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Open-access Revista de Microbiologia

Publication of: Sociedade Brasileira de Microbiologia
Area: Agricultural Sciences, Biological Sciences ISSN printed version: 0001-3714 New title: Brazilian Journal of Microbiology

Table of contents

Revista de Microbiologia, Volume: 30, Issue: 1, Published: 1999

Revista de Microbiologia, Volume: 30, Issue: 1, Published: 1999

Document list
Mini-Review
Microbial contamination of stored hydrocarbon fuels and its control Gaylarde, Christine C. Bento, Fátima M. Kelley, Joan

Abstract in Portuguese:

O problema microbiano maior na indústria de refino de petróleo é a contaminação de produtos armazenados, que pode levar à perda da qualidade, à formação de borra e à deterioração de tubulações e tanques de estocagem, na refinaria e no usuário. São abordadas, neste artigo, três classes de combustível, gasolina, querosene de aviação e óleo diesel, correspondente à ordem crescente de peso no fracionamento de petróleo. O óleo diesel apresenta os problemas microbiológicos mais sérios. São relatados os diversos microrganismos isolados de sistemas de combustíveis hidrocarbonados. São apresentadas as condições necessárias para crescimento microbiano e os métodos utilizados para o monitoramento e controle desse crescimento. Os efeitos de diversos aditivos, inclusive biocidas, são discutidos

Abstract in English:

The major microbial problem in the petroleum refining industry is contamination of stored products, which can lead to loss of product quality, formation of sludge and deterioration of pipework and storage tanks, both in the refinery and at the end-user. Three major classes of fuel are discussed in this article - gasoline, aviation kerosene and diesel, corresponding to increasingly heavy petroleum fractions. The fuel that presents the most serious microbiological problems is diesel. The many microorganisms that have been isolated from hydrocarbon fuel systems are listed. The conditions required for microbial growth and the methods used to monitor and to control this activity are discussed. The effects of various fuel additives, including biocides, are considered.
Veterinarian Microbiology
Properties of the Bacillus Cereus strain used in probiotic CenBiot Gil-Turnes, Carlos Santos, Andrea Freitas dos Cruz, Flávia Weykamp da Monteiro, Alegani Vieira

Abstract in Portuguese:

Bacillus cereus CenBiot possui as características necessárias para ser utilizada como probiótico. Os esporos apresentaram D80 de 14 hs, inibiram Escherichia coli e Yersinia pseudotuberculosis após cultivadas associativamente por 24 hs, foram inócuos para camundongos lactentes e adultos e não foram inibidos por antibióticos a baixas concentrações.

Abstract in English:

Bacillus cereus CenBiot fulfilled the requirements to be used as probiotic. The spores showed D80 of 14 hs, inhibited Escherichia coli and Yersinia pseudotuberculosis after 24 hs in associative culture, were innocuous for suckling and adult mice and were not inhibited by antibiotics at low concentrations.
Veterinarian Microbiology
Bovine S protein (vitronectin) increases phagocytosis of Streptococcus dysgalactiae Filippsen, Laerte Francisco

Abstract in Portuguese:

Foram investigados os efeitos da proteína S bovina (vitronectina) na fagocitose de amostras de Streptococcus dysgalactiae isoladas de bovinos com mastite. A determinação do número de estreptococos fagocitados foi realizada pelo método fluorométrico utilizando neutrófilos polimorfonucleares (NPM) aderidos em lâminas de vidro. A pré-incubação do S. dysgalactiae com a proteína S bovina aumentou significativamente a sua fagocitose por NPM. A proteína S bovina não causou efeito na fagocitose de culturas de S. pyogenes, já que não apresentam sítios de ligação para esta proteína. A digestão enzimática com pronase dos sítios de ligação S. dysgalactiae para a proteína S bovina resultou numa significativa redução do efeito da proteína S na fagocitose. Pode-se concluir que além do papel como promotor da adesão celular e inibidor do complemento, a proteína S bovina pode também influir na fagocitose do S. dysgalactiae durante os processos inflamatórios.

Abstract in English:

The effects of bovine S protein (vitronectin) on phagocytosis of Streptococcus dysgalactiae strains isolated from cattle with mastitis were investigated. Phagocytized streptococci were determined by a fluorometric microassay using glass adherent polymorphonuclear neutrophils (PMN). Preincubation of S. dysgalactiae with bovine S protein significantly increased their phagocytosis by PMN. Bovine S protein had no effect on phagocytic killing of non-S protein binding S. pyogenes cultures. Enzymatic digestion of the bovine S protein binding sites on S. dysgalactiae with pronase resulted in a significative reduction of the effects of S protein on phagocytosis. It could thus be concluded that in addition to its role as a promoter of cellular adhesion and complement inhibitor, bovine S protein may also influence the phagocytosis of S. dysgalactiae during inflammatory processes.
Veterinarian Microbiology
Incidence of Campylobacter in pigs with and without diarrhea Modolo, José Rafael Margato, Luiz Florêncio Fernandes Gottschalk, Arnold Frederico Lopes, Carlos Alberto de Magalhães

Abstract in Portuguese:

Um total de 200 suínos (1 - 21 semanas de idade), originários de cinco criações localizadas no Estado de São Paulo, Brasil foi dividido em dois grupos de 100 animais caracterizando-se o grupo G1 de animais com diarréia e G2, sem diarréia. Campylobacter foi isolado em 43% das amostras provenientes de G1 e 34% de G2. O microrganismo foi mais frequentemente encontrado em leitões na faixa de 0 a 4 semanas de idade. Campylobacter coli foi a espécie mais comumente observada em G1 (44,2%) e em G2 (32,4%), seguido por Campylobacter jejuni/ coli com 16,3% em G1 e 23,5% em G2. As contagens de Campylobacter foram significativamente maiores (p < 0,01) em G1 (<FONT FACE="Symbol"> </FONT><FONT FACE="Symbol">£</FONT><FONT FACE="Symbol"> </FONT>108 UFC/g) do que em G2 (<FONT FACE="Symbol">£</FONT> 104 UFC/g), fato que sugere que o microrganismo pode, pelo menos, atuar no agravamento do processo diarréico.

Abstract in English:

Two hundred pigs (1- 21 weeks old), from five piggeries in São Paulo State, Brazil, were divided in two groups of 100 animals each, G1 with diarrhea and G2 without diarrhea. Campylobacter was recovered from 43% of G1 and 34% of G2 specimens, and was more frequently recovered from 0-4 week old piglets. C. coli was the most common species (44.2% in G1 and 32.4% in G2), followed by C. jejuni/coli (16.3% in G1 and 23.5% in G2). Campylobacter counts were significantly higher in G1 (<FONT FACE="Symbol">£</FONT> 108 UFC/g) than in G2 (<FONT FACE="Symbol">£</FONT> 104 UFC/g) (p < 0.01), which suggests that the bacterium may play a role at least in the aggravation of the diarrheic process.
Veterinarian Microbiology
Pathogenesis of meningoencephalitis in rabbits by bovine herpesvirus type-5 (BHV-5) Silva, Adriana M. da Flores, Eduardo F. Weiblen, Rudi Canto, Marister C. Irigoyen, Luiz F. Roehe, Paulo M. Sousa, Renato S. de

Abstract in Portuguese:

Este artigo descreve os principais aspectos da infecção e enfermidade neurológica pelo herpesvírus bovino tipo 5 (HVB-5) em coelhos. Inoculação intranasal de coelhos recém-desmamados com uma amostra brasileira do HVB-5 produziu enfermidade neurológica e mortalidade em 78,8% (26/33) dos animais inoculados. Os sinais neurológicos iniciaram a partir do 50 dia pós-inoculação e persistiram por 10-12 horas até vários dias. A maioria dos animais evoluiu clinicamente até um estado moribundo ou morte em 24h (69,2%) a 48h (88,5%). A enfermidade neurológica caracterizou-se por crises de excitabilidade/depressão, tremores, bruxismo, andar/correr em círculos, queda para o lado e para trás, arqueamento do pescoço e corpo para trás, incoordenação, movimentos de pedalagem, depressão profunda e morte. Níveis moderados de infectividade foram detectados em várias áreas do encéfalo, principalmente no hemisfério ventro-lateral (em 16 de 20 animais), cérebro anterior (15/20), pedúnculo cerebral (11/20), hemisfério dorso-lateral (10/20) e ponte (12/26). O vírus foi também detectado no bulbo olfatório(9/20), bulbo(10/26), cerebelo (7/20), cérebro posterior (5/20) e gânglio trigêmeo (4/20). Alterações macroscópicas não foram observadas. As lesões microscópicas foram discretas e consistiram de meningite multifocal, infiltrado inflamatório mononuclear perivascular e gliose focal. Essas alterações foram observadas principalmente no córtex ventro-lateral e cérebro anterior. Imunidade passiva protegeu parcialmente os animais da enfermidade neurológica. Coelhos filhos de mães imunizadas com o HVB-5 apresentaram um retardamento no início dos sinais clínicos e taxas reduzidas de morbidade e mortalidade quando comparados com coelhos filhos de mães não imunizadas. Esses resultados demonstram que a enfermidade neurológica causada pelo HVB-5 pode ser consistentemente reproduzida em coelhos e apontam para uma possível utilização dessa espécie como modelo experimental para estudar a neuropatogênese do HVB-5.

Abstract in English:

This article describes the main aspects of bovine herpesvirus type-5 (BHV-5) neurologic infection and disease in rabbits, a candidate animal model for studying BHV-5 neuropathogenesis. Intranasal inoculation of weanling rabbits with a Brazilian BHV-5 isolate produced neurological disease and death in 78.8% (26/33) of the animals. Neurological signs started as early as 5 days post-inoculation and lasted from 10-12 hours up to several days. Most animals evolved to a moribund state or death within 24 (69.2%) to 48 hours (88.5%). Neurological disease was characterized by excitability or depression, tremors, bruxism, walking or running in circles, backward arching of the head and body, incoordination, backward and sideways falling, paddling, profound depression and death. Moderate levels of infectivity were detected in several areas of the brain, most consistently in the ventro-lateral hemisphere (in 16 out of 20 animals), anterior cerebrum (15/20), midbrain (11/20), dorso-lateral hemisphere (10/20) and pons (12/26). Infectious virus was also recovered from the olfactory bulb (9/20), medulla oblongata (10/26), cerebellum (7/20), posterior cerebrum (5/20) and trigeminal ganglia (4/20). No gross lesions were observed. Microscopic lesions were mild and consisted of non-suppurative meningitis, mononuclear perivascular cuffing and focal gliosis. These changes were observed most consistently in the ventro-lateral hemisphere and anterior cerebrum. Passive immunity partially protected rabbits from BHV-5-induced encephalitis. Rabbits born to immunized dams showed a significative delay in the onset of clinical disease and reduced morbidity and mortality rates compared to rabbits born to unvaccinated dams. These results demonstrate that BHV-5-induced neurological disease can consistently be reproduced in rabbits and point towards the use of this species as an animal model to study BHV-5 neuropathogenesis.
Veterinarian Microbiology
Plasmids in Mycoplasma species isolated from goats and sheep and their preliminary typing Nascimento, Elmiro R. DaMassa, Al J. Yamamoto, Richard Nascimento, M. Graça F.

Abstract in Portuguese:

Um total de 105 amostras clínicas de micoplasma, originárias de caprinos, e uma de ovino foram investigadas quanto a presença de plasmídios, que foram observados em trinta e três (31%) delas. Esses micoplasmas provieram de 13 rebanhos. Dez desses rebanhos eram sintomáticos para micoplasmose (mastite, poliartrite, septicemia) e três eram assintomáticos, i.é., clinicamente sadios. Vinte e oito amostras eram Mycoplasma mycoides subespécie mycoides LC ("large colony" ou biotipo caprino), quatro eram M. capricolum subsp. capricolum e uma era M. cottewii. Os plasmídios foram linearizados com endonucleases EcoRI, EcoRV, EcoRI e EcoRV ou BamHI e EcoRV e apresentaram cinco tamanhos (1,1; 1,6; 1,7; 1,8 e 1,9 Kbp). Com base na digestão pela enzima de restrição e o tamanho dos DNA extracromossomais, cinco tipos de plasmídio foram encontrados (p1II, p2III, p2V, p3I e p4IV). O reduzido tamanho desses DNA circulares muito provavelmente exclui formas replicativas de vírus DNA, cujo tamanho é igual ou maior que 8,0 Kbp.

Abstract in English:

One-hundred-five (105) clinical isolates of mycoplasma from caprine origin and one isolate from ovine were surveyed for plasmids, which were present in thirty-three (31%) of them. These mycoplasmas originated from 13 herds. Ten of them were symptomatic for mycoplasmal disease (mastitis, polyarthritis, septicemia) and three herds were asymptomatic, i.e., clinically normal. Twenty-eight isolates were Mycoplasma mycoides subspecies mycoides LC (large colony or caprine biotype), four were Mycoplasma capricolum subsp. capricolum and one was Mycoplasma cottewii. The isolated plasmids were linearized by EcoRI, EcoRV, EcoRI and EcoRV or BamHI and EcoRV, and were of five sizes (1.1, 1.6, 1.7, 1.8, and 1.9 Kbp). Based on restriction enzyme digestion and size of the linearized supercoiled extrachromosomal DNA, five plasmid types were recovered (p1II, p2III, p2V, p3I, and p4IV). The small size of these DNA elements probably exclude replicative forms of DNA virus, which are equal or larger than 8.0 Kbp.
Veterinarian Microbiology
Enzootic bovine Leukosis: development of an indirect enzyme linked immunosorbent assay (I-Elisa) in seroepidemiological studies González, Ester Teresa Bonzo, Estela Beatriz Echeverría, María Gabriela Licursi, María Etcheverrigaray, María Elisa

Abstract in Portuguese:

O Vírus da Leucose Bovina (VLB) é o agente etiológico da Leucose Enzoótica Bovina, um retrovirus exógeno da espécie bovina. Uma vez infectado, não se detecta viremia, mas uma forte e persistente resposta imunológica às proteínas estruturais, sobre tudo para gp51 da coberta e para proteína p24 do core. Neste trabalho se descreve o desenvolvimento de um ELISA indireto (ELISA-I), em que se utiliza o soro policlonal para a detecção de anticorpos para VLB. Os soros foram analisados pela prova de IDGA (imunodifusão dupla em gel de ágar) rotineiramente usada como prova padrão. O antígeno escolhido não necessita de alto grau de purificação e os resultados obtidos com os soros negativos permitiram estabelecer um valor de corte de três desvios padrão (DP) sobre a média do grupo de soros negativos, mostrando aceitável especificidade e reduzindo o risco de falsos positivos. A comparação dos resultados conseguidos por IDGA e ELISA-I demonstrou que em um total de 465 soros, 234 (50%) foram positivas por IDGA e ELISA-I. Dos 225 soros negativos por IDGA, 69 (15%) foram positivos por ELISA-I e 156 (33%) foram negativos pelas duas técnicas utilizadas. Apenas 2% dos soros foram inespecíficos por IDGA e se definiram como positivos ou negativos pelo ELISA-I

Abstract in English:

Bovine Leukemia Virus (BLV) is the etiologic agent of Enzootic Bovine Leukosis, a retrovirus exogenous to the bovine species. Once infected, there is no detectable viraemia but instead there is a strong and persistent immunological response to BLV structural proteins, essentially the gp51 envelope glycoprotein and the mayor core protein p24. We describe the test procedure of an indirect ELISA (I-ELISA) using polyclonal reagents for the detection of antibodies to BLV. For comparison, the sera were simultaneously tested by agar gel immunodiffussion (AGID) test, which is currently used as diagnostic standard for BLV infection. The antigen applied does not require a high degree of purification and the data from the analysis of the negative sera showed that the establishment of a cut-off level corresponding to 3 times the standard deviation (SD) above the mean for the negative control set of sera provided acceptable specificity, reducing the risk of false positives results. A comparison of the results obtained by AGID test and I-ELISA showed that considering a total of 465 serum samples, all of the 234 samples (50%) that were positive by AGID were positive to the I-ELISA. Of 225 serum samples which yielded negative results in the AGID test, 69 (15%) were found to be positive by the I-ELISA and 156 (33%) were negative by both techniques. Few sera (2%) that were non-specific by AGID were defined as negative or positive by I-ELISA.
Micology
Filtration enrichment method for isolation of auxotrophic mutants of Trichoderma harzianum rifai Cassiolato, Ana Maria R. Melo, Itamar Soares de

Abstract in Portuguese:

A obtenção de marcas genéticas, quer sejam para resistência a drogas, quer para auxotrofia, é uma etapa trabalhosa mas importante em pesquisa genética. Esse trabalho visou a obtenção de mutantes auxotróficos de Trichoderma harzianum utilizando-se a técnica de enriquecimento por filtração. A técnica mostrou-se superior à técnica convencional de isolamento total. Doze mutantes auxotróficos obtidos foram testados quanto a estabilidade, crescimento e resistência ao fungicida benomil. Eles apresentaram taxas de crescimento e esporulação comparáveis à linhagem parental e dois mutantes foram resistentes a benomil em uma concentração de 500µg/ml.

Abstract in English:

The isolation of genetic markers, like drug resistance and auxotrophy, is a laborious but important step in genetic research. The isolation of auxotrophic mutants of Trichoderma harzianum using the filtration enrichment technique was more effective than using the total isolation technique. Most of 12 auxotrophic mutants exhibited similar growth rate and higher sporulation when compared with the wild type, but only two mutants (TWS-410 and TW5-523) could grow in 500µg/L of benomyl.
Micology
Differentiation of the entomopathogenic fungus Metarhizium flavoviride (Hyphomycetes) Xavier-Santos, Solange Magalhães, Bonifácio Lima, Elza A. Luna-Alves

Abstract in Portuguese:

A diferenciação de um isolado brasileiro de Metarhizium flavoviride (CG 423), candidato a agente de controle biológico de gafanhotos, foi investigada. Conídios semeados em meio de cultura sólido (extrato de levedura 1%, ágar 2,8%, água destilada 96,2%) e incubados a 28°C, foram observados durante 26 horas. Para induzir a formação de apressórios, conídios foram suspensos em meio líquido contendo duas concentrações de extrato de levedura (0,06 e 1%) e transferidos para placas de Petri plásticas (3,5 cm de diâmetro). A germinação teve início com o aumento do tamanho dos conídios de 5,3 ± 0,6 x 3,1 ± 0,3 µm (0 h de incubação) para 8,1 ± 0,2 x 6,1 ± 0,2 µm (8 h de incubação). Os primeiros tubos germinativos começaram a surgir após 10 h de incubação dos conídios, os quais apresentaram acentuada multipolaridade. Vinte e seis horas após a inoculação foi observado o início da diferenciação micelial e formação de anastomoses entre hifas de conídios adjacentes. Apressórios foram formados somente quando conídos foram incubados em meio líquido contendo concentração mínima de nutriente (extrato de levedura 0,0%; peso/volume). Os apressórios formados encontravam-se fortemente aderidos à superfície do fundo plástico da placa de Petri.

Abstract in English:

The differentiation of a Brazilian isolate of Metarhizium flavoviride (CG 423), a promising candidate for the biocontrol of grasshoppers, was investigated. Conidia were spread onto solid medium (1% yeast extract, 2.8% agar, 96.2% distilled water), incubated at 28°C and observed during 26 h. Germination initiated as conidia size increased from 5.3 (±0.6) x 3.1 (±0.3) µm (0 h incubation) to 8.1 (±0.2) x 6.1 (±0.2) µm (8 h incubation). Germ tubes started to appear after 10 h incubation showing a high degree of multipolarity. Twenty six hours after inoculation, hyphal differentiation and anastomosis among hyphae from adjacent conidia were recorded. Appressoria were formed only from conidia incubated in liquid medium containing minimum concentration of yeast extract (0.06%; w/v). Appressoria were firmly adhered to the bottom of plastic dishes.
Micology
Occorrence of Pseudomicrodochium suttonii in Brazil Nunes, Amanda Torres Cavalcanti, Maria Auxiliadora de Q. Queiroz, Lusinete Aciole de

Abstract in Portuguese:

Pseudomicrodochium suttonii foi isolado do solo da Praça do Derby, uma área de lazer da cidade do Recife, Pernambuco, Brasil. Para o isolamento, foram feitas suspensões utilizando-se água destilada e esterilizada. De acordo com literatura consultada, provavelmente esta é a primeira ocorrência notificada na América do Sul.

Abstract in English:

Pseudomicrodochium suttonii was isolated from the soil of Derby Square, a leisure area in Recife city, Pernambuco, Brazil. For the isolation, suspensions were made in distilled sterile water. According to the literature, this is probably the first occurrence reported in South America.
Medical Microbiology
Role of the concentration process in the recovery of Candida albicans from blood Freitas, Ana Lúcia Peixoto de Barth, Afonso Luis

Abstract in Portuguese:

O sistema de lise-centrifugação (Isolator TM) tem sido considerado como método padrão para aumentar as taxas de diagnóstico de candidemia através de hemocultura. Neste estudo, o processo de concentração, segundo este sistema, foi comparado com métodos convencionais de cultivo em meio líquido e bifásico. Foram realizados testes "in vitro" utilizando Candida albicans em contagens de 100, 10, 1 e 0,5 células/ml de sangue. Culturas em ágar-chocolate foram realizadas a partir do sedimento obtido pela centrifugação do tubo de Isolator TM e do caldo das culturas convencionais após sua incubação por 24 horas a 35oC. Esfregaços corados pelo Gram, preparados a partir dos métodos convencionais, também foram observados em 24 horas. Foi possível detectar Candida albicans independentemente do número de células ou da metodologia utilizada. O tempo para diagnóstico também não foi diferente para os métodos comparados, já que blastoconídios e crescimento foram observados no mesmo prazo de tempo. Assim, sugerimos que o processo de concentração não é o maior fator responsável pelas taxas de recuperação de Candida albicans a partir do sangue obtidas pelo sistema IsolatorTM.

Abstract in English:

The lysis-centrifugation system (Isolator TM) is recognized as the standard method for recovery of Candida spp. from blood. In this study, the effect of the concentration process of this system was compared with conventional methods of blood culture using liquid and biphasic media. The tests were performed in vitro using Candida albicans in counts of 100, 10, 1, and 0.5 cells/ml of blood. Cultures onto chocolate agar were performed with the sediment obtained after centrifugation of IsolatorTM tube and with liquid and biphasic media after their incubation for 24 h at 35oC. Gram stain prepared from the conventional methods were also evaluated in the first 24 h. It was possible to detect Candida albicans in blood, regardless both the number of cells or methodology. As blastoconidia were observed in Gram stains at the same time that growth was noted, time for diagnosis was also not different for the compared methods. Therefore, we suggest that the process of concentration is not the single important factor responsible for the recovery rates of Candida albicans from blood by the IsolatorTM system.
Medical Microbiology
Prevalence of H. pylori infection in a population from the rural area of Araçuaí, MG, Brazil Oliveira, Andreia Maria Rocha de Rocha, Gifone Aguiar Queiroz, Dulciene Maria de Magalhães Barbosa, Maira Tonidandel Silva, Sérgio Caetano

Abstract in Portuguese:

A prevalência da infecção por Helicobacter pylori foi avaliada em uma população rural de Minas Gerais, Brasil, empregando uma reação de ELISA. Cento e quatorze de 131 adultos (87,0%) e 54 de 87 crianças (62,0%) apresentaram anticorpos anti-H. pylori. Foi observado aumento da prevalência da infecção com a idade (p < 0,001).

Abstract in English:

The prevalence of Helicobacter pylori infection was evaluated by ELISA in a rural population in Minas Gerais, Brazil. A total of 114 among 131 adults (87.0%) and 54 among 87 children (62.0%) presented anti-H. pylori antibodies and the prevalence of the infection increased with age (p < 0.001).
Basic Microbiology
Catabolism of caffeine and purification of a xanthine oxidade responsible for methyluric acids production in Pseudomonas putida L Yamaoka-Yano, Dirce Mithico Mazzafera, Paulo

Abstract in Portuguese:

O catabolismo de cafeína e a enzima xantina oxidase, envolvida na sua degradação, foram estudados em Pseudomonas putida L, uma linhagem com alta capacidade para utilizar este substrato como fonte de energia. Células crescidas na presença de cafeína e xantina marcadas com 14C, e cafeína não marcada, mostraram que este alcalóide foi degradado via teobromina/paraxantina -> 7-metilxantina -> xantina -> ácido úrico -> alantoína -> ácido alantóico. Ácidos metilúricos foram formados a partir de teobromina, paraxantina e 7-metilxantina, embora nenhum crescimento bacteriano ter sido observado quando estes compostos foram usados como substratos, indicando que a xantina oxidase possui um ampla especificidade para substratos. Isto foi confirmado por detecção de atividade em gel não desnaturante (PAGE), tendo sido observada atividade para teofilina e 3-metilxantina, que não estão envolvidas na degradação de cafeína. Uma única banda de atividade foi observada em (PAGE) quando NAD+ não foi incluído no meio de incubação, indicando ser a enzima uma oxidase. A temperatura ótima e o pH ótimo da reação para a enzima foram 30oC e 7,0, respectivamente. O Km determinado foi de 169 µM, e o pI 3.1 - 4.0. A massa molecular determinada através da comparação lado a lado de gel de atividade em PAGE e PAGE de padrão de albumina de soro bovino foi de 192 kDa, que foi coincidente com a soma (198,4 kDa) de três subunidades (71, 65,6 e 61,8 kDa) da enzima purificada.

Abstract in English:

Caffeine catabolism and a xanthine oxidase involved in the alkaloid breakdown were studied in Pseudomonas putida L, a strain displaying high ability to grow on this substrate. Cells cultured with unlabelled caffeine and 14C labeled caffeine and xanthine showed that this alkaloid was broken-down via theobromine/paraxanthine -> 7-methylxanthine -> xanthine -> uric acid -> allantoin -> allantoic acid. Methyluric acids were formed from the oxidation of theobromine, paraxanthine and 7-methylxanthine, although no bacterial growth was observed on these compounds, indicating that this might be due to a wide substrate specificity of xanthine oxidase. This was confirmed by activity staining in PAGE where activity was observed with theophylline and 3-methylxanthine, which are not involved in the alkaloid breakdown. A single band of activity was detected without addition of NAD+, showing an oxidase form of the enzyme. The enzyme optimum temperature and pH were 30oC and 7.0, respectively. The determined Km was 169 µM, and the pI 3.1 - 4.0. The molecular weight determined by side by side comparison of activity staining of the enzyme in PAGE and PAGE of BSA was 192 kDa, which was coincident with the sum (198.4 kDa) of three subunits (71, 65.6 and 61.8 kDa) of the purified protein.
Basic Microbiology
Characterization of fusion products from protoplasts of yeasts and their segregants by electrophoretic karyotyping and RAPD Martins, Cleide Viviane Buzanello Horii, Jorge Pizzirani-Kleiner, Aline Aparecida

Abstract in Portuguese:

Com o objetivo de caracterizar os produtos de fusão de protoplastos de leveduras com características de importância para a indústria vinícola e seus segregantes, foram empregadas as técnicas de separação de bandas cromossômicas por eletroforese e de RAPD (amplificação ao acaso de DNA polimórfico). O cariótipo eletroforético foi realizado pelo método CHEF ("contour-clamped homogeneous eletric field eletrophoresis"), constatando-se a complementação de bandas cromossômicas no produto de fusão e padrões de ambos os parentais e padrões intermediários nos segregantes. A análise do padrão de amplificação dos fragmentos de DNA com dois primers evidenciou um padrão de bandas complementares nos produtos de fusão (diplóide) e padrão de bandas de um e de outro parental ou mesmo bandas intermediárias nos segregantes.

Abstract in English:

In order to characterize fusion products from yeast protoplasts and their segregants, with important features to the wine making industry, electrophoretic karyotyping and RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) were utilized. Electrophoretic karyotyping was performed by the CHEF ("contour-clamped homogeneous electric field electrophoresis") method, which allowed the detection of chromosomal band complementation in fusion products and the presence of patterns of both parental and intermediary strains in segregants. By utilizing two primers, an amplification pattern of DNA fragments was obtained. While fusion products (diploid) showed a pattern of complementary bands, segregants showed bands of either parental strains or even intermediary bands
Industrial Microbiology
Screening of basidiomycetes for the production of exopolysaccharide and biomass in submerged culture Maziero, Rosana Cavazzoni, Valeria Bononi, Vera Lúcia Ramos

Abstract in Portuguese:

Este trabalho diz respeito à produção de exopolissacarídeos e biomassa por basidiomicetos em cultura líquida. O "screening" foi realizado com 56 linhagens incluindo fungos nativos de diferentes ecossistemas do Brasil e de fungos comestíveis. Agaricus sp. (CCB 280) e Oudemansiella canarii (Jungh.) Hohn (CCB 179) foram os melhores produtores de exopolissacarídeo (6,01 e 3,54 g peso seco/l respectivamente), em 7 dias de incubação. O melhor produtor de biomassa foi Schizophyllum commune Fr.:Fr. (CCB 473) com 16,68 g peso seco/l em 14 dias de incubação. Quando o filtrado cultural foi submetido à congelamento antes da precipitação do polissacarídeo, formou-se uma fração gelatinosa.

Abstract in English:

Fifty-six strains of Basidiomycetes, including native Brazilian fungi isolated from different ecosystems and edible mushrooms, were screened for production of exopolysaccharides and biomass in submerged culture. Agaricus sp. (CCB 280) and Oudemansiella canarii (Jungh.) Hohn (CCB 179) were the highest exopolysaccharide producers (6.01 and 3.54 g dry w./l respectively) after 7 days of incubation. The best producer of biomass was Schizophyllum commune Fr.:Fr. (CCB 473) with 16.68 g dry w./l in 14 days of incubation. When the culture filtrate was submitted to freezing prior to polysaccharide precipitation, a gelatinous fraction was formed.
Food Microbiology
Occurrence of aflatoxins in peanuts and peanut products consumed in the State of São Paulo/Brazil from 1995 to 1997 Sabino, Myrna Milanez, Thais Valéria Lamardo, Leda Conceição Antonia Inomata, Emiko Ikejiri Zorzetto, Maria Ângela Pompeu Navas, Sandra Aparecida Stofer, Monica

Abstract in Portuguese:

Cento e trinta e sete amostras de amendoim e produtos contendo amendoim, obtidas no período de janeiro de 1995 a dezembro de 1997, a grande parte delas coletadas pela Vigilância Sanitária da Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo, foram submetidas à determinação de aflatoxinas. Foram incluídas amostras de amendoins cru, doces de amendoim ("paçoca" e "pé-de-moleque"), pasta de amendoim, amendoins salgados (frito e torrado), "torrone" e amendoins com cobertura de chocolate ou cobertura salgada ("amendoim japonês"). As amostras foram analisadas por cromatografia em camada delgada. Sessenta e duas amostras (45,3%) foram positivas para aflatoxinas e 37 amostras (27,0%) apresentaram valores de aflatoxinas B1 + G1 acima do limite máximo da legislação brasileira (30,0 µg. kg-1 para aflatoxinas B1+G1). A identidade destas aflatoxinas foi confirmada usando-se ácido trifluoro acético. O 90th percentil foi 110,0 em 1995, 60,0 em 1996 e 118,0 µg. kg-1 em 1997. A concentração de aflatoxinas nas amostras de amendoim cru variou de 5,0 a 356,0 µg.kg-1 e 27,1% delas acima do limite. Quanto à contaminação por aflatoxinas nas amostras de doces de amendoim 32,8% delas estavam acima do limite e as concentrações variaram de 6,0 a 536,0 µg. kg-1. A contaminação nos amendoins salgados foi menos frequente, cerca de 10% das amostras e os níveis de toxina geralmente abaixo de 10,0 µg. kg-1, porém uma das amostras com cobertura ("amendoim japonês") apresentou 536,0 µg. kg-1. Comparando com os dados de incidência de 1980-1987 em amendoim e produtos de amendoim na cidade de São Paulo, quando 68,75% das amostras mostraram valores maiores que o limite permitido e o 90th percentil variou de 42,0 a 333,0 µg.kg-1, e de 1994 quando 36,0% das amostras mostraram resultados acima do limite e o 90th percentil foi 489,0 µg.kg-1, os resultados deste trabalho mostram que a contaminação por aflatoxinas está diminuindo. Entretanto, mostram também que a contaminação por aflatoxinas em amendoim continua um problema sério no Brasil mas que deve-se levar em conta não somente as condições climáticas (umidade e altas temperaturas) mas também as práticas de agricultura e as condições de estocagem.

Abstract in English:

One hundred and thirty seven samples of peanuts and peanut containing foods were collected in markets in the State of São Paulo, Brazil, between January 1995 an December 1997. Most of the samples were collected by the Inspection Service of São Paulo Secretary of Health. The foods included raw peanuts, peanut candies ("paçoca" and "pé de moleque"), peanut butter, fried/roasted salted peanuts, "torrone", chocolate coated peanuts and salt-coated peanuts. The samples were analyzed for aflatoxins using a thin-layer chromatographic method. About 45% of the samples were positive for aflatoxins and 27% exceeded the limits of the Brazilian legislation (30.0 µg.kg-1 for aflatoxins B1+G1). The aflatoxins were confirmed by derivatization with trifluoroacetic acid. The 90th percentile was 110.0 in 1995, 60.0 in 1996 and 118.0 µg.kg-1 in 1997. The aflatoxins concentration in the raw peanut samples ranged from 5.0 to 382.0 µg.kg-1 and 27.1% were above the legal limits. Contamination in peanut candies was above the limit in 32.8% of the samples and the aflatoxins levels ranged from 6.0 to 494.0 µg.kg-1. Contamination of salty peanuts was less frequent, around 10% of the samples and the toxin levels were usually below 10 µg.kg-1. The maximum level of contamination, 536.0 µg.kg-1, was found in a sample of peanut with a salty coat ("amendoim japonês"). Results of previous studies in peanuts and peanut products in the city of São Paulo from 1980-1987 had 68.75% of the samples with levels greater than the limit 30.0 µg.kg-1 and the 90th percentile ranged from 42.0 to 333.0 µg.kg-1. In 1994, 36.0% of the samples showed results above the limit and the 90th percentile was 489 µg.kg-1. The results show that aflatoxins contamination in peanuts is decreasing but it is still a serious problem in Brazil, a country where the climate, the agricultural practices and storage conditions favour fungal growth.
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