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Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 35, Número: 3, Publicado: 2004
  • Filamentação em Saccharomyces cerevisiae Mini-Review

    Ceccato-Antonini, Sandra Regina; Sudbery, Peter Edwin

    Resumo em Português:

    O dimorfismo em fungos é um fenômeno complexo acionado por um grande número de fatores ambientais e consiste num padrão alternante e reversível de crescimento, oscilando entre formas elípticas e filamentosas de células. É de grande importância o entendimento dos mecanismos que regulam esses eventos devido as suas implicações na patogenicidade, diferenciação celular e indústria. Células diplóides de Saccharomyces cerevisiae mudam de células brotantes para pseudohifas quando em condições limitantes de nitrogênio, o que confere às células uma vantagem na procura por alimento. A deficiência de nitrogênio é 'percebida' por pelo menos dois caminhos sinalizadores: 'MAP kinase' (MAPK) e 'PKA' (cAMP-dependent protein kinase A). O resultado dessa sinalização é a expressão de genes específicos para filamentação, cujos perfis de expressão mudam e são acompanhados por um retardo da fase G2 do ciclo celular e um período prolongado de crescimento polarizado. Células haplóides mostram um tipo de crescimento similar após prolongada incubação em meio rico. As células formam cadeias e invadem o ágar na borda da colônia, mas não se tornam alongadas. Esse tipo de crescimento é conhecido como crescimento invasivo haplóide. Os álcoois podem também induzir crescimento filamentoso em S. cerevisiae, ocasionando uma morfologia alongada e aberrante. Nesse artigo revisamos as três formas de crescimento filamentoso incluindo os caminhos envolvidos na percepção, sinalização e transdução do sinal durante o crescimento filamentoso.

    Resumo em Inglês:

    Fungal dimorphism is a complex phenomenon triggered by a large variety of environmental factors and consists of a reversible alternating pattern of growth between different elliptical and filamentous forms of cells. Understanding the mechanisms that regulate these events is of major interest because of their implications in fungal pathogenesis, cell differentiation and industry. Diploid cells of Saccharomyces cerevisiae transform from budding yeast to pseudohyphae when starved for nitrogen, giving the cells an advantage in food foraging, which is sensed by at least two signal transduction pathways: the MAP kinase (MAPK) and the PKA (cAMP-dependent protein kinase A) pathways. The output of these signalling pathways is the expression of pseudohypha-specific genes, whose expression profiles change and is accompanied by a G2 delay in the cell cycle and a prolonged period of polarized growth. Haploid yeast strains show a similar growth type after prolonged incubation on rich medium plates. The cells form chains and invade the agar on the edge of the colony, but they do not become elongated. This growth type is referred to as haploid invasive growth. Alcohols can also induce filamentous growth in S. cerevisiae, promoting aberrant and elongated morphology. The three forms of filamentous growth are revised in this article and also the pathways involved in sensing, signaling and signal transduction during filamentous growth.
  • Avaliação da toxigenidade das cepas de Aspergillus flavus e Fusarium spp. isoladas de amostras de sorgo Medical Microbiology

    Silva, Josefa B. da; Dilkin, Paulo; Fonseca, Homero; Corrêa, Benedito

    Resumo em Português:

    A produção de aflatoxinas por 59 cepas de Aspergillus flavus e fumonisinas por 35 cepas de Fusarium verticillioides isoladas de amostras de grãos de sorgo recém colhido (10 amostras) e armazenado (130 amostras), foram avaliadas. A detecção de aflatoxinas (AFB1 e AFB2) foi efetuada por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e fumonisinas (FB1 e FB2) foram analisadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Os resultados demonstram a produção de AFB1 e AFB2 em 38 cepas (64,4%) de A. flavus cujos níveis variaram de 12,00 a 3282,50 µg/kg. Referente às cepas de F. verticillioides, 32 (91%) produziram FB1, nas concentrações de 0,12 a 5,38 µg/g. Baixos níveis de fumonisinas foram detectados em 2 cepas de F. proliferatum. A constatação da potencialidade toxígena das cepas de A. flavus (64,4%) e de F. verticillioides (91,5%) nesta investigação, revelam a importância da pesquisa de aflatoxinas e fumonisinas nas amostras de sorgo. Diante disto, sugere-se o controle rigoroso das condições de armazenamento de sorgo, visando minimizar a contaminação por fungos deteriorantes toxígenos, evitando riscos à saúde humana e animal.

    Resumo em Inglês:

    Fifty-nine Aspergillus flavus and 35 Fusarium verticillioides strains, isolated from freshly harvested (10) and stored (130) Brazilian sorghum samples, were tested regarding their ability to produce aflatoxins (coconut milk agar) and fumonisins (rice culture), respectively. Aflatoxins B1 and B2 were detected by TLC, and fumonisins B1 and B2 were analyzed by HPLC. Thirty-eight (64.4%) A. flavus strains produced detectable levels of aflatoxins at concentrations ranging from 12.00 to 3282.50 µg/kg (AFB1 + AFB2), while thirty two (91%) F. verticillioides strains produced FB1 at concentrations ranging from 0.12 to 5.38 µg/g. Two F. proliferatum strains produced low fumonisin levels. The toxigenic potential of A. flavus (64.4%) and F. verticillioides (91.5%) strains observed in sorghum samples indicates that rigorous control should be directed at the storage conditions of these products to minimize contamination with toxigenic deteriorating fungi, preventing further hazard to human and animal health.
  • Subtipos e mutações associadas à resistência aos anti-retrovirais em isolados de HIV-1 do Distrito Federal Medical Microbiology

    Cerqueira, Daniela Marreco; Ramalho, Eduardo Dias; Oliveira, Claudiner Pereira; Silva, Ruiter Roberto; Franchini, Miriam; Felipe, Maria Sueli Soares; Martins, Cláudia Renata Fernandes

    Resumo em Português:

    A detecção de polimorfismos do HIV-1 que estejam associados à resistência às drogas anti-retrovirais e aos subtipos genéticos é importante para o controle e tratamento da infecção pelo HIV-1. A pressão exercida pela terapia anti-retroviral seleciona variantes resistentes com mutações nos genes virais da transcriptase reversa (RT) e da protease (PR). Assim, visando contribuir com as autoridades de saúde pública na perspectiva de planejar a disponibilidade de um tratamento terapêutico, nós descrevemos a variabilidade genética e a prevalência de mutações associadas à resistência aos anti-retrovirais em isolados do HIV-1 de indivíduos infectados no Distrito Federal. Dezenove amostras de RNA do HIV-1 provenientes de um laboratório de Saúde Pública do Distrito Federal foram transcritas reversamente e os cDNAs obtidos foram amplificados por nested PCR. Um fragmento de 297 pb correspondente ao gene completo da protease e outro de 647 pb, correspondente à parte do gene da transcriptase reversa (códons 19 a 234), foram obtidos. O seqüenciamento automático e análise de homologia revelaram a presença de 17 subtipos B e 2 subtipos F1 do HIV-1. As seqüências de aminoácidos foram analisadas com relação à presença de mutações associadas à resistência. Um total de 6 mutações na PR, 2 primárias e 4 secundárias e 8 mutações relacionadas à resistência na RT foram encontradas. Nossos dados sugerem uma elevada prevalência do subtipo B do HIV-1 na população estudada do Distrito Federal, assim como a presença de variantes virais geneticamente resistentes em indivíduos que não respondem ao tratamento.

    Resumo em Inglês:

    The detection of polymorphisms associated to HIV-1 drug-resistance and genetic subtypes is important for the control and treatment of HIV-1 disease. Drug pressure selects resistant variants that carry mutations in the viral reverse transcriptase (RT) and protease (PR) genes. For a contribution to the public health authorities in planning the availability of therapeutic treatment, we therefore described the genetic variability, the prevalence of mutations associated to drug resistance and the antiretroviral resistance profile in HIV-1 isolates from infected individuals in Central Brazil. Nineteen HIV-1 RNA samples from a Public Health Laboratory of the Federal District were reversely transcribed and cDNAs were amplified by nested PCR. One fragment of 297 bp coding the entire protease gene, and another of 647 bp, corresponding to the partial RT gene (codons 19-234), were obtained. Automated sequencing and BLAST analysis revealed the presence of 17 B and 2 F1 HIV-1 subtypes. The amino acid sequences were analyzed for the presence of resistance-associated mutations. A total of 6 PR mutations, 2 major and 4 accessory, and 8 RT mutations related to drug resistance were found. Our data suggest a high prevalence of HIV-1 B subtype in the studied population of Federal District as well as the presence of genetically-resistant strains in individuals failing treatment.
  • Infecção e colonização por bacilos Gram-negativos em neonatos internados em Berçário de Alto Risco do Hospital da Universidade Federal de Uberlândia: etiologia, fenótipos de resistência e fatores de risco Medical Microbiology

    Cezário, Renata Cristina; Ribas, Rosineide Marques; Abdallah, Vânia Olivetti Steffen; Carneiro, Claudia Lúcia; Gontijo Filho, Paulo P.

    Resumo em Português:

    Os objetivos deste estudo foram determinar infecções endêmicas e epidêmicas por bacilos Gram-negativos, fatores de risco associados a colonização e infecção e a presença dos fenótipos de resistência ESBL e AmpC em neonatos admitidos em Berçário de Alto Risco. Durante um período de 21 meses, foi realizado um estudo prospectivo para avaliar os casos de infecções hospitalares e o uso de cefalosporinas de terceira geração; e um estudo caso-controle para determinar os fatores de risco associados a colonização/infecção. Quatro inquéritos de colonização da orofaringe e intestino dos neonatos (Setembro e Novembro/2001, Fevereiro e Agosto/2002). Amostras com resistência a 2 mig/mL de ceftazidima foram isoladas devido a suspeita de produção de b-lactamases (ESBL/ AmpC). A incidência de pacientes infectados por bacilos Gram-negativos foi de 2,4% (89/3.709 neonatos), sendo sepse (35,9%) e conjuntivite (31,4%) as síndromes mais frequentes. A maioria das infecções foram endêmicas (73,9%) e associadas a Enterobacteriaceae (95,5%), estes também foram relacionados à colonização, correspondendo principalmente as amostras de Enterobacter spp e Klebsiella spp.. Foram identificados dois surtos, durante o estudo, associados a Pseudomonas aeruginosa (N=10) e Acinetobacter baumannii (N=11). Os fatores de risco incluindo: tempo de internação, uso de antimicrobianos, ventilação mecânica, cateter vascular central, cirurgia e nutrição parenteral foram significativos em uma análise univariada e considerados um risco para infecção por bacilos Gram-negativos. A maioria das amostras de Enterobacteriaceae (80,9%) com resistência a 2 mig/mL de ceftazidima foram do fenótipo ESBL. O uso de cefalosporinas de terceira geração (ceftriaxona) na unidade neonatal favoreceu a emergência de bacilos Gram-negativos multiresistentes.

    Resumo em Inglês:

    The aims of this study were to determine endemic and epidemic infection due to Gram-negative bacilli, risk factors associated with colonization and infection by these organisms and the resistance phenotypes (ESBL, AmpC) in neonates admitted in a High Risk Nursery. The study was conducted during a 21 month period and included: a prospective study to evaluate the neonates with hospital infection and the use of third-generation cephalosporins; a case-control study to determine the risk factors associated with colonization/infection. Rectal and oropharynx cultures were also performed in four opportunities (September and November 2001, February and August 2002). The isolates for which the resistance of ceftazidime was 2 mg/mL were suspected of producing ESBL or AmpC b-lactamases. The incidence of infection by Gram-negative bacilli was 2.4% (89/3.708 neonates), and sepsis (35.9%) and conjunctivitis (31.4%) were the most common infections. The endemic infections were more prevalent (73.9%) and usually associated with Enterobacteriaceae (95.5%), being these organisms also related to colonization, corresponding mainly to isolates of Enterobacter spp. and Klebsiella spp. Two outbreaks of Pseudomonas aeruginosa (n=10) and Acinetobacter baumannii (n=11) were identified during the survey. Univariate analysis showed that risk factors for Gram-negative bacilli infection considered significant included: the length of stay before infection/colonization, exposure to antimicrobial agents, mechanical ventilation, central venous catheters, parenteral nutrition and surgery. The majority of resistance to ceftazidime among Enterobacteriaceae isolates (80.9%) was from ESBL phenotype. Administration of third-generation cephalosporins (ceftriaxone) led to the emergence of these multiresistant Gram-negative bacilli in the neonatal unit.
  • Sensibilidade aos antimicrobianos entre amostras de Enterococcus isolados na cidade de Porto Alegre, RS, Brasil Medical Microbiology

    d'Azevedo, Pedro Alves; Dias, Cícero Armídio Gomes; Lemos, Sibele Krebs; Bittencourt, José Augusto Ferreira; Teixeira, Lúcia Martins

    Resumo em Português:

    A resistência a várias classes de agentes antimicrobianos é uma característica marcante dos enterococos observada em diferentes regiões geográficas. Informações sobre amostras isoladas na região sul do Brasil ainda são limitadas. No presente estudo, 455 enterococos isolados consecutivamente de pacientes moradores na cidade de Porto Alegre, Brasil, foram identificados ao nível de espécie e testados em relação a sua sensibilidade aos antimicrobianos através de testes de difusão em agar. As espécies mais freqüentes foram E. faecalis (92,8%), seguidas por E. faecium (2,9%), E. gallinarum (1,5%), E. avium (1,1%), E. hirae (0,7%), E. casseliflavus (0,4%), E. durans (0,4%) e E. raffinosus (0,2%). Os testes de sensibilidade revelaram que 62,0% das amostras foram resistentes à tetraciclina, 42,6% à eritromicina, 24,8% ao cloranfenicol, 22,6% à ciprofloxacina, 22,0% à norfloxacina, 3,5% à ampicilina e 3,5% á nitrofurantoína. Resistência a níveis elevados de aminoglicosídeos foi encontrada em 37,8% das amostras, com 23,5% sendo resistente à gentamicina, 14,3% à estreptomicina e 2,8% a ambos gentamicina e estreptomicina. Nenhuma amostra com resistência adquirida à vancomicina ou produtora de b-lactamase foi encontrada. Os resultados indicam um significante percentual de amostras resistentes a diferentes antimicrobianos, apontando a necessidade de estratégias de controle para evitar a disseminação de cepas resistentes e de vigilância contínua para a detecção de características emergentes de resistência.

    Resumo em Inglês:

    Resistance to several classes of antimicrobial agents is a remarkable characteristic of enterococcal strains increasingly reported worldwide. Information about strains isolated in the southern region of Brazil is still limited. In this study, a total of 455 consecutive enterococcal isolates recovered from patients living in Porto Alegre, Brazil, were identified at species level and evaluated for their antimicrobial susceptibilities by agar diffusion testing. The most frequent species was E. faecalis (92.8%), followed by E. faecium (2.9%), E. gallinarum (1.5%), E. avium (1.1%), E. hirae (0.7%), E. casseliflavus (0.4%), E. durans (0.4%), and E. raffinosus (0.2%). According to the results of disk tests 62.0% of the strains were resistant to tetracycline, 42.6% to erythromycin, 24.8% to chloramphenicol, 22.6% to ciprofloxacin, 22.0% to norfloxacin, 3.5% to ampicillin, 3.5% to nitrofurantoin. High level resistance to aminoglycosides was found in 37.8% of the isolates, with 23.5% being resistant to gentamicin, 14.3% to streptomycin, and 2.8% to both gentamicin and streptomycin. No vancomycin resistant or b-lactamase producing isolates were found. The results indicate that a significant percentage of isolates are resistant to different antimicrobials, pointing out the need for control strategies to avoid dissemination of resistant isolates and for continuous surveillance for the detection of emerging resistance traits.
  • Variabilidade genética em espécies de Fusarium solani revelada pela técnica de impressão genética baseada em marcadores PCR Medical Microbiology

    Brasileiro, Bereneuza Tavares Ramos Valente; Coimbra, Maria Raquel Moura; Morais Jr, Marcos Antonio de; Oliveira, Neiva Tinti de

    Resumo em Português:

    O fungo Fusarium solani (teleomorfo Haematonectria haematococca) apresenta uma expressiva importância na agricultura por ser considerado patógeno para várias culturas de interesse econômico causando doença conhecida por podridão das raízes, além de ser patógeno aos animais e ao homem, provocando nestes últimos, micoses superficiais e sistêmicas. A complexidade associada a sua identificação correta através de métodos tradicionais justifica os esforços de usar marcadores moleculares para caracterização dos isolados. Neste trabalho, três métodos baseados na tecnologia da PCR (um por ribotipagem por PCR e dois por impressão genética por PCR) foram utilizados para investigar a variabilidade molecular de dezoito isolados de F. solani de quatro Estados brasileiros, coletados de diferentes substratos. A análise genética revelou a variabilidade intraespecífica dos isolados de F. solani, sem qualquer correlação para a origem geográfica e substrato. Seu polimorfismo foi observado até mesmo na seqüência conservada do locus do rDNA, e o marcador SPAR (GTG)5 mostrou o mais alto polimorfismo. Em conjunto, estes resultados poderão auxiliar nos estudos da relação entre variabilidade do perfil genético de isolados e os fenótipos de resistência de determinados cultivares às doenças provocadas pelo fungo, orientando programas de melhoramento vegetal.

    Resumo em Inglês:

    Fusarium solani fungus (teleomorph Haematonectria haematococca) is of relevance for agriculture, producing a disease that causes significant losses for many cultivars. Moreover, F. solani is an opportunistic pathogen to animals and humans. The complexity associated to its correct identification by traditional methods justifies the efforts of using molecular markers for isolates characterization. In this work, three PCR-based methods (one PCR-ribotyping and two PCR-fingerprinting) were used to investigate the molecular variability of eighteen F. solani isolates from four Brazilian States, collected from different substrates. Genetic analysis revealed the intraspecific variability within the F. solani isolates, without any correlation to their geographical origin and substrate. Its polymorphism was observed even in the very conserved sequence of rDNA locus, and the SPAR marker (GTG)5 showed the highest polymorphism. Together, those results may contribute to understand the relation between fungal genetic variability and cultivars resistance phenotypes to fungal-caused diseases, helping plant-breeding programs.
  • Perigos em leite não-pasteurizado comercializado no Brasil: ocorrência de Salmonella spp, Listeria monocytogenes e de resíduos químicos Medical Microbiology

    Nero, Luís Augusto; Mattos, Marcos Rodrigues de; Beloti, Vanerli; Barros, Marcia A.F.; Netto, Daisy Pontes; Pinto, José Paes A.N.; Andrade, Nélio José de; Silva, Wladimir P.; Franco, Bernadette D.G.M.

    Resumo em Português:

    A instabilidade do mercado de leite no Brasil força pequenos produtores de leite a procurar alternativas de comércio de sua produção, o que inclui a venda de leite cru para indivíduos que dão preferência a esse tipo de leite. Considerando a importância desse mercado e os conhecidos riscos à saúde que o consumo de leite cru pode representar, este estudo avaliou a qualidade microbiológica e a presença de Listeria monocytogenes, Salmonella spp., resíduos de cloretos, antimicrobianos e inseticidas (organofosforados e carbamatos) em leite cru produzido em 210 propriedades leiteiras localizadas em quatro importantes estados produtores de leite no Brasil (Paraná, São Paulo, Minas Gerais e Rio Grande do Sul). Em 66% das propriedades selecionadas, a ordenha era manual. Em 33% a ordenha era semi-automática (ordenha mecânica balde ao pé) e em apenas 1% o sistema de ordenha e armazenamento era totalmente mecânico (sistema fechado). Todas as amostras de leite cru foram negativas para L. monocytogenes, Salmonella spp e resíduos de cloretos. As contagens de aeróbios mesófilos foram superiores a 10(5) UFC/mL em 75,7% das amostras. Em 80,4%, as contagens de coliformes foram superiores a 10² UFC/mL. Escherichia coli foi detectada em 36,8% das amostras. Inseticidas e resíduos de antibióticos foram observados em 74,4% e 11,5% das amostras, respectivamente. Níveis inaceitáveis de microrganismos indicadores de higiene, inseticidas e resíduos de antibióticos foram considerados fatores de risco mais importantes que os dois patógenos estudados.

    Resumo em Inglês:

    Fluctuations in the Brazilian milk market force small milk producers to find temporary trade alternatives, which include selling raw milk to people who prefer this type of milk rather than heat-processed milk. Considering the importance of these small milk producers to the market and the well-known health risks associated to consumption of raw milk, this study evaluated the microbiological quality and the presence of Listeria monocytogenes, Salmonella spp., chlorine, antimicrobials and insecticides (organophosphates and carbamates) in raw milk produced in 210 small and medium farms located in four important milk-producing Brazilian states (Paraná, São Paulo, Minas Gerais and Rio Grande do Sul). In 66% of the selected farms the milking was manual. In 33% of them, the milking was semi-automatic, and only 1% were equipped with fully automatic milking systems. All raw milk samples were negative for L. monocytogenes, Salmonella spp and chlorine. Mesophilic aerobes counts were higher than 10(5) CFU/ml in 75.7% of the samples. In 80.4%, coliforms were over 10² CFU/ml. Escherichia coli was detected in 36.8% of the samples. Insecticides and antimicrobial residues were observed in 74.4% and 11.5% of the samples, respectively. The presence of unacceptable levels of hygiene indicators, insecticides and antimicrobial residues were considered more important risk factors than the two pathogens.
  • Arcobacter butzleri um enteropatógeno emergente: comunicação de dois casos de diarréia crônica Medical Microbiology

    Fernández, Heriberto; Krause, Sergio; Paz Villanueva, María

    Resumo em Português:

    Os primeiros dois casos de diarréia crônica por Arcobacter butzleri no sul do Chile são apresentados. As características clínicas, a ausência de outros enteropatógenos, vírus ou parasitas, o resultado do tratamento, bem como a associação epidemiológica entre ambos pacientes e o fato de A. butzleri ter sido a única bactéria isolada permitem assumir que este microrganismo seria o agente etiológico destes dois casos de diarréia crônica.

    Resumo em Inglês:

    The first two cases of chronic diarrhea due to Arcobacter butzleri in Chile are reported. The clinical findings, the absence of other enteropathogens, virus or parasites, the epidemiological association between both patients, the treatment outcome and the fact that A. butzleri was the only bacteria isolated, support the assumption that it was the etiological agent of these chronic diarrhea cases.
  • Caracterização de rizóbios capazes de nodular Arachis pintoi via análise de "RAPD" Environmental And Soil Microbiology

    Pinto, Patrícia Pereira; Paiva, Edilson; Purcino, Hortência; Passos, Raul Vinícius Magalhães; Sá, Nadja Maria Horta

    Resumo em Português:

    As relações genéticas de 85 estirpes de Rhizobium capazes de nodular Arachis pintoi foram determinadas usando o método de "RAPD" (Random Amplified Polymorphic DNA). As análises incluíram 75 estirpes isoladas de solos de Cerrado e 10 de diferentes origens. Os resultados indicaram que existe um alto grau de similaridade entre estas estirpes e que a distribuição geográfica pode afetar suas relações filogenéticas. Além disso, os resultados permitiram a seleção de "primers" mais adequados para a caracterização dessas estirpes de Rhizobium, os quais serão úteis para a implementação de estudos de competitividade nos solos de Cerrado.

    Resumo em Inglês:

    The genetic relationships of 85 Arachis pintoi nodulating Rhizobium strains were determined using the random amplified polymorphic DNA (RAPD) methods. The analysis included 75 strains isolated from Cerrado soils and 10 other ones of different origins. The results indicated that there is a high level of similarity between these strains and that geographic distribution may affect their phylogenetic relationship. In addition, the results allowed the selection of the most suitable primers for characterisation of these Rhizobium strains which will be useful for implementation of competitiveness studies in Cerrado soils.
  • Controle biológico de fire blight em pereiras empregando uma formulação de Pantoea agglomerans Eh 24 Environmental And Soil Microbiology

    Özaktan, Hatice; Bora, Tayyar

    Resumo em Português:

    Controle biológico de Erwinia amylovora através do uso de bactérias epifíticas tem sido considerado um método alternativo para o controle de "fire blight". Uma formulação de Pantoea agglomerans Eh 24 em talco foi utilizada em pereiras a 30% e a 100% de floração, em duas plantações selecionadas na região Aegean da Turquia. Os experimentos foram repetidos duas vezes (1999 e 2000) em cada plantação. A formulação de P. agglomerans foi aspergida nas pereiras naturalmente infectadas com E. amylovora. Nos experimentos de 1999 e 2000, a redução da porcentagem de ocorrência de "fire blight" foi reduzida aproximadamente em 63% e em 76%, respectivamente. Oxicloreto de cobre + maneb foi menos eficiente na redução da infecção por E. amylovora do que o tratamento com a bioformulação. P. agglomerans Eh 24 marcada com StrR+ foi aplicada a 30% e a 100% de floração para monitorar a colonização e a dinâmica da população de P. agglomerans nos brotos das pereiras. Após 18 dias, a população de P. agglomerans aumentou de 2x10(4) para 1,3 x 10(6) UFC/broto.

    Resumo em Inglês:

    Biological control by using epiphytic bacteria against Erwinia amylovora has been considered as an alternative method for controlling the disease. Talc-based formulation of Pantoea agglomerans strain Eh-24 was applied at 30% and 100% bloom on two pear orchards which were selected from different locations in the Aegean Region in Turkey. Pear orchard trials were replicated for two years (1999 and 2000) in each place. Talc-based formulation of P. agglomerans strain Eh-24 was sprayed on pear trees which were naturally infected with E. amylovora. In the orchard trials conducted in 1999 and 2000, talc-based formulation of P. agglomerans strain Eh-24 reduced the percentage of blighted blossoms on pear orchards by 63% to 76%, approximately. Copper oxychloride+maneb was less effective in reducing the incidence of blossom infection by E. amylovora in each pear orchard than the bioformulation treatment. P. agglomerans strain Eh-24 labelled with StrR+ was applied at 30% and 100% bloom to monitor the colonization and population dynamics of P. agglomerans on pear blossoms. The population size of P. agglomerans strain Eh-24 strR+ on pear blossoms increased from 2x10(4) to 1.3x10(6) cfu per blossom over 18 days.
  • Protocolo otimizado para extração simultanea de DNA e RNA de solo Environmental And Soil Microbiology

    Costa, Rodrigo; Gomes, Newton C.M.; Milling, Annett; Smalla, Kornelia

    Resumo em Português:

    Nesse trabalho descrevemos um protocolo otimizado para extração simultânea de DNA e RNA de solo. O tratamento das amostras de solo com etanol e posterior agitação com partículas foi uma estratégia bem sucedida para lise das células sem degradação significativa dos ácidos nucléicos, resultando em bom rendimento de DNA e RNA íntegros. O RNA transcrito pode ser amplificado com iniciadores com alvo no fragmento do gene da glutamina sintetase (glnA). Os fragmentos 16S rDNA, tanto do DNA como do cDNA, foram amplificados e analisados por DGGE. O método foi aplicado para amostras de solo e rizosfera (morango e canola). Dois outros protocolos para extração de ácidos nucléicos de solo foram aplicados para o mesmo lote de amostras, de forma a comparar os métodos quanto à eficiência e reprodutibilidade. Os perfis de DGGE mostraram não haver diferença relevante nos padrões obtidos. O método descrito é apropriado para o processamento rápido de muitas amostras e, conseqüentemente, adequado para estudos ecológicos.

    Resumo em Inglês:

    In this work we report an optimized protocol for simultaneous extraction of DNA and RNA from soil matrices. Treatment of soil matrices with ethanol followed by bead-beating worked as a successful strategy to lyse the cells without considerable degradation of nucleic acids, resulting in DNA and RNA of good yield and integrity. The reverse transcribed RNA could be amplified with primers targeting a glutamine synthetase (glnA) gene fragment. From both DNA and cDNA, 16S rDNA fragments were amplified and analyzed by Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE). The method was applied to soil and rhizosphere (strawberry and oilseed rape) samples. Two other protocols for the extraction of nucleic acids from soil were applied to the same set of samples in order to compare the methods in terms of efficiency and reproducibility. The DGGE profiles indicated no relevant differences between the patterns obtained. The method described here is suitable for rapid processing of many samples and therefore appropriate for ecological studies.
  • Indução de proteínas de Xylella fastidiosa expressas diferencialmente com extrato de citros Environmental And Soil Microbiology

    Bellato, Cláudia de M.; Garcia, Andréia K.M.; Mestrinelli, Fabiana; Tsai, Siu M.; Machado, Marcos A.; Meinhardt, Lyndel W.

    Resumo em Português:

    Estudos in vitro foram desenvolvidos para obter proteínas de Xylella fastidiosa expressas diferencialmente na presença de calos do hospedeiro, citros cultivar Pêra. Para otimizar a indução, desenvolveu-se um meio de cultura comum, o qual foi baseado na seiva do xilema de citros, para cultivar a bacteria e os calos de Pêra. Dados mostraram, após 72 h de cultivo neste meio, 10(8) unidades formadoras de colônias de X. fastidiosa por mL, e 0,79 g de peso seco de células de Pêra. Após testar diferentes métodos de co-cultivo da bactéria com calos de Pêra neste meio, observou-se que a melhor taxa de indução ocorreu quando X. fastidiosa foi cultivada em meio sólido enriquecido com um extrato derivado dos calos de Pêra. Análise em gel bidimensional (2DE) de X. fastidiosa (120 µg) cultivadas na presença do extrato revelou 414 proteínas expressas diferencialmente quando comparado com o perfil proteico obtido na ausência do extrato.

    Resumo em Inglês:

    An in vitro system was developed to induce and identify Xylella fastidiosa proteins that were differentially expressed in the presence of callus-derived extracts from its host, the citrus cultivar Pêra. To optimize the induction, we first developed a single culture medium for the growth of both, host and bacteria. This medium, CPXPm7, which mimics the citrus xylem sap, showed that X. fastidiosa at 72 h post-incubation had 10(8) colony forming units mL-1, while Pêra cells had the highest fresh weight content (0.79 g). After testing various methods of co-cultivation of the bacteria and host callus grown in this single medium, the best induction procedure was to grow X. fastidiosa in a solid medium amended with an extract of Pêra callus grown in CPXPm7. Analysis, by two-dimensional electrophoresis, of the X. fastidiosa proteins (120 µg of total proteins) grown in the presence of Pêra callus extract revealed 414 differentially expressed protein spots when compared to the protein profile obtained in the absence of the extract. The system developed in this study improves the induction and analysis of differentially expressed proteins of X. fastidiosa, which may be involved in pathogenicity.
  • Remoção de metais pesados por quitina e quitosana isoladas de Cunninghamella elegans (IFM 46109) Environmental And Soil Microbiology

    Franco, Luciana de Oliveira; Maia, Rita de Cássia C.; Porto, Ana Lúcia F.; Messias, Arminda Sacconi; Fukushima, Kazutaka; Campos-Takaki, Galba Maria de

    Resumo em Português:

    Quitina e quitosana foram extraídas a partir da massa micelial de Cunninghamella elegans (IFM 46109) e avaliou-se a aplicação destes polissacarídeos na remoção dos metais pesados cobre, chumbo e ferro preparados em solução aquosa. O crescimento de C. elegans foi acompanhado através da determinação de biomassa, pH, consumo de glicose e de nitrogênio. A extração de quitina e quitosana realizou-se através de tratamento álcali-ácido e a produção dos polissacarídeos foi de 23,8 e 7,8 %, respectivamente. A avaliação do processo de remoção dos metais pesados foi realizada utilizando-se os polissacarídeos em solução a 1% (p/v). Os níveis de biossorção de metais foram dependentes da concentração e do pH das soluções. Os melhores resultados foram obtidos em pH 4,0. A quitosana mostrou maior índice de biossorção para o íon cobre e a quitina para o ferro. Os resultados sugerem que C.elegans pode ser considerada uma fonte atrativa para a produção alternativa de quitina e quitosana, e que demonstra grande potencial de biossorção de metais pesados em ambientes poluídos.

    Resumo em Inglês:

    Chitin and chitosan were extracted from mycelial biomass of Cunninghamella elegans and the performance for copper, lead and iron biosorption in aqueous solution was evaluated. The growth curve of C. elegans was accomplished by determination of biomass, pH, glucose and nitrogen consumption. Chitin and chitosan were extracted by alkali-acid treatment and the yields were 23.8 and 7.8%, respectively. For the adsorption analysis, the process of heavy uptake metal sorption was evaluated using polysaccharides solutions (1% w/v). The rate of metallic biosorption was dependent upon the concentration and pH of metal solutions, and the best results were observed with pH 4.0. Chitosan showed the highest affinity for copper and chitin for iron adsorption. The results suggest that C. elegans (IFM 46109) is an attractive source of production of chitin and chitosan, with a great potential of heavy metals bioremediation in polluted environments.
  • Efeito inibitório do ácido acético na bioconversão de xilose em xilitol por Candida guilliermondii em hidrolisado de bagaço de cana Biotechnology

    Silva, Débora D.V.; Felipe, Maria G.A.; Mancilha, Ismael M.; Luchese, Rosa H.; Silva, Sílvio S.

    Resumo em Português:

    Hidrolisado de bagaço de cana-de-açúcar contendo uma concentração inicial de ácido acético de 3,5g/L foi utilizado como meio de fermentação para a bioconversão de xilose em xilitol pela levedura Candida guilliermondii FTI 20037. Ácido acético (2,0g/L) foi adicionado ao meio em diferentes tempos de fermentação, com o objetivo de avaliar o efeito deste ácido neste bioprocesso. O maior efeito inibitório deste ácido na bioconversão de xilose em xilitol pela levedura ocorreu quando este foi adicionado ao meio após 12h de fermentação. Nesta condição observou-se uma redução de 23,22% e 11,24%, respectivamente, no consumo de xilose e no crescimento celular em relação à fermentação em que a adição deste ácido ocorreu no tempo inicial de incubação. Como conseqüência do efeito inibitório, observou-se os menores valores de rendimento (0,39g/g) e produtividade (0,22g/L.h) de xilitol, correspondendo a uma redução de 36 e 48%, respectivamente, em relação aos valores obtidos com a adição de ácido acético nos outros tempos de fermentação. Os resultados obtidos permitem concluir que, nas condições experimentais empregadas neste trabalho, o efeito inibitório do ácido acético sobre a bioconversão de xilose em xilitol é dependente do tempo de fermentação em que a adição do ácido foi feita e não apenas de sua concentração no meio.

    Resumo em Inglês:

    Sugarcane bagasse hydrolysate (initial acetic acid concentration = 3.5g/L), was used as a fermentation medium for conversion of xylose into xylitol by the yeast Candida guilliermondii FTI 20037. Acetic acid (2.0g/L) was added to the medium at different times of fermentation, with the aim of evaluating its effects on the bioconversion process. The addition of acetic acid to the medium after 12h of fermentation resulted in the strongest inhibition of the yeast metabolism. In this case, the xylose consumption and cell growth were, respectively, 23.22 and 11.24% lower than when acid was added to the medium at the beginning of fermentation. As a consequence of the inhibitory effect, lower values of the xylitol yield (0.39g/g) and productivity (0.22g/L.h) were observed, corresponding to a reduction of 36 and 48%, respectively, in relation to the values obtained with the addition of acetic acid after other fermentation times. The results obtained allowed to conclude that, under the experimental conditions employed in this work, the inhibitory effect of acetic acid on the xylose-xylitol bioconversion depends on the fermentation time when this acid was added, and not only on its concentration in the medium.
  • Produção de CGTase por Bacillus alkalophilic CGII isolado de água residuária de uma fecularia de mandioca Biotechnology

    Freitas, Telma Luisa de; Monti, Rubens; Contiero, Jonas

    Resumo em Português:

    Estudou-se a produção de CGTase por uma nova cepa de Bacillus alkalophilic CGII, isolada de água residuária de uma fecularia de mandioca, durante cultivo em meio composto de 1,5% de amido, 1,5% de fonte de nitrogênio e 1% Na2CO3. A atividade enzimática foi alta quando se utilizou amido, maltodextrina e galactose como fontes de carbono. Quando se utilizou glicose no meio de cultivo não se observou produção da enzima. Atividade enzimática alta (88,6 U/mL) e melhor crescimento foram obtidos quando se aumentou a aeração. A caracterização da enzima mostrou um pH ótimo de 8,0 e temperatura ótima de 55ºC sendo que a enzima sofreu uma pequena ativação por Mg+ e Ca++. A enzima foi fortemente inibida por Hg+ e Cu+.

    Resumo em Inglês:

    GCTase production by a new strain of Bacillus alkalophilic CGII isolated from Brazilian wastewater of manioc flour industry was examined. The growth medium used was composed by 1.5% starch, 1.5% nitrogen and 1% Na2CO3. Higher activity was obtained with starch, maltodextrin and galactose. When glucose was added to the medium, no enzyme production was observed. High enzyme activity and growth were reached when aeration was increased (88.6 U/mL). The enzyme characterization showed an optimum pH and temperature 8.0 and 55ºC for starch hydrolyses, respectively. Mg+ and Ca++ showed small activation; however, Hg+ and Cu+ showed a strong enzyme inhibition.
  • Produção de lacase por Lepista sordida Biotechnology

    Cavallazzi, José Renato Pereira; Oliveira, Maria Goreti de Almeida; Kasuya, Maria Catarina Megumi

    Resumo em Português:

    Uma lacase de Lepista sordida foi caracterizada. O fungo produziu lacase e manganês peroxidase em meio líquido com fosfato de amônio, extrato de levedura e molibdato de amônio como fontes de nitrogênio 3 dias após a inoculação. Temperatura e pH ótimos para lacase foram 45ºC e 3,5, respectivamente.

    Resumo em Inglês:

    A Lepista sordida laccase has been characterized. Laccase and manganese peroxidase were detected in liquid medium with ammonium phosphate, yeast extract and ammonium molybdidate as nitrogen sources after 3 days of cultivation. Laccase optimal temperature and pH were 45ºC and 3.5, respectively.
  • Caracterização in vitro de herpes vírus bovino tipos 1.1 (BHV-1.1) e 1.2a (BHV-1.2a) gE negativos Virology

    Spilki, Fernando R.; Franco, Ana C.; Rijsewijk, Frans A. M.; Weiblen, Rudi; Flores, Eduardo F.; Roehe, Paulo M.

    Resumo em Português:

    O presente estudo teve como objetivo a caracterização das propriedades de crescimento in vitro de uma amostra brasileira de herpesvírus bovino tipo 1.2a que apresenta uma deleção no gene que codifica a glicoproteína E (BHV-1.2a gE-). Os tamanhos de placa, cinética de penetração e cinética de multiplicação do vírus BHV-1.2a gE- foram estudados e comparados com o vírus parental, bem como com um vírus BHV-1.1 gE- recombinante, o qual é derivado de uma amostra européia de BHV-1.1. Em termos de cinética de penetração, não foram observadas diferenças significativas quando comparados os vírus gE- com os parentais. A determinação da cinética de multiplicação não demonstrou diferenças significativas entre os quatro vírus estudados. Foi entretanto observado que 11 horas pós infecção os dois vírus gE- foram excretados das células em títulos significativamente maiores do que os vírus parentais. Não foram observadas diferenças significativas quando comparados os diâmetros de placas formadas pelos dois vírus parentais. Da mesma forma, os diâmetros de placas dos vírus gE- foram semelhantes nos três tipos celulares estudados. Entretanto, a comparação dos diâmetros de placas entre os vírus gE- e os parentais mostrou uma redução significativa das placas dos vírus gE- em todos os tipos celulares. Esta característica indica que a falta da gE teve o mesmo efeito em ambos os subtipos de BHV-1, representado por uma disseminação viral célula-célula reduzida.

    Resumo em Inglês:

    This study aimed the in vitro growth characterization of a previously constructed Brazilian bovine herpesvirus 1.2a with a deletion in the glycoprotein E gene (BHV-1.2a gE-). The plaque sizes, penetration and growth kinetics of the Brazilian BHV-1.2a gE- were studied and compared with the parental virus, as well as with a BHV-1.1 gE- recombinant derived from an European BHV-1.1 strain. No statistical differences were observed between the gE- recombinants and the respective parental viruses penetration assays were performed. When single step growth curves were studied, no statistical differences were observed between gE- and parental viruses. However, it was observed that both gE- viruses were excreted from cells in significantly higher titres at 11 hours post infection in comparison with parental viruses. No statistical differences were observed when plaque sizes of parental viruses or gE- viruses we analyzed separately in each cell type. However, both gE- recombinants displayed a significantly reduced plaque areas on three different cell cultures, in comparison with parental viruses, indicating that the lack of gE had the same effect on both BHV-1 subtypes, manifested by a restricted cell-to-cell spread in infected cells.
  • Avaliação de quatro detergentes utilizados para solubilização de proteínas de membrana de Xylela fastidiosa empregando eletroforese bidimensional Basic Microbiology

    Di Ciero, Luciana; Bellato, Cláudia de M.; Meinhardt, Lyndel W.; Ferrari, Fernanda; Castellari, Rafael R.; Marangoni, Sérgio; Novello, José C.

    Resumo em Português:

    O objetivo deste trabalho foi comparar a eficiência da solubilização de quatro detergentes comercialmente disponíveis, ASB 14, SB 3-10, CHAPS e Triton X100, na extração de proteínas de membrana da bactéria Xylella fastidiosa para estudos proteômicos. Estas proteínas foram solubilizadas em duas etapas em tampões diferenciados pelos detergentes e submetidas à eletroforese bidimensional (2-DE) em uma faixa de pH não linear de 3-10. Os detergentes ASB 14 e SB 3-10 foram os mais efecientes, revelando 221 e 157 proteínas, respectivamente, enquanto que o CHAPS e o Triton X100 resultaram somente 72 e 43 proteínas, respectivamente. A identificação das proteínas foi feita por 'peptide mass fingerprinting' em espectrometria de massa MALDI-TOF, através de peptídeos obtidos por digestão com tripsina in gel. Os 18 spots de proteínas do gel com tratamento com ASB 14 mostrou que 83% eram proteínas de membrana. Este estudo concluiu que o detergente ASB-14 foi o mais eficiente na solubilização de proteínas de membrana de Xylella fastidiosa.

    Resumo em Inglês:

    Four different detergents, ASB 14, SB 3-10, CHAPS and Triton X100, were utilized to determine the optimal detergent for the solubilization of membrane proteins from the phytopathogenic bacterium Xylella fastidiosa. These proteins were differentially solubilized in distinct buffers containing the detergent and subjected to bidimensional electrophoresis within the non-linear pH range of 3-10. The detergents ASB 14 and SB 3-10 were the most effective revealing 221 and 157 spots, respectively. CHAPS and Triton X100 were less effective and revealed only 72 and 43 spots, respectively. MALDI-TOF tryptic peptide mass fingerprinting of 18 excised proteins from the ASB 14 treatment revealed that 83% were membrane proteins and that the theoretical efficiency of solubilization for ASB 14 was estimated to be 87%. This study demonstrates the effectiveness of the detergent ASB 14 for the solubilization of membrane proteins from the bacterium X. fastidiosa.
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