma, por parte dos profissionais que trabalham na área de hematologia.

Hematology analyzers provide several parameters that can be obtained in a distinct way, in accordance with the model or brand name. In the present work, two automated hematology equipment Coulter STKS and Sysmex XE-2100D analyzers are studied, evaluating, in a comparative way, the erythrogram parame- of 383 individuals, chosen randomly at the Hospital de Clinicas of the Universidade Federal do Paraná. All the studied parameters, except the HCMC, had presented a good correlation coefficient for the equipments. The HCT, MCV, MCH and HCMC parameters presented less than 4% error between the average values, although, with statistical significance (ANOVA). MCV and HCMC presented a high degree of imprecision (1-R²) that could be explained by the different ways HCT and MCH are obtained through the equipments. The results obtained in this work underline the fact that knowledge of the methodologies in the automated devices is necessary for attaining the erythrogram parameters by professionals who work in the area of hematology.

Los analizadores de hematología ofrecen varios parámetros que se pueden obtener de maneras distintas, en conformidad con el modelo o la marca de los mismos. En el presente trabajo se estudian dos equipos automatizados, analizadores Coulter STKS y Sysmex XE-2100D, y se evalúan de manera comparativa los parámetros del eritrograma en 383 personas elegidas al azar, en el Hospital de Clínicas, de la Universidade Federal do Paraná, Curitiba, Brasil. Todos los parámetros estudiados, excepto la CHCM, presentaron un buen coeficiente de correlación entre los dos equipos. Los parámetros hematocrito (HCT), volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM) presentaron menos de 4% de error entre los valores promedio, sin embargo, con significación estadística (ANOVA). El VCM y el CHCM presentaron alto grado de imprecisión (1-R²), que podría explicarse por las diferentes formas que HCT y VCM son obtenidos por los equipos. Los resultados obtenidos en este trabajo destacan la necesidad del conocimiento de las metodologías en los dispositivos automáticos para la obtención de los parámetros del eritrograma, por parte de los profesionales que trabajan en el área de hematología.

Prevalence of H. pylori infection was determined using cultures of gastric biopsy samples of patients attended at the academic hospital of the Federal University of Paraná, Curitiba, Paraná, Brazil. Molecular methods were used to characterize the cagA and vacA genes from bacterial isolates associated with different diseases presented by patients. Out of a total of 81, forty-two gastric biopsy samples tested were positive for H. pylori, with a prevalence of 51.9%. No significant difference was found with regard to the gender (p=0.793) and age (p=0.183) of the patients. Genotype s1m1 vacA gene was found in 67% of the cases of peptic ulcer investigated (p=1.0), despite the limited number of patients with this disease (n=3). A correlation between the presence of less virulent strains (s2m2) and reflux esophagitis was found in the majority of the cases (45%), but without statistical significance. An association between the prevalence of cagA gene, found in 92% of isolates, and peptic ulcer was not observed (p=1.0), suggesting that this gene cannot be considered a specific marker of severity in our environment. The results reinforce the importance of conducting regional studies and the need to characterize H. pylori virulence genes associated with different diseases.

INTRODUÇÃO: A utilização correta de um plasma-controle para a comparação com o plasma do paciente nos testes de coagulação é fundamental para a garantia de um resultado seguro dessas provas laboratoriais. OBJETIVO: O presente estudo analisou a viabilidade do uso de um pool de plasma caseiro, realizado com cinco (P5) e 20 (P20) amostras a partir de pacientes normais, para ser utilizado como controle normal do tempo de tromboplastina parcial (TTP). MATERIAL E MÉTODO: Os dois pools de plasma caseiro foram analisados em relação a um controle normal comercial (AP). Foram 10 dias de experimento e a cada dia os dois pools caseiro eram feitos. Para cada dia foi feito o TTP de P5, P20 e AP. Todos os pacientes com solicitação de TTP, em cada dia do experimento, tiveram a relação de tempos (R) determinada frente a P5, P20 e AP. As ferramentas estatísticas utilizadas foram média (X), análise de variância e teste de Tukey. RESULTADOS: A análise estatística demonstrou que os valores de TTP são significativamente diferentes entre AP e P5 e entre AP e P20, mas não há diferença significativa entre P5 e P20. Quando a relação de tempos foi analisada, não houve diferença significativa entre AP, P5 e P20. CONCLUSÃO: O estudo demonstrou que pode ser utilizado como controle normal um pool de plasma caseiro, feito a partir de cinco ou 20 amostras.

INTRODUCTION: Proper utilization of plasma control for comparison with the plasma of patients with coagulation tests is critical to ensure a safe outcome of these laboratory tests. OBJECTIVE: The purpose of this work was to know if in-house preparations of polled plasma can be used as a normal control of partial thromboplastin time (PTT). MATERIAL AND METHOD: We make two polled plasma, one with five (P5) samples and another with 20 (P20) samples, both of them from normal patients. Both pooled plasma were analyzed in comparison with a commercial lyophilized control (AP). The experiment was performed in 10 days, and P5 and P20 were made daily. At each day PTT was performed for P5, P20 and AP. All patients who asked for TTP, in each day of this experience, got a time relation (R) determined by a P5, P20 e AP. Tukey test was used as statistical analysis. RESULTS: Statistically significant differences were detected among the PTT for AP and P5, AP and P20, but no difference between P5 and P20 was observed. When the time relations were tested, there were no significant difference, among AP, P5, and P20. CONCLUSION: We found that in-house preparations of polled plasma (P5 and P20) can be used as a normal control of PTT.

OBJETIVO: Determinar se a termografia infravermelha é capaz de detectar com precisão a perda de perfusão tecidual em áreas de parênquima esplênico. MÉTODOS: Cinco porcos Landrace pesando entre 12 a 15 kg, após medicação pré-anestésica intramuscular e anestesia por infusão endovenosa, foram submetidos a quatro etapas de ligaduras sequenciais, dos vasos arteriais para o pólo inferior do baço: 1-vasos do ligamento esplênico; 2-ramo da artéria esplênica para o pólo inferior; 3-ramo arterial para o pólo inferior na face visceral do órgão; 4-parênquima esplênico dividindo o órgão. As imagens foram captadas por câmera Therma CAM SC500 instalada a 50 centímetros da superfície do órgão. As temperaturas foram medidas na região proximal (vascularizada) e na região distal (isquêmica), em três áreas circulares distintas de cada região através do software SAT Report, antes e após cada etapa de ligaduras, constituindo cinco grupos de medidas: tempo 0 = antes da etapa 1; tempo 1 = após etapa 1; tempo 2 = após etapa 2; tempo 3 = após etapa 3; tempo 4 = após etapa 4. RESULTADOS: Houve manutenção da temperatura da região proximal (vascularização preservada) durante todos os tempos de desvascularização. A temperatura da região distal (desvascularizada) iniciou queda a partir da primeira ligadura e tornou-se estatisticamente menor que a da região proximal a partir da ligadura 3 (Etapa 3). Houve diferença estatisticamente significativa entre as temperaturas proximais e distais do órgão na medida em que foram sendo realizadas as ligaduras vasculares. CONCLUSÃO: A termografia infravermelha foi capaz de distinguir com precisão áreas de parênquima esplênico com vascularização preservada de áreas isquêmicas e pode contribuir para a avaliação da viabilidade de órgãos sólidos.

OBJECTIVE: To determine if infrared thermography is capable of precisely detecting loss of tissue perfusion in the spleen during a partial splenectomy. METHODS: Five Landrace pigs, weighing between 12 and 15 kg, after intramuscular pre-anesthetic medication and intravascular infusion anesthesia, were submitted to four sequential vascular interruption steps of the arterial vessels to the lower splenic pole: 1-vessels of splenic ligament; 2-splenic artery branch to the lower pole; 3-arterial branch to the lower pole on the organ visceral surface; 4-splenic parenchyma, splitting the organ. The images were captured by a Therma CAM SC500 camera 50 centimeters from the organ surface. The parenchymal temperatures were measured from the proximal (irrigated) areas and from the distal (ischemic) areas in three distinct circle regions of each area using SAT Report software, before and after each vessels interruption step, establishing five groups of measurement times: time 0 = before interruption step 1; time 1 = after interruption step 1; time 2 = after interruption step 2; time 3 = after interruption step 3; time 4 = after interruption step 4. RESULTS: Proximal area temperatures (preserved vessels) remained stable during all the vessel interruption steps. The temperature of the distal area (compromised vessels), as compared to the proximal area, dropped continually throughout the sequential interruption steps and became statistically lower after interruption step 3 (time 3). There was a statistical difference between the proximal and distal temperatures of the organ as the vascular structures were being interrupted in each step. CONCLUSION: Infrared thermography is capable of precisely distinguishing irrigated splenic parenchyma from the ischemic areas and can contribute to the evaluation of solid organ viability.

A produção de ciclodextrina glicosiltransferase (EC2.4.1.19, CGTase) de B. firmus isolada de solo de Curitiba, PR, foi otimizada com o uso de modelo estatístico fatorial. Foi estudado o efeito de componentes no meio básico bem como pH inicial e temperatura na produção da enzima. O modelo de fatorial 2k-1 foi usado. A atividade da CGTase foi monitorada pelo método colorimétrico com alaranjado de metila. Houve produção da CGTase quando a fonte de carbono era amido e beta-CD, mas quando galactose, lactose, sacarose e maltose foram usadas, nγo houve nenhuma produηγo de enzima. A produηão de CGTase foi a mesma com a fonte de nitrogênio orgânico ou inorgânico. A atividade da CGTase diminuiu 2 vezes quando a temperatura de incubação foi aumentada de 28 a 37 ° C, e diminuiu 2,1 vezes quando o pH inicial foi abaixado de 10,3 a 7,4. As determinações colorimetricas de alfa e beta - CD foram analisadas como regressão não linear e a constante de equilíbrio para os complexos alfa -CD/alaranjado de metila e beta -CD/fenolftaleina foram 7,69 x 10³ L/mol e 2,33 x 10³L/mol, respectivamente.

Cyclodextrin glycosyltransferase (EC 2.4.1.19, CGTase) production from B. firmus, isolated from soil of Curitiba, PR, was optimized in shake flask using an experimental design approach. The CGTase was produced when the carbon source was starch and beta-CD, but when simple sugars such as glucose, galactose, lactose, sucrose, and maltose were used, there was no enzyme production. CGTase production was the same with either organic nitrogen or inorganic nitrogen source. CGTase activity decreased 2-fold when incubation temperature was increased from 28 to 37 ° C, and decreased 2.1- fold when the initial pH was lowered from 10.3 to 7.4. The colorimetric determinations of alpha - and beta -CD were analyzed as a non-linear relationship and the equilibrium constant for alpha -CD/methyl orange and beta -CD/phenolphthalein complexes were 7.69 x 10³ L / mol and 2.33 x 10³ L/ mol, respectively.

A membrana eritrocitária contém as proteínas do citoesqueleto, e proteínas integrais, imersas na bicamada lipídica, todas importantes para a manutenção da integridade e da forma celular. Neste trabalho, estudou-se 14 pacientes portadores de doença hemolítica, atendidos no Centro de Hematologia e Hemoterapia do Paraná (HEMEPAR) em relação a grupo controle de 20 voluntários saudáveis. Amostras de sangue venoso foram coletadas em citrato-fosfato-dextrose (CPD). Após o isolamento das membranas [Dodge et al., Arch. Biochem. Biophys. 100:199, 1963] e a determinação da concentração de proteínas [Lowry et al., J. Biol. Chem. 193: 265, 1951], as proteínas foram submetidas à eletroforese vertical em SDS-Page [Laemmli, Nature 227: 680, 1970]. Os valores obtidos no grupo controle (%; n = 10), foram: espectrinas = 29,67 ± 4,14; anquirinas = 3,97 ± 1,84; banda 3 = 38,70 ± 4,96; banda 4.1 = 6,79 ± 1,60; banda 4,2 = 5,00 ± 1,43; banda 4.5 = 1,89 ± 0,96; banda 4,9 = 1,83 ± 1,22; banda 5 = 6,54 ± 3,13; banda 6,0 = 2,70 ± 1,24; banda 7,0 = 2,36 ± 1,33. Os valores médios para os portadores de esferocitose foram 24,4% para espectrina e 35,8% para banda 3 (teste t; p < 0,05). A observação de esferócitos ou eliptócitos no sangue periférico, associados a um perfil eletroforético com deficiência de espectrina e/ou proteína 3 sugere esferocitose ou eliptocitose hereditária, respectivamente. Portadores assintomáticos de defeitos moleculares de membrana eritrocitária podem ser também detectados através de SDS-Page.

The erythrocyte membrane contains a net of proteins, forming the cell backbone, and the integral proteins, immerging in the lipid bilayer, both important for the integrity maintenance and for the cellular activity. We studied 14 patient carriers of hemolytic diseases, assisted in the Centro de Hematologia e Hemoterapia do Paraná (HEMEPAR) in relation to control group of 20 healthy volunteers. Samples of venous blood were collected in citrate-phosphate-dextrose (CPD). The membranes were isolated [Dodge et al., Arch. Biochem. Biophys. 100:199, 1963], the protein concentration was determined [Lowry et al., J.Biol.Chem. 193: 265, 1951] and were submitted to the vertical electrophoresis (SDS-Page) [Laemmli, Nature 227: 680, 1970]. The values obtained in the control group (%; n = 10) were: spectrins = 29.67 ± 4.14; ankyrins = 3.97 ± 1.84; band 3 = 38.70 ± 4.96; band 4.1 = 6.79 ± 1.60; band 4.2 = 5.00 ± 1.43; band 4.5 = 1.89 ± 0.96; band 4.9 = 1.83 ± 1.22; band 5 = 6.54 ± 3.13; band 6.0 = 2.70 ± 1.24; band 7.0 = 2.36 ± 1.33. The mean value for the spherocytosis carriers was 24.4% for spectrin and 35.8% for band 3, (t tests; p <.0.05). The observation of blood spherocytes or elliptocytes, associated to an electrophoretic profile with deficiency of spectrin or band 3 suggests spherocytosis or hereditary elliptocytosis, respectively. Assimptomatic carriers of erythrocyte membrane molecular abnormalities can also be detected through SDS-Page.