São descritos o cariótipo e a localização das regiões organizadoras de nucléolo (Ag-NOR) de uma amostra de Trichomycterus diabolus, coletada no córrego Hortelã (Botucatu, São Paulo, Brasil). A espécie apresentou 2n=56 cromossomos (42 metacêntricos, 12 submetacêntricos e 2 subtelocêntricos) e as regiões organizadoras de nucléolo localizadas próximas ao centrômero, no braço longo do maior par metacêntrico. A ocorrência de 2n=56 cromossomos em Trichomycterus diabolus é uma característica interessante, uma vez que, até o momento, todas as espécies cis-Andinas cariotipadas apresentaram 2n=54 cromossomos, enquanto que quase todas as espécies trans-Andinas apresentaram números diplóides diferentes. É discutida a possível origem desta inesperada estrutura cariotípica.
