Estudos químicos e biológicos de Microgramma vacciniifolia (Langsd. & Fisch.) Copel (Polypodiaceae)

Chemical and biological studies of Microgramma vacciniifolia (Langsd. & Fisch.) Copel (Polypodiaceae)

Resumo

Chemical studies with aerial parts of Microgramma vacciniifolia (Langsd. & Fisch.) Copel. afforded ²-sitosterol, hopan-22-ol, 6-metoxiapinenin-7-O-²-D-allopyranoside and a mixture containing ethyl esters of carboxilic acids. The structures of the coumpounds were elucidated by spectroscopy and GC-MS analysis. The total phenolics contents of the crude extract and fractions were determined by Folin-Ciocalteau method. The antioxidant activity was evaluated using the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). The AcOEt fraction showed better activity in DPPH assay (9.9 ± 0.03 µg/mL), and presented also higher contents of the total phenolic (93.60 ± 1.11 µg/mg). Antimicrobial and allelopathic effects of the crude etanolic extract and fractions also were evaluated. In addition, the combination of biological activities was discussed.

Microgramma vacciniifolia; Polypodiaceae; biological activity

Microgramma vacciniifolia; Polypodiaceae; biological activity

ARTIGO

Estudos químicos e biológicos de Microgramma vacciniifolia (Langsd. & Fisch.) Copel (Polypodiaceae)

Chemical and biological studies of Microgramma vacciniifolia (Langsd. & Fisch.) Copel (Polypodiaceae)

Marize T. L. P. Peres^I,*; Euclésio Simionatto^I; Sônia C. Hess^I; Vanderléa F. L. Bonani^I; Ana C. S. Candido^I; Caroline Castelli^I; Nilva R. Poppi^II; Neli K. Honda^II; Cláudia A. L. Cardoso^III; Odival Faccenda^III

^IDepartamento de Hidráulica e Transportes, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, 79070-900 Campo Grande - MS, Brasil

^IIDepartamento de Química, Universidade Federal de Mato Grosso de Sul, 79070-900 Campo Grande - MS, Brasil

^IIIDepartamentos de Química e de Computação, Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul , 79804-970 Dourados - MS, Brasil

ABSTRACT

Chemical studies with aerial parts of Microgramma vacciniifolia (Langsd. & Fisch.) Copel. afforded β-sitosterol, hopan-22-ol, 6-metoxiapinenin-7-O-β-D-allopyranoside and a mixture containing ethyl esters of carboxilic acids. The structures of the coumpounds were elucidated by spectroscopy and GC-MS analysis. The total phenolics contents of the crude extract and fractions were determined by Folin-Ciocalteau method. The antioxidant activity was evaluated using the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). The AcOEt fraction showed better activity in DPPH assay (9.9 ± 0.03 µg/mL), and presented also higher contents of the total phenolic (93.60 ± 1.11 µg/mg). Antimicrobial and allelopathic effects of the crude etanolic extract and fractions also were evaluated. In addition, the combination of biological activities was discussed.

Keywords:Microgramma vacciniifolia; Polypodiaceae; biological activity.

INTRODUÇÃO

Polypodiaceae é a maior família de samambaias, sendo composta por cerca de 170 gêneros e 7000 espécies.¹ São especialmente abundantes em florestas e áreas úmidas, mas ocorrem também em quase todas as áreas florísticas, de zonas do deserto a florestas chuvosas e dos trópicos ao ártico ou antártico. Polypodiaceae compreende principalmente espécies epífitas, ocasionalmente terrícolas ou rupícolas.²

Microgramma é um gênero americano, pertencente à família Polypodiaceae, incluindo cerca de 13 espécies. São espécies epífitas em florestas pantanosas, chuvosas e fechadas, encontradas freqüentemente ao longo de rios e riachos, também ocorrem em florestas secundárias. Este gênero é amplamente distribuído nos trópicos americanos, sendo encontrado no México e no sul da Flórida, até o sul da Argentina. Como uma epífita, o gênero Microgramma dispõe de raízes superficiais que se espalham pelas cascas das árvores e arbustos, absorvendo a matéria orgânica disponível.¹

Alguns estudos fitoquímicos com espécies do gênero Micro gramma descrevem a ocorrência de triterpenóides³ e compostos fenólicos.⁴

Microgramma vacciniifolia (Langsd. & Fisch.) Copel. é descrita como uma epífita reptante e/ou hemicriptófita reptante de distribuição neotropical. Pode ser encontrada como corticícola e/ou rupícola e é facilmente reconhecida por seu caule longo intensamente revestido por escamas e folhas dimorfas (as estéreis são ovadas e as férteis lanceoladas). Microgramma vacciniifolia é conhecida popularmente como erva-silvina, erva-silveira, erva-tereza, erva-de-lagarto, cipó-cabeludo, cipó-peludo. Relatos apontam esta espécie como um poderoso adstringente, sendo também recomendada para hemorragias, expectorações, diarréias, disenterias, cólicas intestinais e hidropsia.^5,6 No presente trabalho efetuou-se um estudo fitoquímico com a pteridófita Microgramma vacciniifolia, que possibilitou a identificação e o isolamento dos esteróides β-sitosterol e hopan-22-ol, da flavona glicosilada 6-metoxiapinenina-7-O-β-D-allopiranosídeo e de uma mistura de ésteres graxos. Avaliou-se o potencial biológico dos extratos e frações frente a três ensaios: antioxidante, antimicrobiano e alelopático.

PARTE EXPERIMENTAL

Material vegetal

As frondes verdes de M. vacciniifolia foram coletadas em abril de 2003, na zona urbana do município de Dourados -MS. O material vegetal foi identificado pela bióloga L. P. Clemente em comparação com exsicata previamente identificada pelo biólogo A. Salino (UFMG). Uma exsicata da espécie encontra-se depositada no herbário da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul de acordo com a identificação: Brasil.MS: Ponta Porã, Faz. Curupi, 19.VIII. 1999 I.A. Carneiro, L.P. Clemente & Sciamarelli 62 (CGMS/BHCB); idem, id. 10.IX. 2000, I.A.Carneiro16 (CGMS/BHCB).

Instrumentação

Os espectros de RMN foram obtidos em espectrômetro Bruker DPX-300. As amostras foram solubilizadas em CDCl₃ e MeOD, tomando-se como padrão interno de referência o TMS. As análises em CG-EM foram realizadas em um equipamento Varian- 3800 operando com impacto de elétrons de 70 eV, equipado com coluna capilar CP-SIL (30 m x 0,25 mm). A identificação dos componentes foi baseada em comparações dos tempos de retenção e espectros de massas da biblioteca NBS/NIST.

Procedimento para obtenção dos extratos

O material coletado foi seco à temperatura ambiente e triturado. Foram transferidos 1,5 kg deste material para um recipiente de vidro de boca larga. Este material foi macerado em etanol (Chemco, 93%) e filtrado a cada 24 h por 10 dias, até que os metabólitos secundários presentes nos tecidos fossem completamente extraídos. A evaporação foi realizada em rotavapor, fornecendo 50,2 g do extrato etanólico bruto (EEB). Utilizou-se 20 g do extrato etanólico bruto de M. vac ciniifolia para o fracionamento. Foram dissolvidos com uma mistura de etanol/água a 1/9 (v/v) e submetidos à partição exaustiva líquido/líquido, em funil de separação, com os solventes hexano e acetato de etila (AcOEt), obtendo-se, após evaporação dos solventes, as frações semipurificadas: fração hexânica (Fr. Hex.) (2,04 g), fração acetato de etila (Fr. AcOEt) (2,12 g) e fração hidroetanólica (Fr. EtOH/H₂O) (10,5 g).

Determinação do teor de fenóis totais

A determinação do teor de fenóis totais presentes nas amostras foi feita por meio de espectroscopia na região do visível utilizando o método de Folin-Ciocalteu.^7,8 Os extratos e frações (5 mg) foram dissolvidos em 5 mL de metanol. Uma alíquota de 100 µL desta solução foi transferida para balões de 5 mL. A esta solução adicionou-se 1 mL de água destilada e, posteriormente, 0,2 mL do reagente Folin-Ciocalteu. Finalizando, adicionou-se 0,6 mL de uma solução 20% de Na₂CO₃ e completou-se o volume com metanol. Após 90 min, a absorbância das amostras foi medida a 750 nm utilizando-se cubetas de quartzo. O teor de fenóis totais (FT) foi determinado por interpolação da absorbância das amostras contra uma curva de calibração construída com padrões de ácido gálico (50 a 500 µg/mL) e expressos como mg de EAG (equivalentes de ácido gálico) por mg de extrato. A equação da curva de calibração do ácido gálico foi y = 0,0025x+0,0802, com coeficiente de correlação R = 0,9968. Todas as análises foram realizadas em triplicata.

Análise qualitativa da atividade antioxidante

Os materiais vegetais foram aplicados (2 µL de uma solução a 5 mg/mL, de cada material), em triplicata, sobre placas de alumínio impregnadas com sílica gel 60 F254 (Merck). Posteriormente, as placas cromatográficas foram eluídas com os seguintes sistemas de solventes: AcOEt/EtOH/H₂O 50/35/15 ou 30/30/40 e examinadas 30 min após a nebulização com DPPH em MeOH (0,4 mmol/mL). Os compostos ativos apareceram como sinais amarelo-claros sobre o fundo púrpura.⁹

Análise quantitativa da atividade antioxidante

A atividade seqüestradora de radicais livres para o EEB e para as frações hexânica, AcOEt e EtOH/H₂O foi determinada utilizando o método que emprega DPPH,^10,11 usando uma série de diluições. A 50 µL de várias concentrações dos extratos em metanol (10,0; 5; 2,5; 1,25; 0,62 e 0,31 mg/mL) foram adicionados 5 mL de solução de DPPH (0,004% em metanol). Após um período de 30 min de incubação em temperatura ambiente, as absorbâncias das amostras foram registradas contra um branco em 517 nm. A inibição do radical livre DPPH (em %) foi calculada pela expressão I % = (A_branco - A_amostra/A_branco) x 100. A concentração dos extratos que provocou 50% de inibição (EC50), foi calculada pela equação da reta. Os testes foram realizados em triplicata. Utilizaram-se como padrões o antioxidante sintético butil hidroxianisol (BHA) e os flavonóides quercetina e rutina.

Potencial de atividade alelopática

O EEB e as frações semipurificadas foram ensaiados com alface (Lactuca sativa cv Grand Rapids), marca Isla Pak, e cebola (Allium cepa cv Baia Periforme), marca Feltrin, adquiridos comercialmente. Os bioensaios de germinação e crescimento foram realizados no Laboratório de Pesticidas Naturais/UFMS. Para os bioensaios de germinação, aplicou-se a metodologia descrita por Nishimura et al..¹² Nas placas de Petri, previamente lavadas e esterilizadas em autoclave foram colocados discos de papel-filtro Wahtmann número 1 (5,5 cm de diâmetro), umedecidos com 1 mL de solução do extrato etanólico bruto e frações semipurificadas nas concentrações de 250, 500 e 1000 mg/L. Após a evaporação do solvente, foi adicionado 1,5 mL de Tween 80 (100 mg/mL) e o conjunto deixado em repouso por 12 h. Em seguida, cada disco de papel recebeu 50 diásporos das espécies alvo (alface/cebola), distribuídos aleatoriamente, com quatro repetições para cada extrato/fração, conforme recomendado na literatura.¹³ Como controle, procedimento similar foi utilizado, porém, aplicando-se somente o solvente, sem o extrato/frações. As placas de Petri contendo os diásporos foram levadas ao germinador, marca Eletrolab Modelo LA, com condições de luz (160 W), umidade (±80%) e temperatura (25 ºC alface, 15 ºC cebola, ± 2 ºC) constantes, sendo os discos de papel filtro mantidos úmidos por meio de regas com H₂O destilada, quando necessário. A contagem de sementes germinadas foi realizada diariamente, tendo como critério a protrusão radicular com 2 mm de comprimento. O experimento foi considerado concluído quando a germinação foi nula por 3 dias consecutivos. Para os bioensaios de crescimento foi utilizada a metodologia descrita por Barnes et al..¹⁴ As medidas das radículas e do hipocótilo/coleóptilo de 10 plântulas por placa foram feitas 3 dias após a germinação utilizando-se papel milimetrado. No presente trabalho foram desenvolvidos 4 ensaios com extratos/frações de M. vacciniifolia, com 4 tratamentos (0, 250, 500 e 1000 mg/L) e 4 repetições. Cada parcela constituiu-se de 50 diásporos para a germinação e 10 para o crescimento da radícula/coleóptilo. O tempo médio de germinação foi calculado de acordo com a metodologia descrita por Laboriau.¹⁵

Os dados foram submetidos à análise estatística ANOVA com nível de significância 0,05 quando os testes envolveram comparação de mais de duas médias e teste de Dunnet para a comparação múltipla de duas médias, ou seja, para verificar quais concentrações do EEB e frações aplicadas apresentaram diferenças significativas (p<0,05) em relação ao controle.

Os resultados de crescimento são apresentados em porcentagem em relação ao controle, sendo que zero representa o controle, valores positivos representam estímulo e valores negativos representam inibição.¹⁶

Atividade antimicrobiana

A atividade antimicrobiana das amostras dos extratos foi determinada pelo método de concentração inibitória mínima (CIM). Uma coleção de 10 microorganismos foi usada, incluindo 7 bactérias: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Bacilus subtilis, Salmonella setubal e 3 fungos: Candida albicans, Cryp tococcus neoformans, Sacaromiceae cereviseae. Cepas padrões foram obtidas da American Type Culture Collection (ATCC) e os antibióticos cloranfenicol e nistatina foram usados como padrões. A CIM foi determinada em 96 placas de cultura usando o método de microdiluição e uma suspensão de microorganismos com uma densidade de 10⁵ UFC/mL com caldo de caseína-soja, incubado por 24 h a 37 ºC para bactérias. Para fungos utilizou-se caldo Sabouraund, com um período de incubação de 72 h a 25 ºC. As culturas que não apresentaram crescimento foram usadas para inocular placas de meio sólido (Agar Muller Hinton e Agar Sabouraud) com o objetivo de determinar a concentração mínima letal (CML). As amostras controle e testes foram ensaiadas simultaneamente, em triplicata, conforme técnica descrita previamente.^17-19

Isolamento dos constituintes

Parte da fração hexânica de M. vacciniifolia (1,5 g) foi submetida a processo de purificação em coluna cromatográfica. O fracionamento foi realizado com sílica gel 60 Merck (0,063-0,200 mm), eluída com gradientes de solventes, hexano/AcOEt em ordem crescente de polaridade, sendo coletadas 500 frações de 50 mL. As frações 23-44, eluídas com o sistema hexano/AcOEt 98/2, renderam um óleo (140,6 mg). Este óleo foi analisado por cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massas. A comparação do espectro de massas, correspondente a cada sinal, com os da biblioteca do aparelho possibilitou a identificação de quatro substâncias: hexadecanoato de etila (1, 64,7%), oleato de etila (2, 13,8%), 15-metil-heptadecanoato de etila (3, 5,0%) e o éster etílico do ácido linoleico (4, 4,8%) com índice de similaridade de 89, 93, 95 e 90%, respectivamente.

Hexadecanoato de etila: t.r. 49,010 min; CG-EM m/z: 284 [M]⁺ (45%), 241 (51%), 199 (34%), 157(78%), 101(90%), 88(100%), 73 (59%).

Oleato de etila: t.r. 54,287 min; CG-EM m/z: 310 [M]⁺ (12%), 264 (50%), 222 (20%), 180 (14%), 155 (27%), 137 (22%), 124 (20%), 111 (31%), 101 (32%), 97 (53%), 83 (61%), 69 (66%), 55 (100%), 43 (25%).

15-metil-heptadecanoato de etila: t.r. 55,028 min; CG-EM m/z: 312 [M]⁺(63%), 269 (16%), (12%), 157 (27%), 101 (68%), 88 (100%), 57 (28%).

Ácido linoleico etil éster: t. r. 54,033 min; CG-EM m/z: 308 [M]⁺ (7%), 262 (30%), 220 (4%), 178 (16%), 150 (17%), 135 (24%), 121 (22%), 109 (33%), 95 (56%), 81 (81%), 67 (100%), 55 (39%), 41 (28%).

A fração 62-71 (30,9 mg), eluída com hexano/AcOEt 90/10, foi purificada possibilitando o isolamento do triterpenóide pentacíclico hopan-22-ol (5). Na fração 132-150 (110,7 mg), eluída com hexano/acetato de etila (85/15), após análises espectrais e comparação com padrões por CCD, identificou-se o esteróide β-sitosterol (6).

A fração acetato de etila foi fracionada em Sulpelclean^TM LC-18 e purificada por CLAE usando RP-18. Este procedimento permitiu o isolamento da flavona 6-metoxiapinenina-7-O-β-D-allopiranosídeo (7, 8 mg). Dados de RMN da flavona 6-metoxiapinenina-7-O-β-D-allopiranosideo: ¹H RMN (300 MHz, MeOD): Δ 3,35 (s, OMe), 3,07 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 3,40 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 5,18 (d, 1H, J=8,4), 6,75 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,98 (d, 2H, J=8,4), 7,94 (d, 2H, J=8,4). ¹³C RMN (75 MHz, MeOD): Δ 61,4, 62,5, 71,3, 74,7, 78,0, 78,5, 95,8, 102,0, 103,7, 107,5, 117,1, 123,1, 129,6, 134,2, 154,1, 154,3, 157,9, 162,9, 166,9, 184,4.

Análise em CLAE-DAD

A análise da fração acetato de etila em CLAE foi realizada com um sistema ternário de solventes, equipado com autoamostrador e detector arranjo de diodos. O software Star WS (workstation) foi usado na medida das áreas dos cromatogramas. Foi utilizada a coluna com fase reversa RP18 (25 cm x 4,6 mm x 5 µm), com uma pequena pré-coluna de proteção (2,5 cm x 3 mm x 5 µm), contendo a mesma fase. O processo de eluição foi carreado com um programa de gradientes de solvente metanol/água/acetonitrila (1/84/15) por 40 min até metanol/água/acetonitrila (1/15/84), retornando às condições iniciais após 10 min.

Preparação dos extratos

As amostras foram preparadas com 20 mg de extrato em 5 mL de hexano (ultrasom por 2 h). Uma limpeza foi realizada em Sulpelclean^TM LC-18 (1 g, 55-105 µm, 6 mL) obtido da Supelco Park/USA. Após, a amostra foi adicionada na coluna e eluída com metanol/ água 80/20 v/v (Fração 1) (2 x 1 mL), metanol (Fração 2) (3 x 1 mL) e hexano (Fração 3) (5 x 1 mL). A fração 3 foi filtrada através de Milex filtro, (0,45 µm diâmetro do poro) reconstituída em 3 mL com metanol e purificada por CLAE-UV.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

A atividade seqüestradora de radicais livres foi determinada pelo teste DPPH. Em um primeiro momento, o extrato bruto e as frações hidroetanólica, acetato de etila e hexânica de M. vacciniifolia foram testadas qualitativamente quanto a suas atividades antioxidantes mediante o ensaio com DPPH em CCD, onde foi analisada visualmente a intensidade de formação de halos pelas amostras e comparados com os padrões. Observou-se neste teste que as amostras oriundas do extrato bruto e da fração acetato de etila apresentavam uma forte atividade, enquanto as amostras das frações hexânica e hidroetanólica foram inativas e moderadamente ativas, respectivamente.

A análise quantitativa da atividade antioxidante do extrato bruto e frações de M. vacciniifolia foi determinada pelo método que também emprega o radical livre DPPH. Neste procedimento fizeram-se leituras em um espectrofotômetro e determinou-se a EC50. Como mostrado na Tabela 1, observa-se que a maior capacidade de seqüestrar radicais livres é atribuída à fração acetato de etila, que apresentou uma EC50 de 9,9 ± 0,03 µg/mL. A fração hexânica foi a menos ativa, apresentando o maior valor de EC50 (235,4 ± 3,20 µg/mL). A atividade antioxidante apresentou a seguinte ordem decrescente: Quercetina > BHA > Rutina > Fr. AcOEt > EEB > Fr. EtOH/H₂O > Fr. Hex..

Após a determinação do potencial antioxidante de M. vacciniifo lia, efetuou-se a determinação dos teores de fenóis totais. Os teores de fenóis totais contidos no extrato bruto e frações foram determinados pelo método colorimétrico que utiliza o reagente Folin-Ciocalteau. Os resultados são expressos como equivalentes ao ácido gálico (µg/mg de extrato). De acordo com os dados apresentados na Tabela 1, a amostra que apresentou maior teor de fenólicos totais foi a Fr. AcOEt, com os valores de 93,60 ± 1,11 µg mg^-1.

Sendo a Fr. AcOEt do extrato etanólico bruto de M. vacciniifolia a que apresentou os maiores teores de fenóis totais e, também, aquela mais ativa frente ao radical DPPH, esta foi submetida a um estudo utilizando-se CLAE, em que foram investigados os perfis cromatográficos em duas situações: antes da adição do radical livre DPPH e após a adição de DPPH. A Figura 1 ilustra os cromatogramas obtidos a partir da injeção de alíquotas das duas amostras investigadas. Comparando-se o cromatograma apresentado na Figura 1a, obtido antes do tratamento com DPPH, com aquele apresentado na Figura 1b, obtido após a adição do DPPH, é possível observar que, na região de zero a 2 min, ocorreu uma redução acentuada na intensidade dos sinais, os quais podem contribuir para a atividade antirradicalar. Supõe-se que a Fr. AcOEt apresenta várias substâncias que reagem com o DPPH, o que está de acordo com os resultados dos testes de avaliação da atividade antioxidante, descritos na Tabela 1. A flavona 6-metoxiapinenina-7-O-β-D-allopiranosídeo, isolada da Fr. AcOEt, foi analisada quanto a sua atividade antirradicalar frente ao DPPH, através de CCD e espectrofotometria, sendo inativa nas maiores concentrações testadas. Em trabalhos anteriores foi analisada a atividade antioxidante da apigenina na forma não glicosilada, a qual também foi descrita como inativa frente ao DPPH.^20,21 Observa-se, portanto, que a apigenina é inativa frente ao radical DPPH, independente de estar na forma glicosilada ou tri-hidroxilada. A Figura 2 mostra a estrutura da flavona, juntamente com os demais compostos identificados neste estudo.

O EEB de M. vacciniifolia e frações derivadas foram submetidoa a testes de avaliação da atividade antimicrobiana, sendo que a Fr. Hex. foi a mais ativa frente aos fungos Sacharomices cereviseae e Candida albicans, com MIC de 0,25 mg/mL. Já nos testes contra bactérias observou-se maior resistência contra a Fr. Hex., com valores de MIC superiores a 0,5 mg/mL. As outras amostras (EEB, Fr. AcOEt e Fr. EtOH/H₂O) apresentaram valores de MIC superiores a 0,5 mg/mL, sendo consideradas pouco ativas.

Quanto aos resultados obtidos nos ensaios alelopáticos, observou-se que o EEB de M. vacciniifolia reduziu significativamente o índice de velocidade de germinação (IVG) de alface (dicotiledônea), nas maiores concentrações ensaiadas (1000 mg/L). Com cebola (monocotiledônea) nenhum efeito significativo na germinação foi observado, para EEB. Com relação às frações, constatou-se que todas reduziram o IVG de alface, verificando-se atrasos na germinação de 76% pela Fr. Hex., 50% pela Fr. AcOEt, e 56% pela Fr. EtOH/H₂O, em relação ao controle, na maior concentração ensaiada (1000 mg/L). Com relação à germinabilidade, apenas a Fr. AcOEt reduziu significativamente a porcentagem de germinação de alface em 43%, em relação ao controle, na concentração de 1000 mg/L. Nos testes com cebola, a Fr. Hex. e a Fr. AcOEt afetaram a germinação das sementes, reduzindo o IVG (63 e 33%) e a porcentagem de germinação (62 e 29%), respectivamente, na maior concentração ensaiada (1000 mg/L). Nos ensaios de crescimento, apresentados em porcentagem em relação ao controle, a raiz primária de alface foi estimulada pelo EEB e pela Fr. EtOH/H₂O nas menores concentrações ensaiadas (250 mg/L), enquanto que a Fr. AcOEt inibiu o crescimento inicial da raiz primária de alface em 60% em relação ao controle, na concentração de 1000 mg/L. O crescimento do hipocótilo de alface foi estimulado pelas menores concentrações ensaiadas do EEB e de todas as frações. O comprimento médio da raiz primária de cebola foi reduzido em 16% pela Fr. Hex. na concentração de 1000 mg/L. A Fr. AcOEt, em todas as concentrações ensaiadas, reduziu o crescimento da raiz primária de cebola, sendo em 81%, na maior concentração ensaiada (1000 mg/L). O comprimento médio do coleóptilo de cebola foi inibido pela maior concentração da Fr. Hex. (-24%) e Fr. AcOEt (-30%). O EEB e a Fr. EtOH/H₂O não interferiram no crescimento de cebola.

O atraso na germinação, a redução da porcentagem de sementes germinadas, a inibição do crescimento da raiz primária e as alterações morfológicas observadas para as espécies ensaiadas com o extrato etanólico bruto e frações semipurificadas de M. vacciniifolia sugerem potencial de atividade alelopática desta espécie.

Considerando a atividade antioxidante e o teor de fenóis totais, diversos são os relatos que justificam que a alta atividade esteja relacionada à presença de compostos fenólicos.^22-24 No caso da espécie M. vacciniifolia esta abordagem pode ser aplicada, pois a fração mais ativa em relação à atividade antioxidante (Fr. AcOEt) foi também a que apresentou maior teor de compostos fenólicos. Classes de compostos fenólicos com propriedades antioxidantes também podem apresentar propriedades antimicrobianas, tais como flavonóides e taninos,^25-28 o que demonstra que algumas substâncias antioxidantes que atuam seqüestrando radicais livres também agem no combate a microorganismos, o que tem tornado importante o estudo em conjunto das propriedades antioxidantes e antimicrobianas de frações e extratos de plantas.^29,30 Compostos fenólicos também podem exibir propriedades alelopáticas. Entre as substâncias fenólicas descritas por suas ações alelopáticas podem-se citar os derivados dos ácidos cinâmico e benzóico, sendo os mais freqüentes clorogênico, p-cumárico, ferúlico, cafeíco, p-hidroxibenzóico, siríngico e vanílico. Representantes pertencentes a classes como cumarinas, quinonas, flavonóides e taninos também são conhecidos como inibidores da germinação de sementes e do crescimento de plantas. Ácidos graxos de cadeia longa, identificados na fração hexânica de M. vacciniifolia, também são citados como compostos que apresentam propriedades alelopáticas.^31,32

MATERIAL SUPLEMENTAR

As tabelas relativas aos testes alelopáticos e antimicrobianos encontram-se disponíveis gratuitamente em http://quimicanova.sbq.org.br, na forma de arquivo pdf, com acesso livre.

AGRADECIMENTOS

À Fundação de Apoio ao Desenvolvimento de Ensino, Ciência e Tecnologia de Mato Grosso do Sul (FUNDECT/MS). Ao CNPq pelas bolsas DCR e iniciação científica.

Recebido em 14/4/08; aceito em 13/11/08; publicado na web em 25/3/09

Material Supplementary

Figura 1S - clique para ampliar

Figura 2S - clique para ampliar

Tabela 1S - clique para ampliar

Tabela 2S - clique para ampliar

Tabela 3S - clique para ampliar

Tabela 4S - clique para ampliar

Tabela 5S - clique para ampliar

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  09 Jun 2009
• Data do Fascículo
  2009

Histórico

• Aceito
  13 Nov 2008
• Recebido
  14 Abr 2008