Abstract in Portuguese:

O número de artigos de pesquisa (128 artigos) sobre micotoxinas publicados por pesquisadores brasileiros em 1991-2000 superou a soma de artigos (85 artigos) publicados nas três décadas anteriores (1961-1990). Trinta por cento das publicações foi levantamento da ocorrência de micotoxinas em alimentos e rações. Aflatoxinas em amendoim e produtos de amendoim continua sendo um problema alarmante, e a alta incidência e níveis elevados de fumonisinas em milho e produtos de milho também parecem ser um problema sério. A contaminação com outras micotoxinas, como zearalenona, ocratoxina A e tricotecenos, foi baixo. A ocorrência de aflatoxina M1 em leite e laticínios e de patulina em suco de maçã precisa ser verificada, pois, há uma certa divergência nos resultados. Trabalhos sobre os métodos analíticos, estudos micológicos e efeitos tóxicos constituíram 16, 13 e 13%, respectivamente, dos artigos publicados na década avaliada. A busca de meios de prevenção/controle da contaminação fúngica e produção de micotoxinas aumentou notadamente, perfazendo 27% dos artigos, incluindo investigações sobre fatores influentes (por exemplo, resistência de genótipos, conteúdo/atividade de água, umidade relativa, temperatura, presença de metais, tipo de solo, infestação com inseto) e o potencial antagônico de outros microrganismos contra os fungos produtores de micotoxinas. Os efeitos de extrato de planta, flavonóides, fungicidas e outros químicos, sacos utilizados para estocagem, adsorventes e processamento de alimentos foram também estudados. Portanto, apesar das limitações de recursos, a pesquisa brasileira responde as necessidades do país, reflete as preocupações internacionais e os desenvolvimentos recentes na área.

Abstract in English:

The number of research papers (128 papers) on mycotoxins published by Brazilian researchers in 1991-2000 surpassed the total number (85 papers) published in the preceding three decades (1961-1990). Thirty percent of the papers surveyed mycotoxins in foods and feeds. AFs in peanut and peanut products continued to be alarming, and high incidence and levels of FBs in corn and corn products also appeared as a serious problem. Contamination with other toxins, such as ZEA, OTA and trichothecenes, was low. Occurrence of AFM1 in milk and dairy products and patulin in apple juice needs to be verified as the results are somewhat diverging. Work on analytical methods, mycological examination and toxic effects constituted 16, 13 and 13%, respectively, of the published papers in the decade assessed. Attempts to find means of preventing/controlling fungal growth and mycotoxin production notably increased, making up 27% of the papers, including investigations on influencing factors (e.g. genotype resistance, water content/a w, relative humidity, temperature, presence of metals, type of soil, mite infestation) and antagonistic potential of other microorganisms against mycotoxin-producing fungi. Effects of plant extract, flavonoids, fungicides and other chemicals, storage bag material, adsorbents, cooking and processing of food were also studied. Thus, notwithstanding constraints on resources, Brazilian research responds to the needs of the country, reflects international concerns and recent developments in the area.

Abstract in Portuguese:

Este trabalho teve como objetivo estudar o conteúdo de aflatoxina em frações granulométricas de milho obtidas após peneiragem de trinta amostras, de 3,0 kg cada, sabidamente contaminadas com aflatoxinas. As amostras foram passadas por peneiras com crivos redondos de 4,5 mm obtendo-se as frações com partículas ³ 4,5 mm (fração A) e < 4,5 mm (fração B), que foram analisadas para presença de aflatoxinas através da cromatografia de camada delgada. Os resultados mostraram que a distribuição da concentração de aflatoxinas entre as frações granulométricas A e B variou de amostra para amostra de milho. Contudo, a fração B apresentou maior conteúdo (6 a 1.422 µg/kg) de aflatoxina (P<5%) a fração A (4 a 389 µg/kg). Apesar disso, a segregação desta fração não diminuiu significativamente a contaminação da amostra. Isto ocorreu provavelmente porque a contribuição da fração B para o total estimado da concentração de aflatoxina da amostra foi menor que o da fração A, devido à menor quantidade da fração B no peso da amostra total. Apesar de ser significativa para as amostras estudadas, a correlação entre as percentagens dos grupos de grãos com defeitos, a) grãos ardidos, brotados, queimados e mofados e b) avariados totais, com o nível de contaminação estimado para as amostras, mais estudos serão necessários para que conclusões mais consistentes possam ser tiradas desta correlação.

Abstract in English:

The efficiency of segregation, by particle size, in reducing the aflatoxin content of corn lots under the Brazilian conditions was studied. The aflatoxin content, in the corn fractions obtained after sieving thirty contaminated samples, with approximately 3.0 kg each, was determined. The samples were passed through 4.5 mm round-hole sieves and the fractions with particles ³4.5 mm (fraction A) and <4.5 mm (fraction B) and then analyzed for aflatoxins by TLC. The results showed that the distribution of the aflatoxins among the fractions A and B varied from sample to sample. However, the fraction B presented higher content (6 to 1,422 µg/kg) of aflatoxins (P<5%), than samples of fraction A (4 to 389 µg/kg). In spite of that the segregation of this fraction did not reduce significantly the contamination of the samples. This probably occurred because the contribution of the fraction B for the estimated total of the concentration of aflatoxin of the sample was smaller than that of the fraction A, due to the smallest amount of the fraction B in the sample weight total. In spite of being significant for the studied samples the correlation among the percentages of the groups of grains with defects a) burning grains, sprouted, burned and moldy and b) total injured, with the estimated level of contamination for the samples, more studies will be necessary so that better conclusions can be drawn for this correlation.

Abstract in English:

The morphology of Streptomyces olindensis (producer of retamycin, an antitumor antibiotic) grown in submerged culture was assessed by image analysis. The morphology was differentiated into four classes: pellets, clumps (or entangled filaments), branched and unbranched free filaments. Four morphological parameters were initially considered (area, convex area, perimeter, and convex perimeter) but only two parameters (perimeter and convex perimeter) were chosen to automatically classify the cells into the four morphological classes, using histogram analysis. Each morphological class was evaluated during growth carried out in liquid media in fermenter or shaker. It was found that pellets and clumps dominated in early growth stages in fermenter (due to the inoculum coming from a shaker cultivation) and that during cultivation, the breakage of pellets and clumps caused an increase in the percentage of free filaments. The criteria of morphological classification by image analysis proposed were useful to quantify the percentage of each morphological class during fermentations and may help to establish correlations between antibiotic production and microorganism morphology.

Abstract in Portuguese:

A relação entre o crescimento fúngico e o teor de ergosterol e entre a produção de aflatoxinas B1 e B2 e o teor de ergosterol foi verificada em milho em grãos. No primeiro experimento, o crescimento fúngico e o conteúdo de ergosterol foram monitorados durante incubação das amostras de milho com 0,85 e 0,92 de atividade de água (Aa) a 25ºC por um período de 18 dias. Para a variedade Taiúba o crescimento fúngico e o conteúdo de ergosterol aumentaram mais rapidamente a 0,92 de Aa do que a 0,85 de Aa. Os níveis máximos de ergosterol atingidos foram 2,8 e 4,6 µg/g, respectivamente, para 0,85 e 0,92 de Aa. Para o híbrido Cargill 606, um crescimento fúngico mais pronunciado foi verificado somente ao final do período de incubação principalmente na Aa de 0,92, quando também verificou-se um acentuado aumento do teor de ergosterol. Os níveis máximos de ergosterol detectados foram 1,6 µg/g e 5,8 µg/g, respectivamente, para as Aa de 0,85 e 0,92. Para as duas amostras verificou-se uma correlação positiva nos dois meios de cultura utilizados entre o conteúdo de ergosterol e a contagem total de unidades formadoras de colonias (UFC) g-1 de grãos na Aa de 0,92 mas não na de 0,85. No 2º experimento, amostras de milho da variedade Taiúba com 0,87 e 0,95 de Aa foram inoculadas com uma cepa toxigênica de Aspergillus flavus e incubadas a 25ºC. Os níveis de ergosterol alcançaram valores máximos de 12,1 e 73,4 µg/g, respectivamente, para as Aa de 0,87 e 0,95. Em ambas Aa testadas, a produção de aflatoxinas e o teor de ergosterol apresentaram as mesmas tendências, ou seja, o aumento nos níveis de ergosterol foi acompanhado pelo aumento na produção da aflatoxina B1. Para a aflatoxina B2 essa tendência não foi observada.

Abstract in English:

The relationships between fungal growth and ergosterol content and between aflatoxins B1 and B2 production and ergosterol content were verified in corn grains. In the first experiment, fungal growth and ergosterol content were monitored during incubation of corn grains presenting water activities of 0.85a w and 0.92a w at 25ºC over a period of 18 days. For the Taiúba variety, the fungi growth and ergosterol content increased more rapidly for 0.92a w than 0.85a w. Maximum ergosterol levels were 2.8 and 4.6 µg/g, respectively, for 0.85a w and 0.92a w. For the Cargill hybrid 606, a more pronounced increase in fungal growth was verified just at the end of the incubation period, mainly for 0.92a w when an acentuated increase in ergosterol content was also observed. Maximum ergosterol levels detected were 1.6 µg/g and 5.8 µg/g, respectively, for 0.85a w and 0.92a w. There was a significant correlation between ergosterol content and log of CFU g-1 for 0.92a w but not for 0.85 a w. In the second experiment, samples of corn grains of the Taiúba variety at 0.87a w and 0.95a w were inoculated with a toxigenic Aspergillus flavus strain and incubated at 25ºC. Ergosterol levels reached maximum values of 12.1 and 73.4 µg/g, respectively, for 0.87a w and 0.95a w. In both water activities, content aflatoxin B1 followed the same trend as ergosterol. For the aflatoxin B2 this trend was not observed. Ergosterol assay appears to be a useful test to measure fungal growth and to indicate the possibility of aflatoxin production in corn grains.

Abstract in Portuguese:

Comparou-se o desempenho de três meios de cultura na determinação das concentrações inibitórias mínimas (CIMs) de dois antifúngicos frente a 48 amostras de C. neoformans. Para anfotericina B, os meios empregados foram o Caldo RPMI 1640, indicado como referência pelo NCCLS, o Yeast Nitrogen Base (YNB-1) indicado por Ghannoum et al., o Antibiotic Medium 3 (AM3) utilizado por vários autores e o YNB-2, sugerido por nós, que é o mesmo YNB-1, todavia, adequado à técnica preconizada pelo NCCLS. Para a anfotericina B, a mais ampla faixa de CIMs (0,125-1,0 mg/ml) foi obtida no YNB-1; os intervalos de CIMs obtidos no caldo RPMI 1640 e no YNB-2 foram muito similares enquanto que o AM3 evidenciou pequenas variações nas CIMs. Para os testes com o fluconazol utilizou-se o RPMI 1640 e o YNB-1; novamente, o mais amplo intervalo de CIMs, assim como as CIMs mais elevadas, foram observados no YNB-1; as variações de CIM 50% foram de 2,0 mg/ml no RPMI 1640 e 4,0 mg/ml no YNB-1. Os resultados obtidos permitem concluir que: o RPMI 1640 suplementado com dextrose 2% permite um bom crescimento em 48h de incubação; o YNB recomendado por Ghannoum et al. fornece faixas de CIMs mais amplas; que o AM3 forneceu estreito intervalo de CIMs para a anfotericina B e que o YNB-2 utilizado nos testes com anfotericina B, evidenciou resultados muito semelhantes aos do caldo RPMI 1640.

Abstract in English:

This study compared the performance of three culture media used for the determination of minimal inhibitory concentration (MIC) of amphotericin B and fluconazole against 48 Cryptococcus neoformans strains. For amphotericin B the media employed were RPMI 1640 medium, as indicated by NCCLS as reference, Yeast Nitrogen Base (YNB) as proposed by Ghannoum et al. (YNB-1), Antibiotic medium 3 (AM3) indicated by others, and YNB as proposed by us (YNB-2). In YNB-1, amphotericin B showed broader MIC ranges, varying from 0.125 µg/ml to 1.0 µg/ml; in RPMI 1640 medium and YNB-2 the MICs were similar and in AM3 the MIC ranges were narrower. The same pattern was observed for MIC 90%. For fluconazole the media employed were RPMI 1640 and YNB-1. The MIC ranges were broader and elevated when YNB-1 was employed. MIC 50% were 2.0 µg/ml in RPMI 1640 medium and 4.0 µg/ml in YNB-1. Our results indicate that RPMI 1640 supplemented with 2% glucose allowed a good growth at 48h; YNB as recommended by Ghannoum et al. provided a broader MIC range, AM3 provided a narrow MIC range for amphotericin B, and YNB-2 was very similar to RPMI 1640 medium.

Abstract in Portuguese:

Os meios de Murashige e Skoog, Hoagland, Arnon e White, suplementados ou não com sacorose, e tendo como substratos vermiculita, ágar ou natrosol foram utilizados para avaliar seus efeitos sobre o desenvolvimento da batata doce, c.v. White Star, e sua colonização por Glomus etunicatum Becker & Gerd. (isolado INVAM FL S329). A adição de sacorose (3%) ao meio não afetou o desenvolvimento da planta, porém reduziu o crescimento das hifas de G. etunicatum e a colonização das raízes. A concentração de nutrientes dos meios utilizados mostrou efeitos contrastantes entre altura da planta, crescimento das hifas e colonização das raízes por G. etunicatum. A alta concentração de nutrientes no meio Murashige e Skoog estimulou o crescimento das plantas, reduziu o desenvolvimento das hifas e inibiu a colonização das raízes pelo fungo micorrízico. Plantas desenvolvidas em vermiculita mostraram maior desenvolvimento e maior colonização das raízes que as desenvolvidas em agar ou natrosol. Os resultados indicam que o desenvolvimento e a colonização "in vitro" da batata doce micropropagada é afetada pela composição do meio e pelo tipo de substrato.

Abstract in English:

Nutrients media (Murashige & Skoog, Hoagland & Arnon and White's media) supplemented or not with sucrose and substrates (vermiculite, agar and natrosol) were tested for their effects on plant development and root colonization of micropropagated sweet potato, cv. White Star, by Glomus etunicatum Becker & Gerdemann (isolate INVAM FL S329). Addition of sucrose (3%) did not affect plant development. However, hyphal growth and root colonization were depressed. Contrasting responses to media nutrient concentration were observed for plant height, root colonization, and hyphal growth. The highest concentration of nutrients in Murashige & Skoog medium improved plant development, but this medium decreased hypha growth and inhibited root colonization. Plants growing in vermiculite substrate had higher (p£0.05) development and mycorrhizal root colonization than those growing in agar or natrosol. The results indicate that colonization of micropropagated sweet potato by arbuscular mycorrhizal fungi is affected by media composition and type of substrate.

Abstract in Portuguese:

A qualidade do solo foi avaliada após a incorporação de matéria orgânica e microrganismos eficazes (EM) em solo franco argiloso coletado em cultivos protegidos em Aranjuéz (Madrid). Os tratamentos constaram de solo (controle); solo + 50 ton./ha de esterco de animal (E50); E50 + EM (E50EM); solo + 30 ton/ha de restos de cultivos + plantas invasoras (RC30); RC30 + 30l/ha EM (RC30EM). Amostras de solo dos tratamentos foram tomadas após o tratamento, antes e após a incubação e analisadas usando os parâmetros físico-químicos e microbiológicos. Observou-se aumento significativo na produção de polissacarídeos, nas atividades enzimáticas esterases e fosfatases alcalina principalmente, nos tratamentos E50EM e RC30EM, sendo diretamente correlacionadas com a humificação da matéria orgânica, com a capacidade de campo e com a capacidade de intercâmbio catiônico. A partir desses resultados, pode se concluir que o solo tratado com microrganismos eficazes teve intensa atividade biológica, contribuindo para uma mais rápida humificação da matéria orgânica fresca e melhorando as propriedades fisico-química do solo, destacando os parâmetros microbiológicos como indicadores precoces de recuperação da qualidade do solo.

Abstract in English:

The soil quality was evaluated following the addition of organic matter and microorganisms to a clay loam soil collected in Aranjuez (Madrid) under controlled conditions of temperature and moisture, and over a period of three months. The following treatments were carried out: soil (control); soil + 50 t/ha of animal manure (E50); soil + 50 t/ha of animal manure + 30l/ha of effective microorganisms (E50EM); soil + 30 t/ha of combination of various green crop residues and weeds (RC30) and soil + 30 t/ha of combination of various green crop residues and weeds + 30l/ha of effective microorganisms (RC30EM). The soil samples were taken before and after the incubation and analysed using physical, chemical and microbiological parameters. A significant increase in the production of polysaccharides and alkaline phosphatase and esterase enzymes in the treatments E50EM and RC30EM was observed, being in direct correlation with the humification of the organic matter, with the water retention at field capacity, and with the cationic exchange capacity (CEC). It can be concluded that the incorporation of microorganisms EM potentialized the soil biological activity and improved physico-chemical soil properties, contributing to a quick humification of fresh organic matter. Those findings were proved by microbiological activities of exopolysaccharides by alcaline phosphatase and esterase enzymes, which can be used as earlier and integral soil health indicators.

Abstract in Portuguese:

O protozoário Cryptosporidium é um importante patógeno contaminante de água, causador de surtos de gastroenterite em vários países. Na tentativa de compreender e monitorar o significado desse patógeno em amostras ambientais, vários métodos foram desenvolvidos para o isolamento e identificação de oocistos de Cryptosporidium. O objetivo deste trabalho foi realizar a primeira investigação da presença de oocistos de Cryptosporidium em águas de esgoto e de córrego no município de São Paulo. Os oocistos foram concentrados por floculação e por filtração em membrana. Os resultados indicaram a ocorrência de Cryptosporidium em todas as amostras analisadas, indicando um potencial risco de disseminação desse patógeno no ambiente aquático e também na comunidade.

Abstract in English:

The protozoan parasite Cryptosporidium has emerged as one of the most important contaminants of water, causing waterborne outbreaks of gastroenteritis worldwide. To monitor and understand the public health significance of this pathogen in environmental samples, several methods have been developed to isolate and detect Cryptosporidium oocysts. The purpose of this study was to perform the first investigation on the presence of Cryptosporidium spp. oocysts in raw sewage and creek water in the city of São Paulo, Brazil. The oocysts were concentrated by flocculation and membrane filtration. The results showed the occurrence of Cryptosporidium spp. in all wastewater samples analyzed, indicating a possible risk for dissemination of these pathogens in aquatic environment and in the community.

Abstract in Portuguese:

O sistema SimPlate™ TPC CI é um método rápido para enumeração de microrganismos aeróbios mesófilos (MAM) em alimentos que utiliza a resazurina como substância indicadora de crescimento bacteriano. Para avaliar sua eficiência em leite pasteurizado, 142 amostras (38 de leite tipo A, 43 de leite tipo B e 61 de leite tipo C) foram colhidas em Londrina, PR, e analisadas pelo SimPlate™ TPC CI e pelo método de contagem em placas com ágar padrão de contagem (PCA). As placas de ambos os sistemas foram incubadas a 35ºC e as leituras realizadas em 24 e 48h. Também foi verificada a presença de resultados falso-positivos e falso-negativos bem como a microbiota láctea predominante nas cavidades do SimPlate™ TPC CI e a capacidade redutora dos diversos grupos de microrganismos. Os resultados foram comparados através de correlação simples e variância média. Considerando a leitura em 24h do SimPlate™ TPC CI, os resultados obtidos apresentaram uma correlação (r) de 0,6811 (var. média: 0,7583) com os resultados do método padrão; na leitura em 48h, a correlação encontrada entre os dois métodos foi de 0,9126 (var. média: 0,0842). Considerando os diferentes tipos de leite, as leituras em 48h do SimPlate™ TPC CI apresentaram as seguintes correlações com o método padrão: leite tipo A, r: 0,9285 (var. média: 0,0817); leite tipo B, r: 0,9231 (var. média: 0,0466); leite C, r: 0,7209 (var. média: 0,1082). Nas amostras com altas contagens de MAM, verificou-se uma maior freqüência de cavidades falso-negativas e uma grande participação de microrganismos Gram positivos, que são pobremente detectados pelo sistema SimPlate™ TPC CI por crescerem lentamente e possuírem baixa capacidade redutora. Os resultados indicaram um melhor eficiência do sistema SimPlate™ TPC CI na leitura em 48h, além da influência direta da qualidade do leite analisado, ou seja, quanto melhor a qualidade microbiológica do leite, melhor o desempenho do sistema. A alta correlação entre os métodos indica que o SimPlate™ TPC CI pode ser utilizado como uma alternativa viável ao método padrão de contagem de MAM em leite pasteurizado tipos A e B, desde que a leitura seja realizada em 48h.

Abstract in English:

The SimPlate™ TPC CI system is a rapid method to count mesophilic aerobic microorganisms (MAM) in foods, based on the use of resazurine to indicate bacterial growth. Its efficiency in pasteurized milk was evaluated using 142 pasteurized milk samples (38 type A, 43 type B and 61 type C) collected in Londrina, PR. The standard plating method, using Plate Count Agar (PCA) was used for comparison. The plates of both systems were incubated at 35ºC and read after 24h and 48h. The occurrence of false-positive and false-negative wells and the predominant microorganisms in them were also evaluated. The results were compared by simple correlation and mean variance analyses. The correlation (r) and mean variance values were 0.6811 and 0.7583 for the results obtained after 24h, respectively, and 0.9126 and 0.0842 for the results obtained after 48h, respectively. These results indicate that the performance of the system increases when the plates are incubated for 48h. When the three types of milk were evaluated separately, these values were 0.9285 and 0.0817 for type A milk, 0.9231 and 0.0466 for type B milk and 0.7209 and 0.1082 for type C milk. These results indicate that the better the quality of the milk the better the performance of SimPlate™ TPC CI. False-negative wells, found more frequently in samples with high MAM counts, were caused by Gram positive microorganisms, poorly detected by the SimPlate™ TPC CI system because they grew slowly and had low reduction capacity. The results indicated a higher efficiency of the SimPlate™ TPC CI system in the reading at 48h.

Abstract in Portuguese:

O Readycult™ - LMX é um método rápido, que permite resultados em 24h para detecção de coliformes totais e Escherichia coli. Indicado para detecção destes microrganismos em água, baseia-se em reações de enzimas específicas dos coliformes com nutrientes-indicadores do meio. O objetivo deste trabalho foi estudar sua utilização para enumeração de coliformes e E. coli em leite. 125 amostras de leite cru e pasteurizado coletadas na cidade de Londrina, PR, Brasil, foram submetidas à determinação do Número Mais Provável (NMP) de coliformes totais e E. coli pela técnica de tubos múltiplos, utilizando-se simultaneamente o Caldo Lactosado Bile Verde Brilhante (CLBVB) e o Readycult™ - LMX. A análise estatística indicou uma correlação entre os resultados obtidos pelos dois métodos de 0,8224 para coliformes totais e de 0,8603 para E. coli. Observou-se que o Readycult™ - LMX e o CLBVB deram resultados semelhantes, mas o Readycult™ - LMX foi mais fácil de ser utilizado. Além disso, os resultados foram mais rapidamente obtidos (24h).

Abstract in English:

Readycult™ - LMX is a rapid method to test for the presence of total coliform bacteria and Escherichia coli in water, giving results in 24h. It is based on reactions of specific microbial enzymes or indicator nutrients of the medium. The goal of this paper was to study the use of Readycult™ - LMX to detect total coliform and E. coli in milk. One hundred twenty five samples of pasteurized and raw milk, collected in Londrina, PR, Brazil, were tested simultaneously by the most probable number (MPN) method using Brilliant Green Bile Lactose Broth (2%) (BRILA) and Readycult™ - LMX. The Readycult™ - LMX test was evaluated for sensitivity, simplicity, and speed of results. There was a significant correlation between the results obtained by the two methods for total coliforms (r: 0.8224) and for E. coli (r: 0.8603). The two methods yielded similar results, but Readycult™ - LMX was easier to use. In addition, results were available as early as 24h.

Abstract in Portuguese:

Escherichia coli O157:H7 causa colite hemorrágica que pode evoluir para síndrome urêmica hemolítica e síndrome púrpura trombótica trombocitopênica. Entre os alimentos mais envolvidos nos surtos causados por essa bactéria destacam-se os hambúrgueres de carne bovina. Esta pesquisa teve como objetivo determinar o valor D10 de E. coli O157:H7 em hambúrgueres e sugerir uma dose que torne o alimento seguro em relação à essa bactéria e sem alterar suas características sensoriais. Amostras de hambúrgueres industrializados foram inoculados com Escherichia coli O157:H7 e submetidos à radiação com raios gama (60Co). A temperatura média durante o processo foi de 5,6ºC. O valor D10 no hambúrguer variou de 0,17 a 0,27 kGy. Considerando o maior valor D10 obtido, a dose de 1,08 kGy seria suficiente para reduzir a população de Escherichia coli O157:H7 em 4 ciclos logarítmicos, sem que houvesse rejeição do produto pelo painel treinado de analistas.

Abstract in English:

Escherichia coli O157:H7 causes bloody diarrhoea, haemorrhagic colitis and life-threatening complications like haemolytic uremic syndrome and thrombotic thrombocitopenic purpura. Among foods associated with outbreaks caused by this pathogen, hamburger is the most common one. The aim of this research was to determine the radiation dose to reduce the population of E. coli O157:H7 in hamburgers to non-detectable levels in order to render a safer product. Hamburgers, inoculated with Escherichia coli O157:H7, were exposed to gamma radiation (60Co) treatment, with doses ranging from 0 to 0.7 kGy. The average temperature during the process was 5.6ºC. Non-inoculated hamburgers were submitted to sensory evaluation after being exposed to irradiation doses of 0.8 kGy and 1.0 kGy. The D10 for the pathogen varied from 0.17 kGy to O.27 kGy in hamburger. Considering the highest D10 value in hamburger, a dose of 1.08 kGy would be sufficient to reduce E. coli O157:H7 contamination in 4 log cycles, without affecting the sensory attributes of the product.

Abstract in Portuguese:

A produção de alfa-amilase (1,4-alfa-D-glicano glicanohidrolase, EC 3.2.1.1) por um Bacillus sp cepa SMIA-2 cultivado em meios líquidos contendo amido solúvel, alcançou o máximo em 48h com níveis de 57U/mL. Estudos sobre a caracterização de alfa-amilase revelaram que a temperatura ótima de atividade desta enzima foi 70ºC. A enzima foi estável por 2h a 50ºC, enquanto que a 60ºC, 70ºC e 90ºC, 4%, 13% e 38% da atividade original foram perdidas, respectivamente. O pH ótimo da enzima foi 7,5. Após a incubação da enzima bruta por 24h a pH 7,5 observou-se um decréscimo em torno de 5% de sua atividade original. A enzima foi fortemente inibida por Co2+, Cu2+ e Ba2+, mas foi menos afetada por Ca2+, Mg2+, Ni2+, Sr2+ e Mn2+. Em solução de NaCl 1M e 5M, a enzima reteve 70% e 47% da sua atividade original após 24h a 4ºC, respectivamente.

Abstract in English:

alpha-amylase (1,4-alpha-D-glucan glucanohydrolase, EC 3.2.1.1) production by thermophilic Bacillus sp strain SMIA-2 cultivated in liquid media containing soluble starch reached a maximum at 48h, with levels of 57U/mL. Studies on the a-amylase characterization revealed that the optimum temperature for activity was 70ºC. The enzyme was stable for 2h at 50ºC, while at 60ºC, 70ºC and 90ºC, 4%, 13% and 38% of the original activities were lost, respectively. The optimum pH of the enzyme was 7.5. After incubation of crude enzyme solution for 24h at pH 7.5, a decrease of about 5% of its original activity was observed. The enzyme was strongly inhibited by Co2+, Cu2+ and Ba2+, but less affected by Ca2+, Mg2+, Ni2+, Sr2+ and Mn2+. The enzyme in 1M and 5M NaCl solutions the enzyme retained 70% and 47% of the original activity after 24h of incubation at 4ºC, respectively.

Abstract in Portuguese:

Quatro linhagens de Rhodotorula mucilaginosa e uma linhagem padrão dessa mesma espécie foram investigadas quanto a habilidade de acumular íons de prata livres (Ag+) e complexados [Ag (CN)2-], através de processos dependentes e independentes do metabolismo. A habilidade de acumular Ag+ foi observada em ambas as células, vivas e mortas. Contudo, o acúmulo de Ag (CN)2- foi um processo estritamente dependente de energia. Durante os estudos que avaliaram a dependência de uma fonte energética para o acumulo de íons de prata livres (Ag+) foi observado que a adição de glicose resultou na diminuição do acúmulo de Ag+ por três linhagens (UFMG -- Y02, 27 and 35). Ao passo que as linhagens CBS 316 e UFMG -- Y01 apresentaram aumento do acúmulo desse metal. A analise dos resultados de biossorção através do modelo de Langmuir, sugerem que a linhagem UFMG -- Y27 possui a maior capacidade de acúmulo de prata (carga). Enquanto que a linhagem padrão CBS 316 apresentou a menor capacidade de carga e a maior afinidade por ions de prata. Analises de infra vermelho da biomassa fúngica, com e sem prata, mostraram que os grupamentos C=O foram os principais sítios de ligação desse metal pela linhagem UFMG -- Y27.

Abstract in English:

Five strains of Rhodotorula mucilaginosa were tested for the ability to accumulate free and complexed silver ions by metabolism-dependent and -independent processes. The ability to take up Ag+ was observed in both live and dead biomass, whereas silver dicyanide [Ag (CN)2-] uptake was strictly glucose dependent. In contrast to Ag (CN)2-, glucose addition inhibited by 16 to 25% the Ag+ uptake rate of living UFMG - Y02, Y27, and Y35 cells, while strains CBS 316 and UFMG-Y01 showed an improved uptake rate of about 115% and 13%, respectively. The Langmuir sorption model was used to evaluate the silver sorption capability of the R. mucilaginosa strains. The calculated q max value suggested that R. mucilaginosa strains UFMG-Y27 had the highest loading capacity. The type strain CBS 316 had the lowest q max but showed the highest affinity for silver ions. The results provided by the Fourier Transform Infra Red analysis (FTIR) suggest that C=O groups represent the main reactive site for silver uptake by the strain UFMG-Y27.

Abstract in Portuguese:

Bagaço de cana-de-açúcar foi utilizado como substrato para a produção de xilanase pelo Trichoderma harzianum Rifai, isolado previamente de peroba (Aspidosperma sp) em decomposição. Após ter sido lavado, seco e moído, o bagaço foi umedecido com meio mínimo de Vogel e autoclavado. Dois métodos de extração foram avaliados para recuperação da enzima: (A) Tween 80 0,1% em salina fisiológica (v/v) e (B) tampão acetato pH 5 (50mM) sob agitação (180rpm) durante 15, 30 e 60 minutos. Em média, foram recuperados 15U/ml de atividade xilanásica com ambos os extratores, após uma única extração, independente do tempo de agitação. Uma segunda e terceira reextrações recuperaram 10,4 e 6,6U/ml, respectivamente. O efeito de diferentes volumes de extração e a concentração de bagaço de cana para a produção da xilanase também foram investigados. A curva de crescimento de Trichoderma harzianum foi avaliada durante 20 dias e a maior atividade xilanásica (288U/ml) foi obtida no sétimo dia de cultivo. O extrato enzimático, após precipitação com sulfato de amônio, foi submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida e apresentou 4 bandas de proteína, das quais apenas uma demonstrou atividade xilanásica.

Abstract in English:

Sugarcane bagasse was used as substrate for xylanase production by means of a strain of Trichoderma harzianum Rifai isolated from decaying Aspidosperma sp. (peroba) wood. The bagasse was washed, dried, milled and wetted with minimal salts medium and the cultures grown at 28 ± 2ºC for 7 days. Two extraction methods were tested for enzyme recovery: (A) Tween 80, 0.1% (v/v), in physiological saline, and (B) 50mM sodium acetate buffer, pH 5.0, under agitation (180rpm) for 15, 30 and 60min. After a single extraction, both extraction methods recovered an average of 15U/ml of xylanase activity, independent on the time of shaking. A second and third extraction recovered 10.4 and 6.6U/ml xylanase, respectively. The effect of volume size for extraction, and sugarcane bagasse concentration, on xylanase production were also investigated. The growth profile of Trichoderma harzianum was followed over 20 days on 14% (w/v) bagasse, and highest xylanase activity (288U/ml) appeared on the seventh day. The enzymatic extract after precipitation with ammonium sulphate was submitted to electrophoresis on polyacrylamide gels and showed 4 protein-staining bands, one of which exhibited xylanase activity.

Abstract in Portuguese:

Os objetivos deste estudo foram determinar a freqüência e perfis de resistência a antimicrobianos de microorganismos associados com casos de sepsis em um hospital maternidade pública, e analisar os principais dados demográficos relacionados a estes neonatos infectados durante um período de dois anos. Analisamos 255 hemoculturas positivas e prontuários médicos de neonatos admitidos na unidade de tratamento intensivo neonatal do Hospital Maternidade Alexander Fleming II, Rio de Janeiro, Brasil, de Julho de 1997 a Julho de 1999. As Identificações e antibiogramas das cepas isoladas foram realizadas de acordo com os procedimentos de rotina laboratorial. Os dados demográficos e microbiológicos foram analisados utilizando o programa Epi-Info. A idade média dos neonatos foi 13,1 dias, com média de 1,2 cepas isoladas por paciente. Antibióticos foram administrados a 207 (83,1%) pacientes antes de apresentarem hemocultura positiva. Um total de 90,8% pacientes eram prematuros, 83,9% tiveram idade gestacional menor que 36 semanas, 52,6% apresentaram peso de nascimento muito baixo, 39,8% tiveram asfixia e 33,3% apresentaram doença de membrana hialina. Um total de 301 microrganismos foram isolados com uma predominância de Klebsiella pneumoniae (22,9%), Staphylococcus coagulase-negativo (17,3%), Serratia marcescens (15,9%) e Pseudomonas aeruginosa (10,6%). As cepas Gram-negativas mostraram altos níveis de resistência para cefalosporinas e aminoglicosídeos. Um total de 93,3% Staphylococcus aureus foram meticilino-resistentes. Os neonatos examinados neste estudo apresentaram muitos fatores de risco para aquisição de infecção hospitalar e os microorganismos isolados mostraram altos níveis de resistência para a maioria dos antibióticos rotineiramente utilizados no hospital.

Abstract in English:

The aims of this study were to determine the frequency and antimicrobial resistance patterns of microorganisms associated with sepsis cases in a public maternity hospital, and to analyze the main demographic data relating to these infected neonates over a two year period. We analyzed 255 positive blood cultures and the medical records of newborns admitted to the neonatal intensive care unit of the Hospital Maternidade Alexander Fleming II, Rio de Janeiro city, Brazil, from July 1997 to July 1999. Identification and antibiograms of the isolated strains were performed according to routine laboratory procedures. Demographics and microbiological data were analyzed using the Epi-Info program. The mean age of the newborns was 13.1 days, with an average of 1.2 strains isolated per patient. Antibiotics were administered to 207 (83.1%) patients before positive blood culture presentation. A total of 90.8% patients were premature; 83.9% had a gestational age of less than 36 weeks; 52.6% presented very low birth weight; 39.8% had asphyxia and 33.3% presented hyaline membrane disease. A total of 301 microorganisms were isolated with a predominance of Klebsiella pneumoniae (22.9%), coagulase-negative Staphylococci (17.3%), Serratia marcescens (15.9%) and Pseudomonas aeruginosa (10.6%). Gram-negative strains showed high resistance levels to cephalosporins and aminoglycosides. A total of 93.3% Staphylococcus aureus strains were methicillin-resistant. The newborns examined in this study presented several risk factors for acquiring hospital infection and the isolated microorganisms showed high levels of resistance to the majority of the antibiotics routinely used in the hospital.

Abstract in Portuguese:

Candida albicans é um potente ativador do sistema complemento, e opsoninas lábeis ao calor produzidas por ativação de C3 (C3b e iC3b) aumentam a fagocitose de C. albicans mediada por receptores de complemento. Neste estudo, tratamos o soro de camundongo com sobrenadante de culturas de uma cepa de C. albicans produtora de proteases e avaliamos a capacidade deste soro reduzir a fagocitose de C. albicans. Sobrenadantes livres de células obtidos de cultura de C. albicans foram concentrados 5 vezes e adicionados ao soro de camundongo por 30 minutos a 37ºC, antes deste soro ser usado para opsonização de C. albicans na forma de levedura e fixadas em glutaraldeido. Nós observamos que soro normal aumentou 3 vezes a fagocitose de C. albicans por macófagos peritoneais, enquanto que o soro tratado com sobrenadante não aumentou a fagocitose. Este efeito do sobrenadante sobre o soro foi evitado por adição de pepistatina (5 µg/ml; um inibidor de proteinase ácida) ao meio. Soro tratado com sobrenadantes de culturas de um mutante de C. albicans deficiente em produção de proteinase também aumentou em 3 vezes a fagocitose da levedura. Estes resultados sugerem que uma proteinase produzida por C. albicans causa proteólise de opsoninas do soro, desta maneira reduzindo a fagocitose da levedura.

Abstract in English:

Candida albicans is a potent activator of the complement system, and heat labile opsonins produced by activation of C3 (C3b and iC3b) enhance phagocytosis of C. albicans mediated by complement receptors. In this study we treated mouse serum with supernatants from cultures of a protease producer strain of C. albicans and evaluated the ability of this serum to enhance phagocytosis of C. albicans. Cell-free supernatants from cultures of C. albicans were concentrated 5 fold and added to mouse serum for 30 min at 37ºC, before using this serum for opsonization of glutaraldehyde-fixed yeast cells. We observed that normal mouse serum increased about 3 fold the phagocytosis of C. albicans by mice peritoneal macrophages, whereas supernatant-treated serum did not increase phagocytosis. This effect of supernatants on serum was prevented by addition of pepstatin (5 µg/ ml; an inhibitor of C. albicans acid proteases) to the medium. Serum treated with supernatants from cultures of a protease-deficient mutant of C. albicans also increased about 3 fold phagocytosis of the yeast. These results suggest that a protease produced by C. albicans causes proteolysis of serum opsonins, thereby reducing the phagocytosis of the yeast.

Abstract in Portuguese:

As metalopeptidases têm papel importante em bactérias, estando envolvidas em vários processos que dependem de reciclagem de proteínas, como nutrição, degradação de peptídios-sinal, localização de proteínas e virulência. Nós clonamos e caracterizamos o gene da metaloendopeptidase PepF da bactéria aquática Caulobacter crescentus. O gene a montante de pepF (orf1) codifica uma proteína hipotética conservada encontrada em Mycobacterium e Streptomyces. pepF é co-transcrito com o gene a juzante (orf3), que codifica uma proteína pertencente à família ABC1 de proteínas quinases, sugerindo que estas duas proteínas podem compartilhar uma função comum na célula. A proteína PepF de C. crescentus possui o motivo HEXGH presente nos domínios de ligação de zinco de homólogos de PepF. A interrupção do gene pepF por inserção de sequência de DNA de um vetor não gerou nenhum defeito de crescimento, mas a linhagem mutante possui apenas 30% da atividade especifica de endopeptidases presentes na linhagem selvagem. Deleções e mutações pontuais na região regulatória mostraram que há duas possíveis regiões promotoras, e a expressão do operon é independente do regulador de transcrição CtrA. Os resultados indicam que PepF não é essencial para o crescimento desta bactéria utilizando peptídios como fonte de carbono, sugerindo que outras peptidases possam estar realizando esta função.

Abstract in English:

The metallopeptidases have a very important role in bacteria, being involved in several processes that rely on protein turnover, such as nutrition, degradation of signal peptides, protein localization and virulence. We have cloned and characterized the gene of the metalloendopeptidase PepF from the aquatic bacterium Caulobacter crescentus. The gene upstream of pepF (orf1) encodes a conserved hypothetical protein found in Mycobacterium and Streptomyces. pepF is co-transcribed with the gene downstream (orf3), which encodes a protein that belongs to the ABC1 protein kinase family, suggesting that these two proteins may share a common function in the cell. The C. crescentus PepF protein possesses the conserved HEXGH motif present in zinc binding domains of PepF homologs. Disruption of the pepF gene by insertion of a vector sequence did not produced any growth defect, but the mutant strain possesses only 30% of the specific activity of endopeptidases present in the wild type strain. Deletions and point mutations in the regulatory region showed that there are two putative promoter regions, and the operon expression is independent of the transcription regulator CtrA. The results indicate that PepF is not essential for either growth or development of this bacterium using peptides as the sole carbon source, suggesting that other peptidases can be sharing this function.

Abstract in Portuguese:

Para investigar a resposta adaptativa ao pH ambiente em fungos, foram determinados por ELISA os níveis de fosfatase alcalina Pi-repressível expressada pelo gene pho-2 de Neurospora crassa. Foi mostrado que as linhagens 74A e pho-2A deste fungo secretam quantidades semelhantes da fosfatase alcalina Pi-repressível independentemente do pH ambiente, quando ambos os genes preg e pgov não são funcionais, isto é, quando a linhagem nuc-2+ cresce em condições de limitação em fosfato inorgânico (Pi). Isto sugere que o gene pho-2, o qual é regulado pela ação hieráquica dos genes nuc-2, preg, pgov e nuc-1, é reprimido pelo fosfato inorgânico, mas não responde ao pH ambiente, e que a diferença na glicosilação observada para a fosfatase alcalina Pi-repressível (APase) retida no micélio em pH 5,6 ou APase secretada no meio de cultura em pH 8,0 é a resposta genética para o monitoramento do pH ambiente em N. crassa.

Abstract in English:

In order to investigate further the adaptive response of moulds to ambient pH, we have measured by ELISA the pho-2-encoded Pi-repressible alkaline phosphatase synthesised by Neurospora crassa. We showed that the 74A and pho-2A strains of this mould secrete similar amounts of the pho-2-encoded enzyme irrespective of ambient pH, when both the preg and pgov genes are not functional, i.e., in strains nuc-2+ growing under Pi-starvation. This suggests that pho-2, which is responsive to Pi starvation via the action of genes nuc-2, preg, pgov and nuc-1, is not a gene responsive to ambient pH and that the differential glycosylation observed for the Pi-repressible alkaline phosphatase retained by the mycelium at pH 5.6 or secreted into the growth medium at pH 8.0 is the genetic response to ambient pH sensing in N. crassa.