Levantamento molecular de patógenos transmitidos por carrapatos em pequenos mamíferos da Amazônia brasileira

Colle, Ana Cláudia; Mendonça, Ravena Fernanda Braga de; Maia, Maerle Oliveira; Freitas, Leodil da Costa; Witter, Rute; Marcili, Arlei; Aguiar, Daniel Moura de; Muñoz-Leal, Sebastián; Labruna, Marcelo Bahia; Rossi, Rogério Vieira; Pacheco, Richard de Campos

doi:10.1590/S1984-29612019086

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Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária

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Sumário

Original Article • Rev. Bras. Parasitol. Vet. 28 (4) • Oct-Dec 2019 • https://doi.org/10.1590/S1984-29612019086 copiar

Levantamento molecular de patógenos transmitidos por carrapatos em pequenos mamíferos da Amazônia brasileira

Autoria SCIMAGO INSTITUTIONS RANKINGS

Resumo

Pequenos mamíferos não voadores (marsupiais e pequenos roedores) foram capturados em três diferentes períodos, ao longo de 23 fragmentos florestais de três municípios (Alta Floresta, Sinop e Cláudia), localizados no bioma amazônico do Estado de Mato Grosso, no centro-oeste do Brasil. Os tecidos dos animais (fígado e baço) e sangue foram selecionados e submetidos a ensaios moleculares para a detecção do DNA de Babesia, Coxiella, Cytauxzoon, Hepatozoon, Theileria e agentes Anaplasmataceae. Um total de 230 espécimes (78 roedores e 152 marsupiais) foram capturados. Hepatozoon e agentes Piroplasmorida foram detectados em gambás (Didelphis marsupialis). Ao contrário, todas as amostras (sangue, fígado ou baço) coletadas dos pequenos mamíferos foram negativas para o gênero Coxiella e a família Anaplasmataceae, conforme detectado pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Análises filogenéticas inferidas pelas sequências parciais do gene 18S rRNA evidenciaram a ocorrência de novos haplótipos de Hepatozoon e Piroplasmorida. Futuros estudos determinando a importância do gambá-comun (D. marsupialis) nos ciclos epidemiológicos de Hepatozoon e Babesia em condições naturais, no bioma amazônico, são necessários.

Palavras-chave:
Hepatozoon; Babesia; bioma Amazônico; estado de Mato Grosso

Targeted DNA	Gene (PCR nucleotides size)	Primer sequence (5’-3’)	Cycling conditions of PCR assays	Reference
Mammal	GAPDH (590 bp)	Forward (CCTTCATTGACCTCAACTACAT) Reverse (CCAAAGTTGTCATGGATGACC)	95 °C for 5 min; 35 cycles of 95 °C for 15 s, 50 °C for 30 s and 72 °C for 30 s; and final extension of 72 °C for 5 min.	Birkenheuer et al. (2003)Birkenheuer AJ, Levy MG, Breitschwerdt EB. Development and evaluation of a seminested PCR for detection and differentiation of Babesia gibsoni (Asian genotype) and B. canis DNA in canine blood samples. J Clin Microbiol 2003; 41(9): 4172-4177. http://dx.doi.org/10.1128/JCM.41.9.4172-4177.2003. PMid:12958243. http://dx.doi.org/10.1128/JCM.41.9.4172-...
Hepatozoon spp.	18S rRNA (574 bp)	Forward (GGTAATTCTAGAGCTAATACATGAGC) Reverse (ACAATAAAGTAAAAAACAYTTCAAAG)	95 °C for 5 min; 35 cycles of 95 °C for 30 s, 57 °C for 30 s and 72 °C for 60 s; and final extension of 72 °C for 5 min	Almeida et al. (2012)Almeida AP, Marcili A, Leite RC, Nieri-Bastos FA, Domingues LN, Martins JR, et al. Coxiella symbiont in the tick Ornithodoros rostratus (Acari: argasidae). Ticks Tick Borne Dis 2012; 3(4): 203-206. http://dx.doi.org/10.1016/j.ttbdis.2012.02.003. PMid:22480930. http://dx.doi.org/10.1016/j.ttbdis.2012....
Piroplasmida	18S rRNA (551 bp)	Forward (CCGTGCTAATTGTAGGGCTAATACA) Reverse (GCTTGAAACACTCTARTTTTCTCAAAG)	95 °C for 5 min; 35 cycles of 95 °C for 30 s, 61 °C for 30 s and 72 °C for 30 s; and final extension of 72 °C for 7 min	Almeida et al. (2012)Almeida AP, Marcili A, Leite RC, Nieri-Bastos FA, Domingues LN, Martins JR, et al. Coxiella symbiont in the tick Ornithodoros rostratus (Acari: argasidae). Ticks Tick Borne Dis 2012; 3(4): 203-206. http://dx.doi.org/10.1016/j.ttbdis.2012.02.003. PMid:22480930. http://dx.doi.org/10.1016/j.ttbdis.2012....
Coxiella spp.	CTP synthase (504 bp)	Forward (TTATTTACCAACGTTCCTGAGCCG) Reverse (TTTATCCCGAGCAAATTCAATTATGG	95 °C for 5 min; 40 cycles of 95 °C for 60 s, 60 °C for 60 s and 72 °C for 60 s; and final extension of 72 °C for 10 min.	Reeves et al. (2008)Reeves WK, Loftis AD, Nicholson WL, Czarkowski AG. The first report of human illness associated with the Panola Mountain Ehrlichia species: a case report. J Med Case Reports 2008; 2(1): 139. http://dx.doi.org/10.1186/1752-1947-2-139. PMid:18447934. http://dx.doi.org/10.1186/1752-1947-2-13...
Anaplasmataceae	16S rRNA (344 bp)	Forward (GGTACCYACAGAAGAAGTCC) Reverse (TAGCACTCATCGTTTACAG)	95 °C for 5 min; 34 cycles of 95 °C for 30 s, 55 °C for 30 s and 72 °C for 90 s; and final extension of 72 °C for 5 min.	Inokuma et al. (2000)Inokuma H, Raoult D, Brouqui P. Detection of Ehrlichia platys DNA in brown dog ticks (Rhipicephalus sanguineus) in Okinawa Island, Japan. J Clin Microbiol 2000; 38(11): 4219-4221. PMid:11060094.

Municipality	Mammal species (n)	Field numbers (RVR)	Forest fragment occurrence ^a a Forest fragment numbers represented in Figure 1;	Number of infected sample/ Number of tested sample (%)
Alta Floresta				Blood	Liver	Spleen
	ORDER RODEN/TIA
	Euryoryzomys nitidus (1)	84	2	0/1	0/1	n/t^b b Sample non-tested;
	Hylaeamys megacephalus (4)	77, 83, 88, 100	1, 4, 62	0/4	0/4	0/3
	Makalata sp. (1)	85	2	0/1	0/1	n/t
	Neacomys amoenus (7)	6, 7, 46, 47, 74, 87, 109	3, 4	0/3	0/6	0/6
	Necromys lasiurus (2)	48, 76	3, 4	0/1	0/2	0/2
	Oecomys cleberi (3)	49, 50, 75	1, 2	0/1	0/2	0/2
	Oecomys paricola (2)	38, 94	6	0/1	0/2	0/2
	Oecomys aff. catherinae (1)	89	4	0/1	0/1	0/1
	Oligoryzomys cf. mattogrossae (5)	42, 54, 90, 98, 99	2, 4, 6,	0/3	0/5	0/2
	Oxymycterus amazonicus (1)	39	6	n/t	0/1	0/1
	Proechimys sp. (5)	1, 18, 35, 63, 92	1, 5	0/2	0/5	0/5

	ORDER DIDELPHIMORPHIA
	Caluromys philander (1)	25	2	n/t	0/1	0/1
	Cryptonanus sp. (10)	2, 16, 17, 23, 27, 37, 55, 57, 64, 104	1-5	0/2	0/10	0/10
	Didelphis marsupialis (2)	78,79	4	0/1	0/1	0/1
	Glironia venusta (1)	107	2	0/1	0/1	0/1
	Marmosa constantiae (11)	3, 10-12, 14, 15, 26, 29, 34, 36, 105	1-4	0/1	0/10	0/10
	Marmosa murina (2)	31, 80	1, 3	0/1	0/1	0/1
	Marmosops bishopi (13)	5, 9, 13, 28, 53, 56, 60, 67, 93, 101-103, 110	1-4	0/6	0/10	0/9
	Marmosops aff. pinheiroi (4)	24, 58, 62, 95	1, 5, 6	0/2	0/3	0/3
	Monodelphis glirina (4)	4, 33, 65, 82	2, 4	0/1	0/4	0/3
	Monodelphis saci (2)	8, 59	1, 3	n/t	0/2	0/2
Sinop
	ORDER RODENTIA
	Mesomys hispidus (3)	165, 230, 245	8, 10, 21	0/3	0/3	0/3
	Mus musculus (1)	178	23	n/t	0/1	0/1
	Oecomys bicolor (18)	133, 142, 145, 146, 148, 169, 186, 192, 205, 214, 233, 241, 244, 248, 249, 253, 260, 264	14-15, 18, 23	0/14	0/17	0/18
	Oecomys paricola (1)	167	22	0/1	0/1	0/1
	Oecomys roberti (7)	122, 123, 143, 147, 149, 211, 215, 263	8, 9, 13, 15, 16, 18	0/7	0/6	0/5
	Proechimys roberti (14)	120, 129, 160, 177, 179, 180, 185, 191, 199, 200, 206, 212, 220, 223	10, 12, 22, 23,	0/12	0/11	0/11
	ORDER DIDELPHIMORPHIA
	Caluromys philander (5)	183, 190, 216, 218, 226	12, 19	0/5	0/5	0/5
	Didelphis marsupialis (31)	118, 119, 128, 130, 132, 134, 135, 140, 141, 153-159, 163, 166, 168, 175, 210, 213, 228, 229, 238, 242, 246, 251, 255-257	7-10, 12-14, 16-22	14/31 (45.16)^c c Results refer to samples testing positive for Hepatozoon PCR assay; 2/31 (6.45%)^d d Results refers to samples testing positive for Piroplasmorida PCR assay.	13/29 (44.82)^c c Results refer to samples testing positive for Hepatozoon PCR assay; 0/29	7/29 (24.13)^c c Results refer to samples testing positive for Hepatozoon PCR assay; 0/29
	Gracilinanus peruanus (5)	207, 231, 247, 250, 265	10, 14, 16	0/3	0/5	0/5
	Marmosa constantiae (53)	121, 124-127, 131, 136, 137, 144, 150-152, 161, 162, 164, 170-174, 182, 184, 187-189, 193-198, 201-204, 208, 209, 217, 219, 221, 222, 224, 225, 227, 232, 236, 237, 239, 240, 243, 252, 258, 261	7-10, 12-19, 21-23	0/52	0/53	0/49
	Marmosa murina (1)	139	14	0/1	0/1	0/1
	Marmosops aff. pinheiroi (1)	81	14	0/1	0/1	n/t
	Metachirus nudicaudatus (5)	138, 234, 235, 262, 266	8, 16-18	0/5	0/5	0/4
Cláudia
	ORDER RODENTIA
	Hylaeamys megacephalus (1)	254	20	0/1	0/1	0/1
	Oecomys paricola (1)	259	20	0/1	0/1	0/1

	ORDER DIDELPHIMORPHIA
	Didelphis marsupialis (1)	176	20	0/1	0/1	0/1

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E-mail: cbpv_rbpv.fcav@unesp.br

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[1] *Corresponding author: Richard de Campos Pacheco. Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias – PPGVET, Faculdade de Medicina Veterinária – FAVET, Universidade Federal de Mato Grosso – UFMT, Av. Fernando Corrêa da Costa, 2367, Boa Esperança, CEP 78060-900, Cuiabá, MT, Brasil. e-mail: richard@ufmt.br