A relação da caderina-E com o prognóstico do adenocarcinoma colorretal

The relationship of E-cadherin with colorectal adenocarcinoma prognosis

ARTIGO ORIGINAL

A relação da caderina-E com o prognóstico do adenocarcinoma colorretal

The relationship of E-cadherin with colorectal adenocarcinoma prognosis

Marcelo Betim Paes Leme, TCBC-RJ^I; Ângela F L Waitzberg^II; Ricardo Artigiani^III; Delcio Matos^IV

^IProfessor de Clínica Cirúrgica do Centro Universitário de Volta Redonda – UNiFOA; Doutor em Medicina pela UNIFESP-EPM

^IIProfessora Doutora do Departamento de Patologia da UNIFESP-EPM

^IIIMédico Patologista do Hospital São Paulo; Mestre em Patologia pela UNIFESP-EPM

^IVProfessor Livre Docente e Chefe do Grupo de Coloproctologia da Disciplina de Gastroenterologia Cirúrgica da UNIFESP-EPM

^{Endereço para correspondência}

RESUMO

OBJETIVO: Avaliar a relação da expressão da caderina-E com o intervalo livre de doença (ILD), com a sobrevida (S) e com o estadiamento de doentes operados por adenocarcinoma colorretal.

MÉTODO: Foram estudados 89 doentes (41 homens e 48 mulheres) com média de idade de 62,3 anos. A distribuição segundo o estadiamento TNM foi: estádio I - 13 (14,6%) doentes, estádio II - 29 (32,6%), estádio III - 23 (25,8%) e estádio IV - 24 (27,0%). Sessenta e sete doentes foram submetidos à operação radical e acompanhados por um período médio de 37,9 meses. Os tumores foram examinados por técnica imuno-histoquímica e classificados como positivos ou negativos em relação à expressão da caderina-E.

RESULTADOS: A caderina-E foi positiva em 49,4% e negativa em 50,6% dos doentes. A recidiva ocorreu em 22,4% dos doentes e não esteve relacionada à expressão da caderina-E. Não foi observada relação da caderina- E com intervalo livre de doença e com a sobrevida. Também não foi verificada a associação da caderina-E (p = 0,958) com o estadiamento TNM.

CONCLUSÃO: Os resultados verificados nesta pesquisa não permitem relacionar a expressão tissular da caderina-E com o estadiamento e o prognóstico do adenocarcinoma colorretal.

Descritores: Caderinas; Neoplasias do cólon; Cirurgia colorretal; Cólon; adenocarcinoma; Reto.

ABSTRACT

BACKGROUND: To evaluate the relationship between E-cadherin and recurrence, relapse free survival, overall survival and TNM system in patients operated on for colorectal adenocarcinoma.

METHODS: This study included 89 patients (41 men and 48 women, mean age 62.3 years) who underwent colorectal ressection for adenocarcinoma. Of these patients, 13 (14.6%) had TNM stage I disease, 29 (32.6%) stage II, 23 (25.8%) stage III and 24 (27.0%) stage IV. Sixty-seven patients had been treated by curative resection and their mean follow-up was 37.9 months. Paraffin-embedded tumor specimens were immunohistochemically stained to cadherin-E and assessed as positive and negative.

RESULTS: E-cadherin was positive in 49.4% of the patients and negative for the remaining 50.6%. The disease recurred in 22.4% of the patients and there was no relation with E-cadherin expression. Likewise, there was no relationship between E-cadherin and relapse free survival or overall survival. No significant association has been show between E-cadherin (p = 0.958) and TNM system.

CONCLUSION: These results do not allow us to associate Ecadherin with the TNM system and prognosis of patients with colorectal adenocarcinoma.

Key words: Cadherins; Colonic Neoplasms; Colorretal surgery; Colon; Adenocarcinoma; Rectum.

INTRODUÇÃO

A importância das moléculas de adesão celular na etiologia das neoplasias está tornando-se cada vez mais evidente. Acredita-se também que a invasão tumoral e a disseminação metastática estejam relacionadas com algumas dessas moléculas¹. No câncer colorretal, a transformação adenoma-carcinoma ocorre em conseqüência às alterações genéticas que incluem algumas moléculas de adesão já identificadas, entre elas as proteínas caderina-E, cateninas, DCC e CD44 ^{2, 3}.

A caderina-E tem sido relacionada como uma das principais proteínas envolvidas na adesão celular e está localizada particularmente no sítio epitelial ^3,4. Assim, quando pesquisada no tecido epitelial normal observa-se que sua expressão está sistematicamente preservada e distribuída de forma homogênea na membrana citoplasmática ⁵. Por outro lado, tem-se observado que a ausência ou diminuição da proteína caderina-E em espécimes operatórios de câncer colorretal, tem estado associada a tumores com estádio mais avançado e à maior incidência de metástases linfonodais e hepáticas ^{6, 7}.

Esta pesquisa baseou-se na hipótese de que tumores com menor adesão celular teriam maiores chances de desenvolver metástases.

MÉTODO

Neste estudo retrospectivo, foram avaliados 89 pacientes operados de câncer colorretal, na Disciplina de Gastroenterologia Cirúrgica do Hospital São Paulo - Universidade Federal de São Paulo. O Comitê de Ética aprovou o protocolo de pesquisa sem restrições.

As informações relativas ao estadiamento clínico e anatomopatológico, tratamento operatório e acompanhamento dos pacientes foram obtidas pela revisão dos prontuários (Quadro 1).

Foram excluídos do estudo doentes com tumores não ressecados ou tratados por ressecção local, doentes submetidos à radioterapia ou quimioterapia pré-operatória, doentes com tumores relacionados à polipose cólica familiar, retocolite ulcerativa e doença de Crohn e doentes com outras neoplasias.

A operação foi considerada radical em 67 (75,3%) pacientes e paliativa em 22 (24,7%). Convencionou-se como operação radical quando o cirurgião relatou ressecção completa da lesão e o estudo anatomopatológico do espécime operatório não demonstrou comprometimento das margens de ressecção.

Os pacientes foram estadiados segundo a classificação TNM⁸ e estavam assim distribuídos: 13 pacientes no estádio I, 29 pacientes no estádio II, 23 pacientes no estádio III e 24 pacientes no estádio IV.

A expressão da caderina-E foi avaliada em relação ao estadiamento TNM, a recidiva, o intervalo livre de doença (ILD) e a sobrevida (S). Considerou-se como recidiva o ressurgimento de doença neoplasica, loco-regional ou em órgãos a distancia, cuja detecção tenha sido realizada por exame físico, endoscópico ou de imagem, sem necessidade de comprovação histológica; como ILD o tempo decorrido entre a data da operação e a ultima revisão na qual não foi detectada recidiva neoplasica e como sobrevida o intervalo de tempo decorrido entre a data da operação e o desfecho de óbito.

Dos blocos de parafina, utilizados no estudo histopatologico foram produzidas novas laminas histológicas, com cortes de 4mm, todos correspondentes ao ponto de maior penetração do tumor na parede intestinal, com finalidade de padronização da amostra. A proteína caderina-E foi evidenciada por exame imuno-histoquimico, pela técnica da estreptoavidina- biotina-peroxidase, utilizando-se o anticorpo monoclonal anti-caderina-E, diluição 1/100 (NCH-38®, DAKO).

A avaliação da caderina-E, por método semiquantitativo, foi realizada por leitura das laminas histológicas em microscópio óptico com aumento de 400x. Os achados foram considerados positivos quando se detectou a presença da proteína na membrana celular em 50% das células tumorais e negativos quando se verificou menos de 50% de células tumorais positivas para caderina-E ou quando a localização da proteína estivesse fora da membrana celular ⁹.

As avaliações foram realizadas sem conhecimento do estadio clinico-patologico e do estudo histológico pela coloração hematoxilina-eosina. Foram utilizados dois avaliadores que classificaram os casos em conjunto e em comum acordo.

Os resultados foram submetidos a analise estatística e considerou-se como significativo valores de p < 0,05 ou 5%. A avaliação da associação entre o estadiamento e a expressão da caderina-E foi realizada pelo teste Qui-quadrado de Pearson. Utilizou-se o estimador de Kaplan-Meier no estudo da associação entre expressão tissular da caderina-E e o intervalo livre de doença e sobrevida. O teste de Wilcoxon (versão Breslow) foi aplicado na comparação entre as curvas obtidas.

RESULTADOS

A caderina-E, avaliada em 89 doentes, apresentou expressão positiva em 44 (49,4%) doentes e negativa em 45 (50,6%). Não foi verificada a relação do estadiamento TNM com a expressão da caderina-E (Tabela 1).

Os doentes submetidos à operação radical (n = 67) foram acompanhados por um período médio de 37,9 meses, o que permitiu detectar a recorrência da doença neoplásica em 15 (22,4%) pacientes, sendo oito recidivas à distância. Neste mesmo período foram observados 20 óbitos, dos quais 11 foram relacionados a causas gerais e nove à doença neoplásica.

Observou-se freqüência semelhante de recidivas em doentes com expressão positiva (sete recidivas) e negativa da proteína caderina-E (oito recidivas).

Também foram comparados o intervalo livre de doença (ILD) e a sobrevida (S) de doentes com expressão positiva e negativa da proteína caderina-E e não se observou diferença entre os dois grupos.

DISCUSSÃO

A adesão celular não deve ser entendida como um fenômeno estático com efeito limitado à função de "cimento" intercelular. Freqüentemente as moléculas envolvidas nesse processo, além da função de ligação, permitem a transmissão de sinais reguladores e a troca de informações entre células. Assim, a interação, mediada por essas moléculas, permite às células organizarem-se em grupos e formarem estruturas complexas, bem como participar da organogênese e da reconstrução tissular ^{10, 11}.

Distúrbios na interação celular normal podem ocorrer pela baixa produção de moléculas de adesão ou por bloqueio em sua ação, permitindo novas interações celulares e a disseminação dessas células fora do seu sítio original. Esses eventos poderiam explicar uma ou mais etapas no processo de carcinogênese.

As caderinas formam uma família de glicoproteínas transmembrana, cuja função de adesão célula-célula é cálcio dependente. Sua porção intracelular se liga a um grupo de proteínas chamadas cateninas, que por sua vez se ligam ao citoesqueleto. A caderina-E tem sido relacionada como uma das principais proteínas envolvidas na adesão celular^3,4 e se supõem que alterações em sua expressão poderiam relacionar- se com prognóstico do adenocarcinoma colorretal ^{5, 12}.

Na literatura não existe consenso quando considerar a reação imuno-histoquímica da proteína caderina-E positiva. Assim aceita-se como reação normal ou positiva aquela que ocorre na membrana celular. Entretanto quando se avalia em que percentual mínimo as células tumorais devem expressar a caderina-E para que o tumor seja considerado como produtor normal da proteína, as medidas são muito variáveis, situandose entre 25 e 90% ^{5, 9, 13, 14}. Questiona-se também se não poderiam existir tumores que avaliados pelo método imuno-histoquímico, expressassem a caderina-E com características histológicas normais mas destituída de função biológica, por exemplo, pela falta de expressão das cateninas citoplasmáticas ¹⁴.

Essa possibilidade foi avaliada por Ghadimi et al ¹⁵ que verificaram presença de caderina-E normal e catenina alterada em 15% dos casos. Acredita-se entretanto, que nesta situação haveria uma distribuição anormal da caderina-E que estaria então localizada no citoplasma ou interstício¹⁶. Isto talvez explique a localização citoplasmática da caderina-E em vários casos dessa pesquisa. Quando isto ocorria, o tumor era classificado como negativo.

De um modo geral tem-se criticado a avaliação de marcadores tumorais em cortes histológicos, devido a heterogeneidade das células tumorais que, por não estarem distribuídas uniformemente dificultariam a detecção e quantificação de todas as alterações histopatológicas e moleculares ocorridas na neoplasia ¹⁷.

A expressão da caderina-E estudada por técnica imuno-histoquímica é freqüentemente medida por método semiquantitativo, o que implica em elevado grau de subjetividade da medida. Deve-se ressaltar, entretanto, que algumas pesquisas verificaram concordância entre resultados encontrados por método imuno-histoquímico e estudos genéticos e de biologia molecular ^{18, 19}.

Ainda não está clara a relação entre a evolução do estadiamento clínico-patológico e alterações na expressão da caderina-E. Alguns autores observaram menor freqüência na expressão da caderina-E em tumores colorretais com estadiamento mais avançado ^{5, 19, 20}. Esses resultados entretanto não são uniformes. Nesta pesquisa não se observou relação entre a expressão da caderina-E e estadiamento clínico-patológico. Resultados semelhantes foram verificados por outros autores ^15,21.

A expressão tissular caderina-E também pode estar relacionada à sobrevida de doentes operados de câncer colorretal. Em geral as pesquisas têm revelado uma relação positiva entre a expressão de proteínas de adesão celular e sobrevida ¹². Ikeguchi et al ⁹ e Dorudi et al ²² verificaram relação entre os níveis de caderina-E e a sobrevida de doentes com câncer colorretal, observando que a maior expressão de caderina-E correspondia a melhor curva de sobrevida. Kimura et al ⁷ observaram curvas de sobrevida desfavoráveis para doentes com expressão reduzida da caderina-E. Os resultados foram submetidos à análise multivariada que confirmou a baixa expressão da caderina-E como um fator de mau prognóstico. Outros autores, entretanto, verificaram que a baixa expressão da caderina-E ocorria na mesma medida em que havia progressão do estadiamento clínicopatológico ^5,20, o que de certa forma limitaria sua utilização como fator prognóstico para uso clínico.

Neste estudo a análise de sobrevida, pelo método de Kaplan-Meier, não detectou diferença entre doentes com expressão tissular positiva e negativa da proteína caderina-E. Resultados semelhantes foram observados por Hugh et al²³ e Schuhmacher et al ²⁴.

Portanto, nós acreditamos que o papel da expressão tissular da caderina-E na avaliação prognóstica do câncer colorretal ainda permanece indefinido. Assim sua utilização na prática clínica, no momento, não deve ser estimulada devendo- se restringir seu uso à área da pesquisa.

Recebido em 15/02/2005

Aceito para publicação em 24/05/2005

Conflito de interesse: nenhum

Fonte de financiamento: nenhuma

Trabalho realizado na Disciplina de Gastroenterologia Cirúrgica do Hospital São Paulo da Universidade Federal de São Paulo – Escola Paulista de Medicina.

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  22 Nov 2005
• Data do Fascículo
  Ago 2005

Histórico

• Recebido
  15 Fev 2005
• Aceito
  24 Maio 2005