Resumo em Português:

As micoses endêmicas podem ser um desafio com relação ao diagnóstico e a interpretação acurada dos dados laboratoriais é importante para garantir um tratamento mais apropriado para os pacientes. Embora o diagnóstico definitivo da histoplasmose (HP), uma das micoses endêmicas no mundo, seja determinado pelo exame direto com a observação de micro e macroconídeos do Histoplasma capsulatum (H. capsulatum), evidências sorológicas da infecção fúngica se torna importante uma vez que o isolamento dos agentes etiológicos é um procedimento demorado e com baixa sensibilidade. Uma variedade de imunoensaios tem sido usada para detectar anticorpos específicos contra o H. capsulatum. A técnica mais aplicada para a detecção de anticorpos é a imunodifusão, apresentando uma sensibilidade entre 70 a 100% e especificidade de dependendo da forma clínica. A fixação de complemento (CF), uma metodologia que foi extensivamente usada no passado, apresenta uma menor especificidade (60 to 90%). A detecção de antígenos fúngicos pelos imunoensaios é valiosa para indivíduos imunocomprometidos onde cada ensaio garante valores preditivos positivos variando de 96-98%. A maioria dos testes atual ainda utiliza antígenos complexos não-purificados obtidos de parede celular fúngica ou filtrados de cultura. Contudo, importância tem sido dada a imunoensaios clínicos utilizando antígenos altamente purificados e caracterizados, incluindo antígenos recombinantes. Neste manuscrito, nós revisamos as ferramentas atuais utilizadas no diagnóstico, como fixação de complemento e imunodifusão, sumarizando o desenvolvimento de novas tecnologias, reagentes e métodos, e discutiremos aqui os seus méritos relativos e desvantagens no imunodiagnóstico desta micose.

Resumo em Inglês:

Endemic mycoses can be challenging to diagnose and accurate interpretation of laboratory data is important to ensure the most appropriate treatment for the patients. Although the definitive diagnosis of histoplasmosis (HP), one of the most frequent endemic mycoses in the world, is achieved by direct diagnosis performed by micro and/or macroscopic observation of Histoplasma capsulatum (H. capsulatum), serologic evidence of this fungal infection is important since the isolation of the etiologic agents is time-consuming and insensitive. A variety of immunoassays have been used to detect specific antibodies to H. capsulatum. The most applied technique for antibody detection is immunodiffusion with sensitivity between 70 to 100 % and specificity of 100%, depending on the clinical form. The complement fixation (CF) test, a methodology extensively used on the past, is less specific (60 to 90%). Detecting fungal antigens by immunoassays is valuable in immunocompromised individuals where such assays achieve positive predictive values of 96-98%. Most current tests in diagnostic laboratories still utilize unpurified antigenic complexes from either whole fungal cells or their culture filtrates. Emphasis has shifted, however, to clinical immunoassays using highly purified and well-characterized antigens including recombinant antigens. In this paper, we review the current conventional diagnostic tools, such as complement fixation and immunodiffusion, outline the development of novel diagnostic reagents and methods, and discuss their relative merits and disadvantages to the immunodiagnostic of this mycosis.

Resumo em Português:

Extratos de acetato de etila obtidos dos fungos fitopatogênicos Diplodia maydis e Sclerotium rolfsii mostraram atividade bactericida contra bactérias multi droga resistentes isoladas de pacientes de Hospital Brasileiro.

Resumo em Inglês:

Ethyl acetate extracts of the phytopathogenic fungi Diplodia maydis and Sclerotium rolfsii presented antibacterial activity against multidrug resistant bacteria isolated from patients in the University Hospital (HUOP-Unioeste, Brazil).

Resumo em Português:

Vinte e uma cepas de Streptococcus mutans foram agrupadas pela eletroforese de enzimas codificadas por multilocus (MLEE). Seis isoenzimas apresentaram forte poder discriminatório (M1P, MPI, PLP, NSP, GOT e LAP). A MLEE é uma técnica robusta que pode ser empregada no estudo da diversidade clonal de cepas de S. mutans, em estudos epidemiológicos.

Resumo em Inglês:

Twenty-one Streptococcus mutans strains were clustered by Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE). Six isoenzymes showed strong infra-specific discriminatory power (M1P, MPI, PLP, NSP, GOT, and LAP). MLEE is a robust technique that may be used to explore clonal diversity of S. mutans isolates in epidemiological surveys.

Resumo em Português:

O estudo in vitro das interações entre S. mutans e S. sobrinus pode ser importante na determinação do papel desses microrganismos na formação de biofilmes nas estruturas dentais e seu potencial em induzir lesões cariosas. O objetivo da presente pesquisa foi estudar a supressão da formação da placa dental e sua recolonização por S. mutans rifampicina-resistentes e S. sobrinus estreptomicina-resistentes in vitro. Para avaliar as relações de competitividade entre essas espécies, cepas que foram previamente padronizadas foram incubadas em meio de cultura contendo diferentes carboidratos fermentáveis. Em intervalos de tempo determinados, amostras de S. mutans e S. sobrinus foram coletadas a partir de culturas mistas, diluídas e semeadas em placas com meio BHI-ágar contendo rifampicina ou estreptomicina para determinação do número de células viáveis de cada espécie por contagem de unidades formadoras de colônia. Para a avaliação da colonização bacteriana e recolonização da placa bacteriana in vitro, três experimentos foram realizados: I - co-cultivo de S. mutans e S. sobrinus; II - inoculação de S. mutans em placa bacteriana pré-formada por S. sobrinus; e III - placa bacteriana pré-formada por S. mutans dispersada e plaqueada em meio BHI-ágar contendo estreptomicina ou rifampicina para determinação do número de células viáveis para cada espécie. Os resultados indicaram uma predominância de S. mutans em relação ao S. sobrinus, demonstrando a capacidade do S. mutans em inibir a formação de placa por S. sobrinus e recolonizar a superfície dentária.

Resumo em Inglês:

The in vitro study of the interactions between S. mutans and S. sobrinus is important to determine the role of these microorganisms in the formation of biofilms on dental structures and their potential to induce carious lesions. The objective of this research was to study the suppression of bacterial plaque formation and its recolonization by rifampycin-resistant S.mutans and streptomycin-resistant S. sobrinus. To study the competitive relationship between these species, previously standardized strains were incubated in media containing different fermentable carbohydrates. At determined time intervals, samples were collected from mixed cultures of S. mutans and S. sobrinus, diluted and plated on BHI-agar containing rifampycin or streptomycin to determine the number of viable cells of each species by counting colony-forming units. In order to study the bacterial colonization process and in vitro recolonization of bacterial plaque, three experiments were performed: I - co-cultivation of S. mutans and S. sobrinus; II - inoculation of bacterial plaque pre formed by S. sobrinus with S. mutans; and III - bacterial plaque pre formed by S. mutans dispersed and plated on BHI- agar containing streptomycin or rifampicin to determine the number of viable cells for each species. The results indicated a predominance of S. mutans in relation to S. sobrinus, demonstrating the capacity of S. mutans to inhibit plaque formation by S. sobrinus and recolonize the surfaces.

Resumo em Português:

Cepas orais de Candida albicans coletadas de crianças saudáveis cárie ativas e livres de cárie com idade variando de 24 a 36 meses, foram estudadas. O propósito do estudo foi determinar a atividade da proteinase e da fosfolipase produzida por Candida albicans nos dois grupos e comparar com a diversidade genotípica usando o método AP-PCR. As cepas identificadas como C. albicans por testes morfológicos e de fermentação, foram cultivadas em meio ágar proteinase e fosfolipase a 37ºC por 7 e 4 dias, respectivamente. Após o período de incubação, a atividade enzimática das cepas proteinase e fosfolipase positiva foram medidas. Todas as cepas foram submetidas a técnica genotípica AP-PCR, usando o primer arbitrário AP-3. A análise enzimática demonstrou que não há diferença entre os dois grupos estudados. O método AP-PCR foi eficiente em demonstrar o polimorfismo genético de C. albicans intra indivíduos demonstrando uma maior diversidade clonal em crianças cárie ativas em relação as livres de cárie. Dendogramas de similaridade demonstraram semelhança na linhagem clonal apenas intra-indivíduos. Os resultados sugerem que o perfil enzimático não depende das características genotípicas das cepas.

Resumo em Inglês:

Candida albicans oral strains collected from caries-free and caries-active healthy children ranging from 24 to 36 months old, were studied. The aim of the study was to determine proteinase and phospholipase activities produced by Candida albicans in the two groups and to determine the phenotypic diversity of these enzymes based on genetic polymorphism using the AP-PCR method. Strains identified by morphological and fermentation tests as C. albicans were grown in proteinase and phospholipase agar media at 37ºC for 7 and 4 days, respectively. After the incubation period, the enzyme activity of the proteinase and phospholipase positive strains was measured. All strains were subjected to AP-PCR, using the arbitrary primer AP-3. The enzymatic analysis showed no differences between the two groups. The AP-PCR method was effective in demonstrating intra-individual genetic polymorphism in C. albicans, showing a greater clonal diversity in caries-active versus caries-free children. Dendograms of similarity showed only intra-individual clonal lineage. The results suggest that the enzymatic profile does not depend on the genotypic characteristics of the strains.

Resumo em Português:

A colonização da nasofaringe por Haemophilus influenzae (Hi) foi estudada em 114 crianças saudáveis com menos de 3 anos de idade e que freqüentam creches (day-care centers DCC) em Ribeirão Preto, estado de São Paulo, Brasil. Para cada uma das cepas isoladas foram determinados o biótipo, o sorotipo (por antisoro especifico e PCR) e a sensibilidade a 14 antibióticos. A freqüência de colonização por Hi foi de 72,0%. As cepas isoladas foram identificadas como pertencentes aos biótipos II (36,5%), I (21,5%), V (18,2%) e III (16,1%). A freqüência encontrada de cepas encapsuladas foi de 3,2% para o tipo f, 1,0% para o tipo b, 1,0% para o tipo d e 1,0% para o tipo e. A resistência para trimetoprim-sulfametoxazole e ampicilina foi de 46,2% e 10,7% respectivamente. Resistência múltipla foi encontrada em 14 (15,0%) das cepas analisadas. 13,9% das cepas analisadas eram produtoras de beta-lactamase, e não foi recuperada nenhuma cepa beta-lactamase negativa e ampicilina resistente. DCCs são considerados locais de risco, com um alto potencial de disseminação de microrganismos e por isto devem ser continuadamente monitorados com a finalidade de detectar a eliminação da colonização da nasofaringe por cepas H. influenzae tipo b das crianças que freqüentam DCC, ou detectar a sua substituição por outro tipo de cepa.

Resumo em Inglês:

Nasopharyngeal carriage of Haemophilus influenzae (Hi) was studied in 114 healthy children < 3 years old, attending day-care centers (DCCs) in Ribeirão Preto, State of São Paulo, Brazil. Biotype, serotype (by specific antisera and PCR) and antibiotic susceptibility to 14 antibiotics of each isolate were determined. Carriage rates of Hi were 72.0%. Isolates belonged to biotype II (36.5%), I (21.5%), V (18.2%) and III (16.1%). The prevalence of encapsulated Hi carriers was 3.2% for type f, 1.0% for type b, 1.0% for type d and 1.0% for type e. Resistances to trimethoprim-sulphamethoxazole and ampicillin were 46.2% and 10.7% respectively. Multidrug resistance was found in 14 (15.0%) of the isolates tested. Among the isolates, 13.9% were beta-lactamase producers; there were no beta-lactamase negative ampicillin resistant isolates. DCCs are niches with a high potential for the spread of microorganisms and should be continuously monitored to detect elimination or replacement of H. influenzae type b colonization.

Resumo em Português:

Noventa e três isolados nasofaringeanos de H. influenzae foram sorotipados através de 2 métodos de aglutinação em lamina (SAST 1 e SAST 2) e os resultados foram comparados com a sorotipagem por PCR. SAST 1 apresentou uma baixa correlação com os resultados obtidos por PCR (75,2%) enquanto que SAST 2 mostrou uma melhor concordância com os resultados da técnica molecular (93,5%). Estes resultados indicam que SAST 2 pode ser um método alternativo para a correta detecção de H. influenzae tipo b.

Resumo em Inglês:

Ninety-three nasopharyngeal Haemophilus influenzae isolates were serotyped by two slide agglutination methods (SAST 1 and SAST 2) and the results compared with those obtained by capsule type-specific PCR. SAST 1 presented a low correlation with results obtained by PCR (75.2%) while SAST 2 showed a better agreement with the molecular technique results (93.5%). These findings suggest that SAST 2 could be an alternative method for adequate detection of H.influenzae type b.

Resumo em Português:

Actinobacillus actinomycetemcomitans produz protease ativa sobre imunoglobulina G humana, sendo um dos mecanismos importantes de escape do microrganismo. No presente trabalho, foi analisada a atividade proteolítica de sobrenadante de cultivo de A. actinomycetemcomitans ATCC 43718 sobre imunoglobulina G humana em função de concentração, tempo de cultivo do microrganismo e tempo de incubação com IgG, por ensaio imunoenzimático. Adicionalmente, foi determinada a fração com atividade de protease por meio de análise de eluatos de cromatografia em coluna de Sephadex G 150. Os resultados obtidos demonstraram que A. actinomycetemcomitans liberou protease ativa sobre imunoglobulina G humana em sobrenadante de cultivo, sendo a sua maior atividade evidenciada na concentração de 27,5 mig proteína/mL, com tempo de cultivo de 72 horas e com 24 horas de incubação com IgG. A massa molecular da fração ativa de protease foi compreendida entre 43 a 150 kDa.

Resumo em Inglês:

Actinobacillus actinomycetemcomitans produces a protease to human immunoglobulin G that is an important evasion mechanism. In this study, the proteolytic activity of A. actinomycetemcomitans strain ATCC 43718 on human immunoglobulin G associated with culture supernatant concentrations, the growth period and the period of incubation with immunoglobulin G were evaluated by an enzyme linked immunosorbent assay. The protease fraction was detected by Sephadex G 150 chromatography. The results showed that A. actinomycetemcomitans produced a protease to human immunoglobulin G in the culture supernatant, and the highest activity was achieved witen the concentration was 27.5 mug protein/mL, after culturing for 72 hours and incubating with IgG for 24 hours. The molecular mass of the protease active fraction was from 43 to 150 kDa.

Resumo em Português:

O aumento no consumo de produtos naturais transformou seu uso em um problema de Saúde Pública devido a possibilidade do acesso a produtos sem adequadas condições de uso. A preocupação com a qualidade dos produtos naturais é devida à potencialidade de contaminação por fungos e ao risco da presença de micotoxinas. Noventa e uma amostras de plantas medicinais foram avaliadas quanto à contaminação fungica e ao potencial micotoxigênico de Aspergillus e Penicillium isolados nestas amostras. Os resultados indicaram que a micoflora predominante esteve distribuída entre 10 gêneros. Entretanto, 89,9% dos isolados corresponderam aos gêneros Aspergillus e Penicillium, extremamente importantes do ponto de vista micotoxicológico. Verificou-se que 21,97% dos isolados de Aspergillus e Penicillium demonstraram capacidade para produzir aflatoxinas (42,9%), ocratoxina A (22,4%) e citrinina (34,7%). A presença de fungos toxigênicos representa risco potencial de contaminação com micotoxinas e considerando o aumento no consumo de produtos de origem vegetal como alternativa terapêutica, é necessário estabelecer padrões para a presença de fungos toxigênicos em drogas vegetais a fim de reduzir os riscos à saúde do consumidor.

Resumo em Inglês:

The increase in the consumption of natural drugs have made their use a Public Health problem due to the possibility of access to products without adequate conditions of use. The concern with the quality of the natural products is due to the potential fungal contamination and the risk of the presence of mycotoxins. Ninety-one samples of medicinal plants were evaluated for the fungal contamination and the mycotoxigenic potential of Aspergillus and Penicillium isolated from the samples. Results indicated that predominant mycoflora was distributed in 10 genera. From these, 89.9% of the isolates corresponded to genera Aspergillus and Penicillium, which are extremely important from the mycotoxicological standpoint. 21.97% of the Aspergillus and Penicillium isolates proved to have the ability for producing aflatoxins (42.9%), ochratoxin A (22.4%) and citrinine (34.7%). The presence of toxigenic moulds represents a potential risk of mycotoxin contamination and considering the worldwide increased use of herbal products as alternative medicines, it is necessary setting standards for toxigenic moulds in crude herbal drugs in order to reduce the risks for consumers' health.

Resumo em Português:

Três meios de cultura foram avaliados quanto a produção de substâncias semelhantes a bacteriocinas (SSB) por Carnobacterium piscicola L 103, utilizando um sistema contínuo de cultura. A eficácia da substância antagonista contra Listeria monocytogenes foi testada em salmão embalado a vácuo. As SSB foram produzidas em bioreator de 1.0 L, em cultura contínua e em cultura estacionária, utilizando D-MRS, mod. D-MRS e APT como meios de cultivo. Filés de salmão foram inoculados com SSB (200 AU mL-1 e 800 AU mL-1) e L. monocytogenes (8.0 x 10¹ ufc cm-2) e mantidos a 4ºC. O crescimento de L. monocytogenes foi verificado a cada 5 dias, durante 15 dias. C. piscicola L 103 antigiu a fase estacionária depois de 12 h de incubação em cultivo em batelada, sendo a atividade SSB de 800 AU mL-1 nos meios D-MRS e mod. D-MRS e de 400 AU mL-1 no caldo APT. Durante a cultura continua, a atividade SSB aumentou até 6400 AU mL-1 nos dois tipos de caldo MRS, ao passo que no caldo APT esta atividade diminuiu a 50 AU mL-1, indicando uma clara vantagem de uso dos dois primeiros meios de cultura e do sistema de crescimento contínuo. SSB mostrou efeito bacteriostático sobre L. monocytogenes quando inoculada em salmão, com contagens de 6,0 x 10³ ufc cm-2 após 15 dias. Não foram encontradas diferenças significantes entre as duas atividades utilizadas. No ensaio controle, sem SSB, a contagem de L. monocytogenes aumentou até 1,0 x 10(6) ufc cm-2 após 15 dias de estocagem.

Resumo em Inglês:

Three culture media were studied for the bacteriocin like substance (BLS) production from Carnobacterium piscicola L 103 in a batch and continuous culture system. The efficacy of the antagonistic substance against Listeria monocytogenes was tested on vacuum packaged salmon. BLS was produced in a 1.0 L bioreactor by batch and continuous culture using D-MRS, mod. D-MRS and APT as nutrient broths. Salmon fillets were inoculated with BLS (200 AU mL-1 and 800 AU mL-1) and 8.0 x 10¹ cfu cm-2 of L. monocytogenes and stored at 4ºC. The growth of L. monocytogenes was determined every 5 days during 15 days. After 12 h of batch culture the stationary growth phase of C. piscicola L 103 started, with a BLS activity of 800 AU mL-1 in D-MRS and mod. D-MRS broth, and of 400 AU mL-1 in APT broth. During continuous culture BLS activity increased to 6400 AU mL-1 in both types of MRS broths, while in APT the activity decreased to 50 AU mL-1, indicating a clear advantage of the first two culture media and also of the continuous culture system. BLS had a bacteriostatic effect on L. monocytogenes when inoculated on salmon, with counts of 6.0 x 10³ cfu cm-2 after 15 days. No significant differences were found between the two BLS activities used. In the control without BLS, L. monocytogenes counts increased to 1.0 x 10(6) cfu cm-2 after 15 days of storage.

Resumo em Português:

Fungos do gênero Fusarium são bem conhecidos como patógenos para plantas e como produtores de micotoxinas. O objetivo deste trabalho foi avaliar qualitativamente a produção "in vitro" de desoxinivalenol e de zearalenona, em 24 diferentes isolados de Fusarium graminearum coletados a partir de cereais associados à doença Giberela na Região Sul do Brasil. Os isolados foram cultivados em arroz, durante 14 dias, a 28ºC. Os cultivos foram extraídos com metanol:água (40:60, v/v) e analisados por cromatografia em camada delgada. Outros tricotecenos (diacetoxiscirpenol, fusarenona-X, neosolaniol e nivalenol) e zearalenol, freqüentemente produzidos por Fusarium, também foram avaliados. Nas condições utilizadas, foi possível determinar o perfil de produção dessas micotoxinas, sendo que 67% dos isolados produziram zearalenona e 33% dos isolados produziram desoxinivalenol. Também foram detectadas as presenças de zearalenol, diacetoxiscirpenol e fusarenona. Finalmente, em nenhum dos isolados estudados foram encontrados nivalenol e neosolaniol.

Resumo em Inglês:

Fusarium fungi are known to be pathogenic for plants and mycotoxin producers. The in vitro production of deoxynivalenol and zearalenone was qualitatively evaluated in 24 different isolates of Fusarium graminearum collected from small cereals associated with the scab disease, in southern Brazil. Isolates were cultivated in rice during 14 days at 28ºC. Cultivates were extracted with methanol:water (40:60 v/v) and analyzed by thin layer chromatography. Other trichothecenes (diacetoxyscirpenol, fusarenon-X, neosolaniol and nivalenol) and zearalenol, often produced by Fusarium, were also analyzed. In the conditions used, it was possible to detect zearalenone and deoxynivalenol in 67% and 33% of the isolates, respectively. The presence of zearalenol, diacetoxyscirpenol and fusarenone was also detected. None of the isolates was found to produce nivalenol or neosolaniol.

Resumo em Português:

Devido ao hábito alimentar filtrante, os moluscos bivalves são contaminados por vírus presentes em águas contaminadas por esgoto. Os enterovírus são geralmente usados como modelos para a detecção de vírus em moluscos bivalves devido a sua importância em saúde pública. No presente estudo, ostras foram colocadas em aquários de vidro contendo água do mar adicionada de algas unicelulares. Dois tipos de experimentos foram realizados: a) ostras bioacumulando quatro diferentes concentrações de poliovírus: 5 x 10(4), 2,5 x 10(4), 5 x 10³, 5 x 10² PFU/mL durante 20h; b) tecidos de ostras inoculados diretamente com 6,0 x 10(5) e 1,0 x 10(5) PFU/mL. Após a semeadura, os tecidos foram processados por um método de adsorção-eluição-precipitação. Controles positivos foram realizados por inoculação de 6,0 x 10(5) PFU/mL de poliovírus diretamente nos tecidos processados das ostras. Os extratos teciduais foram testados para presença do vírus por ensaios de placa de lise (PFU), RT-PCR e cultura celular integrada ao PCR (ICC/PCR). Este último consistiu na inoculação das amostras sobre monocamadas de células VERO seguida de RT-PCR do fluido celular infeccioso. No primeiro experimento (ensaio de bioacumulação por 20h), foram detectados até 5 x 10³ PFU de poliovírus, após 24 e 48h de replicação nas células. Os ensaios de RT-PCR e ICC/PCR foram capazes de detectar 3 e 0,04 PFU de poliovírus, respectivamente nos ensaios de bioacumulação. Quando os extratos teciduais processados foram semeados, os ensaios de placa de lise demonstraram recuperação de vírus infecciosos em todas as concentrações testadas. Pudemos concluir que partículas viáveis de poliovírus podem ser detectadas em ostras após bioacumulação e que estas técnicas podem ser diretamente aplicadas na detecção de vírus em amostras ambientais.

Resumo em Inglês:

Shellfish are readily contaminated with viruses present in water containing sewage due to the concentrating effect of filter feeding. Enteroviruses are generally used as a model for the detection of viruses from shellfish due to their public health significance. In the present work, oysters were placed in glass aquaria containing seawater plus unicellular algae. Two experiments were performed: 1) oysters bioaccumulating four different poliovirus type 2 concentrations: 5 x 10(4), 2.5 x 10(4), 5 x 10³ and 5 x 10² PFU/mL during 20h; 2) oyster tissues directly inoculated with 6.0 x 10(5) and 1.0 x 10(5) PFU/mL. After viruses seeding, tissue samples were processed by an adsorption-elution-precipitation method. Positive controls were performed by seeding 6.0 x 10(5) PFU/mL of poliovirus type 2 directly on the final oyster tissue extracts. Oyster extracts were assayed for viruses recovery by plaque assay, RT-PCR and integrated cell culture-PCR methodologies (ICC/PCR). The last one was based on the inoculation of the samples onto VERO cell monolayer followed by RT-PCR analysis of the infected cell fluid. In the first experiment (20h bioaccumulation) until 5 x 10³ PFU were detected after 24 and 48h growth on VERO cells. Direct RT-PCR and ICC/PCR were able to detect 3 and 0.04 PFU of poliovirus, respectively, when bioaccumulation assay was used. When direct tissue virus seeding was performed, the plaque assays showed that polioviruses were recovered in all tested concentrations. Based on these results, it is possible to conclude that viable polioviruses can be detected in oysters after bioaccumulation and these techniques can be directly applied for monitoring virus contamination in environmental samples.

Resumo em Português:

A intoxicação alimentar estafilocócica ocorre devido à ingestão de alimentos contaminados com enterotoxinas. Essa contaminação tem sido oriunda, principalmente, da manipulação humana, ou de matérias-primas procedentes de animais portadores. Embora Staphylococcus aureus coagulase positiva, seja o principal agente de intoxicação alimentar, alguns pesquisadores enfatizam que os estafilococos coagulase-negativa (ECN) podem produzir as enterotoxinas estafilocócicas, podendo contribuir para a intoxicação alimentar. Este estudo teve como objetivos isolar os ECN de alimentos e verificar a capacidade enterotoxigênica dessas linhagens. Foram estudadas 88 amostras de alimentos, sendo que 22,7% foram positivas para ECN com crescimento entre 10² e 10(6) UFC/g or mL. A espécie predominante dentre as linhagens isoladas foi S. epidermidis (40%), seguido por S. warneri (20%), S. xylosus (20%), S. saccharolyticus (15%) e S. hominis (5%). Entre as linhagens isoladas, quatro apresentaram genes para produção de enterotoxinas pelo método de Reação da Polimerase em Cadeia (PCR), com predominância do gene sea. Não se detectou a produção de enterotoxina pelo método de aglutinação em látex (RPLA). Através dos resultados obtidos, observou-se que os ECN isolados de alimentos não devem ser ignorados quanto à sua capacidade toxigênica, necessitando de maior estudo e atenção para melhor caracterização desse grupo de microrganismos em alimentos.

Resumo em Inglês:

Staphylococcal food poisoning is caused by ingestion of enterotoxins preformed in the food contaminated essentially through human manipulation or raw material obtained from animals. Although coagulase-positive Staphylococcus aureus is the main agent responsible for food intoxication, some researches emphasise that coagulase-negative staphylococci (CNS) are able to produce staphylococcal enterotoxins and may be a potential cause of food poisoning. In the present study CNS were isolated from foods and the toxigenic capacity of the strains determined. A total of 88 food samples were analysed and 22.7% were positive for CNS strains. Staphylococcal counts ranged from 3.0 x 10² to 1.4 x 10(6) CFU/g or mL of food examined. S. epidermidis predominated among the isolates (40%). Further isolates included S. xylosus (20%), S. warneri (20%), S. saccharolyticus (15%), and S. hominis (5%). Four isolates were positive for enterotoxin genes, as detected by polymerase chain reaction, with sea being the predominant gene. Although no enterotoxin production was detected by the reverse passive latex agglutination method, the data showed that the toxigenic capacity of CNS should not be ignored, requiring investigation of this group of microorganisms in food.

Resumo em Português:

A eficácia antimicrobiana de conservantes empregados em formulações cosméticas foi avaliada usando Phenova® e Imidazolinidil uréia que inibiram o crescimento de Bacillus subtilis no extrato de Achillea millefolium L. e Nipagin®/ Nipasol® 0,2% em propilenoglicol não apresentaram efeito microbicida.

Resumo em Inglês:

The antimicrobial efficacy of three preservatives used in cosmetic formulations was evaluated. Phenova® and imidazolidinyl urea inhibited the growth of Bacillus subtilis when added to leaf extract of Achillea millefolium L., whereas 0.2% Nipagin®/ Nipasol® in propylene glycol did not.

Resumo em Português:

A produção de L-DOPA a partir de tirosina pela cepa mutante de Aspergillus orizae UV-7 foi melhorada através de mutação química. Diferentes cepas foram testadas quanto a produção de L-DOPA por fermentação submersa, observando-se que a cepa denominada SI-12 foi a melhor produtora (300 mg de L-DOPA por g de células). A produção de L-DOPA pela cepa mutante a partir de diferentes fontes de carbono foi testada em diferentes fontes de nitrogênio, pH inicial e temperatura. Em pH ótimo (5,0) e temperatura ótima (30ºC), todos os açúcares foram utilizados para formação de biomassa, com um rendimento de L-DOPA de 150 mg.g-1, e produtividade volumétrica máxima e especifica de 125 mg.l.h-1 e 150 mg.g-1.h-1, respectivamente. A velocidade de formação do produto aumentou 3 vezes, sendo esse aumento o maior já relatado na literatura. Para explicar o mecanismo cinético da formação de L-DOPA e a inativação térmica da tirosinase, os parâmetros termodinâmicos foram determinados aplicando-se o modelo de Arrhenius: no caso da cepa mutante, a entalpia de ativação e entropia foram 40kj/mol e 0,076 kj/mol.K para produção de L-DOPA e 116 kj/mol and 0,590 kj/mol.K para inativação térmica, respectivamente. Os valores para formação do produto foram mais baixos e os para desativação do produto foram mais elevados que os valores correspondentes à cultura parental, indicando que a cepa mutante foi termodinamicamente mais resistente à denaturação térmica.

Resumo em Inglês:

Aspergillus oryzae mutant strain UV-7 was further improved for the production of L-DOPA from L-tyrosine using chemical mutation. Different putative mutant strains of organism were tested for the production of L-DOPA in submerged fermentation. Among these putative mutant strains, mutant designated SI-12 gave maximum production of L-DOPA (300 mg L-DOPA.g-1 cells). The production of L-DOPA from different carbon source solutions (So= 30 g.l-1) by mutant culture was investigated at different nitrogen sources, initial pH and temperature values. At optimum pH (pHo= 5.0), and temperature (t=30ºC), 100% sugars were utilized for production and cell mass formation, corresponding to final L-DOPA product yield of 150 mg.g-1 substrate utilized, and maximum volumetric and specific productivities of 125 mg.l-1.h-1, and 150 mg.g-1 cells. h-1, respectively. There was up to 3-fold enhancement in product formation rate. This enhancement is the highest reported in literature. To explain the kinetic mechanism of L-DOPA formation and thermal inactivation of tyrosinase, the thermodynamic parameters were determined with the application of Arrhenius model: activation enthalpy and entropy for product formation, in case of mutant derivative, were 40 k j/mol and 0.076 k j/mol. K for L-DOPA production and 116 k j/mol and 0.590 k j/mol. K for thermal inactivation, respectively. The respective values for product formation were lower while those for product deactivation were higher than the respective values for the parental culture. Therefore, the mutant strain was thermodynamically more resistant to thermal denaturation.

Resumo em Português:

Embora muitos estudos tenham avaliado muitos dos fatores que afetam a eficiência da fermentação etanólica, a influência da concentração da biomassa na eficiência do processo tem recebido pouca atenção. Esse trabalho mostra que a influencia da concentração inicial de biomassa depende do que se considera "etanol produzido". Se, terminada a fermentação, considera-se como etanol produzido apenas aquele existente na fase aquosa do meio, o rendimento da fermentação decresce linearmente quando a concentração inicial de biomassa aumenta. Entretanto, se o etanol intracelular também é considerado, a concentração da biomassa não afeta o rendimento da fermentação.

Resumo em Inglês:

Although numerous studies have examined many of the factors that affect the efficiency of batch ethanol fermentation, little attention has been paid to the influence of the biomass concentration on this efficiency. This paper shows that the influence of the biomass initial concentration on the fermentation efficiency depends on what is considered "produced ethanol". If only the ethanol present in the medium aqueous phase at fermentation completion is considered, the fermentation efficiency linearly decreases when the biomass initial concentration increases. If, however, the intracellular ethanol is also considered as produced ethanol, the fermentation efficiency is not affected by the biomass concentration.

Resumo em Português:

Avaliou-se o crescimento e vigor das linhagens LE 96/17, LE 98/51, LE 98/53 e LE 98/56 de Lentinula edodes (Berk) Pegler em diferentes composições de meio de cultura. As linhagens foram provenientes da Micoteca do Módulo de Cogumelos da Faculdade de Ciências Agronômicas, Unesp, Campus de Botucatu. Os isolados foram obtidos por propagação vegetativa, pela transferência asséptica do micélio para o meio de cultura de extrato de serragem-dextrose-ágar. O crescimento e vigor do micélio foi fotografado diariamente com uma câmera digital, durante a incubação, até a colonização total da placa de Petri. As imagens foram analisadas pelo programa UTHSCSA ImageTool (freeware), versão 2.0, desenvolvido pela University of Texas Health Science Center, San Antonio, Texas. O modelo estatístico que melhor explicou a cinética de crescimento miceliano em área (mm²), das linhagens de cogumelos L. edodes, tem como componente determinístico a exponencial de uma função Gompertz. O vigor, avaliado através da cor do micélio (em escala de tons do cinza), revelou um comportamento similar entre as linhagens, com valor máximo entre o 4º e 5º dia e, em seguida apresentou declínio. Em meios de cultura mais enriquecidos, a velocidade de crescimento das linhagens de L. edodes foi menor e o vigor maior. O monitoramento digital permite uma avaliação objetiva do crescimento e vigor do L. edodes in vitro.

Resumo em Inglês:

The mycelium growth kinetics and vigor of shiitake (Lentinula edodes (Berk.) Pegler) strains LE 96/17, LE 98/51, LE 98/53, and LE 98/56 were studied under different agar medium compositions. The strains were from the mycological collection of the Módulo de Cogumelos, Faculdade de Ciências Agronômicas, Unesp-Botucatu, Brazil. Mycelium fragments from stock cultures were transferred to Petri dishes with Sawdust extract-Dextrose-Agar medium. The area of growth and vigor (density) of the mycelia were daily recorded with a digital camera, during incubation, until the complete colonization of the Petri dish. The images were analyzed by the freeware UTHSCSA ImageTool, v. 2.0, developed by the University of Texas Health Science Center, San Antonio. The kinetics of mycelium growth, as measured by the mycelium area (mm²), has as a deterministic component an exponential function of Gompertz. The vigor, as evaluated by mycelium color in gray scale, was similar for all strains, reached a maximal value between the 4th and 5th day of incubation and decreased further on. The velocity of growth of L. edodes strains was lower in enriched culture media, while vigor was higher. Digital monitoring permits a objective evaluation of the growth kinetics of L. edodes in vitro.

Resumo em Português:

Uma linhagem de Bacillus pumilus foi isolada e identificada de amostras de águas coletadas em um pequeno Igarapé do Rio Amazonas. Foi detectada atividade de restrição do tipo II nesta bactéria. A enzima foi purificada e o peso molecular da proteína nativa foi estimado por gel filtração e por eletroforese em gel de poliacrilamida. Foram determinados, o pH e temperatura ótimos e as necessidades de sais. Os ensaios do controle de qualidade mostraram uma ausência completa de "nucleases não específicas". As analises das clivagens e o seqüenciamento do DNA dos fragmentos de restrição permitiram uma demonstração inequívoca de que 5´GAG<FONT FACE=Symbol>¯</FONT>CTC 3´ é a seqüência de reconhecimento da enzima. Esta enzima foi denominada de BpuAmI e aparentemente é um neoesquisômero da enzima protótipo SacI. Este é o primeiro relato de um isoesquisômero e/ou neoesquisômero da enzima protótipo SacI identificada no gênero Bacillus.

Resumo em Inglês:

A strain of Bacillus pumilus was isolated and identified from water samples collected from a small affluent of the Amazon River. Type II restriction endonuclease activity was detected in these bacteria. The enzyme was purified and the molecular weight of the native protein estimated by gel filtration and SDS-PAGE. The optimum pH, temperature and salt requirements were determined. Quality control assays showed the complete absence of "nonspecific nucleases." Restriction cleavage analysis and DNA sequencing of restriction fragments allowed the unequivocal demonstration of 5´GAG<FONT FACE=Symbol>¯</FONT>CTC3´ as the recognition sequence. This enzyme was named BpuAmI and is apparently a neoschizomer of the prototype restriction endonuclease SacI. This is the first report of an isoschizomer and/or neoschizomer of the prototype SacI identified in the genus Bacillus.