Ocorrência da leucose enzoótica dos bovinos no Estado do Pará, Brasil

Occurrence of enzootic bovine leukosis in the State of Pará, Brazil

Ocorrência da leucose enzoótica dos bovinos no Estado do Pará, Brasil¹

Éva Molnár², László Molnár²,Hilma Tavares Dias³, Aluízio Otávio Almeida da Silva⁴ e William Gomes Vale⁵

ABSTRACT.- Molnár É., Molnár L., Dias H. T., Silva A. O. A. & Vale W. G. 1999. [Occurrence of enzootic bovine leukosis in the State of Pará, Brazil.] Ocorrência da leucose enzoótica dos bovinos no Estado do Pará, Brasil.Pesquisa Veterinária Brasileira 19(1):7-11. Laboratório de Investigação e Diagnóstico de Enfermidade Animal, Centro Agropecuário, Universidade Federal do Pará, Belém, PA 66075-900, Brazil.

The occurrence of the infection with Bovine Leukosis Virus (BLV) was examined in agar-gel immunodiffusion (AGID) test and with indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), in the State of Pará, Brazil. The blood sera were collected from different breeds including Nelore, Piemontes, Simental, Holstein Frisian, Indubrasil, Girolanda, Simbrasil and their cross-breedings. The majority of the animals were adults. The overall occurrence of infections was 49.8% (359/721) and 26.0% (174/668) for ELISA and AGID test, respectively. All animal groups examined showed infection in ELISA, however in the AGID test two groups were sera negative.

INDEX TERMS: Enzootic bovine leukosis, indirect ELISA, immunodiffusion, bovine leukemia, bovine.

RESUMO. -A ocorrência da infecção pelo Vírus da Leucose Enzoótica dos Bovinos (BLV) no Estado do Pará, foi estudada através do método de imunodifusão em ágar-gel (AGID) e por um ensaio imunoenzimatico (ELISA) indireto, paralelamente. Os exames foram realizados com amostras de soros sanguíneos oriundos de bovinos de diferentes raças sendo a maioria deles adultos. A prevalência observada foi de 49,8% (359/721) no ELISA e 26,0% (174/668) no AGID. Todos os 14 grupos dos animais estudados pelo ELISA indireto, mostraram a existência da infeção, enquanto que pelo método da AGID, dois grupos de animais foram negativos.

TERMOS DE INDEXAÇÃO: Leucose Enzoótica dos Bovinos, ELISA indireto, imunodifusão.

INTRODUÇÃO

A leucemia e o linfossarcoma dos bovinos são enfermidades economicamente importantes (Da et al. 1993, Thurmond 1987). A doença tem sido considerada como uma enfermidade infecciosa desde o início deste século, mas seu agente foi demonstrado pela primeira vez somente 30 anos atrás (Miller et al. 1969).

Após a descoberta do vírus da leucose dos bovinos (BLV), iniciou-se a elaboração de métodos diagnóstico para a demonstração da infeção. Desde o primeiro momento, os seguintes testes sorológicos foram utilizados mais amplamente: imunodifusão em gel de ágar (AGID) (Miller & Olson 1972, Miller & Van der Maaten 1976, Bex et al. 1979, Mammerickx et al. 1980, Miller et al. 1981, Roberts et al. 1989); radioimuno-ensaio (Devare et al. 1976); fixação do complemento (Miller & Van der Maaten 1974, Portelle et al.1978); reverse transcriptase ensaio (Graves et al.1977); virus neutralização (Miller et al. 1981) e ensaio imunoenzimatico (ELISA; Portelle et al. 1983; Portelle et al. 1989, Florent 1988, Have & Hoff-Jorgensen 1991, Noda-Gomes et al. 1992).

Com o acúmulo de conhecimentos e dados em relação às provas sorológicas surgiu a possibilidade de realização de estudos comparativos a respeito da sensibilidade dos diferentes métodos diagnósticos, assim como, sobre a aplicabili-dade dos mesmos (Mammerickx et al. 1980, Jacobsen et al. 1985, Hoff-Jorgensen 1989, Roberts et al. 1989, Moreno et al. 1992).

Têm sido realizadas pesquisas comparativas também em relação ao diagnóstico através das provas sorológicas e demonstração direta do agente causador (Gupta et al. 1981, Klintevall et al. 1993).

Está fundamentado o fato de que os bovinos sororrea-gentes (BLV) estão realmente infectados com o vírus (Devare et al. 1976). Por outro lado, todos os bovinos e ovinos inoculados experimentalmente com BLV, soroconvertaram-se na AGID em quatro meses e, no ELISA, dentro de duas semanas (Jacobsen et al. 1985); isso ocorre geralmente, embora hajam exceções (Cockerell & Rovnak 1988, Murtaugh et al. 1991).

Os resultados do teste AGID mostraram uma considerável variação na concentração dos anticorpos dos bovinos infectados com BLV (Kono et al. 1982), pois em alguns casos, esta flutuação determina um resultado temporariamente negativo. Outras pesquisas evidenciaram uma diminuição da concentração de anticorpos relacionada às fases finais da gestação e após o parto, assim como há também uma negatividade transitória em alguns animais infectados (Bause et al. 1978, Bause & Schmidt 1980, Burridge et al. 1982).

Sobre a disseminação desta enfermidade no Brasil, publicou-se ultimamente um artigo (Birgel Junior et al. 1995). Em todos os onze Estados da Federação pesquisados comprovou-se a infeção por BLV, variando a proporção de sororrea-gentes entre 9,1% no Estado de Ceará (Abreu 1993) e 44,3% no Estado de Rio de Janeiro (Romero & Rowe 1981, Cunha et al. 1982).

Não foi encontrando nenhum dado na literatura sobre a ocorrência do BLV no Estado do Pará e pelo fato de que os exames sorológicos no país foram feitos exclusivamente através da AGID, os objetivos do presente estudo são de pesquisar a presença do BLV neste Estado e comparar a sensibilidade das duas provas sorológicas que são amplamente utilizadas para o diagnóstico desta doença.

MATERIAL E MÉTODOS

As amostras utilizadas no presente estudo foram obtidas de 14 rebanhos, criados extensivamente em diferentes regiões do Estado do Pará (Quadro 1). O número de amostras colhidas em cada rebanho variou de 16 a 137, provenientes de animais de diversas faixas etárias. Do total foram examinados 721 amostras pelo ELISA indireto e 668 amostras pela prova de AGID.

As amostras de sangue foram colhidas e os soros preparados a partir da retração do coágulo, conservados em temperatura de -20º C, até a realização dos testes sorológicos.

Para o diagnóstico através do método de ELISA, foi utilizado um kit diagnóstico (Leukosis ELISA kit), fornecido pela Animal Production Unit, Joint FAO/IAEA Agriculture and Biotechnology Laboratory, Agency Laboratories Division, Seiberdorf, Austria, que apresenta as seguintes características: O antígeno empregado consistiu na glicoproteína (gp51) de BLV, derivado de cultura de células. Utilizou-se um conjugado comercial constituído por monoclonal anti-bovino IgG1 de camundongo, conjugado com peroxidase de raiz-forte (horseradish peroxidase, HRP, Sigma). Foram utilizados como controle, soros fortemente e fracamente positivos e negativos. Todos estes soros foram de origem de bovino, liofilizados até a utilização. Os soros para teste foram diluídos a 1:50 e examinados em duplicata. Procedia-se a repetição do exame do soro nos casos em que os valores individuais estivessem fora do valor de PP (por cento de positividade), estabelecido como padrão. A leitura da densidade ótica foi realizada no aparelho de "Immunoscan BDSL" com medição do desenvol-vimento de cor de substrato a 450nm. O software foi utilizado o EDI, com o valor 35 de cut-off .

A imunodifusão foi realizada segundo Tekes at al. (1984) utilizando-se antígeno glicoprotéico (gp51) produzido pelo laboratório BIOVETA⁶. Utilizando esta metodologia, foram analisadas 60 amostras por placa de Petri de 9 cm de diâmetro.

RESULTADOS

O protocolo utilizado para o recebimento do material, assim como os resultados obtidos nos exames estão resumidos no Quadro 1. Através do ELISA, em todos os rebanhos foram encontrados animais soro-reagentes, e em alguns o índice de infecção variou entre 6,6% e 83,0%, o que representou em termos médios, uma prevalência de 49,8% de animais infectados. Contudo, através de prova da IDAG, dois rebanhos não mostraram-se infectados, e os índices de infecção nos rebanhos infectados variaram entre 5,4% e 49,0% com uma prevalência média de 26,0%.

Na presente triagem não foi possível examinar a distribuição da infecção segundo a faixa etária, porque a idade dos animais somente foi conhecida em alguns rebanhos, mas nestes, a média de infecção sempre foi elevada, aumentando significativamente com a progressão da idade, exceto em bezerros até 3 meses de idade. Em um dos rebanhos foram examinados oito soros de bezerros com a idade variando de 2 a 3 meses, todos mostrando-se soro-positivos através do ELISA, assim como os soros de suas mães.

DISCUSSÃO

Vários estudos epidemiológicos comprovaram a existência de bovinos infectados pelo BLV em todos os Estados da Federação pesquisados. Baseado nestes estudos, deduziu-se que a infecção provavelmente ocorreria também no Estado do Pará, só não imaginava-se que a sua prevalência fosse tão elevada.

Para o Brasil, o método empregado rotineiramente para o diagnóstico desta enfermidade é a prova da AGID (Alencar Filho 1978, Samara et al. 1996).

As diferenças entre as taxas de prevalência encontradas nas diversas regiões do Brasil, podem ser explicadas considerando-se os diferentes tipos raciais, manejo e a tecnologias empregada na criação (Birgel Junior et al. 1995). Este fenômeno que parece ser bem conhecido, é caracterizado pelo fato da enfermidade estar bastante disseminada, principalmente nos rebanhos leiteiros com sistema de criação intensivo. Não obstante, no presente estudo foi surpreendente o fato de que em todos os rebanhos examinados encontraram-se animais sororreagentes, apesar de a grande maioria desses rebanhos ser criada em regime extensivo e ser especializada para a produção de carne. É de amplo conhecimento que a raça parece ter grande importância na prevalência e disseminação desta enfermidade (Szent-Iványi & Mészáros 1985), porém surge a questão: porque existem rebanhos soro-negativos em gado de corte no Estado de São Paulo e nas outras regiões brasileiras (Birgel et al. 1993)? Seria pela resistência natural desses animais ao vírus, ou porque nestes animais não encontrou-se o vírus, ou a metodologia empregada não é suficientemente eficiente para o diagnóstico da enfermidade ?

Algumas vezes é difícil encontrar a fonte da infeção no rebanho. Neste sentido, foram interessantes as observações de Tekes et al. (1984) que, nos rebanhos onde haviam-se colocado machos da raça Frísia-holandesa, com o objetivo de melhoramento genético, todos apresentaram-se infectados, entretanto estavam livres da infeção aqueles rebanhos onde sêmen diluído dos mesmos machos era utilizado para a inseminação artificial.

No rebanho, a infeção pode difundir-se rapidamente, caso não seja realizado um controle voltado para a erradicação da doença. A experiência geral demonstra que um rebanho com 15 a 20% de soropositividade, a frequência da infeção aumenta de 60 a 70% em 2 a 3 anos (Mészáros et al. 1986). A difusão da doença parece ser mais lenta no Estado do Pará pela extensão territorial e forma de manejo utilizado, porém em alguns casos, as manifestações no Brasil também foram muito semelhantes das observadas em outros países (Samara et al. 1996).

As diferenças observadas entre os resultados obtidos através do ELISA e da AGID foram bastante evidentes em alguns rebanhos (no. 3, 5, 8) e, em outros casos os resultados foram semelhantes (no. 11, 12, Quadro 1), porém em todos os casos o ELISA manifestou-se mais sensível e, somente dois animais foram positivos através da AGID e negativos pelo ELISA. Em conjunto, considerando-se os resultados em AGID, a proporção da infecção (26,0%) está na media, entretanto, baseado nos resultados obtidos pelo ELISA, 49,8%. Conforme calculado entre dois testes utilizando-se estatística, kappa é 0,99, onde o ensaio referente é a AGID; o Estado do Pará está altamente infectado.

Na literatura internacional acumulam-se dados nos últimos anos sobre a maior sensibilidade da prova de ELISA do que a AGID (Noda-Gomez et al. 1992, Moreno et al. 1992, Klintevall et al. 1993, Tekes 1994), e no presente estudo, os resultados confirmaram este fato. Apesar de tudo, torna-se difícil explicar através do presente trabalho porque ocorreu alta prevalência da infecção em alguns rebanhos quando utilizou-se a prova de ELISA e pouco freqente (no. 15 e 8) ou nula (no. 3) quando foi utilizada a prova da AGID (Quadro 1). Moreno et al. (1992) constataram que existem diferenças na sensibilidade entre os "kits" empregados no diagnóstico desta enfermidade, oferecidos pelo mercado internacional. No presente estudo, pode-se especular que a qualidade dos "kits" utilizados, produzidos e fornecidos pela Joint FAO/IAEA, tenha sido responsável pela alta sensibilidade demonstrada pelos mesmos. Estes "kits" têm sido adaptados em vários países e em diferentes condições ambientais, parecendo desta forma serem mais sensíveis e específicos (Moreno et al. 1992, Noda-Gomes et al. 1992, Klintewall et al. 1993).

Em função dos resultados aqui encontrados, é possível especular-se que o BLV, provavelmente encontra-se disseminada na região Amazônica, devido o desenvolvimento desordenado que vem sofrendo, em especial no setor da pecuária bovina, indicando com que outros Estados da região, ou mesmo os países com fronteiras limítrofes, possam ter esta enfermidade sem ainda existir diagnóstico. Entretanto, se fazem necessárias pesquisas adicionais para avaliar a prevalência da infecção e elaborar um mapa epidemiológico da enfermidade, nas diferentes regiões da Panamazônia.

CONCLUSÕES

1. A Leucose Enzoótica dos Bovinos ocorre também no Estado do Pará e sua prevalência é bastante alta em suas diferentes regiões.

2. A prova de ELISA é mais sensível que a da AGID, sendo portanto mais recomendada para o diagnóstico, controle e erradicação desta enfermidade.

3. Seria importante a realização de um levantamento geral nas diferentes regiões do Estado, para avaliar a difusão da doença, e, ao mesmo tempo, dar início a estudos para o controle e a possível erradicação desta enfermidade.

Agradecimentos.- A Joint FAO/IAEA, Agriculture and Biotechnology Laboratory, Agency Laboratories Division, Seiberdorf, Austria, pelo fornecimento dos "kits" e o apoio no estabelecimento do Setor de ELISA do LIDEA, e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq, pelo apoio financeiro.

REFERÊNCIAS

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¹

Aceito para publicação em 24 de abril de 1998.

Este trabalho contou com o apoio da Joint FAO/IAEA, Agriculture and Biotechnology Laboratory, Agency Laboratories Division, Seiberdorf, Austria.

²

Programa de Medicina e Saúde Animal, Convênio CNPq/UFPA. Centro Agropecuário-Laboratório de Investigação e Diagnóstico de Enfermidades Animal (LIDEA), Universidade Federal do Pará (UFPA), Belém, Pará 66075-900.

³

Bolsista de Desenvolvimento Regional do CNPq, Centro Agropecuário-LIDEA, UFPA.

⁴

Centro de Ciências Biológicas e Centro Agropecuário, UFPA.

⁵

Centro Agropecuário e Centro de Ciências Biológicas, UFPA; Pesquisador Bolsista I-B do CNPq.

⁶

BIOVETA Komenského 212, 68323 Ivanovice na Hané, República Tcheca.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  02 Set 1999
• Data do Fascículo
  Jan 1999

Histórico

• Aceito
  24 Abr 1998