Estudio comparativo de la patogenicidad y la antigenicidad de 6 cepas de Paracoccidioides brasiliensis

Finquelievich, J.L.; Negroni, R.; Iovannitti, C.A.; Elías Costa, M.R.I. de

doi:10.1590/S0036-46651993000600010

Resúmenes

Fueron estudiadas en forma comparativa 6 cepas de P. brasiliensis con el propósito de determinar su patogenicidad para la rata y su antigenicidad. Las mismas fueron aisladas de : 1) biopsia de cuello uterino en 1989 (U), 2) biopsia de mucosa bucal en 1988 (V), 3) aspiración ósea en 1991 (63265), 4) testículo de cobayo 1984(C24), 5) punción-aspiración ganglionaren 1986 (G) y 6) cepa proveniente de la Escola Paulista de Medicina (339). Se prepararon antigenos citoplasmáticos liofilizados de cada una de ellas, en la concentración final de 100 mg/ml y se realizaron pruebas de inmunodifusión frente a 6 sueros patrones positivos de ratas. En este ensayo todos los antígenos presentaron dos ó tres bandas de precipitación. Para estudiar el poder patógeno se inocularon, en total, 120 ratas Wistar, de ambos sexos de 200 g de peso, por via intracardíaca con suspensiones de la fase levaduriforme del P. brasiliensis, en concentraciones de 3x10(7) y 5x10(7) células/ml de cada cepa. Los animales que no murieron espontáneamente fueron sacrificados a los 14,28,42, 56 y 70 dias post-infección y se evaluaron los siguientes parámetros: A) exámenes macro y microscópicos de pulmones, hígado, bazo y riñones; B) cultivos de un pulmón y C) prueba de inmunodifusión con antígeno homólogo. Se consideró además, el porcentaje de muertes espontáneas por cada cepa. Los resultados de estos estudios fueron los siguientes:No se observó relación entre la patogenicidad y la antigenicidad. La cepa más virulenta correspondió a un aislamiento reciente a partir de una forma juvenil grave y la más antigénica fue una cepa, morfológicamente atípica, que no provocó lesiones macroscópicas ni microscópicas en los órganos de las ratas.

Paracoccidioides brasiliensis; Cepas; Antigenicidad; Patogenicidad

A comparative study of antigenicity and patho-genicity for rats of six Paracoccidioides brasiliensis strains was carried out. The antigenic capacity "in vitro" of cytoplasmic extract from each strain was determined by immuno-diffusion test against 6 serum samples obtained from rats experimentally infected with Paracoccidioides brasiliensis, that had presented positive reactions with a metabolic control antigen. The cytoplasmic extracts were used at final concentration of 100 mg/ml. All of them showed 2 or 3 precipitation bands in this assay. One hundred twenty Wistar rats both sexes weighing approximately 200 g, were inoculated intracardiacally with suspensions of the yeast phase of different P. brasiliensis strains. Two concentrations containing 3x10(7) and 5x10(7) cells/ml of each isolate were prepared. The inoculated animals were divided in two groups, one was left to its spontaneous outcome and the percentages of deaths were registered and the other rats were sacrificed at 14, 28, 56 and 70 days post-infection. The following parameters were taken into account for evaluation: A) presence of macroscopic granulomas in lung, liver, spleen and kidney; B) presence of P. brasiliensis in microscopic exams of the same organs, in wet preparations and in hystologic sections stained by H&E; C) culture of lung and D) immunodiffusion test using pre-mortem serum samples and the homologous antigen. The correlation between the most important parameters studied in each strain are summarized as follow:As no significant differences between the two inocula employed for each strain was observed, the before-mention results are the average of those obtained with each inoculation doses. The most virulent strain was a recent isolate from an acute disseminated form of the juvenil type. A morphological atypic isolate, which produced a very mild experimental infection with viable P. brasiliensis determined 100% of positive immunodifussion tests. The strain 339 did not produce infection in the rats, and the animals inoculated did not presented antibodies. Nevertheless this strain is useful to prepare antigens for Serologic reactions. No correlation between antigenicity or pathogenicity and the time during which these strains were mantained "in vitro" could be established.

MICOLOGIA

Estudio comparativo de la patogenicidad y la antigenicidad de 6 cepas de Paracoccidioides brasiliensis

Comparative study of pathogenicity and antigenicity of six Paracoccidioides brasiliensis strains

J.L. Finquelievich; R. Negroni; C.A. Iovannitti; M.R.I. de Elías Costa

Centro de Micología del Departamento de Microbiología de la Facultad de Medicina de la UBA. Paraguay 2155. CP 1121. Buenos Aires, Argentina

^{Correspondencia para} Correspondencia para: Prof. Dr. Ricardo Negroni Juncal 3475 - 4º, "C" (1425) Bs.As. - Argentina

RESUMEN

Fueron estudiadas en forma comparativa 6 cepas de P. brasiliensis con el propósito de determinar su patogenicidad para la rata y su antigenicidad. Las mismas fueron aisladas de : 1) biopsia de cuello uterino en 1989 (U), 2) biopsia de mucosa bucal en 1988 (V), 3) aspiración ósea en 1991 (63265), 4) testículo de cobayo 1984(C24), 5) punción-aspiración ganglionaren 1986 (G) y 6) cepa proveniente de la Escola Paulista de Medicina (339).

Se prepararon antigenos citoplasmáticos liofilizados de cada una de ellas, en la concentración final de 100 mg/ml y se realizaron pruebas de inmunodifusión frente a 6 sueros patrones positivos de ratas. En este ensayo todos los antígenos presentaron dos ó tres bandas de precipitación. Para estudiar el poder patógeno se inocularon, en total, 120 ratas Wistar, de ambos sexos de 200 g de peso, por via intracardíaca con suspensiones de la fase levaduriforme del P. brasiliensis, en concentraciones de 3x10⁷ y 5x10⁷ células/ml de cada cepa. Los animales que no murieron espontáneamente fueron sacrificados a los 14,28,42, 56 y 70 dias post-infección y se evaluaron los siguientes parámetros: A) exámenes macro y microscópicos de pulmones, hígado, bazo y riñones; B) cultivos de un pulmón y C) prueba de inmunodifusión con antígeno homólogo. Se consideró además, el porcentaje de muertes espontáneas por cada cepa. Los resultados de estos estudios fueron los siguientes:

No se observó relación entre la patogenicidad y la antigenicidad. La cepa más virulenta correspondió a un aislamiento reciente a partir de una forma juvenil grave y la más antigénica fue una cepa, morfológicamente atípica, que no provocó lesiones macroscópicas ni microscópicas en los órganos de las ratas.

Unitermos:Paracoccidioides brasiliensis; Cepas; Antigenicidad; Patogenicidad.

SUMMARY

A comparative study of antigenicity and patho-genicity for rats of six Paracoccidioides brasiliensis strains was carried out.

The antigenic capacity "in vitro" of cytoplasmic extract from each strain was determined by immuno-diffusion test against 6 serum samples obtained from rats experimentally infected with Paracoccidioides brasiliensis, that had presented positive reactions with a metabolic control antigen. The cytoplasmic extracts were used at final concentration of 100 mg/ml. All of them showed 2 or 3 precipitation bands in this assay.

One hundred twenty Wistar rats both sexes weighing approximately 200 g, were inoculated intracardiacally with suspensions of the yeast phase of different P. brasiliensis strains. Two concentrations containing 3x10⁷ and 5x10⁷ cells/ml of each isolate were prepared.

The inoculated animals were divided in two groups, one was left to its spontaneous outcome and the percentages of deaths were registered and the other rats were sacrificed at 14, 28, 56 and 70 days post-infection. The following parameters were taken into account for evaluation: A) presence of macroscopic granulomas in lung, liver, spleen and kidney; B) presence of P. brasiliensis in microscopic exams of the same organs, in wet preparations and in hystologic sections stained by H&E; C) culture of lung and D) immunodiffusion test using pre-mortem serum samples and the homologous antigen.

The correlation between the most important parameters studied in each strain are summarized as follow:

As no significant differences between the two inocula employed for each strain was observed, the before-mention results are the average of those obtained with each inoculation doses.

The most virulent strain was a recent isolate from an acute disseminated form of the juvenil type. A morphological atypic isolate, which produced a very mild experimental infection with viable P. brasiliensis determined 100% of positive immunodifussion tests. The strain 339 did not produce infection in the rats, and the animals inoculated did not presented antibodies. Nevertheless this strain is useful to prepare antigens for Serologic reactions.

No correlation between antigenicity or pathogenicity and the time during which these strains were mantained "in vitro" could be established.

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AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen al Sr. Ricardo Rando por las preparaciones histopatológicas.

Recebido para publicação em 10/03/1993

Aceito para publicação em 01/09/1993

1. ACOSTA, M.V.; MELO, L. & CASTAŃEDA, E. - Estudio del comportamiento "in vivo e in vitro" de seis cepas de Paracoccidioides brasiliensis, Rev. iberoamer. Micol., 9: 7-11, 1992.
2. BACCHI, M.M. & FRANCO, M. - Experimental paracoccidi-oidomycosis in the mouse. III. Histopathological and immunological finding after intravenous infection in the presence or absence of previous immunization. Rev. Soc. bras. Med. trop., 18: 101-108, 1985.
3. BIAGIONI, L.M.V.; SADATSUNE, T.; FRANCO, M.F. & MATHOS, M.C.F.I. - A comparative study of the immuno-antigenicity of eight Paracoccidioides brasiliensis isolates. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 29: 97-103, 1986.
4. CALICH, V.L.G.; PURCHIO, A. & PAULA, C.R. - A new fluorescent viability test for fungi cells. Mycopathologia (Den Haag), 66: 175-177, 1978.
5. CALICH, V.L.G.; FAZIOLI, R.A.; TEIXEIRA, H.C.; RUSSO, M.; SINGER-VERMES, L.M.; BURGER, E. & VAZ, C.A.C. - Mechanisms of host-resistance to Paracoccidioides brasillensis. In: CONGRESS OF INTERNATIONAL SOCIETY FOR HUMAN AND ANIMAL MICOLOGY, 10, Barcelona, J.R. Prous Science, 1988. Proceedings. p. 154-159.
6. CALICH, V.L.G.; BURGER, E.; RUSSO, M.; VAZ, C.A.C. & SINGER-VERMES, L.M. - Immunopathogenesis of murine paracoccidioidomycosis. Rev. argent. Micol., 15 (1) : 38, 1992.
7. GOSIS, A. & NEGRONI, R. - Desarrollo de un modelo animal para el estudio de la paracoccidioidomicosis animal. Rev. argent. Micol. 4 (3): 5-9, 1981.
8. IABUKI, K. & MONTENEGRO, M.R. - Experimental paracoccidioidomycosis in the Syrian hamster morphology, ultrastructure and correlation of lesion with presence of specific antigens and serum levels of antibodies. Mycopathologia (Den Haag), 67: 131-141, 1979.
9. KASIHNO, S.S.; CALICH, V.L.G.; BURGER, E. & SINGER-VERMES, L.M. - "In vivo" and "in vitro" characteristics of six Paracoccidioides brasiliensis strains. Mycopathologia (Den Haag), 92: 173-178, 1985.
10. NEGRONI, R.; FINQUELIEVICH, J.L.. & GOSIS, A.S. - Estudio comparativo de la eficacia de itraconazol y ketoconazol en el tratamiento de la paracoccidioidomicosis experimental. Med. cut. iberolat. amer., 15: 455-460, 1987.
11. NEGRONI, R.; ELIAS COSTA, M.R.; FINQUELIEVICH, J.; IOVANNITTI, C.; AGORIO, I. & TIRABOSCHI, N. - Three triazole in the treatment of experimental paracoccidioidomycosis. Rev. iberoamer. Micol., 8: 8-12, 1991.
12. RESTREPO, A.; ROBLEDO, M.; GIRALDO, R.; HERNÁNDEZ, H.; SIERRA, F.; GUTIÉRREZ, F.; LONDOŃO, F.; LÓPEZ, R. & CALLE, G. - The gamut of paracoccidioidomycosis. Amer. J. Med., 61: 33-42, 1976.
13. SAN BLAS, G. & SAN BLAS, F. - Paracoccidioides brasiliensis: cell wall structure and virulence. Mycopathologia (Den Haag), 62: 77-86, 1977.
14. SAN BLAS, G.; SAN BLAS, F. & SERRANO, L.E. - Host-parasite relationships in the yeast-like form or Paracoccidioides brasiliensis strain IVIC-Pb9. Infect. Immun., 15: 343-346, 1977.
15. SAN BLAS, G.; SAN BLAS, F.; ORDAZ, D.; CENTENO, S. & ALBORNOZ, M. - Chemical changes in cell wall structure of five strains of Paracoccidioides brasiliensis. Sabouraudia, 22: 255-257, 1984.
16. SCROFERNEKER, M.L. - Contribuiçăo para o estudo da composiçăo antigęnica do Paracoccidioides brasiliensis. Comparaçăo entre 5 amostras. Săo Paulo, 1982. (Tese de Doutoramento - Instituto de Cięncias Biomédicas da Universidade de Săo Paulo).
17. SINGER-VERMES, L.M.; BURGER, E.; FRANCO, M.F.; MOSCARDI BACCHI, M.; MENDES GIANNINI, M.J. & CALICH, V.L.G. - Evaluation of the pathogenicity and immunogenicity of seven Paracoccidioides brasiliensis isolates in susceptible inbred mice. J. med. vet. Mycol., 27: 71-82, 1987.
18. TANI, E.M.; PERAÇOLI, M.T.S.; FRANCO, M.F. & MONTENEGRO, M.R. - Experimental pulmonary paracoccidioidomycosis in the Syrian hamster: morphology and correlation of lesion with the immune response. J. med. vet. Mycol., 25: 291-300, 1987.
19. ZACHARIAS, D.; UFDA, A.; MOSCARDI-BACCHI, M.; FRANCO, M. & SAN BLAS, G. - A comparative histopathological, immunological, and biochemical study of experimental intravenous paracoccidioidomycosis induced in mice by three Paracoccidioides brasiliensis isolate. J. med. vet. Mycol., 24: 445-454, 1986.
20. ZAROR, L.; ROBLES, A.M. & NEGRONI, R. - Pruebas de inmuno-difusión en medios gelosados con agregado de polietilenglicol 6000 para el serodiagnóstico de las micosis. Rev. argent. Micol., 10: 61-64, 1978.

Correspondencia para:

Prof. Dr. Ricardo Negroni

Juncal 3475 - 4º, "C"

(1425) Bs.As. - Argentina

Fechas de Publicación

Publicación en esta colección
03 Jul 2006
Fecha del número
Dic 1993

Histórico

Acepto
01 Set 1993
Recibido
10 Mar 1993

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

[1] 1. ACOSTA, M.V.; MELO, L. & CASTAŃEDA, E. - Estudio del comportamiento "in vivo e in vitro" de seis cepas de Paracoccidioides brasiliensis, Rev. iberoamer. Micol., 9: 7-11, 1992.

[2] 2. BACCHI, M.M. & FRANCO, M. - Experimental paracoccidi-oidomycosis in the mouse. III. Histopathological and immunological finding after intravenous infection in the presence or absence of previous immunization. Rev. Soc. bras. Med. trop., 18: 101-108, 1985.

[3] 3. BIAGIONI, L.M.V.; SADATSUNE, T.; FRANCO, M.F. & MATHOS, M.C.F.I. - A comparative study of the immuno-antigenicity of eight Paracoccidioides brasiliensis isolates. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 29: 97-103, 1986.

[4] 4. CALICH, V.L.G.; PURCHIO, A. & PAULA, C.R. - A new fluorescent viability test for fungi cells. Mycopathologia (Den Haag), 66: 175-177, 1978.

[5] 5. CALICH, V.L.G.; FAZIOLI, R.A.; TEIXEIRA, H.C.; RUSSO, M.; SINGER-VERMES, L.M.; BURGER, E. & VAZ, C.A.C. - Mechanisms of host-resistance to Paracoccidioides brasillensis. In: CONGRESS OF INTERNATIONAL SOCIETY FOR HUMAN AND ANIMAL MICOLOGY, 10, Barcelona, J.R. Prous Science, 1988. Proceedings. p. 154-159.

[6] 6. CALICH, V.L.G.; BURGER, E.; RUSSO, M.; VAZ, C.A.C. & SINGER-VERMES, L.M. - Immunopathogenesis of murine paracoccidioidomycosis. Rev. argent. Micol., 15 (1) : 38, 1992.

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[8] 8. IABUKI, K. & MONTENEGRO, M.R. - Experimental paracoccidioidomycosis in the Syrian hamster morphology, ultrastructure and correlation of lesion with presence of specific antigens and serum levels of antibodies. Mycopathologia (Den Haag), 67: 131-141, 1979.

[9] 9. KASIHNO, S.S.; CALICH, V.L.G.; BURGER, E. & SINGER-VERMES, L.M. - "In vivo" and "in vitro" characteristics of six Paracoccidioides brasiliensis strains. Mycopathologia (Den Haag), 92: 173-178, 1985.

[10] 10. NEGRONI, R.; FINQUELIEVICH, J.L.. & GOSIS, A.S. - Estudio comparativo de la eficacia de itraconazol y ketoconazol en el tratamiento de la paracoccidioidomicosis experimental. Med. cut. iberolat. amer., 15: 455-460, 1987.

[11] 11. NEGRONI, R.; ELIAS COSTA, M.R.; FINQUELIEVICH, J.; IOVANNITTI, C.; AGORIO, I. & TIRABOSCHI, N. - Three triazole in the treatment of experimental paracoccidioidomycosis. Rev. iberoamer. Micol., 8: 8-12, 1991.

[12] 12. RESTREPO, A.; ROBLEDO, M.; GIRALDO, R.; HERNÁNDEZ, H.; SIERRA, F.; GUTIÉRREZ, F.; LONDOŃO, F.; LÓPEZ, R. & CALLE, G. - The gamut of paracoccidioidomycosis. Amer. J. Med., 61: 33-42, 1976.

[13] 13. SAN BLAS, G. & SAN BLAS, F. - Paracoccidioides brasiliensis: cell wall structure and virulence. Mycopathologia (Den Haag), 62: 77-86, 1977.

[14] 14. SAN BLAS, G.; SAN BLAS, F. & SERRANO, L.E. - Host-parasite relationships in the yeast-like form or Paracoccidioides brasiliensis strain IVIC-Pb9. Infect. Immun., 15: 343-346, 1977.

[15] 15. SAN BLAS, G.; SAN BLAS, F.; ORDAZ, D.; CENTENO, S. & ALBORNOZ, M. - Chemical changes in cell wall structure of five strains of Paracoccidioides brasiliensis. Sabouraudia, 22: 255-257, 1984.

[16] 16. SCROFERNEKER, M.L. - Contribuiçăo para o estudo da composiçăo antigęnica do Paracoccidioides brasiliensis. Comparaçăo entre 5 amostras. Săo Paulo, 1982. (Tese de Doutoramento - Instituto de Cięncias Biomédicas da Universidade de Săo Paulo).

[17] 17. SINGER-VERMES, L.M.; BURGER, E.; FRANCO, M.F.; MOSCARDI BACCHI, M.; MENDES GIANNINI, M.J. & CALICH, V.L.G. - Evaluation of the pathogenicity and immunogenicity of seven Paracoccidioides brasiliensis isolates in susceptible inbred mice. J. med. vet. Mycol., 27: 71-82, 1987.

[18] 18. TANI, E.M.; PERAÇOLI, M.T.S.; FRANCO, M.F. & MONTENEGRO, M.R. - Experimental pulmonary paracoccidioidomycosis in the Syrian hamster: morphology and correlation of lesion with the immune response. J. med. vet. Mycol., 25: 291-300, 1987.

[19] 19. ZACHARIAS, D.; UFDA, A.; MOSCARDI-BACCHI, M.; FRANCO, M. & SAN BLAS, G. - A comparative histopathological, immunological, and biochemical study of experimental intravenous paracoccidioidomycosis induced in mice by three Paracoccidioides brasiliensis isolate. J. med. vet. Mycol., 24: 445-454, 1986.

[20] 20. ZAROR, L.; ROBLES, A.M. & NEGRONI, R. - Pruebas de inmuno-difusión en medios gelosados con agregado de polietilenglicol 6000 para el serodiagnóstico de las micosis. Rev. argent. Micol., 10: 61-64, 1978.

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