Este estudo in vitro avaliou comparativamente, por meio de tomografia computadorizada (TC), a quantidade de dentina removida das paredes do canal radicular utilizando-se as técnicas de preparo manual e automatizada de instrumentação rotatória. Foram selecionados 40 incisivos inferiores com coroa dental e um único canal. Os dentes foram divididos aleatoriamente em 2 grupos, de acordo com a técnica empregada para o preparo dos canais radiculares: Grupo I - técnica manual com limas manuais de aço inoxidável e Grupo II - técnica automatizada de movimentos rotatórios RaCe com limas de níquel-titânio. Em cada dente, procedeu-se à mensuração (em mm) da espessura da dentina radicular nas faces vestibular, lingual, mesial e distal dos terços apical, médio e cervical por meio de tomografia computadorizada multislice (Siemens Emotion, Duo). Os dados coletados foram armazenados utilizando-se os softwares SPSS versão 11.5 e SigmaPlot 2001 v. 7.101 (SPSS Inc.). Após a abertura coronária, o comprimento de trabalho foi estabelecido, os canais radiculares foram instrumentados e novas tomadas de tomografia computadorizada foram realizadas para mensuração da espessura das paredes dentinárias radiculares. Os dados obtidos antes e após o preparo biomecânico dos canais foram comparados. Os resultados foram estatisticamente por meio de análise de variância (ANOVA) com localização de diferenças post hoc de Tukey (p=0,05). Com base nos achados desse estudo, pode-se concluir que: com relação à remoção de dentina das paredes dos canais radiculares durante a instrumentação nenhuma das técnicas avaliadas pode ser apontada como mais efetiva que a outra.