Caracterização de Aeromonas spp isoladas de amostras de ostras e água por método microbiológico e molecular

Characterization of Aeromonas spp isolated from water and of oysters samples by microbiological and molecular methods

Resumos

Objetivou-se isolar e identificar bactérias do gênero Aeromonas de amostras de ostras e de água, pelos métodos microbiológico e molecular. A identificação do gênero Aeromonas foi realizada pelo método convencional e pela técnica da PCR e a caracterização das espécies foi realizada pela chave de identificação Aerokey II e pela técnica de RFLP-PCR do 16S rDNA. Foram identificadas 59 (98,3%) amostras de ostras e 15 (75%) amostras de água contaminadas por bactérias do gênero Aeromonas. Dos 74 isolados de Aeromonas spp. obtidos pela análise microbiológica, 53 (71,62%), 38 (65,51%) de amostras de ostras e 15 (100%) de amostras de água, confirmaram a caracterização do gênero pela técnica molecular. Quanto a identificação bioquímica das espécies 59,3% (n=35) e 40,6% (n=24) dos isolados de Aeromonassp. obtidos das amostras de ostras foram classificados como A. hydrophila e A. caviae, respectivamente; e para os isolados obtidos das amostras de água, 60% (n=9) foram classificados como A. hydrophila e 40% (n=6) como A. caviae; entretanto, somente a A. hydrophila foi confirmadapelo sequenciamento genético. Quanto a classificação através da RFLP-PCR 16S rDNA, foram obtidos padrões de bandas inespecíficos, impossibilitando a identificação das espécies por esta técnica. O grande número de amostras de ostras contaminadas com Aeromonas spp. e a identificação da A. hydrophila demonstram que este molusco pode oferecer risco à saúde dos consumidores, principalmente por ser consumido in natura e se tratar de um micro-organismo potencialmente patogênico para o ser humano.

água; Aeromonas; ostras; PCR

This study aimed to isolate and identify Aeromonas bacteria from samples of oysters and water, by microbiological and molecular methods. Identification of Aeromonas was performed by the conventional method and by PCR and species characterization was performed by identification key Aerokey II and by RFLP-PCR of 16S rDNA. 59 (98.3%) samples of oysters and 15 (75%) samples of water contaminated by Aeromonas bacteria were identified. Of the 74 isolates of Aeromonas spp. obtained by microbiological analysis, 53 (71.62%), 38 (65.51%) oyster samples and 15 (100%) of water samples confirmed the characterization of the genus by molecular technique. As to biochemical species identification, 59.3% (n = 35) and 40.6% (n = 24) of isolates from Aeromonas sp. obtained from oyster samples were rated as A. hydrophila and A. caviae, respectively; and from isolates obtained from water samples, 60% (n = 9) were classified as A. hydrophila and 40% (n = 6) as A. caviae; however, only the A. hydrophila was confirmed by genetic sequencing. Regarding the classification by RFLP-PCR 16S rDNA, patterns of nonspecific bands were obtained, making it impossible to identify the species by this technique. The large number of oyester samples contaminated with Aeromonas spp. and identification of A. hydrophila, demonstrate that this mollusk might present a risk to consumer health, mainly because it is consumed raw and is to a potentially pathogenic micro-organism to humans.

Aeromonas; oysters; PCR; water

• ¹
  Mendes ES, Lopes PP, Magalhães CA, Coelho MIS, Souza JCR, Cruz MCS, et al . Sazonalidade dos micro-organismos em ostras consumidas na grande Recife, PE. Hig. Alim. 2004; 18: 79-87.
• ²
  Pereira MA, Nunes MM, Nuernberg L, Schulz D, Batista CRV. Microbiological quality of oysters (Crassostreagigas) produced and commercialized in the coastal region of Florianópolis – Brazil. Braz. J. Microbiol. 2006 Fev 26; 37 (2): 159-62.
• ³
  Lucena RF, Delamare APL, Thomazi G, Ferrarini S, Zacaria, J e Echeverrigaray S.Aeromonas detection and characterization using genus-specific PCR and single-strand conformation polymorphism (SSCP).World JournalofMicrobiologyandBiotechnology. 2012; 28 (8): 3007-3013.
• ⁴
  Martins AGLA, Nascimento AR, Vieira RHSF, Serra JL, Rocha MMRM. Quantificação e identificação de Aeromonas spp. em águas de superfície do estuário do rio Bacanga em São Luís / MA (Brasil). Boletim Ceppa. 2009; 27: 107-18.
• ⁵
  Costa FN, Rossi Júnior OD. Bactérias do gênero Aeromonas em abatedouro de frangos. Arq. Bra. Méd. Vet. Zoot, 2002; 54 (5): 534-5.
• ⁶
  Chan, F.K.L., Ching, J.Y.L., Ling, T.K.W., Chung, S.C.S., Sung, J.J.Y.Aeromonasinfection in acute suppurative cholangitis: review of 30 cases. J.Infection, 2000; 40 (1): 69-73.
• ⁷
  Ozbas ZY, Lehner A, Wagner M. Development of a multiplex and semi-nested PCR assay for detection ofYersiniaenterocolitica and Aeromonashydrophila in rawmilk. Food Microbiol. 2000; 17 (2): 197-203.
• ⁸
  Santos LR, Nascimento VP, Oliveira SD, Flores ML, Pilotto F, Pontes AP, et al. Identificação de Salmonella através da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Arq. Fac. Vet. 2001; 29 (2): 87-92.
• ⁹
  Borrell N, Acinas SG, Figueras MJ, Martinez-Murcia AJ. Identification of Aeromonas clinical isolates by restriction fragment length polymorphism of PCR-amplified 16S rRNA genes. J. Clin. Microbiol. 1997; 35 (7): 1671–4.
• ¹⁰
  Silva, N da, Junqueira, V.C.A., Silveira, N.F.A. Manual de Métodos de Análise Microbiológica de Alimentos. 2º edição. Editora Varela. São Paulo, 2001
• ¹¹
  Costa FN, Rossi Júnior OD. Enterotoxigenicidade e espécies de Aeromonas isoladas em diferentes pontos do fluxograma de abate de frangos. Arq. Inst. Biol. 2007; 74 (1): 5-9.
• ¹²
  Carnahan AM, Behram S, Joseph SW. Aerokey II: aflexible Key for identifying clinical Aeromonassp.ecies. J. clin.Microbiol.1991; 29 (12): 2843-9.
• ¹³
  Uehara FI. Concordância entre o perfil de restrição do fragmento 16S rDNA e testes fenotípicos para determinação do posicionamento taxonômico de cepas de Aeromonas [dissertação]. São Paulo (SP): Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo. 2008.
• ¹⁴
  Evangelista-Barreto NS, Vieira RHSF, Carvalho FCT, Torres RCO, Sant'anna ES, Rodrigues DP, et al. Aeromonas spp. Isolated from oysters (Crassostrearhizophoerea) from a natural oyster bed, Ceará, Brazil. Rev. Inst. Med. Trop. 2006; 48 (3): 129-133.
• ¹⁵
  Gomes ML. Quantificação de Aeromonassp em amostras de ostras e relação com coliformes fecais e estreptococos fecais. Produção de enterotoxina e sensibilidade a antibioìticos a partir das cepas isoladas [internet] 2002 [acesso em 15 de outubro de 2009]. Disponível em: http://en.scientificcommons.org/33797824
• ¹⁶
  Colakoglu FA, Sarmasik A, Koseoglu B. Occurrence of Vibrio spp.AndAeromonas spp. In shellfish harvested off Dardanelles cost of Turkey. FoodControl. 2006; 17 (8): 648-52.
• ¹⁷
  Galvão JA, Furlan EF, Salán EO, Porto P, Oetterer M. Características físico–químicas e microbiológicas (Staphylococcus aureus e Bacilluscereus) da água e dos mexilhões cultivados na região de Ubatuba, SP. Ciênc. agrotec. 2006; 30 (6): 1124-9.
• ¹⁸
  Pereira CS, Possas CA, Viana CM, Rodrigues DP. Aeromonasspp. e Plesiomonasshigelloides isoladas a partir de mexilhões (Perna perna) in natura e pré-cozidos no Rio de Janeiro, RJ. Ciênc. Tecnol. Aliment.2004; 24 (4).
• ¹⁹
  Figueiras MJ, Soler L, Chacón MR, Guarro J, Martinez- Murcia AJ. Extended method for discrimination of Aeromonas spp..by 16s rDNA RFLP analysi. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2000; 50: 2069-73.
• ²⁰
  Arora SK, Neely AN, Blair B, Lory S, Ramphal R. Role of motility and flagellin glycosylation in the pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa burn wound infections. Infect Immun. 2005; 73 (7): 4395–8.
• ²¹
  Wahli T, Burr SE, Pugovkin D, Mueller O, Frey J. Aeromonassobria, a causativeagentofdisease in farmedperch, Perca fluviatilis L. J. FishDis. 2005; 28: 141-50.
• ²²
  Kozinska A, Figueras MJ, Chacon MR, Soler L. Phenotypic characteristics and pathogenicity of Aeromonasgenomo species isolated from common carp (Cyprinuscarpio L.). J. Appl. Microbiol. 2002; 93 (6): 1034–41.
• ²³
  Castro-Escarpulli F, Figueras MJ, Aguilera-Arreola G, Soler L, Fernandez-Rendon E, Aparício GO, et al. Characterisation of Aeromonas spp. isolated from frozen fish intended for human consumption in México. Int. J. Food Microbiol. 3003; 84 (1): 41– 49.
• ²⁴
  Graf J. Diverse Restriction Fragment Length Polymorphism Patterns of the PCR-Amplified 16S rRNA Genes in Aeromonasveronii Strains and Possible Misidentification of Aeromonas Species. J. Clin. Microbiol. 1999; 37 (10): 3194–7.
• ²⁵
  Ormen O, Granum PE, Lassen J, Figueiras MJ. Lack of agreement between biochemical and genetic identification of Aeromonas spp. APMIS. 2005; 113: 203-7.
• ²⁶
  Huys G, Kampfer P, Albert MJ, Kuhn I, Denys R, Swings J. Aeromonashydrophila subsp. Dhakensis subsp. nov., isolated from children with diarrhoea in Bangladesh, and extended description of Aeromonashydrophila subsp. Hydrophila (Chester 1901) Stanier 1943 (Approved Lists 1980).Int. l J. System. Evol. Microbiol. 2002; 52: 705–12.
• ²⁷
  Miñana-Galbis D, Farfán MM, Fusté MC, Lorén JG. Aeromonasbivalvium sp. nov., isolated from bivalve mollusks. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2007; 57: 582–7.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  15 Out 2014
• Data do Fascículo
  Set 2014

Histórico

• Recebido
  18 Fev 2014
• Aceito
  02 Set 2014